2
BAB IPENDAHULUAN
1. 1. Latar Belakang
Kanker adalah penyakit akibat pertumbuhan tidak normal dari
sel-sel jaringan tubuh yang berubah menjadi sel kanker. Dalam
perkembangannya, sel-sel kanker ini dapat menyebar ke bagian tubuh
lainnya sehingga dapat menyebabkan kematian. Kanker merupakan
penyebab utama kedua kematian di Amerika Serikat. Secara
keseluruhan, diperkirakan bahwa sekitar 1,3 juta kasus kanker baru
terjadi pada tahun 2002 dan 555.500 orang meninggal akibat
kanker.Badan Kesehatan Dunia (WHO) menyebutkan bahwa tahun 2003,
setiap tahun timbul lebih dari 10 juta kasus penderita baru kanker
dengan prediksi peningkatan setiap tahun kurang lebih 20%. Jumlah
penderita baru penyakit kanker tahun 2020 diperkirakan meningkat
hampir 20 juta penderita, 84 juta orang diantaranya akan meninggal
pada sepuluh tahun ke depan bila tidak dilakukan usaha yang
memadai.1 Dan di Indonesia sendiri, Bedasarkan data Riset Kesehatan
Dasar 2013 prevalensi kanker adalah 1,4 per 1000 penduduk dengan
prevalensi tertinggi terdapat di DI Yogyakarta (4.1%), diikuti Jawa
tengah (2,1%) dan prevalensi kanker kalimantan Tengah sendiri
sebesar (0,7%). Dari seluruh penyebab kematian, kanker merupakan
penyebab kematian nomor tujuh di Indonesia.2Pengobatan kanker
secara medis yang selama ini dilakukan adalah melalui pembedahan
(operasi), penyinaran (radiasi) dan terapi kimia (kemoterapi).
Pengobatan dengan penyinaran hingga kini masih belum dapat
memberikan hasil yang memuaskan, demikian juga pengangkatan
jaringan kanker juga masih sering tidak sempurna. Salah satu yang
menjadi perhatian adalah kemoterapi, yaitu penggunaan bahan-bahan
bioaktif dari hasil sintesis atau isolasi bahan alam. Penggunaan
bahan bioaktif dari isolasi bahan alam terus dikembangkan sampai
saat ini karena sifatnya yang renewable, mudah terdekomposisi dan
dapat dikeluarkan dari dalam tubuh, sedangkan bahan sintetis dapat
tertinggal atau menjadi residu yang berbahaya bagi tubuh.3,4 Hal
ini menyebabkan pelacakan senyawa-senyawa antikanker dari bahan
alam banyak dilakukan, untuk mendapatkan senyawa yang berpotensi
sebagai antikanker yang awalnya banyak dilakukan sebagai pengobatan
tradisional.5Sesuai dengan standar WHO, obat tradisional harus
memenuhi beberapa persyaratan meliputi kualitas,keamanan dan
efektifitas yang tinggi. Banyak negara yang menggunakan obat obat
tradisional untuk berbagai macam pengobatan. Menurut WHO 2005, di
Afrika disebutkan sebesar 80% populasi masyarakatnya menggunakan
obat tradisional untuk membantu memenuhi kebutuhan pelayan
kesehatan di negara tersebut. Di Cina, obat tradisional sudah
digunakan sebesar 40% dari keseluruhan sistem pelayanan kesehatan
yang ada di negara tersebut.6,7 Di Indonesia, penggunaan obat
tradisional sampai sekarang terus berlanjut dan berkembang pesat
karena sejak dahulu bangsa Indonesia telah mengenal dan
memanfaatkan tumbuhan yang berkhasiat obat sebagai salah satu upaya
untuk menanggulangi masalah kesehatan. Pengetahuan tentang
pemanfaatan obat tersebut merupakan kepercayaan peduduk terhadap
sejarah adat dan budaya yang diwariskan turun-temurun dari generasi
ke generasi berikutnya sehingga tercipta berbagai ramuan tumbuhan
obat yang merupakan ciri khas pengobatan tradisional
Indonesia.8,9Kalimantan Tengah memiliki kekayaan beragam jenis
tumbuhan yang biasa digunakan oleh masyakat sebagai tradisional.
Salah satu tumbuhan yang di gunakan sebagai obat tradisional adalah
tumbuhan jinjit (Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van
Meeuwen). Berdasarkan kuisioner yang telah di sebar di kelurahan
Tewah Kabupaten Gunung Mas, sebanyak 110 responden, didapatkan
hasil 74% masyarakat mengetahui tanaman jinjit, dan 40 % pernah
menggunakan sebagai obat. Penggunaan semua bagian (akar, batang,
daun) sebesar 50% ,daun saja 19%, akar saja 19%, dan batang saja
12%. Tumbuhan ini sering digunakan masyarakat setempat sebagai
tumbuhan obat. Masyarakat mempercayai tumbuhan jinjit ini mempunyai
khasiat untuk mengobati apabila ada benjolan pada tubuh mereka.
Berbagai penelitian dilakukan oleh peneliti lain, mengenai tumbuhan
yang bersifat sitotoksik terhadap sel-sel kanker dengan metode
Brimp Shrimp Lethality Test. Salah satunya adalah penelitian yang
dilakukan oleh Yazid Murtadlo dkk, dengan mengidentifikasi senyawa
ekstrak daun tempuyung (Sonhus arvensis Linn) melakukan uji
sitotoksik terhadap Artemia salina Leach dengan metode Brimp Shrimp
Lethality Test yang merupakan indikator sel kanker didapatkan
ekstrak daun tempuyung bersifat toksik menurut harga LC50 pada
metode Brine Shrimp Lethality Test .10 Dan juga Penelitian uji
sitotoksik ekstrak etanol kulit kayu tumbuhan cep-cepen
(Castanopsis Costanta Bl) yang dilakukan oleh Tata Bintara.11 Hasil
penelitian sebelumnya dengan metode DPPH tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) diketahui bahwa
tumbuhan ini memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dan
terdapat senyawa flavonoid yang terkandung didalamnya yang bersifat
sebagai antikanker.12 Penelitian dengan menggunakan batang tumbuhan
jinjit belum banyak dilaporkan. Akan tetapi, belum ada penelitian
tentang potensi sitotoksik tumbuhan jinjit (Desmodium heterocarpon
[L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan Tengah.
Sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui
kemampuan sitotoksiknya sebelum diuji coba pada sel kanker.
Penelitian ini menggunakan metode Brine shrimp Lethality Test
(BSLT). Uji ini dilakukan karena masih kurangnya informasi ilmiah
mengenai potensi sitotoksik tumbuhan jinjit. Metode BSLT sering di
gunakan untuk praskrining terhadap senyawa aktif yang terkandung
dalam ekstrak tumbuhan karena sederhana , cepat, murah dan dapat
dipercaya. Penelitian ini menentukan nilai LC50, apabila ekstrak
tumbuhan yang diuji bersifat toksik menurut harga LC50, maka
tumbuhan tersebut dapat dikembangkan pada penelitian yang lebih
lanjut lagi sebagai obat antikanker.13 Penilitian ini diharapkan,
khasiat batang tumbuhan jinjit bukan hanya berdasarkan dari
kepercayaan dari masyarakat saja melainkan sudah diteliti
ketoksikannya, dan hasil dari penelitian ini dimasa mendatang dapat
dijadikan bahan informasi secara ilmiah mengenai kemampuan
sitotoksik dan senyawa aktif dari ekstrak etanol batang dari
tumbuhan jinjit itu sendiri. 1. 2.Rumusan Masalah
1. Apakah ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan
Tengah memiliki potensi sitotoksik terhadap larva Artemia salina
Leach ?2. Berapa persentase kematian larva Artemia salina Leach
setelah pemberian ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan
Tengah?
3. Berapa nilai LC50 larva Artemia salina Leach setelah
pemberian ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan
Tengah ?1. 3.
Tujuan Penelitian
1. 3. 1.Tujuan umum Membuktikan adanya potensi sitotoksik pada
ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium heterocarpon [L.]
DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan Tengah dengan
metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).1. 3. 2. Tujuan khusus 1.
Mengukur persentase kematian larva Artemia salina Leach setelah
pemberian ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan
Tengah.2. Menentukan nilai LC50 larva Artemia salina Leach setelah
pemberian ekstrak etanol batang tumbuhan jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) asal Kalimantan
Tengah.1. 4.Manfaat PenelitianDari penelitian ini dapat menambah
wawasan dan pengetahuan tentang batang tumbuhan jinjit dan
mengetahui kemampuan sitotoksik dari ekstrak etanol batang tumbuhan
jinjit Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van
Meeuwen).BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2. 1. Siklus SelSiklus sel adalah proses sel membelah diri
secara periodik, meliputi dua tahap yaitu : Tahap Mitosis dan
Interfase. Lama berlangsungnya siklus ini untuk setiap jenis sel
kini sudah dapat di perhitungkan berdasarkan pengamatan. Siklus
paling pendek lamanya 8 jam (pada sel epitel usus) sampai 100 hari
atau lebih (pada sel hepar dewasa). Tahap interfase pada siklus sel
merupakan tahap persiapan menuju pembelahan. Tahap ini dibagi atas
tiga fase yaitu :
(1) Fase Gl / Gap 1, adalah fase persiapan sel untuk melakukan
replikasi DNA, pada fase initerjadi pembentukan berbagai RNA dan
protein yang berperan dan yang diperlukan dalam proses replikasi,
durasi waktu fase ini bervariasi tergantung dari tipe sel. Fase G1
berlangsung sekitar 12 jam pada kebanyakan sel mamalia. Pada fase
G1 ditemukan suatu faktor yang menginduksi fase G1 untuk masuk fase
S yang disebut S phase Promoting Factor (SPF). Pada fase ini
terjadikegiatan biosintesis yang sangat meningkat.
(2) Fase S/ Sintesa, merupakan fase sintesa DNA.Permulaan
replikasi DNA terjadi saat peralihan fase akhir G1 dan awal fase S.
Replikasi DNA terjadi selama fase S, jumlah DNA keseluruhan akan
bertambah dari diploid (2n) hingga replikasi komplit menjadi
tetraploid (4n). Fase ini berlangsung selama 10-20 jam. (3) Fase
G2/ Gap 2, yaituwaktu antara akhir fase S sampai terjadinya mitosis
atau pembelahan, sel mempersiapkan diri untuk membelah dan
mempersiapkan 2 set kromosom. Akhir dari fase G2 dan awal dari fase
M ditemukan suatu faktor yang menginduksi fase G2 untuk masuk ke
fase M yang di sebut M phase promoting factor (MPF). Fase G2
berlangsung selama 1-12 jam. Phase terakhir dari proses proliferasi
adalah fase M (mitosis) yang merupakan fase tersingkat karena hanya
berlangsung selama 30-60 menit. Pada fase M terjadi pemecahan DNA
yang telah berduplikasi secara komplit. Proses ini akan
menghasilkan 2 sel anak kromosom diploid (2n). Sel akan mempunyai 2
pilihan pada akhir siklus sel yaitu melanjutkan siklus sel kedalam
fase G1 bila sel masih aktif berproliferasi atau memasuki fase G0
bila sel tidak aktif. Fase G0 adalah fase dalam keadaan isirahat
atau tidak aktif melakukan proses proliferasi.14Siklus sel dimulai
pada fase Gl dimana terjadi penentuan apakah sel meneruskan proses
atau keluar dari siklus ( GO/ istirahat atau terminal). Adanya
stimuli dari platelet derived growth factors (PDGF), epidermal
growth factor (EGF), atau insulin like growth factors (IGF 1 &
IGF 2) menyebabkan aktifnya siklus sel di Gl. Apabila replikasi sel
telah dimulai pada akhir Gl sel tidak dapat berespon terhadap
stimuli faktor pertumbuhan, tetapi berespon terhadap penghambat
faktor pertumbuhan, proses ini diatur oleh cyclin dependent kinase
inhibitor (CDKi). Ada dua mekanisme yang mengontrol jalannya siklus
sel yaitu: Cyclins dan Checkpoints.Cyclin mengatur proses tiap fase
dari siklus sel seperti Cyclin B/CDKi berfungsi mengontrol transisi
dari fase G2 ke fase M, sedangkan Checkpoints bertugas mengawasi
ada tidaknya penyimpangan pada DNA. Apabila mekanisme ini terganggu
atau terjadi penyimpangan maka dapat menyebabkan timbulnya
kanker.142.2. KankerKanker atau neoplasma merupakan pertumbuhan sel
sel baru yang secara abnormal yang tumbuh melampaui batas normal
dan yang kemudian dapat menyerang bagian tubuh dan menyebar ke
bagian lain. Kanker ditandai dengan pembelahan sel yang tidak
terkendali akibat kerusakan DNA dimana terjadi mutasi di gen vital
yang mengontrol pembelahan sel untuk mengubah sel normal menjadi
sel kanker. Mutasi-mutasi tersebut sering diakibatkan agen kimia
maupun fisika yang disebut karsinogen. Mutasi dapat terjadi secara
spontan diperoleh ataupun diwariskan. Golongan Gen memainkan
peranan penting dalam mengatur sinyal mekanisme faktor pertumbuhan
dan siklus sel itu sendiri, termasuk protoonkogen yang mendorong
pertumbuhan, gen penekan kanker (tumor supressor gene) yang
menghambat pertumbuhan (antionkogen), gen yang mengatur kematian
sel terencana (programmed cell death) atau apoptosis dan gen yang
mengatur perbaikan DNA yang rusak. Gen penekan tumor TP53 (dulu
P53) adalah gen yang paling sering mengalami mutasi pada kanker
manusia. TP53 dapat menimbulkan anti proliferasi, dan gen ini juga
mengendalikan apoptosis. TP53 berperan penting dalam mempertahankan
integritas genom, apabila kehilangan TP53 secara homozigot
kerusakan DNA tidak dapat diperbaiki dan mutasi akan terfiksasi di
sel yang membelah sehingga akan masuk jalan satu arah menuju
keganasan.15 Mekanisme pertumbuhan kanker disebut juga dengan
Karsinogenesis. Karsinogenesis merupakan suatu proses multi-tahap.
Sebagian besar karsinogen sebenarnya tidak reaktif (prokarsinogen
atau karsinogen proximate), namun di dalam tubuh diubah menjadi
karsinogen awal (primary) atau menjadi karsinogen akhir (ultimate).
SitokromP450 merupakan suatu mono-oksidase dependen retikulum
endoplasmik sering mengubah karsinogen proximate menjadi
intermediate defisien elektron yang reaktif (electrophils).
Intermediate (zat perantara) yang reaktif ini dapat berinteraksi
dengan pusat-pusat di DNA yang kaya elektron (nucleophilic) untuk
menimbulkan mutasi. Interaksi antara karsinogen akhir dengan DNA
semacam ini dalam suatu sel diduga merupakan tahap awal terjadinya
karsinogenesis kimiawi. DNA sel dapat pulih kembali bila mekanisme
perbaikannya normal, namun bila tidak sel yang mengalami perubahan
dapat tumbuh menjadi tumor yang akhirnya nampak secara klinis.
Ko-karsinogen (promoter) sendiri bukan karsinogen. Promoter
berperan mempermudah pertumbuhan dan perkembangan sel tumor dormant
atau latent. Waktu yang diperlukan untuk terjadinya tumor dari fase
awal tergantung pada adanya promoter tersebut dan untuk kebanyakan
tumor pada manusia periode laten berkisar dari 15 sampai 45
tahun.15,16Proses transformasi sel normal menjadi sel ganas melalui
displasi terjadi melalui mekanisme yang sangat rumit, tetapi secara
umum mekanisme karninogenesis ini terjadi melalui tiga tahap
yaitu:1. Inisiasi (Initiation)
Tahap pertama ialah permulaan atau inisiasi, dimana sel normal
berubah menjadi premaligna.Karsinogen harus merupakan mutagen yaitu
zat yang dapat menimbulkan mutasi gen. Pada tahap inisiasi
karsinogen bereaksi dengan DNA, menyebabkan amplifikasi gen dan
produksi copy multipel gen.
2. Promosi (Promotion)
Promoter adalah zat non mutagen tetapi dapat meningkatkan reaksi
karsinogen dan tidak menimbulkan amplifikasi gen. Sifat-sifat
promotor ialah: mengikuti kerja inisiator, perlu paparan
berkali-kali, keadaan dapat reversible, dapat mengubah ekspresi gen
seperti: hiperplasia, induksi enzim, induksi diferensiasi.
3. Progresi (Progression)
Pada progresi ini terjadi aktivasi, mutasi atau hilangnya gen.
Pada progresi ini timbul perubahan benigna menjadi pre-maligna dan
maligna.
Dalam karsinogenesis ada 3 mekanisme yang terlibat:17a) Onkogen
yang dapat menginduksi timbulnya kanker.
b) Antionkogen atau gen suppressor yang dapat mencegah timbulnya
kanker.
c) Gen modulator yang dapat mempengaruhi eksperimen
karakteristik gen yang mempengaruhi penyebaran kanker. Bila ada
kerusakan gen, tubuh berusaha mereparasi atau memperbaiki
transkripsi gen yang rusak (DNA repair). Kerusakan transkripsi ini
mungkin dapat dan mungkin pula tidak dapat diperbaiki lagi. Bila
transkripsi gen itu dapat diperbaiki dengan sempurna, maka pada
replikasi sel berikutnya terbentuklah sel baru yang normal. Tetapi
bila tidak dapat diperbaiki dengan sempurna akan terbentuk sel baru
yang defektif. Walaupun sel itu defektif masih tetap ada usaha
mereparasi kerusakan transkripsi. Bila berhasil akan terbentuk sel
yang normal dan bila gagal akan terbentuk sel yang abnormal, yaitu
sel yang mengalami mutasi, atau transformasi, yang pada akhirnya
dapat menjadi sel kanker.17Teori karsinogenesis untuk menerangkan
bagaimana kanker itu terjadi didasarkan atas:161) Mutasi Somatik,
yaitu perubahan urutan letak nukleotida dalam asam amino rantai
DNA, yang menyebabkan perubahan kode genetik. Menghasilkan produksi
protein yang abnormal, sehingga regulasi pertumbuhan dan
diferensiasi sel terganggu, sel menjadi otonom dan lepas dari
regulasi normal dan sel dapat tumbuh tanpa batas.
2) Penyimpangan Diferensiasi Sel (Teori Epigenetik), terjadinya
gangguan sistem atau mekanisme regulasi gen seperti represif,
depresi serta ekspresi regulasi, sehingga timbul gangguan
pertumbuhan dan diferensiasi sel. Defek yang terjadi karena
mekanisme regulasi gen yang mengatur pertumbuhan, dan bukan pada
struktur gen itu sendiri, maka teori ini disebut teori
epigenetik.
3) Aktivasi Virus. Virus masuk ke dalam inti sel dan
berintegrasi dengan DNA penderita serta mengubah fenotype sel
dengan menyisipkan (insersi) informasi baru atau mengubah
transkripsi dan translasi gen. Virus DNA dapat secara langsung
berintegrasi dengan DNA inang dan ditularkan secara vertikal kepada
anak-anak sel inang, sedang virus RNA dengan bantuan enzim reverse
transkriptase. Menurut teori ini kanker terjadi karena ada infeksi
virus yang menyisipkan gennya ke dalam DNA inang yang dapat
mengaktifkan protoonkogen menjadi onkogen.
4) Seleksi Sel. Pada sel tubuh manusia diperkirakan terdapat
lebih dari 50.000 gen dan masing-masing gen mempunyai fungsi
tersendiri. Di dalam tubuh setiap saat ada sel yang mati dan ada
pula sel baru yang terbentuk melalui proses mitosis. Karena adanya
mutasi maka timbul sel yang defektif dan akan mati atau tidak dapat
mengadakan mitosis lebih lanjut. Hanya sel-sel yang baik dan
memenuhi syarat tertentu yang akan dapat tetap bertahan hidup.
Dalam menyeleksi sel mana yang boleh terus hidup dan berkembang,
terjadi kekeliruan. Di sini ada sel yang mengalami mutasi atau
transformasi yang lepas dari seleksi dan terus berkembang menjadi
sel kanker. Keganasan pada sel eukariota terjadi akibat adanya
perubahan perilaku sel yang abnormal, yaitu sel mempunyai kemampuan
proliferasi dan diferensiasi yang sangat tinggi. Perubahan perilaku
tersebut terjadi karena sel mengekspresikan berbagai protein yang
abnormal. Berbagai protein abnormal muncul karena sel mengalami
mutasi/kecacatan gen, khususnya gen yang mengkode protein, yang
sangat berperan pada pengaturan siklus pembelahan sel. Contohnya
adalah gen yang termasuk kelompok protooncogen atau kelompok tumor
suppressor gene, serta gen yang mengatur dan menghambat pemendekan
telomer pada ujung kromosom.18The six hallmark of cancer ( 6
karakter sel kanker ) adalah konteks enam perubahan mendasar dalam
fisiologi sel yang secara bersama-sama menentukan fenotipe
keganasan.1,2(1). Growth signal autonomy: Sel normal memerlukan
sinyal eksternal untuk pertumbuhan dan pembelahannya, sedang sel
kanker mampu memproduksi growth factors dan growth factor receptors
sendiri. Dalam proliferasinya sel kanker tidak tergantung pada
sinyal pertumbuhan normal. Mutasi yang dimilikinya memungkinkan sel
kanker untuk memperpendek growth factor pathways.
(2). Evasion Growth inhibitory signal: Sel normal merespon
sinyal penghambatan pertumbuhan untuk mencapai homeostasis. Jadi
ada waktu tertentu bagi sel normal untuk proliferasi dan istirahat.
Sel kanker tidak mengenal dan tidak merespon sinyal penghambatan
pertumbuhan,keadaan ini banyak disebabkan adanya mutasi pada
beberapa gen (protoonkogen) pada sel kanker.
(3). Evasion of Apoptosis Signal: Pada sel normal kerusakan DNA
akan dikurangi jumlahnyadengan mekanisme apoptosis, bila ada
kerusakan DNA yang tidak bisa lagi direparasi. Sel kanker tidak
memiliki kepekaan terhadap sinyal apoptosis. Kegagalan sel kanker
dalam merespon sinyal apoptosis lebih disebabkan karena mutasinya
gen-gen regulator apoptosis dan gen-gen sinyal apoptosis.
(4). Unlimited replicative potential: Sel normal mengenal dan
mampu menghentikan pembelahan selnya bila sudah mencapai jumlah
tertentu dan mencapai pendewasaan. Penghitungan jumlah sel ini
ditentukan oleh pemendekan telomere pada kromosom yang akan
berlansung setiap ada replikasi DNA. Sel kanker memiliki mekanisme
tertentu untuk tetap menjaga telomere yang panjang, hingga
memungkinkan untuk tetap membelah diri. Kecacatan dalam regulasi
pemendekan telomere inilah yang memungkinkan sel kanker memiliki
unlimited replicative potential.
(5). Angiogenesis (formation of blood vessel): Sel normal
memiliki ketergantungan terhadap pembuluh darah untuk mendapatkan
suplay oksigen dan nutrient yang diperlukan untuk hidup. Namun
bentuk dan karakter pembuluh darah sel normal lebih sederhana atau
konstan sampai dengan sel dewasa. Sel kanker mampu menginduksi
angigenesis, yaitu pertumbuhan pembuluh darah baru disekitar
jaringan kanker. Pembentukan pembuluh darah itu baru diperlukan
untuk survival sel kanker dan ekspansi kebagian lain dari tubuh
(metastase). Kecacatan pada pengaturan keseimbangan induser
angiogenik dan inhibitornya dapat mengaktifkan angiogenic
switch.
(6). Invasion and metastasis: Sel normal memiliki kepatuhan
untuk berpindah ke lokasi lain didalam tubuh. Perpindahan sel
kanker dari lokasi primernya ke lokasi sekunder atau
tertiernyamerupakan faktor utama adanya kematian yang disebabkan
karena kanker. Mutasi memungkinkan peningkatan aktivitas
enzim-enzim yang terlibat invasi sel kanker (MMPs). Mutasi juga
memungkinkan berkurangnya atau hilangnya adhesi antar sel oleh
molekul-molekul adhesi sel,meningkatnya attachment, degradasi
membran basal, serta migrasi sel kanker.
Gambar 2.1 Enam tanda utama kanker1,2
Siklus pembelahan sel kanker berbeda dengan sel normal.
Perkembangan sel kanker mempengaruhi ekspresi protein-protein
pengatur siklus sel, keadaan ini dapat menyebabkan peningkatan
ekspresi cyclin dan kehilangan ekspresi CDK inhibitor sehingga
mengakibatkan respon yang menyimpang terhadap adanya kerusakan
seluler.19,20 Tidak semua gen menunjukkan ekspresi. Gen akan
mengalami ekspresi jika menghasilkan protein. Dalam proses
pertumbuhan dan diferensiasi sel ada sejumlah gen yang dihidupkan
dan ada pula yang dimatikan.202.3. Tumbuhan Jinjit (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen)
Tumbuhan Jinjit atau yang disebut dengan (Desmodium heterocarpon
[L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) merupakan tumbuhan yang banyak
tumbuh di daerah tropis yang tersebar secara alami dari India
hingga Indonesia, kepulauan Pasifik dan Australia.Tumbuhan ini
mampu untuk bertahan pada musim kering jangka pendek tetapi tidak
toleran pada penggenangan air dalam jangka panjang. Pada daerah
tropis tumbuhan ini dapat tumbuh dengan baik diatas ketinggian 2500
m. Secara deskriptif, tumbuhan ini memiliki panjang batang antara
0.53.0 m, dan umumnya dengan batang yang bercabang pada pangkalnya.
Daunnya memiliki beragam tekstur, bentuk dan ukuran, misalnya
berbentuk bundar seperti telur dengan ujung yang berbentuk
menjorong, ujung daun bertakik atau lebih atau sedikit
meruncing.21,22
Gambar 2.2 (Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van
Meeuwen)212.3. 1.Klasifikasi Taksonomi dari tumbuhan (Desmodium
heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen) adalah sebagai
berikut :
Kingdom: Plantae
Divisi: Magnoliophyta
Kelas: Magnoliopsida Famili:PapilionaceaeGenus :Desmodium
Spesies :Desmodium heterocarpon (L) DC. Subspesies : Desmodium
heterocarpon (L) DC. var. strigosum van MeeuwenDesmodium adalah
salah satu genus dari famili tumbuhan famili Papilionaceae dengan
genus Desmodium dan spesies Desmodium heterocarpon (L) DC. Yang
membedakan tanaman ini dengan tanaman lain adalah subspesiesnya
yaitu Desmodium heterocarpon (L) DC. var. strigosum van Meeuwen.
Nama Indonesia tumbuhan ini adalah Buntut meyong sisir, Kaci, Akar
entimor, dan jinjit. Untuk daerah Malaysia tumbuhan ini memiliki
nama Rumput kerbau derapah, kacang kayu betina. Selanjutnya di
Filipina nama tumbuhan ini adalah mangkit-parang, mani-mani,
huyo-huyop. Nama daerah dari Kamboja adalah baay dam nnaep dan dari
Vietnam disebut trang qua di qua.22Di Indonesia, tumbuhan jinjit
(Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van Meeuwen)belum
dibudidayakan secara umum sehingga masih merupakan tumbuhan liar.
Tumbuhan jinjit (Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van
Meeuwen) selain di Indonesia juga terdapat di kepulauan Pasifik dan
Australia. Selain Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum
van Meeuwen, spesies Desmodium yang sudah diteliti khasiatnya
adalah yaitu D. Triquetrum Linn. Spesies ini diketahui memiliki
khasiat sebagai obat tradisional, diantaranya untuk mengatasi
penyakit wasir, batu ginjal dan diuretik. Kegunaan lain dari
tumbuhan ini adalah sebagai obat penyakit perut, batuk,
demam.22Khusus untuk spesies Desmodium (Desmodium heterocarpon [L.]
DC. var. strigosum van Meeuwen) sendiri, dari penelitian Tsai et
al,6 diketahui bahwa tumbuhan ini memiliki aktivitas tumbuhan ini
memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dan terdapat
senyawa flavonoid yang terkandung didalamnya yang dapat bersifat
sebagai antikanker.122.3.2.Kandungan kimia batang tumbuhan jinjit
(Desmodium heterocarpon
[L.]DC. var. strigosum van Meeuwen)
Kandungan kimia yang terkandung dalam tanaman jinjit adalah
flavonoid.12,23,24 Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang
banyak terdapat pada tumbuhan hijau yang dapat ditemukan di
berbagai bagian dari tumbuhan tersebut seperti daun, akar, kulit,
kayu, tepung sari, nektor, bunga, buah, dan biji. Berdasarkan
beberapa penelitian, pada (Desmodium heterocarpon [L.] DC. var.
strigosum van Meeuwen) memiliki kandungan senyawa flavonoid yang
sama dengan kandungan tumbuhan genus Desmodium lainnya.23,24 dan
untuk spesies (Desmodium heterocarpon [L.] DC. var. strigosum van
Meeuwen) sendiri, berdasarkan penelitian yang dilakukan Tsai et al,
diketahui bahwa tumbuhan ini memiliki aktivitas antioksidan yang
sangat kuat dan terdapat senyawa flavonoid yang terkandung
didalamnya. Dengan beberapa jenis lain dari tumbuhan dengan genus
Desmodium digunakan sebagai obat untuk demam tifoid, kanker, asma,
bronchitis, disentri, diare, dan batuk.12 Flavonoid dapat berperan
sebagai antioksidan (senyawa yang dapat menunda, memperlambat, dan
mencegah proses oksidasi), antimutagenetik (menghambat mutasi gen),
dan antineoplastik (mencegah, membunuh, atau menghambat pertumbuhan
dan penyebaran sel kanker). Senyawa kelompok flavonoid biasanya
hanya terdapat pada tumbuhan.Pembentukan kelompok ini secara
biogenesis merupakan perpaduan antara jalur shikimat dan jalur
asetat-malonat. Hal ini didasarkan pada kerangka dasar dari
flavonoid, yaitu dua cincin benzen (C6) yang terikat pada rantai
propan (C3) dengan susunan C6-C3-C6.25 Menurut Lamson, et al.
flavonoid termasuk senyawa yang banyak ditemukan di alam. Flavonoid
memiliki aktifitas sebagai antioksidan yang mampu menetralisir
radikal bebas ditubuh yang dapat menyebabkan kanker, penyakit
jantung dan penuaan dini.26 Ada beberapa teori yang menjelaskan
flavonoid sebagai antikanker. Pertama, flavonoid sebagai oksidan
yakni melalui mekanisme pengaktifan jalur apoptosis sel kanker.
Mekanisme apoptosis sel pada teori ini merupakan akibat fragmentasi
DNA. Fragmentasi ini diawali dengan dilepasnya rantai proksimal DNA
oleh senyawa oksigen reaktif seperti radikal hidroksil. Senyawa ini
terbentuk dari reaksi redoks Cu(II). Senyawa tembaga ini
dimobilisasi oleh flavonoid baik dari ekstra sel maupun intra sel
terutama dari kromatin. Kedua, flavonoid sebagai penghambat
proliferasi tumor/kanker yang salah satunya dengan menginhibisi
aktivitas protein kinase sehingga menghambat jalur tranduksi sinyal
dari membran sel ke inti sel. Ketiga, dengan menghambat aktivitas
reseptor tirosin kinase, karena aktivitas reseptor tirosin kinase
yang meningkat berperan dalam pertumbuhan keganasan.27 Efek
sitotoksik memicu apoptosis sel menghambat siklus sel dalam fase
tertentu sehingga proliferasi sel terhambat.28Tabel berikut ini
adalah tabel jenis flavonoid yang diketahui memiliki aktivitas
antikanker.29Tabel 2.1 Jenis flavonoid sebagai
antikanker29KankerSelJenis Flavonoid
Kanker mulutHSC-2, HSG, SCC -25Flavanon, isoflavon, EGC,
chalcones, EGCG, quercetin, cisplatin.
Kanker payudaraMCF-7Flavanon, daidzein, genistein, quercetin,
luteolin.
Kanker tiroidARO, NPA, WROGenistein, apigenin, kaempfrol,
chrysin, luteolin, biochanin A.
Kanker paru paruSK-LU1, SW900, H441, H661, haGo-K1, A549Flavon,
quercetin.
Kanker prostatLNCaP, PC3, DU145Catechin, epichatechin,
quercetin, kaempferol, luteolin, genistein, apigenin, myricetin,
silymarin.
Kanker ususCaco-2, HT-29, IEC-9, HCT-15Flavon, quercetin,
genistein, anthocyanin.
LeukimiaHL-60, K562, JurkatApigenin,quercetin, myricetin,
chalcones.
Melanoma mencit B164A5Chalcones.
Masuknya zat toksik seperti flavonoid melalui saluran pencernaan
larva Artemia salina Leach bersifat penyaring tidak selektif
(nonselektif filter feeder) sehingga apa saja yang masuk mulut
larva seakan akan menjadi makanannya. Senyawa yang masuk dapat
berinteraksi dengan target (misalnya enzim, lemak, membran sel dan
asam nukleat) mempengaruhi mekanisme tubuh yang akhirnya dapat
menyebabkan kematian. Selain itu senyawa ini menghambat reseptor
perasa pada mulut larva, yang menyebabkan larva Artemia salina
Leach gagal menstimulus rasadan tidak dapat mengenali makanannya
yang mengakibatkan kematian dari larva Artemia salina
Leach.30,312.4. Uji SitotoksikUji sitotoksik adalah suatu skrining
awal untuk menguji aktivitas sitotoksisitas suatu agen kimia
terhadap berbagai sel kanker. Uji ini lebih sensitive dibandingkan
dengan uji secara in vivo karena uji secara in vivo membutuhkan
konsentrasi agen yang lebih tinggi yang kadangkala tidak
menimbulkan aktifitas apapun walaupun agen tersebut sudah
menunjukkan aktivitas pada pengujian secara in vitro. Tumbuhan yang
di jadikan sebagai anti tumor atau antikanker harus memiliki
senyawa metabolit yang aktif dengan sifat yaitu : antitoksik,
sitostatik dan antiangiogenesis. Sifat antitoksik adalah kemampuan
untuk mengeliminasi keganasan racun yang dihasilkan oleh sel sel
tumor, sedangkan sitostatik merupakan kemampuan dalam menghambat
pertumbuhan sel tumor. Sifat antiangiogenesis ialah kemampuan untuk
memutuskan pasokan makanan dan oksigen dengan menghentikan aliran
darah.32Sitotoksik juga merupakan suatu efek sejauh agen dalam
melakukan tindakan destruktif spesifik pada sel-sel tertentu.
Sitotoksisitas dipakai untuk memahami proses biologis baik yang
normal maupun abnormal baik dari segi pertumbuhan, pembelahan, dan
kematian dari suatu sel. Uji sitotoksik merupakan metode yang
dikembangkan untuk mengetahui keberadaan senyawa yang bersifat
toksik. Uji sitotoksik menentukan parameter nilai LC50, nilai LC50
menunjukan konsentrasi yang menghasilkan hambatan proliferasi sel
50% dan menunjukan ketoksikan suatu senyawa. Semakin besar harga
LC50 maka senyawa tersebut semakin tidak toksik. Akhir uji
sitotoksik adalah memberikan informasi langsung tentang perubahan
yang terjadi pada sel secara spesifik. Salah satu senyawa
sitotoksik yanga banyak terdapat pada tumbuhan dan diketahui
mempunyai kemampuan sebagai antikanker adalah flavonoid. Uji
sitotoksik dilakukan sebagai uji awal dan syarat mutlak untuk
senyawa bioaktif produk farmasi yang akan digunakan sebagai
antikanker.13Dalam pencarian bahan bioaktif yang mempunyai
aktifitas anti kanker digunakan beberapa metode penapisan
bioaktivitas diantaranya metode uji BSLT, uji hambatan tumor pada
lempeng kentang, serta uji sitotoksik in vitro dan in vivo.32
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode BSLT yang
merupakan metode penapisan farmakologi awal yang relatif murah dan
telah teruji hasilnya 95% dan memenuhi syarat untuk analisis
statistika. Menurut penelitian Meyer et al, pada tahun 1982 dan
Carballo et al pada tahun 2002 melaporkan bahwa suatu ekstrak
menunjukan toksisitas jika ekstrak dapat menyebabkan 50% kematian
pada hewan uji .13,34,352.5.Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT) merupakan salah satu metode untuk
menentukan ketoksikan suatu ekstrak ataupun senyawa. Metode ini
menunjukkan aktifasi farmakologis yang luas, tidak spesifik dan
dimanifestasikan sebagai toksisitas senyawa terhadap larva udang
(Artemia Salina Leach). Kematian Artemia salina Leach digunakan
sebagai parameter untuk menunjukkan adanya kandungan zat aktif
tumbuhan yang bersifat sitotoksik. Apabila harga LC50
