BAB I
PENDAHULUAN
A. Tujuan Praktikum1. Mengetahui jenis media isolasi kuman
2. Mengetahui cara isolasi kuman pada media SSA3.
Mengidentifikasi koloni bakteri yang terisolasi pada media SSA
(dengan sampel cilok)B. Manfaat Praktikum1. Dapat mengetahui jenis
media isolasi kuman
2. Dapat mengaplikasikan cara isolasi kuman pada media SSA3.
Dapat membaca dan mengidentifikasi bakteri yang terisolasi pada
media SSA (dengan sampel cilok)BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Isolasi Kuman1. Pengertian
Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba
tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau
biakan murni. Kultur murni adalah kultur yang sel-sel mikrobanya
berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Biakan murni
diperlukan karena semua metode mikrobiologis yang digunakan untuk
menelaah dan mengidentifikasi mikroba, termasuk penelaahan
ciri-ciri kultur, morfologis, fisiologis, maupun serologis
memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroba
saja. 1Isolasi adalah suatu cara untuk memisahkan satu mikrobia
dari mikrobia lainnya yangbertujuan untuk mendapatkan spesies
tunggal dengan sifat-sifat yang diinginkan. Untukmengetahui jenis
mikroorganisme yang hidup dalam bahan pangan dapat dilakukan
isolasi mikrobia, dengan cara menggoreskan suspensi campuran sel
pada suatu mediapadat di dalam cawan petri kemudian
menginkubasikannya, sehingga setiap sel akan tumbuh membentuk
koloni dan memudahkan untuk memisahkannya. 2. Teknik
Di dalam mengisolasi mikroorganisme digunakan berbagai cara,
antara lain dengan cara goresan (streak plate), cara taburan /
tuang (pour plate), cara sebar (spread plate), cara pengenceran
(dilution method), serta micromanipulator (the micromanipulator
method). Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah teknik
cawan tuang dan cawan gores. Kedua metode ini didasarkan pada
prinsip yang sama yaitu mengencerkan organisme sedemikian rupa
sehinga individu spesies dapat dipisahkan dari lainnya.
a. Teknik Streak Plate (Goresan)Teknik streak plate ( lempeng
gores ) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di
dalam media agar dengan cara menstreak (menggores) permukaan agar
dengan jarum ose yang telah diinokulasikan dengan kultur bakteri.
Dengan teknik ini mikroorganisme yang tumbuh akan tampak dalam
goresan-goresan inokulum bekas dari streak jarum ose. Cara ini
dilakukan dengan membagi cawan petri menjadi 3-4 bagian.2Ose steril
yang telah disiapkan dilekatkan pada sumber isolat, kemudian
menggoreskan ose tersebut pada cawan berisi media steril. Goresan
dapat dilakukan 3-4 kali membentuk garis horisontal di satu sisi
cawan. Ose disterilkan lagi dengan api bunsen, setelah kering ose
tersebut digunakan untuk menggores goresan sebelumnya pada sisi
cawan kedua. Langkah ini dilanjutkan hingga keempat sisi cawan
tergores. Pada metode ini, goresan di sisi pertama diharapkan
koloni tumbuh padat dan berhimpitan, sedangkan pada goresan sisi
kedua, koloni mulai tampak jarang dan begitu pula selanjutnya,
sehingga didapatkan koloni yang tampak tumbuh terpisah dengan
koloni lain. Seluruh tahap hendaknya dilakukan secara aseptik agar
tak terjadi kontaminasi.2
Gambar 1. Pola Teknik Streak PlateSumber : google.comTeknik ini
digunakan jika ingin mendapatkan kultur murni suatu mikrobia yang
digunakan adalah metode streak plate, karena hasil akhir metode ini
adalah berupa kumpulan sel-sel yang semakin jarang pada ujung
streak sehingga dapat diambil bakteri pada jumlah seluler (satu
sel). Selain itu bakteri yang didapat seharusnya merupakan bakteri
yang memang ingin dibiakkan di kultur tersebut dengan kata lain
bukan bakteri kontaminan, sebab yang diambil/dicuplik adalah koloni
bakteri yang berada di atas streak yang dibuat dan bukan di luar
streak. Kelebihan metode ini adalah dapat segera diketahui adanya
kontaminasi. Sedangkan kekurangannya metode ini sulit dilakukan dan
hanya dapat digunakan untuk menumbuhkan bakteri aerob saja.3b.
Teknik Pour Plate (Tuang)Teknik pour plate (lempeng tuang) adalah
suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media
agar dengan cara mencampurkan media agar yang masih cair dengan
stok kultur bakteri. Teknik ini biasa digunakan pada uji TPC (Total
Plate Count). Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang
tumbuh dapat tersebar merata pada media agar. 2Gambar 2. Teknik
Pour PlateSumber : google.comMetode ini dilakukan dengan
menginokulasikan sejumlah bakteri ke dasar cawan baru kemudian
medium agar cair dimasukkan dan dibiarkan memadat. Metode ini cocok
digunakan apabila kita ingin menguji apakah suatu koloni bakteri
merupakan bakteri yang aerobik, anaerob fakultatif, ataukah anaerob
obligat. Pengujian ini dapat terjadi karena hasil akhir metode pour
plate adalah berupa pertumbuhan bakteri pada dasar medium, tengah
medium, dan pada permukaan medium. Bakteri yang terdapat pada dasar
medium mungkin adalah bakteri anaerob obligat, sedangkan bakteri
yang tumbuh pada bagian tengah medium adalah bakteri anaerob
fakultatif, dan bakteri yang tumbuh pada permukaan adalah bakteri
aerob walaupun perlu pengkajian lebih lanjut mengenai hal ini.
Kekurangan metode ini adalah sulit menentukan kontaminan dan
kerapatan mikrobia karena jarak antar koloni terlalu rapat.4c.
Teknik Spread Plate (Menyebar)Teknik spread plate (lempeng sebar)
adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam
media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau
mengapuskannya di atas media agar yang telah memadat. Bedanya
dengan pour plate adalah, pencampuranstok kultur bakteri dilakukan
setelah media agar memadat sedangkan pour plate kultur dicampurkan
ketika media masih cair (belum memadat). Kelebihan teknik ini
adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada
seluruh permukaan media agar.2Metode ini dilakukan dengan
menginokulasikan sejumlah bakteri pada medium dan diratakan pada
bagian permukaan medium dengan menggunakan drygalski. Metode ini
cocok digunakan apabila ingin mengetahui bentuk koloni alami dari
suatu bakteri. Kelebihan teknik ini adalah mudah dilakukan dan
mudah menghitung kerapatan mikrobia.Pemilihan teknik ini didasarkan
pada tujuan penelitian / percobaan. Kekurangannya sulit mengetahui
kontaminasi, untuk mengetahuinya perlu perlakuan control.5d.
Dilution Methode (Pengenceran)Tujuan dari teknik ini pada
prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari
substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Sampel
yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril.
Teknik dilusi sangat penting di dalam analisa mikrobiologi. Karena
hampir semua metode perhitungan jumlah sel mikroba mempergunakan
teknik ini, seperti TPC (Total Plate Count). 2Metode pengenceran
dilakukan dengan cara mengencerkan suatususpensi berupa cairan
spesies kemudian diencerkan dalam tabung tersendiri. Dari
pengenceran tersebut kemudian diambil 1 ml umtuk diencerkan lagi.
Jika perlu, dari pengenceran yang kedua diambil 1 ml untuk
diencerkan lebih lanjut hingga pengenceran yang diinginkan. Dari
akhir pengenceran diambil kembali 1 ml untuk disebarkan pada suatu
medium padat sehingga kemungkinan besar akan didapatkan beberapa
koloni yang tumbuh pada medium tersebut. Dilakukannya pengenceran
bertujuan untuk memperoleh biakan atau koloni murni dari suatu
medium. 2e. Micromanipulator MethodeSelain metode yang disebutkan
diatas, terdapat metode lainnya yaitu metode micromanipulator,
dimana kita memerlukan kesabaran dalam pengerjaannya, selain itu
harganya sangat mahal, tetapi dengan menggunakan alat
micromanipulator ini kita dapat mengambil satu bakteri dari sekian
banyak bakteri dengan tidak ikut sertanya bakteri lain. 2B. Media
Pertumbuhan1. Pengertian
Untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroba diperlukan substrat
yang disebut media. Sedangkan media itu sendiri sebelum
dipergunakan harus dalam keadaan steril, artinya tidak ditumbuhi
oleh mikroba lain yang tidak diharapkan.6Media merupakan bahan
nutrisi yang disiapkan unutk pertumbuhan mikroba. Agar-agar
merupakan kompleks merupakan kompleks polisakarida, dihasilkan oleh
alga laut dan digunakan untuk pemadat pada makanan. Keunggulan agar
yaitu mencair pada suhuy yang sama dengan air, namun tetap dalam
keadaan cair sampain suhu 400 C.7Susunan bahan baik yang berbentuk
alami (seperti toge, kentang, daging, telur wortel dan sebagainya)
ataupun bahan buatan (berbentuk senyawa kimia baik organik maupun
anorganik) yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan perkembangan
mikroba dinamakan media. 6Media merupakan suatu kumpulan zat-zat
organik dan anorganik yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba
dengan syarat-syarat tertentu. Organisme hidup memerlukan nutrisi
untuk pertumbuhannya. Subtansi kimia organik dan inorganik
diperoleh dari lingkungan dalam berbagai macam bentuk. Nutrien
diambil dari lingkungan kemudian ditransformasikan melalui membran
plasma menuju sel. Di sel beberapa nutrisi diolah menghasilkan
energi yang digunakan dalam proses seluler.Bakteri dalam medium
juga memerlukan makanan untuk pertumbuhannya. Bakteri yang tidak
punya akar harus berada pada permukaan larutan makanan yang cair.
Pertumbuhan bakteri berarti meningkatnya jumlah sel yang konstituen
(yang menyusun). Apabila disusun 10 bakteri dalam 1 ml medium yang
cocok dan 24 jam kemudian ditemukan 10 juta bakteri tiap
milimeternya, maka terjadilah pertumbuhan bakteri. Meningkatnya
jumlah bakteri terjadi dengan proses yang disebut dengan pembelahan
biner, dimana setiap bakteri membentuk dinding sel baru. 82. Bentuk
Media
Ditentukan oleh ada atau tidaknya penambahan zat pemadat seperti
agar-agar, gelatin dan sebagainya, dikenal tiga bentuk media :a.
Media Padat
Kalau ke dalam media ditambahkan antara 10-15 gr tepung
agar-agar per 1.000 ml media. Jumlah tepung agar-agar yang
ditambahkan tergantung kepada jenis atau kelompok mikroba yang
dipelihara. Ada yang memerlukan kadar air tinggi sehingga kadar
tepung agar-agar harus rendah tetapi ada pula yang memerlukan
kandungan air rendah sehingga penambahan tepung agar-agar harus
sedikit.Media padat biasanya dipergunakan untuk bakteri, ragi,
jamur dan kadang-kadang mikroalge.b. Media Cair
Kalau ke dalam media tidak ditambahkan zat pemadat, umumnya
digunakan untuk pembiakan mikroalge tetapi juga mikroba lain
terutama bakteri dan jamur. Contohnya seperti Nutrient Broth (NB),
Lactose Broth (LB) dan kaldu.
c. Media Semi Padat atau Semi Cair
Kalau penambahan zat pemadat hanya 50% atau kurang dari yang
seharusnya. Ini umumnya diperlukan untuk pertumbuhan mikroba yang
banyak memerlukan kandungan air dan hidup anaerobik atau
fakultatif.Media ini dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan
mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami
percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh
pada media NfB (Nitrogen free Bromthymol Blue) semisolid akan
membentuk cincin hijau kebiruan di bawah permukaan media, jika
media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur. Semisolid
juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi oksigen, misalnya pada
media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau sedikit oksigen
meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga diharuskan
tumbuh merata diseluruh media. 93. Susunan Media
Sesuai dengan fungsi fisiologis dan masing-masing komponen yang
terdapat dalam media, maka susunan media mempunyai kesamaan isi,
yaitu:
a. Kandungan air
b. Kandungan nitrogen baik bersal dari protein, asm amin dan
senyawa lain yang mengandung nitrogen.
c. Kandungan sumbr energi/unsur C baik yang berasal dari
karbohidrat, lemak, protein senywa-senyawa lain.
d. Ion-ion baik sebagai unsur makro dan unsur mikro.
e. Faktor pertumbuhan, umumnya vitamin dan asam amino.
Berdasarkan pada persyaratan tersebut media dapat berbentuk
:
a. Media Alami
Media yang disusun oleh bahan-bahan alami seperti kentang,
tepung, daging, telor, ikan, umbi-umbian lainnya dan sebagainya.
Pada saat sekarang media alami yang banyak digunakan adalah dalam
bentuk kultur jaringan tanaman atau hewan. Contoh lainnya adalah
Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic
Extract.
b. Media Sintetik
Media yang disusun oleh senyawa kimia seperti media untuk
pertumbuhan dan perkembangbiakan bakteri Clostridium .Medium
sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis
dan takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey
Agar.c. Media Semi Sintetik
Media yang tersusun oleh campuran bahan-bahan alami dan
bahan-bahan sintetis, misalnya :
1) Kaldu Nutrisi
Untuk pertumbuhan bakteri
Pepton10,0 g
Ekstrak daging10,0 g
NaCl5,0 mgAkuades1000 ml2) Taoge Agar
Untuk pertumbuhan jamur / fungi
Toge
100 g
Sukrosa60,0 g
Akuades1000 ml
Agar-agar15,0 g3) Wortel agar
Untuk pertumbuhan ragi dan beberapa jenis jamur
Wortel
1.000 g
CaSO
2,0 g
Agar-agar4,0 g
Akuades200 ml
Contoh lainnya dari media semi sintetik adalah PDA (Potato
Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang.
Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara
detail tentang komposisi senyawa penyusunnya.94. Sifat Media
Penggunaan media bukan hanya untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakan tetapi juga untuk tujuan-tujuan lain, misalnya
untuk isolasi, seleksi, evaluasi dan diferensiasi biakan yang
didapatkan. Artinya penggunaan beberapa jeis zat tertentu yang
mempunyai pengaruh terhadap pertumbuhn dan perkembangbiakan
mikroba, banyak dilakukan dan dipergunakan. Sehingga tiap-tiap
media mempuyai sifat (spesifikasi) tersendiri sesuai dengan
maksudnya.
Berdasarkan kepada sifat-sifatnya media dibedakan menjadi :
a. Media Umum
Media tersebut dapat digunakan untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakan satu atau lebih kelompok mikroba secara umum,
seperti agar kaldu, nutrisi untuk bakteria, agar kentang dekstrosa
untuk jamur dan sebagainya.
b. Media Pengaya
Media tersebut dipergunakan dengan maksud memberikan kesempatan
terhadap suatu jenis atau kelompok mikroba untuk tumbuh dan
berkembang lebih cepat dan jenis atau kelompok lainnya yang
sama-sama berada dalam satu bahan. Misalnya untuk memisahkan
bakteri penyebab penyakit tifus (Salmonella typhi) dari bahan tinja
(kotoran manusia).Tanpa media pengaya terlebih dahulu mungkin yang
akan tumbuh dan berkembang adalah semua jenis atau kelompok yang
ada di dalam bahan, karena dalam tinja bukan hanya puluhan tapi
mungkin ratusan jenis kelompok mikrob yang akan didapatkan. Dengan
media pengaya seperti kaldu selenit ataupun kaldu tetrationat maka
kesempatan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba lain akan
terlambat atau terhenti untuk waktu-waktu tertentu, tetapi tidak
untuk Salmonella sp. Misalnya dalam waktu 8-22 jam, maka
kemungkinan besar mikroba lain akan terhambat dan Salmonella sp.
akan tumbuh, sehingga kalau kemudian dibiakan ke dalam media
selanjutnya. Jenis tersebut besar kemungkinan akan didapatkan.
c. Media Selektif
Media yang dapat ditumbuhi oleh satu atau lebih jenis mikroba
tertentu tetapi dalam mnghambat dan mematikan untuk jens-jenis
lainnya ini misalnya media SS (Salmonella Shigella) agar untuk
bakteri Salmonella dan Shigella atau media WB (Wismuth and Blaire)
agar untuk kelompok yang sama.
d. Media Diferensiasi
Media yang dipergunakan untuk penumbuhan mikroba tertentu serta
penentuan sifat-sifatnya seperti media agar darah yang dipergunakan
untuk penumbuhan hemolitik, sehingga bakteri non hemolitik tidak
dapat tumbuh atau akan terhambat.
e. Media Penguji
Media yang dipergunakan untuk pengujian senyawa atau benda
tertentu dengan bantuan mikroba. Misalnya media penguji vitamin,
asam amino, antibiotika, residu pestisida, residu detergen dan
sebagainya. Media ini disamping tersusun oleh senyawa dasar untuk
kepentingan pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba, juga
ditambahkan sejumlah senyawa tertentu yang akan diuji.
f. Media Enumerasi
Media yang dipergunakan untuk menghitung jumlah mikroba pada
suatu bahan. Media ini dapat berbentuk media umum, media selektif
ataupun media diferensial dan media penguji.Semua senyawa di dalam
media dan indicator ditambahkan ke dalamnya, mempuyai fungsi
tertentu sesuai dengan sifat pertumbuhan mikroba. Kehadiran senyawa
atau indicator tersebut tidak asal saja tetapi sudah diketahui dan
diatur jumlahnya sehingga sesuai untuk tempat pertumbuhan dan
perkembangbiakan mikroba. Ini akan selalu didapatkan untuk
media-media diferensial, media selektif ataupun media penguji.10C.
SSA (Salmonella Shigella Agar)
Salmonella Shigella Agar (SSA) merupakan media agar diferensial
yang digunakan untuk mengisolasi Enterobacteriaceaepatogen.
Enterobacteriaceae tersebut, khususnya Salmonella sp dan
Shigella sp. dari makanan, alat-alat kesehatan lain, dan bahan
percobaan klinik. Aksi penghambatan pada bakteri koliform dan
gram-positif dilakukan oleh campuran garam bile dan brilliant green
pada medium. Sodium sitrat menghambat bakteri gram-positif. Neutral
red merupakan pH indikator bagi bakteri yang memfermentasi laktosa
akan menghasilkan koloni berwarna merah jambu.
BeberapaSalmonellasp. and Proteussp. menghasilkan bulatan hitam
(presipitat ferri sulfat) di tengah koloni sebagai hasil produksi
gas H2S.
Komposisinya adalah sebagai berikut :1. Lab-Lemco powder 5,0
gr
Sebagai sumber vitamin B.2. Peptone 5,0 gr
Sebagai sumber nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan
mikroba.3. Laktose 10,0 gr
Sebagai sumber energy dan sebagai bahan karbohidrat.4. Bile Salt
8,5 gr
Sebagai penghambat tumbuhnya bakteri gram positif.5. Sodium
Citrate 10,0 gr
Sebagai sumber nutrisi lain bagi mikroorganisme.6. Sodium
thiosulphate 8,5 gr
Sebagai sumber nutrisi bagi mikroorganisme.7. Ferric citrate 1,0
gr
Sebagai bahan buffer dan aseptor electron.8. Briliant green
0,00033 gr
Sebagai inhibitor atau penghambat tumbuhnya mikroorganisme
lain.9. Neutral red 0,025 gr
Sebagai indicator untuk mengetahui terbentuk tidaknya asam
karena pemecahan karbohidrat.10. Bacto Agar 13,5 grSebagai bahan
pemadat media.
D. Escherichia coliEscherichia coli (E.coli) adalah bakteri
dalam kelompok Enterobacteriaceae yang bersifat gram negatif,
anaerobik fakultatif, berbentuk batang, tidak membentuk spora,
fermentatif dan biasanya bergerak dengan flagela peritrika. Koloni
pada agar nutrien berbentuk bundar agak sedikit cembung tanpa
pigmen, halus dengan pinggiran nyata. Bakteri E.coli mampu
memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan gas. Suhu optimum
untuk pertumbuhannya adalah 37 42o C. Koloni bakteri ini dapat
bertahan dalam beberapa minggu dalam penyimpanan kultur pada suhu
kamar dan dapat hidup beberapa bulan dalam tanah dan air. Beberapa
keturunan akan mati dalam waktu 15 20 menit pada suhu 60o C tetapi
beberapa dari padanya mampu bertahan terhadap pasteurisasi. E.coli
merupakan organisme yang biasanya hidup dalam saluran usus manusia
dan pada hewan tingkat tinggi lainnya merupakan prokariyotis yang
paling banyak dipelajari. E. coli tidak mempunyai membran yang
mengelilingi materi genetic didalamnya. Dinding luar selnya
dilapisi oleh selongsong atau kapsul yang terbentuk dari senyawa
berlendir. Membran sel terdiri dari molekul lipid yang membentuk
dua lapisan tipis dengan berbagai protein yang membentuk lapisan
tersebut. Membran ini bersifat selektif permeable dan mengandung
protein yang dapat melangsungkan pengangkutan nutrient tertentu ke
dalam sel dan hasil buangan ke luar sel.11
Gambar 3 . E.coliSumber : google.comE. Enterobacter
sp.Enterobacter sp. merupakan patogen nosokomial yang menjadi
penyebab berbagai macam infeksi termasuk bakteremia, infeksi
saluran pernapasan bagian bawah, infeksi kulit dan jaringan lunak,
infeksi saluran kemih, infeksi dalam perut, radang jantung, radang
sendi, osteomyelitis, dan infeksi mata.Enterobacter sakazakii
merupakan bakteri gram negatif anaerob fakultatif, berbentuk
koliform (kokoid), dan tidak membentuk spora. Bakteri ini termasuk
dalam famili Enterobacteriaceae. Sampai tahun 1980 E. sakazakii
dikenal dengan nama Enterobacter cloacae berpigmen kuning.
Pada tahun 1980, bakteri ini dikukuhkan dalam genus Enterobacter
sebagai suatu spesies baru yang diberi nama Enterobacter sakazakii
untuk menghargai seorang bakteriolog Jepang bernama Riichi
Sakazakii. Reklasifikasi ini dilakukan berdasarkan studi DNA
hibridisasi yang menunjukkan kemiripan 41% dengan Citrobacter
freundii dan 51% dengan Enterobacter cloacae.Enterobacter sakazakii
bukan merupakan mikroorganisme normal pada saluran pencernaan hewan
dan manusia, sehingga disinyalir bahwa tanah, air, sayuran, tikus
dan lalat merupakan sumber infeksi. Enterobacter sakazakii dapat
ditemukan di beberapa lingkungan industri makanan (pabrik susu,
coklat, kentang, sereal, dan pasta), lingkungan berair, sedimen
tanah yang lembab. Dalam beberapa bahan makanan yang potensi
terkontaminasi E. sakazakii antara lain keju, sosis, daging cincang
awetan, sayuran, dan susu bubuk.
Gambar 4. Enterobacter sakazaki
Sumber : google.com
F. Makanan Terkontaminasi
Produksi dan peredaran makanan di Indonesia telah diatur dalam
Peraturan Menteri Kesehatan No. 329/MenKes/XII/1976 Bab II Pasal 2
peraturan ini menyebutkan bahwa makanan yang diproduksi dan
diedarkan di wilayah Indonesia harus memenuhi syarat-syarat
keselamatan, kesehatan, standar mutu, atau persyaratan yang
ditetapkan oleh Menteri untuk tiap jenis makanan. Upaya pengamanan
makanan dan minuman pada dasarnya meliputi orang yang menangani
makanan, tempat penyelenggaraan makanan, peralatan pengolahan
makakan dan proses pengolahannya. Ada beberapa faktor yang
mempengaruhi terjadinya keracunan makanan, antara lain adalah
higienis perorangan yang buruk, cara penanganan makanan yang tidak
sehat dan perlengkapan pengolahan makanan yang tidak bersih.
Kontaminasi yang terjadi pada makanan dan mimunan dapat menyebabkan
berubahnya makanan tersebut menjadi media bagi suatu penyakit.
Penyakit yang ditimbulkan oleh makanan yang terkontaminasi disebut
penyakit bawaan makanan (food-borne diseases). Departemen Kesehatan
mengelompokkan penyakit bawaan makanan menjadi lima kelompok yaitu
yang disebabkan oleh virus, bakteri, amoeba/ protozoa, parasit dan
penyebab bukan kuman.
Salah satu kontaminan yang paling sering dijumpai pada makanan
adalah bakteri Coliform, Escherichia coli dan Faecal coliform.
Bakteri ini berasal dari tinja manusia dan hewan, tertular ke dalam
makanan karena perilaku penjamah yang tidak higienis, pencucian
peralatan yang tidak bersih, kesehatan para pengolah dan penjamah
makanan serta penggunaan air pencuci yang mengandung Coliform, E.
coli dan Faecal coliform.12G. Cilok
Pentol cilok merupakan sejenis makanan jajanan yang terbuat dari
kanji (pati singkong) dengan atau tanpa ditambahkan daging cincang
yang dibentuk bulat dan direbus hingga matang, memiliki rasa gurih
dan kenyal serta disajikan dengan saus.Cilok (singkatan dari Aci
dicolok) adalah sebuah makanan rakyat khas Jawa Barat yang berasal
dari Indonesia yang terbuat dati tepung Kanji (aci dalam bahasa
sunda) yang kenyal dengan di tambahkan bumbu pelengkap seperti Saus
Kacang, Kecap,dan Saus. Cilok bentuknya bulat-bulat seperti bakso,
hanya saja berbeda bahan dasarnya. Terdapat telur atau cincang
daging di dalamnya, karena terbuat dari bahan dasar tepung kanji
maka cilok jika dimakan rasanya kenyal. Tak hanya disukai oleh
anak-anak, pada zaman modern ini ternyata hapir semua orang
menyukai cilok, seperti para mahasiswa dan orang tua.
BAB IIIMETODE PRAKTIKUMA. Alat dan Bahan
Alat :
1. Kertas gambar, berfungsi sebagai media untuk menggambar
preparat yang telah dididentifikasi.
2. Pensil warna, berfungsi untuk memberikan warna pada gambar
preparat yang telah diidentifikasi.
3. Lampu spiritus (Bunsen), berfungsi untuk mensterilkan saat
sampel makanan digoreskan ke media SSA4. Osse steril untuk
menggoreskan material sampel ke media SSA
5. Petry Dish (Cawan Petri) untuk tempat media SSA dan tempat
isolasi kuman
6. Laminary Air Flow, berfungsi sebagai meja kerja steril untuk
melakukan kegiatan inokulasi / penanaman7. Inkubator, berfungsi
sebagai alat untuk memeram mikroba pada suhu yang terkontrol serta
dilengkapi pengatur suhu dan waktuBahan :
1. Korek api, berfungsi untuk menyalakan lampu spiritus atau
Bunsen2. Media SSA sebagai tempat isolasi kuman dari material
sampel yang digoreskan
3. Kertas label untuk member tanda goresan I, II, III dan IV
4. Sampel makanan berupa cilok
B. Skema Kerja Berisikan Alur Kerja Praktikum
Gambar 5. Skema Kerja Praktikum
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. HASIL
Tabel hasil Pengamatan 1
No.IdentifikasiGambar 6
1. Material
: CilokBentuk koloni: Bulat, tunggal, bercampurWarna koloni:
Pink (Enterobacter sp.)
Pink tua / merah (E. coli)Media : SSA Warna Media : Orange
kemerahanKuman : E. coli dan Enterobacter sp.
E. coli dan Enterobacter sp.
B. PEMBAHASANBerdasarkan praktikum isolasi kuman dari material
cilok pada media SSA dapat diidentifikasi beberapa jenis koloni
kuman atau bakteri, yaitu :
1. E. coli ( bentuk koloni, bulat tunggaal, warna pink tua
sampai merah. Warna tersebut disebabkan oleh kemampuan E.coli dalam
memfermentasi laktosa yang merupakan bahan utama media SSA
sedangkan untuk bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa
seperti Salmonella sp dan Shigella sp. koloninya akan tidak
memiliki warna.
2. Enterobacter sp. ( bentuk koloni bulat tunggal, warna pink
muda agak krem. Warna tersebut disebabkan karena dapat
memfermentasi laktosa yang merupakan bahan utama media SSA
sedangkan untuk bakteri yang tidak dapat memfermentasi laktosa
seperti Salmonella sp dan Shigella sp. koloninya akan tidak
memiliki warna.
Baik E. coli dan Enterobacter sp merupakan bakteri koliform
sehingga dalam media SSA pertumbuhannya terhambat sehingga koloni
yang terbentuk yang kecil.13Dari hasil isolasi, dapat diketahui
bahwa pada cilok yang dijadikan sampel terdapat E. coli dan
Enterobacter sp. yang termasuk dalam bakteri koliform. Kontaminasi
bakteri tersebut dapat terjadi melalui beberapa kemungkinan yang
erat hubungannya dengan personal higien dan higienitas bahan baku
yang digunakan. Selain itu kemungkinan lain kontaminasi bahan
makanan ini dapat berasal dari lingkungan sekitar (udara dan air)
juga dapat berasal dari penjamah sendiri (misalnya penjamah makanan
memiliki kuku panjang dan kotor). Disamping itu kebiasaan tidak
mencuci tangan sebelum melayani pembeli dan sehabis pergi ke
toilet, merupakan sumber kontaminan yang cukup berpengaruh terhadap
kebersihan bahan makanan atau kebiasaan-kebiasaan yang meningkatkan
risiko kontaminasi.BAB VPENUTUP
A. Kesimpulan
1. Media perkembangbiakan memiliki jenis yang beragam,
berdasarkan bentuknya dibagi menjadi media padat, cair, semi padat
atau semi cair.2. Teknik isolasi kuman dibedakan menjadi cara
goresan (streak plate), cara taburan / tuang (pour plate), cara
sebar (spread plate), cara pengenceran (dilution method), serta
micromanipulator (the micromanipulator method).3. Teknik isolasi
yang digunakan pada praktikum ini adalah teknik goresan dengan
media yang dipilih adalah SSA.4. Berdasarkan isolasi material cilok
yang dilakukan dapat diamati koloni E. coli yang memiliki bentuk
koloni, bulat tunggal, warna pink tua sampai merah serta koloni
Enterobacter sp. yang memiliki bentuk koloni bulat tunggal, warna
pink muda agak krem5. Warna koloni yang kemerahan atau pink
disebabkan karena kemampuan memfermentasi laktosa yang menjadi
bahan utama SSA sedangkan pada bakteri yang tidak mampu
memfermentasi laktosa koloninya tidak bewarnaB. Saran
Dari praktikum pemeriksaan air yang telah dilakukan, penulis
memberikan saran :
1. Dalam melakukan isolasi harus dilakukan dengan teliti.2.
Dalam melakukan langkah-langkahnya harus dilakukan secara hati-hati
dan berusaha agar sampel tetap steril (dipanaskan pada bunsen).3.
Penggoresan pada media hendaknya dilakukan dengan hati-hati agar
medianya tidak rusak.4. Dalam mengamati hasil, hendaknya dilakukan
secara cermat terutama untuk membedakan tiap koloninyaDAFTAR
PUSTAKA1. Waluyo,lud. 2005. Buku Petunjuk Praktikum Mikrobiologi
Umum. Malang: UMM2. Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam
Praktek. Jakarta : Gramedia3. Burrow, W.1959. Textbook of
Microbiology. W.B. Saunders Company. Philadelphia,pp.150.4. Black,
J. G. 1999. Microbiology : Principles and Exploration. Prentice
Hall,New Jersey5. Pelczar, M.J dan E.C.S Chan, 1986. Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Terjemahan R.S.Hadioetomo dkk. UI Press. Jakarta,
hal. 686. Suriawiria, Unus. 2005. Mikrobiologi Dasar. Jakarta :
Papas Sinar Sinant
7. Suryanto, D. dan E. Munir. 2006. Bahan Ajar : Mikrobiologi.
USU-Press, Medan8. Volk, W. A. dan M. F. Wheeler. 1989.
Mikrobiologi Dasar, Penerbit Erlangga, Jakarta.9. Dwidjoseputro, D.
1994. Dasar- Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan.
10. Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta:
Raga Grafindo Persada11. Cahyonugroho, Okik
Hendriyanto.2007.Pengaruh Intensitas Sinar UV dan Pengadukan
Terhadap Reduksi Jumlah Bakteri E.coli. Jurnal Ilmiah Teknik
Lingkungan Vol.2 No.1 hal 18-23.12. Susanna,Dewi & Budi
Hartono.2003.Pemantauan Kualitas Makanan Ketoprak dan Gado-Gado di
Lingkungan Kampus UI Depok, Melalui Pemeriksaan Bakteriologis.
Makara, Seri Kesehatan Vol. 7 No. 1 Juni 2003. Diunduh dari
http://repository.ui.ac.id/contents/koleksi/2/881afd4e6559e236721be556a933f22c0043940d.pdf13.
Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta :
Gramedia
LAMPIRAN
1. Alat dan Bahan Isolasi Kuman
2. Hasil praktikum Isolasi kuman
Mulai
Alat dan bahan disiapkan
Bahan dan alat dibawa ke meja steril (laminary air flow)
Osse dipanaskan sampai merah kemudian didinginkan
Material sampel (cilok) diambil dengan Osse dan digoreskan pada
media SSA
Digoreskan pada media SSA dengan urutan goresan I, II, III dan
IV (pada tiap awal goresan osse disterilkan dulu)
Cawan petri dututup dengan posisi terbalik dan diberi label pada
tiap goresn
Dimasukkan ke dalam incubator dengan suhu 370C
Ditunggu selama 24 jam
Diambil dari inkubator
Selesai
Diamati dan digambar koloni yang terlihat
22
