LIETUVOS SVEIKATOS MOKSLŲ UNIVERSITETAS

VETERINARIJOS AKADEMIJA

VETERINARIJOS FAKULITETAS

ANATOMIJOS IR FIZIOLOGIJOS KATEDRA

Eugenija Vaičiūnaitė

KAČIŲ KIAUŠIDŽIŲ HISTOLOGINIAI TYRIMAI

Veterinarinės medicinos vientisųjų studijų

MAGISTRO BAIGIAMASIS DARBAS

Darbo vadovas : doc. Dr. Vidmantas Lasys

Kaunas, 2014

DARBAS ATLIKTAS ANATOMIJOS IR FIZIOLOGIJOS KATEDROJE

PATVIRTINIMAS APIE ATLIKTO DARBO SAVARANKIŠKUMĄ

Patvirtinu, kad įteikiamas magistro baigiamasis darbas „KAČIŲ KIAUŠIDŽIŲ HISTOLOGINIAI

TYRIMAI“.

1. Yra atliktas mano paties/pačios;

2. Nebuvo naudotas kitame universitete Lietuvoje ir užsienyje;

3. Nenaudojau šaltinių, kurie nėra nurodyti darbe, ir pateikiu visą panaudotos literatūros

sąrašą.

(data) (autoriaus vardas, pavardė) (parašas)

PATVIRTINIMAS APIE ATSAKOMYBĘ UŽ LIETUVIŲ KALBOS TAISYKLINGUMĄ ATLIKTAME DARBE

Patvirtinu lietuvių kalbos taisyklingumą atliktame darbe.

(data) (autoriaus vardas, pavardė) (parašas)

MAGISTRO BAIGIAMOJO DARBO VADOVO IŠVADOS DĖL DARBO GYNIMO

(data) (darbo vadovo vardas, pavardė) (parašas)

MAGISTRO BAIGIAMASIS DARBAS APROBUOTAS KATEDROJE/KLINIKOJE

(aprobacijos data) (katedros/klinikos vedėjo/jos vardas,

pavardė)

(parašas)

Magistro baigiamojo darbo recenzentas

(vardas, pavardė) (parašas)

Magistro baigiamųjų darbų gynimo komisijos įvertinimas:

(data) (gynimo komisijos sekretorės (-riaus) vardas, pavardė) (parašas)

Magistro baigiamasis darbas yra įdėtas į ETD IS

(gynimo komisijos sekretorės (-riaus) parašas)

TURINYS

2

ĮVADAS

Naminė katė – (lot. Felis catus), viena iš mažesnių katinių šeimos atstovų.Nuo senų senovės iki šių

laikų katės auginamos kaip naminiai augintiniai.

Katėms būdingas rojos sezoniškumas, taip pat rujai labai daug įtakos turi ne tik sezonas, aplinkos

temperatūra, patino buvimas, bet ir šviesa - apšvietimo galingumas bei trukmė.Tai rodo, jog su

kiaušidėmis glaudžiai sąveikauja hipofizė bei pagumburis.Gilinantis į katinių šeimos patelių

reprodukcines savybes bei jas tiriant labai svarbu įvertinti aplinkos veiksnių įtaką, endokrininius

procesus ir jų įtaką kiaušidėse vykstantiems gametogenezės procesams.

Gametogenezės procesus galima įvertinti atliekant histologinius tyrimus: atlikti morfometrinę

kiaušidžių folikulų analizę, taip pat histologiškai diferencijuoti skirtingus folikulus.Labai svarbu dar

3

ir tai, jog histologiniai kiaušidžių tyrimai leidžia pažvelgti į kiaušidžių mikrostruktūras, tiriant

kiaušidės folikulus ir nežinant gyvūno amžiaus, galima apytiksliai jį nusakyti, taip pat įvertinti ar

kiaušidė funkcionavo normaliai, įvertinti folikulogenezę (folikulų augimą).

Kuomet kalbame apie morfometrinę analizę, šis tyrimo metodas leidžia įvertinti įvairių stadijų

kiaušidžių folikulų dydį, tiksliai išmatuoti pačius folikulus ir ovocitus, pagal gautus duomenis

galima diferencijuoti folikulus į grupes, pagal subrendimo lygį.

Panašų tiriamąjį darbą atliko ir japonų mokslininkai, kurie nagrinėjo kiaušidžių folikulų

morfometriją bei vertino subrendimo lygį (The effect of ovarian status and follicular diameter on

maturational ability of domestic cat oocytes,.Uchikura K, Nagano M, Hishinuma M. 2011.

Department of Theriogenology, School of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture,

TottoriUniversity, Japan).

Mikroskopinė bei morfometrinė analizės ypač aktualios pritaikant jas teorijoje, kuomet lyginami

keli tyrimai, atlikti su skirtingo amžiaus, tačiau tos pat rūšies gyvūnais, tuomet galima stebėti, kaip

skiriasi tiek kokybiškai, tiek kiekybiškai kiaušidės sandara ir joje esančių folikulų skaičius bei

klasės, ir kad tarp tos pačios rūšies ir amžiaus grupės individų tų pačių kiaušidžių folikulų klasių

pastebima dydžių ir dažnai kiekio koreliacija.

Darbo tikslas:

Histologiškai ištirti panašaus amžiaus kačių kiaušidžių įvairių stadijų folikulus: atlikti morfometrinę

analizę ir palyginti gautus duomenis.

Darbo uždaviniai :

1. Atlikti morfometrinę analizę: išmatuoti užuomazginius kačių kiaušidžių folikulus ir juose

esančius ovocitus (taip pat ir branduolį).

2. Išmatuoti pirminius kačių kiaušidžių folikulus ir juose esančius ovocitus .

3. Išmatuoti antrinius kačių kiaušidžių folikulus ir juose esančius ovocitus

1. LITERATŪROS APŽVALGA

4

Surinktoje literatūroje nagrinėjama histologinė kačių ir kitų žinduolių patelių bei žmogaus

kiaušidžių struktūra, aprašomas kiaušidžių folikulų vystymasis bei vystymosi stadijos, taip pat

neuroendokrininės reguliacijos įtaka kiaušidžių folikulų vystymuisi ir fiziologiniai lytinio ciklo

dėsningumai kačių organizme.

Žinduolių patelių lytinei sistemai būdinga identiška anatominė sandara : kiaušidės, kiaušintakiai,

gimda, makštis, lytinės lūpos ir varputė.Vienas iš svarbiausių patelių reprodukcinių organų yra

kiaušidės.Jos vykdo keturis svarbius reprodukcijai procesus :

1.Gametogenezę.

2.Steroidinių hormonų sintezę ir sekreciją(estrogeno ir progesterono).

3.Hormoninės reguliacijos funkciją bei postnatalinio augimo skatinimą.

4.Inicijuoja antrinių lytinių požymių pasireiškimą.

(Schatten H., Constantinescu M.G., Comparative reproductive biology ,99 p.)

Kiaušidžių funkcija glaudžiai susijusi su pagumburiu bei hipofize.Pagumburio –hipofizės -

kiaušidžių (angl. hypothalamic-pituitary-gonadal HPG) sistema, kuri reguliuoja reprodukcinę

funkciją („The role of hypothalamic-pituitary-gonadal hormones in the normal structure and

functioning of the brain.“Vadakkadath Meethal S, Atwood C.S.) – tai neuroendokrininė reguliacija.

1.1 Kačių lytinis ciklas

Katės dažniausiai lytinę brandą pasiekia sulaukusios 10 mėnesių, o katinai 9-12 mėnesių amžiaus.

Kačių reprodukcinės fiziologinės savybės įdomios tuo, kad katės yra sezoniškai poliestriniai

gyvūnai („Comparative reproductive biology“ Schatten H., Constantinescu M.G. 103p.).Tai reiškia

jog jos gali periodiškai rujoti viso dauginimosi sezonono metu , jei ciklo nenutraukia nėštumas arba

kiti veiksniai.

Kačių ruja vyksta sezoniškai: šiaurinėse klimato juostose prasideda apytiksliai vasario ir baigiasi

spalio mėnesį.Daug įtakos rujai turi šviesa.Tai įrodo atliktas eksperimentas, kuomet (ne rujos

sezono laikotarpyje) mėnesį laiko 12 valandų per parą katės buvo laikomos 150 lux. šviesoje, po to

14 valandų per parą tokiame pačiame apšvietime ir praėjus 15 dienų, 5 iš 6 kačių pradėjo rujoti.

(„Induction of oestrus in cats by photoperiodic manipulations and social stimuli“ CHANTAL

MICHEL Laboratory Animals 1993.).Todėl katės priskiriamos prie gyvūnų, kurių lytinis aktyvumas

5

padidėja, kuomet šviesusis paros laikotarpis tampa ilgesnis už tamsųjį. Šviesa veikia endokrininę ir

nervų sistemą .Dėl šviesos poveikio kankorežinė liauka (glandulla pinealis) sintetina mažiau

melatonino.Dėl melatonino poveikio kačių lytinis aktyvumas sumažėja ((Goericke-Pesch S (2010)

Reproduction control in cats: new developments in non-surgical methods. J Feline Med. Surg.

12(7):539-546), todėl melatonino implantai naudojami veterinarinėje medicinoje kačių rujos

kontrolės tikslais), o sumažėjus šio hormono kielio lytinis aktyvumas suintensyvėja.

Dar viena kačių reprodukcinė ypatybė yra ta, jog joms būdinga provokacinė ovuliacija (ovulatio

provocata) – tai reiškia, jog ovuliacija įvyksta tik po lytinio akto, paprastai per 27 valandas

(Naminių gyvūnų mikroskopinė anatomija, 2006 Padaiga A., Lasys V., Sederevičius A. 166p.)

Kačių lytinis ciklas - jį sudaro penkios fazės.

1 Lentelė: Lytinio ciklo fazės:

Lytinio ciklas

1.Proestus - Priešrujis

2.Estrus - Ruja

3.Metestrus - Porujis

4.Diestrus - Tarprujis

5.Anestrus – Ramybės fazė

Proestrus ir estrus – šias fazes apima folikulinė stadija.

Proestus – Priešrujis. Tai paruošiamoji fazė prieš rują, pasireiškia lyt. organų hiperemija.Šiso fazės

metu didėja estrogenų koncentracija, auga folikulai, vystosi endometriumas.

Estrus – Ruja. Tai estrogenų koncentracijos piko metas, kai patelė pasiruošusi poruotis su patinu.

Ovuliacija įvyksta, tik po poravimosi su patinu, dažniausiai rujos pabaigoje.Po to estrogeno

koncentracija ima mažėti.

Metestrus – Porujis.Šiuo metu vyksta corpus luteum vystymasis ir progesterono sekrecija.

Diestrus – Tarprujis.Šiuo metu corpus luteum išskiria didelius kiekius progesterono.Jei nėra įvykęs

apsivaisinimas, geltonasis kūnas (corpus luteum) rezorbuojasi – vyksta liuteolizė, dėl

prostaglandino PGF2ά poveikio, kuris sintetinamas gimdoje.Tuomet progesterono koncentracija

mažėja, dėl to gonadotropinų koncentracija padidėja ir taip vėl pradedamas naujas rujos (estrus)

ciklas.

Anestrus – Ramybės fazė.Tai fazė, kurios metu kiaušidės būna neaktyvios. (Schatten H.,

Constantinescu M.G. Comparative reproductive biology.103psl.).Ši fazė trunka iki kito poravimosi

sezono, nes katės yra sezoniškai poliestriniai gyvūnai.

6

1.2. Kačių kiaušidžių struktūra

Kiaušidė gali būti skirstoma į dalis: žievinę dalį (išorinę) bei šerdinę dalį (vidinę).

Kiaušidė yra sudaryta iš dviejų komponentų: stromos ir parenchimos, todėl pagal sandaros pobūdį

kiaušidė priskiriama parenchiminiams organams (1pav.) .

Kiaušidės stromą (stroma ovarii) sudaro intersticinis audinys, kuris suteikia kiaušidei formą, tai

tarsi kiaušidės žievės ir šerdies griaučiai.Stromoje yra kraujagyslių, limfagyslių bei nervų įeinančių

į kiaušidę per kiaušidės vartus (hilus ovarii) (8 pav.)..

Parenchiminė dalis (ypač žievėje) svarbi funkciškai.Šerdinėje dalyje yra įsiterpusios stambios

kraujagyslės, nervai.

1pav.Katės kiaušidė

http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-

_Oogenesis_and_Ovulation

1.2.1.Kiaušidės dangalai

Kiaušidės paviršių dengia paviršinis epitelis (epithelium superficiale), kurį sudaro mikrogaureliniai

kūbiškieji epiteliocitai (2pav.).Kitas kiaušidės dangalas, kuris yra po paviršiniu epiteliu – tai

7

balsganasis dangalas (tunica albuginea), kuris sudarytas iš glaudžiojo netaisyklingojo kolageninio

jungiamojo audinio, kuriame yra negausus kraujagyslių tinklas.

2 pav. Kiaušidės dangalai – histologinė sandara (x 10 padidinimas)

http://www.medicalhistology.us/twiki/bin/view/Main/FemaleReproductiveSystemAtlas16

1.2.2. Kiaušidės žievė

Kiaušidės žievė (cortex ovarii) (3pav.) : kačių kiaušidėms, kaip ir daugelio mėsėdžių būdinga tai,

jog kiaušidės žievėje yra kiaušidės endokrinocitai, folikulai ir geltonasis kūnas (corpus

luteum).Žievės stroma, kuri sudaryta iš puriojo kolageninio jungiamojo audinio, gaubia

parenchimos elementus – endokrinocitų sankaupas, taip pat kiaušidės folikulus ir geltonąjį kūną.

3 pav.Katės kiaušidės žievės histologinė struktūra su žievėje esančiais įvairių stadijų folikulais

http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-

_Oogenesis_and_Ovulation

2013 m. gruodis 22 d. 19:53

1.2.3. Kiaušidės šerdis

8

Kiaušidės šerdį (medulla ovarii) (4pav.) sudaro purusis kolageninis audinys ir neruožuotųjų

miocitų virželiai. Mėsėdžių kiaušidės šerdies sandarai yra būdinga tai, jog joje yra kiaušidės tinklo

(rete ovarii) liekana, kurią sudaro šerdies stygos (chorda medullaris).

4 pav. Kiaušidės šerdis

http://meddic.jp/ovarian_medulla

1.2.2.1 Kačių kiaušidžių folikulai ir jų klasifikacija

Kiaušidžių folikulai, pagal dydį ir juos gaubiančių dangalų išsivystymo lygį, skirstomi į

užuomazginius, pirminius, antrinius, tretinius( pūslinius) kiaušidės folikulus.

Užuomazginis kiaušidės folikulas( folliculus ovaricus primordialis) (5 pav. 9 Pav.) sudarytas iš

pirminio ovocito, kurį gaubia vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių epiteliocitų.Mikroskopu

stebint kiaušidės žievę, galima pastebėti, jog šie folikulai yra po balsganuoju dangalu, kiaušidės

periferijoje.

5 pav.Autorės nuotrauka.Užuomazginis folikulas x40.

Pirminis kiaušidės folikulas (folliculus ovaricus primarius) (6 pav., 7 pav. ) sudarytas iš pirminio

ovocito ir vieno sluoksnio kūbiškųjų arba stulpiškųjų epitelio ląstelių, kurias nuo stromos skiria

pamatinė membrana.

9

6 pav.Autorės nuotrauka. Pirminis folikulas. X40

7 pav. http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf

Antrinis kiaušidės folikulas (folliculus ovaricus secundarius). Pirminis ovocitas auga bei

kinta.Pirmas folikulinių epiteliocitų sluoksnis, gaubiantis ovocitą – tai stulpiškieji epiteliocitai,

kurie formuoja spindulinį vainiką (corona radiata), taip pat šios ląstelės sintetina skaidriąją zoną

(zona pellucida).Kai formuojasi antrinis folikulas, susidaro folikulinė ertmė (antrum folliculare) (11

pav.), kuri formuojantis pūsliniam folikului prisipildo folikulinio skysčio. (10 pav.)

Tretinis arba pūslinis folikulas (folliculus ovaricus vesiculosus) –sudarytas iš pirminio ovocito.Jį

gaubia sienelė, kurią sudaro vidinis folikulinių ląstelių sluoksnis bei išorinis žievės jungiamojo

audinio apvalkalėlis, kuris diferencijuojamas į išorinį apvalkalėlį (theca externa) ir vidinį

apvalkalėlį (theca interna).

Folikulinės ląstelės , supančios pirminį ovocitą skirstomos pagal vietą, kurią užima folikule:

folikulinės ląstelės supančios pirminį ovocitą ir esančios virš zona pellucida yra vadinamos

spindulinio vainiko (corona radiata) ląstelėmis. (Comparative reproductive biology Schatten H.,

Constantinescu M.G.100p).O tos folikulinės ląstelės, kuriso yra atsikišusios nuo vidinės

apvalkalėlio sieneles – tai kiaušialąstės iškylą ( cummulus oophorus ) sudarančios ląstelės.

10

Apvalkalėlis apsuptas endokrinocitų, kurių funkcija yra sintetinti ir išskirti hormonus (estradiolį,

estroną/folikuliną, estriolį).Pūslinis folikulas yra labai didelis palyginti su kitais kiaušidės folikulais,

todėl užma gana daug vietos kiaušidės žievėje.Kačių kiaušidėse susiformuoja net keletas pūslinių

folikulų – tiek, kiek katė atsiveda jauniklių.

Poliovuliacinis folikulas

Atliekant histologinius kiaušidžių tyrimus ir stebint mėginius mikroskopu buvo pastebėtas atipiškas

folikulas : pagal struktūrą buvo galima priskirti antriniams folikulams, tačiau jame buvo ne vienas

pirminis ovocitas, o du, šiek tiek mažesni pirminiai ovocitai.Panašūs atvejai buvo nagrinėti ir

angl.Domestic cat (Felis catus) polyovular follicles (Naminių kačių poliovuliaciniai folikulai)

Miclăus V., I. Groza, L. Oana (2007).

8 pav. Kiaušidė : mažėjančio aktyvumo fazėje

http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf

11

9 Pav. Užuomazginiai folikulai kiaušidėje

http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf

10 pav. Pirminiai folikulai katės kiaušidėje

http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf

12

11 pav. Antrinis folikulas su folikuline ertme

http://ocw.tufts.edu/data/4/221179.pdf

1.2.2.2 Kačių kiaušidžių folikulų klasifikacija

Kačių kiaušidžių folikulų klasifikavimas daugelyje literatūros šaltinių buvo pagrįstas remiantis

žmogaus bei graužikų kiaušidžių folikulų klasifikacija, mokslinių darbų autoriai klasifikuoja

folikulus skirtingai, priklausomai nuo to, kokie kiaušidžių folikulų tyrimai atliekami.Taip pat

pastebėtina ir tai, jog nėra nustatytos vieningos kačių kiaušidžių įvairių stadijų folikulų

klasifikacijos.

Atliekant histologinius kiaušidžių tyrimus, kurių metu tiriami įvairių stadijų kiaušidžių folikulai

pasitelkiant morfometrinės analizės principus patogiausia suskirstyti kiaušidžių folikulus pagal

išsivystymą ir dydį .Tokį suskirstymą nurodo ir Bristol-Gould S., Woodruff TK. (2006):

Užuomazginiai kiaušidės folikulai - apie ovocitą išsidėstęs vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių

ląstelių.Nurodoma jog užuomazginio folikulo ovocitas gali siekti >25µm.(jei ovocitą supa

plokščiosios folikulinės ląstelės, jis priskiriamas B kategorijai, jei supa kūbiškosios –B/C

kategorijai.

Pirminiai kiaušidės folikulai – ovocitą supa vienas sluoksnis kūbiškųjų arba stulpiškųjų folikulinių

ląstelių.Pirminio ovocito folikulo ovocitas viršija 25µm.

13

Antriniai kiaušidės folikulai – ovocitą supa mažiausiai du, bet dažniausiai daug daugiau sluoksnių

kūbiškųjų epiteliocitų, o juos supa apvalkalėlis (theca).Todėl pagal kūbiškųjų ląstelių sluoksnius

folikulai gali būti vertinamas antrinių folikulų subrendimo lygis.

Tretiniai arba pūsliniai folikulai - įskaitant ir mažus pūslinius folikulus, kurių diametras 300–

1000 µm. Pūsliniai folikulai pasižymi tuo, jog jiems būdingas folikulinė ertmė, pripildyta

folikulinio skysčio. Ši ertmė didėja augant folikului..Kačių subrendusio pūslinio folikulo diametras

gali siekti iki 2 mm.

Ankstesniuose tyrimuose Bristol S.K. and. Woodruff T.K (2003) ( angl. Follicle-restricted

Compartmentalization of TGF-β Superfamily Ligands in the Feline Ovary ) remiasi Gougeon et al.

(angl. Morphometric studies of small follicles in ovaries of women at different ages (1987) –

(Skirtingo amžiaus moterų mažų kiaušidžių folikulų morfometriniai tyrimai )ir Meredith et al.

(angl.Classification of small type B/C follicles as primordial follicles in mature rats (2000)

-Subrendusių žiurkių mažū B/C tipo užuomazginių folikulų klasifikacija) siūloma klasifikacija ,

kuri buvo pritaikyta atliekant tyrimus.

1.2.2.3 ovocitai ir ovuliacija

Užuomazginės lytinės ląstelės kiaušidėse virsta į ovogonijas, o po ovogenezės – į

kiaušialąstes.Skiriamos dvi ovogenezės stadijos : mitozė ir mejozė.Mėsėdžių ovogonijų mitozei

būdinga tai, jog ji trunka ne tik vaisiaus iki atvedimo vystimosi metu, bet ir pirmąsias po atvedimo

savaites. (Naminių gyvūnų mikroskopinė anatomija, 2006 Padaiga A., LasysV., Sederevičius A.

161psl.)

Vėliau įvyksta I mejozė, kurios metu ovogonijos diferencijuojasi į pirminius ovocitus.Antrasis

mejozinis dalijimasi būna tik po ovuliacijos ir sustoja metafazėje, jei įvyksta apsivaisinimas,

baigiamas II mejozinis dalyjimasis http://www.usfca.edu/fac_staff/dever/webmenstruation.pdf .

2.TYRIMO METODIKA

Įsisavintos tyrimų metodikos

Histologinė technika:

1.Histologiniai preparatai paimti operacijos metu fiksuojami 10 proc. formalinu, laikomi

kambario temperatūroje 24 val.

2.Prieš atliekant mėginių pjūvius mikrotomu, jie dehidratuojami 60, 70, 80, 96, 100 proc.

etilo spiritu.Vykdoma laipsninė dehidratacija, tai padeda išvengi audinių struktūros

pokyčių.Mirkoma po 2 val. kiekviename skirtingos koncentracijos spirite.

14

3.Standinimas parafinu.Audiniai apliejami parafinu ir suformuojami parafininiai blokai.

4.Mikrotomu atliekami pjūviai : 10 – 15 vienos kiaušidės pjūvių, 5 µm storio.Pjūviai dedami

ant objektinių stiklelių.Naudojama kas 5 nuopjova. Po to nuopjovos dedamos į 37 °C temperatūros

vandens vonelę, tai padeda išlyginti raukšles, tuomet nuopjovos uždedamos ant stiklelių ir

džiovinamos.

5.Iš pjūvių pašalinamas parafinas.Deparafinavimas : prieš dažant pjūvius, stikleliai su

pjūviais merkiami į ksileną 5 min., nusausinami, tuomet į spiritą 96 proc. 5 min, nusausinami, po to

į distiliuotą vandenį 5 min, nusausinti neliečiant pjūvio.

6.DAŽYMAS HEMATOKSILINU- EOZINU.

1) ant pjūvio užpilama hematoksilino ir laikoma 7 min.;

2)Skalauti vandentiekio vandeniu 5 min.;

3)Eozinas 5 min.;

4)Skalaujama vandeniu 5 min.;

5)Mirkyti spirite : 70, 96 proc. po 4 – 5 s.;

6)Nusausini;

7) 1min. laikyti ksilene;

8)Nuplauti ;

9)Užlašinti Kanados balzamo, uždedamas dengiamasis stiklelis ir prispaudžiamas.

Paruošus kiaušidžių histol. mėginius stebėjimui mikroskopu, vertinami kačių kiaušidžių

folikulai:įvertinama folikulų stadija, dydis (matmenys), gauti duomenys palyginami.

Histologinių preparatų tyrimas

Histologiniai kiaušidžių mėginių tyrimai buvo atliekami OLYMPUS CX 31 mikroskopu,

fotografuojant OLYMPUS N 547 fotoaparatu. Skaitmeninės fotografijos buvo naudojamos

morfometrinei kiaušidžių folikulų analizei atlikti. Pasitelkiant programą UTHSCSA Image tool 3

version for Windows atliekama morfometrinė analizė, esant reikalui vaizdų kokybė bei

kontrastingumas koreguotas pasitelkiant daugiafunkcijinę vaizdų apdorojimo programą GIMP

pagerinant vaizdinę raišką ir siekiant preciziškumo .Statistinė analizė atlikta naudojant programą

MS Excel 2003 bei kompiuterinė programa „Graph Pad QuickCalcs“.

Įvertinus mėginius folikulai sugrupuoti į 3 grupes (klases):

2 Lentelė: folikulų grupės

Nr. Folikulų grupės (klasės)1. Užuomazginiai folikulai .

15

2. Pirminiai folikulai 3. I.Antriniai folikukai – ankstyvojoje stadijoje

Pūslinių folikulų susiformuoja tiek, kiek patelė veda jauniklių : vienvedžių 1, daugiavedžių –

keletas.Katės subrendusio pūslinio folikulo skersmuo esti 2mm.

Tiriamos keturių kačių kiaušidės.Tiriamųjų amžius I - 8mėn., II 1m., III – 1,8 m., IV –

7mėn.Histologinė medžiaga buvo surinkta iš pacientų ovariohisterektomijos metu. Atliekant

procedūrą buvo taikoma sisteminė nejautra.

Atlikti matavimai:

Matuotas užuomazginių, pirminių antrinių ir tretinių folikulų :plotas, diametras.

Skaidriosios zonos storis antriniuose folikuluose.

Ovocitų plotas, diametras.

Ovicituose esančių branduolių plotas, diametras.

Pamatinės membranos storis.

Folikulinių ląstelių diametras.

3.TYRIMŲ REZULTATAI

3.1.Kačių nuo 7mėn. iki 1,8 metų amžiaus užuomazginių folikulų diametrų statistinė bei

morfometrinė analizė, palyginimas.

10

15

20

25

Diametras

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų diametrai

katė I katė II katė III katė IV

3.1 pav.

16

Atlikus matavimus ir statistiškai apdorojus gautus duomenis, rezultatai parodė, jog visų keturių

tiriamų kačių užuomazginių kiaušidės folikulų diametrai yra labai panašūs (pateikiami skaičiavimų

vidurkiai ir standartiniai nuokrypiai):I katė 21,5 ± 1,296 µm, II katė 21,37 ± 0,35µm, IIIkatė 21,19

± 1,04µm, IV katė 22,32 ±0,33µm.

Įvairavimo koeficientas (variacijos koeficientas) 0,04, o išreiškus proc. - 4.Patikimumas p<0,05,

rodo, jog duomenys statistiškai patikimi.

3.2 Kačių nuo 7mėn. iki 1,8 metų amžiaus užuomazginių folikulų plotų statistinė bei

morfometrinė analizė, palyginimas:

300

320

340

360

380

Plotas

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.2 pav.I katė 375,8±16,65 µm², II katė 375,25±14,99 µm², IIIkatė 374,37± 15,7 µm², IV katė 375,3267

±12,4 µm².

Įvairavimo koeficientas 0,034,o proc. 3.Tiriamųjų kačių užuomazginių folikulų plotai labai panašūs,

patikimumas p<0,05, rodo, jog duomenys statidtiškai patikimi.

3.3 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,

palyginimas.

17

10

12

14

16

18

20

Diametras

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų diametrų palyginimas

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.3 pav.I katė 19,63±0,54, IIkatė 19,36±0,53 µm, IIIkatė 19,63±0,84 µm, IVkatė 19,87±1,35

µm.Užuomazginių folikulų ovocitų diametrai yra didesni I katės ir IV katės, tačiau visų keturių

kačių ovocitų diametrai tarpusavyje yra panašūs.Įvairavimo koeficientas yra 0,0395, proc. 4 .

3.4 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas

0

50

100

150

200

250

300

350

Plotai

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.4 pav.

I katė 286,73±2,83 µm², II katė 345,7733±4,31 µm², III katė311,1267±24,77 µm², IV katė

327,98±26,44 µm².Užuomazginių folikulų plotų vidurkiai mažai skiriasi – didesni I ir IV katės.

Įvairavimo koeficientas 0,086, 9%

3.5 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir morfometrinė

analizė, palyginimas.

18

0

1

2

3

4

5

6

Diametras

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.5 pav.

I katė 5,18±0,094 µm, II katė 5,33±0,335 µm, III katė 5,51±0,7 µm, IV katė 5,15±0,6 µm.

Įvairavimo koeficientas 0,084, o proc. 8.Visų keturių kačių užuomazginių folikulų ovocitų

branduolių diametrai labai panašūs.

3.6 Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė

analizė, palyginimas.

0

5

10

15

20

25

Plotas

p < 0,05

Užuomazginių kiaušidės folikulų ovocitų branduolių plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.6pav.

I katė21,23±1,1 µm², II katė 20,21±0,87 µm², III katė 23,4±4,45 µm², IV katė 21,96±3,19 µm².

Įvairavimo koeficientas 0,12, procentinė išraiška : 12%.Užuomazginių folikulų ovocitų branduolių

plotai mažai skiriasi.

19

3.7 Užuomazginių kiaušidės folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė analizė,

palyginimas.

01234567

Matmenys

Katė I Katė II Katė III Katė IV

Užuomazginių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių plotis ir aukštis

plotis aukštis

3.7 pav.

Pločio įvairavimo koeficientas 0,092, procentais - 9%, aukščio - 0,23, procentais- 23%

Pločiai : I katė 6,66±0,54 µm,II katė 6,5±0,61 µm, III katė 6,05±0,62 µm, IV katė 6,49±0,48 µm.

Aukščiai : I katė 1,23±0,29 µm, II katė 1,41±0,50 µm, III katė 0,92±0,349 µm, IV katė 0,93±0,19

µm.Visų keturių kačių užuomazginių folikulų folikulinių ląstelių pločiai tarpusavyje panašūs, tačiau

ženkliai viršija aukščių vidurkius.Kiekvienos katės folikulinių ląstelių aukščių vidurkiai taip pat

panašūs, bet akivaizdžiai mažesni už folikulinių ląstelių plotį.

3.8 Užuomazginių kiaušidės folikulų pamatinės membranos storis

3.8 pav.

I katė 0,70±0,0057 µm,

II katė 0,676±0,041 µm,

III katė 0,69±0,01 µm,

IV katė 0,64±0,173 µm.

Įvairavimo koeficientas

0,04 , o proc. išraiška

4.Visų keturių kačių

užuomazginių folikulų pamatinių membranų storiai labai panašūs.

3.9Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,

palyginimas.

20

p < 0,05

0

0,2

0,4

0,6

0,8

Storis

Užuomazginių folikulų pamatinės membranos storis

Katė I Katė II Katė III Katė IV

0

10

20

30

40

Diametras

p < 0,05

Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.9 pav.

Katė I 36,98±2,62 µm, Katė II 35,04±0,82 µm, Katė III 37,06±0,6 µm, Katė IV 37,33±1,1

µm.Įvairavimo koeficientas 0,043, proc. 4 .Pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrai tarpusavyje

mažai skiriasi.

3.10 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

500

1000

1500

Plotas

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.10 pav.

I katė 1005,31±175,132 µm², II katė 937,607±175,13 µm², III katė 1041,08±101,73 µm², IV katė

1086,76±53,29 µm².Įvairavimo koeficientas 0,105, procentais - 10%.Visų tiriamųjų pirminių

kiaušidžių folikulų plotai labai panašūs.

3.11 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė,

palyginimas.

21

0

10

20

30

40

Diametras

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.11 pav.

Įvairavimo koeficientas 0,037, proc. 4%.I Katė 35,1±2,5047 µm, II Katė 34,0266±0,861 µm, III

Katė 34,63±0,532 µm, IV Katė 35,246±1,01 µm.Visų keturių kačių pirminių kiaušidžių folikulų

ovocitų diametrai tarpusavyje panašūs.

3.12 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė,

palyginimas.

0

200

400

600

800

1000

Plotas

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.12 pav.

I katė 880,13±70,45 µm², II katė 846,498±23,26 µm² III katė 817,7±31,23 µm²,

IVkatė886,48±108,36 µm².Įvairavimo koeficientas 0,075, procentais 8%.Visų tiriamųjų pirminių

kiaušidžių folikulų ovocitų plotų skaitinės reikšmės labai panašios.

22

3.13 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir

morfometrinė analizė, palyginimas.

0

2

4

6

8

10

Diametras

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.13 pav.

I katė 8,44±0,121 µm, II katė8,43±0,058 µm, III katė 8,646±0,151 µm, IV katė 8,42±0,185 µm.

Visų keturių kačių pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai tarpusavyje labai

panašaus dydžio. Įvairavimo koeficientas 0,000178, procentinė išraiška 0,017%.

3.14 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

20

40

60

Plotas

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.14 pav.I katė 55,213±2,248829 µm², II katė 53,773±3,345106 µm², III katė 59,18± 4,602959 µm², IV katė

54,2± 2,229865 µm².Visų tiriamųjų kačių pirminių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai

dydžiu yra artimi vienas kitam. Įvairavimo koeficientas 0,06, proc. išraiška 6%.

23

3.15 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

1

2

3

4

5

Matmenys

Katė I Katė II Katė III Katė IV

Pirminių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių aukštis ir plotis

Plotis Aukštis

3.15pav.Plotis : I katė 4,336±0,26 µm, II katė 4,35± 0,18 µm, III katė 4,48±0,29 µm,IV katė 4,41±0,26

µm.Įvairavimo koeficientas 0,057, proc. 6.Aukštis : I katė 4,338±0,20 µm, II katė 4,32± 0,21 µm,

III katė 4,49± 0,33 µm, IV katė 4,50±0,40 µm. Įvairavimo koeficientas 0,0683, procentais-

7%.Pirminių kiaušidžių folikulų ląstelių plotis ir aukštis yra panašūs tarpusavyje.

3.16 Pirminių kačių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storiųstatistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

0,5

1

1,5

Storis

p < 0,05

Pirminių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storis

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.16 pav.I katė 1,166±0,202 µm, II katė 1,003±0,015 µm, IIIkatė 1,046±0,09 µm, IV katė 1,133±0,115 µm.

Įvairavimo koeficientas 0,126, procentinė išraiška 13.Pamatinės membranos storis kiekvienos

tiriamos katės pirminiuose kiaušidžių folikuluose yra labai panašus.

24

3.17 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

70

75

80

85

Diametras

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.17 pav.I katė 83,016±1,63 µm, II katė 82,2±0,91 µm, III katė 81,92±0,32 µm, IV katė 81,97±0,47

µm.Įvairavimo koef. 0,011, proc. 1.Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų diametrai visų tirtų

kačių tarpusavyje yra labai panašūs.

3.18 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

5000

5100

5200

5300

5400

Plotas

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.18 pav.I katė5278,217±101,93 µm², II katė5310,947±22,22 µm², III katė5286,18±22,70 µm², IV

katė5278,433±56,869 µm².Lyginant gautus duomenis diagramoje akivaizdžiai pastebimas

ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotų panašumas. Įvairavimo koeficientas 0,01, proc.1%.

25

3.19 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

20

40

60

Diametras

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų diametras

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.19 pav.I katė 52,94667±1,42 µm, II katė 55,17±1,80 µm, III katė 52,28±0,767 µm, IV katė 53,06±0,728

µm. Ankstyvųjų antrinių ovocitų diametrai yra tarpusavyje panašūs.

Įvairavimo koeficientas 0,0293, procentinė išraiška 3%.

3.20 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

1000

1500

2000

2500

Plotas

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.20pav.I katė 2160,069 ±186,4 µm²,II katė 2467,57±192,5 µm², III katė2161,773±20,939 µm², IV katė

2168,61±25,239 µm². Įvairavimo koeficientas 0,08, procentinė išraiška 8%.

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų plotai šiek tiek skiriasi, bet tai yra palyginti maži skirtumai,

todėl galima teigti, kad dydžiai panašūs

.

26

3.21 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

5

10

15

Diametras

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.21pav.I katė 10,42±0,746 µm, II katė 10,07±0,676 µm, III katė 9,75±0,279 µm, IV katė

10,01567±0,63 µm. Įvairavimo koeficientas 0,057, procentinė išraiška 6%.Ankstyvųjų antrinių

kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių diametrai visų keturių tiriamųjų kačių kiaušidėse labai

panašūs.

3.22 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

50

60

70

80

Plotas

p < 0,05

Ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų branduolių plotai

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.22 pav.I katė 73,765±1,528 µm², II katė 75,69±1,35 µm², III katė 75,13±0,757 µm², IV katė75,158±1,66

µm².Įvairavimo koeficientas 0,018, procentinė išraiška 2%. Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių

folikulų ovocitų branduolių plotų statistinė ir morfometrinė analizė parodė, jog plotai skiriais labai

nedaug.

27

3.23 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų folikulinių ląstelių matmenų statistinė ir morfometrinė analizė, palyginimas.

0

1

2

3

4

Matmenys

Katė I Katė II Katė III Katė IV

Ankstyvųjų antrinių folikulų folikulinių ląstelių plotis ir aukštis

Plotis Aukštis

3.23 pav. Plotis: I katė 3,235±0,247 µm,II katė 2,94±0,247 µm,III katė 3,065±0,285 µm,IV katė

3,29±0,277 µm. Įvairavimo koeficientas 0,09, procentinė išraiška 9 proc..

Aukštis: I katė 3,36±0,25 µm, II katė 3,275±0,275 µm, III katė 3,187±0,21 µm, IV katė 3,36±0,25

µm. Įvairavimo koeficientas 0,075, procentinė išraiška 8proc. Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių

folikulų folikulinių ląstelių matmenų palyginimas rodo, jog tiek plotai , tiek aukščiai yra panašūs.

3.24 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų ovocitų skaidriosios zonos storis

0

0,5

1

1,5

2

Storis

p < 0,05

Skaidriosios zonos storis

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.24 pav.Skaidriosios zonos storis : I katė 1,5±0,058 µm, II katė 1,7±0,097 µm, III katė 1,6±0,08 µm, IV

katė 1,56±0,062 µm.Visų keturių kačių ankstyvųjų antrinių kiaušidžių folikulų ovocitų skaidriosios

zonos storis yra panašus.

Įvairavimo koeficientas 0,059, procentinė išraiška 6 proc.

3.25 Ankstyvųjų antrinių kačių kiaušidžių folikulų pamatinės membranos storis

28

0

0,5

1

1,5

2

Storis

p < 0,05

Pamatinės membranos storis

Katė I Katė II Katė III Katė IV

3.25 pav.Pamatinės membranos storis : vidurkiai.

I katė 1,569 µm ,II katė 1,54 µm, III katė 1,58 µm, IV katė 1,56 µm. Įvairavimo koeficientas 0,01,

procentinė išraiška 1proc.Ankstyvųjų antrinių visų tiriamų kačių kiaušidžių folikulų pamatinės

membranos storis buvo panašus.

4.TYRIMO REZULTATŲ APTARIMAS

Kadangi nėra vieningos kačių kiaušidžių folikulų klasifikavimo sistemos ir daugelis skirtingų

autorių pateikia skirtingą klasifikaciją, patogiausia klasifikacija yra tokia, kuri remiasi kiaušidžių

folikulų išsivystimo stadija ir tai stadijai būdingais ovocito arba folikulo matmenimis.Todėl

patogiausia kačių kiaušidžių klasifikacija buvo pasiūlyta Bristol-Gould S., Woodruff TK. (2006):

Užuomazginiai kiaušidės folikulai – mažai išsivysčiusį ovocitą supa vienas sluoksnis plokščiųjų

folikulinių ląstelių.Užuomazginio folikulo ovocitas >25µm.

Pirminiai kiaušidės folikulai – ovocitą supa vienas sluoksnis kūbiškųjų / stulpiškųjų folikulinių

ląstelių. Ovocitas viršija 25µm diametrą.

Antriniai kiaušidės folikulai – ovocitą supa nuo 2 iki daug daugiau sluoksnių kūbiškųjų

epiteliocitų, o juos supa apvalkalėlis (theca).Pagal kūbiškųjų ląstelių sluoksnius gali būti vertinamas

antrinių folikulų subrendimo lygis (ankstyvieji ir vėlyvieji antriniai kiaušidės folikulai).

Tretiniai arba pūsliniai folikulai - taip pat ir maži pūsliniai folikulai, kurių diametras 300–1000

µm. Pūsliniai folikulai turi folikulinę ertmę, kuri pripildyta folikulinio skysčio.Folikulinė ertmė

didėja folikului ir ovocitui augant.Kačių subrendusio pūslinio folikulo diametras gali siekti iki 2

mm.

29

Atlikdama folikulų matavimus vadovavausi šia klasifikacija, pagal kurią suskirsčiau matuojamus

folikulus į užuomazginius, pirminius, antrinius ankstyvuosius.Vėlyvųjų antrinių ir pūslinių folikulų

nepavyko įtraukti į skaičiavimus, nes jų nebuvo pakankamas kiekis kačių kiaušidėse, todėl statistinė

analizė nebūtų buvusi tiksli bei patikima.

Išmatavus kačių nuo 7 mėn. iki 1.8metų amžiaus kiaušidžių užuomazginių folikulų diametrą buvo

gauti duomenys : mažiausias vidurkis 21,19 ± 1,04µm ir didžiausias vidurkis 22,32 ±0,33µm, o

išmatavus užuomazginių folikulų ovocitų diametrą mažiausias vidurkis 19,36±0,53 µm ir

didžiausias vidurkis 19,87±1,35 µm.Šie duomenys panašūs į nurodytus Bristol-Gould S., Woodruff

TK. t.y. neviršija 25µm diametro.

Kadangi vyksta folikulų augimo procesas (ovogenezė), folikulų diametras ir plotas didėja, vyksta

folikulinių ląstelių diferenciacija - plokščiosios folikulinės ląstelės transformuojasi į

kūbiškasias.Užuomazginiai folikulai auga ir virsta pirminiais kiaušidžių folikulais, kurių ovocitų

matmenys yra didesni negu 25µm.Tirtų pirminių kačių kiaušidžių folikulų diametrų vidurkis

variavo nuo35,04±0,82 µm iki 37,33±1,1 µm, pirminių folikulų ovocitų diametrų vidurkis nuo

35,246±1,01 µm iki 34,0266±0,861 µm, o pirminių folikulų ovocitų branduolių diametrų vidurkis

kito nuo 8,42±0,185 µm iki 8,646±0,151 µm.Matmenų skirtumai ir folikulinių ląstelių

diferenciacijos pokyčiai rodo, kad vyksta ovogenezė ir užuomazginiai kiaušidžių folikulai virsta

pirminiais, pirminiai –antriniais, o antriniai tretiniais.

Antriniai kiaušidės folikulai identifikuojami pagal tris pagrindinius požymius : 2 ar daug daugiau

sluoksnių kūbiškųjų epiteliocitų ir juos supantį apvalkalėlį (theca), taip pat galima pastebėti ir

skaidriąją zoną apie ovocitą.

Atlikdama tyrimą pasirinkau tirti ankstyvuosius antrinius folikulus su 2-3 sluoksniais kūbiškųjų

epiteliocitų.Tiriant antrinių folikulų diametrus gauti duomenų vidurkiai nuo 81,92±0,32 µm iki

83,016±1,63 µm., antrinių folikulų ovocitų diametrų vidurkiai nuo 55,17±1,80 µm iki 52,28±0,767

µm. O antrinių folikulų ovocitų branduolių diametrų vidurkiai varijuoja nuo 5,51±0,7 µm iki

5,15±0,6 µm.Gauti vidurkiai atitinka normą.Tai rodo, kad tarp tos pačios amžiaus grupės ir tos

pašios rūšies individų tam tikrų vystymosi stadijų kiaušidžių folikulų, ovocitų ir jų branduolių yra

dydžių ir plotų koreliacija.

30

5.IŠVADOS

1.Atlikus keturių kačių nuo 7 mėn. iki 1,8 m amžiaus užuomazginių kiaušidžių folikulų

mikroskopinę, morfometrinę bei statistinę analizę paaiškėjo, jog jų užuomazginių folikulų diametrai

(21,19 ± 1,04µm - 22,32 ±0,33µm), plotai (375,8±16,65 µm² - 374,37± 15,7) µm², pamatinės

membranos (0,64±0,173 µm-0,70±0,0057 µm) storiai buvo labai panašūs.

1.1Taip pat visų keturių kačių užuomazginių folikulų ovocitų diametrai (35,246±1,01 µm -

34,0266±0,861 µm) tarpusavyje buvo panašūs.Tą patį galima pasakyti ir apie jų plotus

(286,73±2,83 µm² - 345,7733±4,31 µm²).

1.2Užuomazginių folikulų ovocitų branduolių diametrai (5,15±0,6 µm - 5,51±0,7 µm) visų keturių

kačių beveik nesiskyrė tarpusavyje.Plotai taip pat buvo panašūs (20,21±0,87 µm² - III katė

23,4±4,45 µm²).

Pastebėtina tai, jog ovocitą gaubiančių folikulinių ląstelių plotis (6,66±0,54 µm - 6,05±0,62 µm)

yra ženkliai didesnis už aukštį (1,41±0,50 µm - 0,92±0,349 µm). Tai būdinga užuomazginių

folikulų savybė.

2.Taip pat ištyrus visų keturių kačių pirminius kiaušidžių folikulus buvo nustatyta, jog pirminių

folikulų (35,04±0,82 µm - 37,33±1,1 µm), ovocitų (35,246±1,01 µm - 34,63±0,532 µm), ovocitų

31

branduolių diametrai (8,42±0,185 µm - 8,646±0,151 µm) bei ovocitų plotai (937,607±175,13 µm² -

1086,76±53,29 µm²) taip pat yra panašūs, kaip ir užuomazginių folikulų.

2.1Folikulinių ląstelių sluoksnyje pastebėtina tai, jog folikulinių ląstelių aukštis (4,50±0,40 µm -

4,32± 0,21 µm) ir plotis (4,336±0,26 µm - 4,48±0,29 µm) yra panašūs – tai kūbiškieji folikuliniai

epiteliocitai.

3.Tiriant antrinius folikulus taip pat pastebėta, jog folikulinių ląstelių sluoksnis ankstyvuose

antriniuose folikuluose yra panašus (2-3 sl.), folikulinių ląstelių aukštis (3,36±0,25 µm -

3,187±0,21 µm) ir plotis (2,94±0,247 µm - 3,29±0,277 µm) labai mažai skiriasi, panašius ir šių

folikulų diametrai (81,92±0,32 µm - 83,016±1,63 µm).Ankstyvųjų antrinių folikulų ovocitų

diametrai (55,17±1,80 µm - 52,28±0,767 µm) taip pat panašūs, taip pat ir plotai .Ovocitų

branduolių diametrai (9,75±0,279 µm - 10,42±0,746 µm) taip pat panašūs, plotai panašūs.

Skairiosios zonos storis taip pat panašus.Pamatinės membranos storis (1,54 µm - 1,58 µm) panašus.

6.SANTRAUKA

Tiriamojo darbo sritis – histologiniai kačių kiaušidžių tyrimai..

Darbo tikslas buvo ištirti keturių kačių nuo 7 mėn. iki 1,8 metų įvairių stadijų kiaušidžių folikulus

ir juos įvertinti.Kačių kiaušidės buvo paimtos ovariohisterektomijos metu.Kiaušidės supjaustytos į

5µ storio pjūvius, pjūviai dažyti hematoksilino-eozino dažais.

Folikulai suskirstyti pagal išsivystymą ir matmenis į užuomazginius, pirminius, ankstyvuosius

antrinius.

Atlikti matavimai, išmatuoti užuomazginių, pirminių, antrinių folikulų diametrai, plotai, folikulų

ovocitų diametrai, plotai, jų branduolių diametrai, plotai, folikulinės ląstelės – jų aukštis ir plotis,

pamatinė membrana, antrinių folikulų skaidrioji zona.

Ištirta, jog užuomazginių, pirminių bei antrinių folikulų, ovocitų ir jų branduolių diametras, plotas,

pamatinės membranos storis ir antrinių folikulų ovocitų skaidriosios zonos storis yra panašūs.

Užuomazginių folikulų ovocitą gaubia vienas sluoksnis plokščiųjų folikulinių ląsteliu – joms

būdinga tai, jog, jų plotis didesnis už aukštį, o pirminių folikulų ovocitą gaubia kūbiškosios ląstelės,

kurių tiek aukštis, tiek plotis panašūs.Antrinių ankstyvųjų folikulų ovocitų paviršių gaubia 2-3

sluoksnių folikulinių ląstelių, kurių plotis ir aukštis yra panašūs.

Statistinių duomenų patikimumas 95 % arba p<0,05.

32

Raktiniai žodžiai : folikulas, kiaušidė, katė, histologija .

7.SUMMARY Histological analysis of feline ovary

Range of investigation is histological analysis of feline ovary.

The purpose of this scientific research is to explore various stages ovarian follicles in four cats (age

7 months- 1,8 years).Ovaries were cut into 5 µm sections, than sections were stained by eosin-

hematoxylin.

Folicles were classified regarding to their development and dimensions into primordial, primary

and early secoundary follicles.

Were performed measurements.Were measured diameters and areas of primordial, primary and

early secoundary follicles, diameters and areas of oocytes and nucleus of oocytes, heigt and width

of folliculas cells, thickness of basal lamina .Also were measured zona pellucida of secoundary

follicles.

Results revealed that diameter and area of primordial, primary and early secoundary follicles,

oocytes and nucleus were comparable.Basal lamina thickness were simmilar too, the same thing is

about zona pellucida in secoundary follicles.

Primordial follicle is surrounded by one layer of squamous cells - basic feature of these cells is that

their width is much bigger than height meanwhile primary follicle is surrounded by cuboidal one

33

layer cells with almost equal width and height. Cells of early secoundary follicle are surrounding

oocyte at least with two layers and their width and height are almost equal.

Calculated statistical data reliability is 95 % or p<0,05.

Keywords: feline, ovary, ovarian follicle, histology.

8.LITERATŪROS SĄRAŠAS

Literatūros sąrašas :

Alionienė Ingrida. Bendroji histologija su histologinės technikos pagrindais.

Aniulis, E. Znuidauskas B. ir kt.Veterinarinė akušerija ir ginekologija, 1989.

Domestic cat (Felis catus) polyovular follicles Miclăus V., I. Groza, L. Oana 2007.

Don. A. Samuelson Text book of veterinary histology.

E. Aghey, F.L.Frye. Comparative veterinary Histology with clinical correlates.

Elsevier S. Bristol-Gould, TK Woodruff. Theriogenology, 2006.

Jo Ann Aurel, Brien L.Frappier. Dellmann‘s text book of veterinary histology.

Laurinavičienė Aida. Histologinių technologijų vadovas, 2008.

Padaiga Antanas, Lasys Vidmantas, Sederevičius Antanas. Naminių gyvūnų mikroskopinė

anatomija, 2006, P. 158-166.

Reproductive System Images.

Schatten H. Comparative reproductive biology, Constantinescu M.G., P.99-103.

Tufts OpenCourseWare © 2009 Tufts University Collection of Veterinary Female

34

Uchikura K, Nagano M, Hishinuma M. The effect of ovarian status and follicular diameter on

maturational ability ofdomestic cat oocytes, Department of Theriogenology, School of Veterinary

Medicine, Faculty of Agriculture, Tottori University, Japan, 2011.

William J.Bacha, Jr.Linda M.Bacha M. Wood. Color Atlas of Veterinary Histology. Philadelpia,

London, 1990,269 p.

http://ajplegacy.physiology.org/content/189/1/145.short 2013 m. gruodis 1 d. 10:33

http://books.google.lt/books?

id=COV7tAgMaMwC&pg=PA400&lpg=PA400&dq=feline+secondary+follicle&source=bl&ots=r

zRkmIv6fA&sig=jmmClX0RrzEGTO9tJVKf9qaI-

dk&hl=lt&sa=X&ei=V47JUp7nIIfUtQbHm4GYAw&ved=0CE0Q6AEwAw#v=onepage&q=feline

%20secondary%20follicle&f=false 2014 m. sausis 5 d. 18.57

http://europepmc.org/abstract/MED/2621721/reload=0;jsessionid=2oYbe3Z2DGDzC0yyOKVm.58

2013 m. gruodis 1 d. 12:18

http://europepmc.org/abstract/MED/2621721/reload=0;jsessionid=2oYbe3Z2DGDzC0yyOKVm.58

2013 m. gruodis 13 d. 17:00

http://info.visiblebody.com/bid/287220/Anatomy-and-Physiology-Uterine-Anatomy 2013 m.

gruodis 2 d. 19:27

http://jfm.sagepub.com/content/12/7/539.abstract?patientinform-links=yes&legid=spjfm;12/7/539

2013 m. gruodis 15 d. 14.04

http://journals.cambridge.org/download.php?file=%2FBJN

%2FBJN5_01%2FS0007114551000182a.pdf&code=9e5012292ff2bbd7a22b52fd9ff5084a 2013 m.

gruodis 13 d. 17:20

http://lan.sagepub.com/content/27/3/278.full.pdf 2013 m. gruodis 3 d. 22:59

http://meddic.jp/ovarian_medulla 2013 m. gruodis 29 d. 19:37

http://php.med.unsw.edu.au/embryology/index.php?title=2010_BGD_Practical_3_-

_Oogenesis_and_Ovulation 2013 m. gruodis 22 d.

http://web.archive.org/web/20080630205100/http://animal.discovery.com/guides/cats/body/maturit

y.html 2013 m. gruodis 16 d. 12:10

http://www.biolreprod.org/content/28/3/657.short 2013 m. gruodis 1 d. 11:46

http://www.biolreprod.org/content/60/2/522.long 2014 m. sausis 5 d. 19.53

http://www.biolreprod.org/content/early/2003/12/03/biolreprod.103.021857.full.pdf 2014 m. sausis

5 d. 21:11

http://www.britannica.com/EBchecked/topic/193725/estrus#ref5672 2013 m. gruodis 15 d. 14:23

35

http://www.columbia.edu/itc/cerc/danoff-burg/invasion_bio/inv_spp_summ/Felis_catus.html 2013

m. lapkritis 30 d. 13:21.

http://www.glowm.com/resources/glowm/cd/pages/v5/v5c012.html 2013 m. gruodis 3 d. 22:51

http://www.google.lt/books?

hl=lt&lr=&id=zBYi4NgVwCUC&oi=fnd&pg=PR7&dq=domestic+cat&ots=jCrdwYrX1o&sig=tk

MfjF3kZaHn1TmJouBs784JgRQ&redir_esc=y#v=onepage&q=domestic%20cat&f=false 2013 m.

lapkritis 24 d. 19:17

http://www.kaunasvet.lt/kaliu-ir-kaciu-lytinis-ciklas 2013 m. gruodis 16 d. 12:45

http://www.medicalhistology.us/twiki/bin/view/Main/FemaleReproductiveSystemAtlas16 2013 m.

gruodis 16 d. 17:37

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK10008/ 2014 m. sausis 5 d. 18.33

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15723162 2013 m. gruodis 13 d. 17:36

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16620931 2014 m. sausis 4 d. 17:01

http://www.redbiolab.unimi.it/RedBioLab/Publications_files/Reproduction%20in%20Domestic

%20Animals%202012%20Luvoni.pdf 2014 m. sausis 4 d. 17:00

http://www.theriojournal.com/article/S0093-691X%2809%2900168-X/abstract 2013 m. gruodis 1

d. 10:28

http://www.uff.br/gefras/artigo%2049.pdf 2013 m. gruodis 13 d. 20:13

http://www.usfca.edu/fac_staff/dever/webmenstruation.pdf 2014 m. sausis 14 d. 23:44

36