8/18/2019 Dozarea Proteinelor Prin Metoda Bradford

1/2

DOZAREA PROTEINELOR PRIN METODA BRADFORD

Metoda Bradford este mult mai sensibilă decât metoda Biuretului. Cu ajutorul acestei

metode se pot doza proteine cu o concentraţie cuprinsă între 0,1 – m!"ml.

Principiul metodei.  #n mediu puternic acid, colorantul Coomassie Brilliant Blue $

%CBB$&, se află predominant în formă cationică total protonată, ro'ie, cu un ma(im al

absorbanţei în jurul )alorii de *+ nm precum 'i în forma de culoare )erde cu un ma(im al

absorbanţei la +0 nm 'i într-o mai mică măsură în forma anionică de culoare albastră cu un

ma(im al absorbanţei la 0 nm %/i!ura 1 'i /i!ura &. intre formele ionice ale colorantului,

doar forma anionică se lea!ă la proteine la ni)elul resturilor de lizină 'i ar!inină încărcate poziti),

formând un comple( de culoare albastră. Concomitent cu formarea comple(ului albastru are loc o

modificare a ma(imului de absorbţie de la *+ nm la nm %/i!ura &. ntensitatea culoriimăsurată la nm este direct proporţională cu cantitatea de proteină din proba de analizat.

/i!ura 1. /ormele ionice ale colorantului CBB$

/i!ura . Modificarea ma(imului de absorbţie a colorantului CBB$ în prezenţa proteinelor de la

*+ nm la nm

8/18/2019 Dozarea Proteinelor Prin Metoda Bradford

2/2

Reactivi şi olu!ii

1. 2oluţie standard de albumină serică bo)ină %B23& m!"ml preparată e(temporaneum

în acela'i mediu în care s-a efectuat e(tracţia proteinelor4

. 5eacti) Bradford6 100 m! de colorant CBB$ se dizol)ă în 0 ml de etanol 7.

2oluţia alcolică se amestecă cu 100ml de acid fosforic 87 'i se aduce la 1 litru cu

apă distilată4

9. :(tract proteic total %:;l mediu dee(tracţie

Concentraţieobţinută%m!"ml&

nO D

,,..

1 0 00 0 1? 0,9 0 10 0,* ? 1 0,? 100 100 1+ 1 ? 1,? 10 0 1,

• într-o plăcuţă de + de !odeuri se pipetează în !odeuri distincte câte >l din fiecare probă %constituite din diluţii ale :;