Upload
anii-voierfflichh
View
230
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
1/13
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Sejak zaman purbakala, demam telah dikenal sebagai tanda utama
penyakit, tetapi pengertian tentang patofisiologi demam tergolong relatif
masih baru. Substansi yang dapat menimbulkan demam disebut pirogen. Ada
dua macam pirogen, yaitu pirogen endogen yang dibentuk oleh sel-sel tubuh
sebagai respons terhadap stimulusdari luar (misal: toksin), dan pirogeneksogen yang berasal dari luar tubuh.
irogen adalah produk metabolisme mikroorganisme umumnya bakteri
dankapang serta !irus telah dilaporan sebagai penghasil pirogen. "akteri
gram negatif memberikan zat pirogenik paten seperti crudotoksin, secara
kimia#i, pirogen adalah zat lemak yang berhubungan dengan suatu molekul
pemba#a yang biasanya merupakan polisakarida, tapi juga merupakan suatu
peptida.
ada manusia reaksi pirogenic dimanifestasikan dengan demam dan
menggigil. Setelah diinjeksikan sekitar $%-&' menit, kemudian terjadi
kenaikan suhu tubuh, diikuti dengan menggigil, sakit kepala dan malaise.
ingin berlangsung ' sampai *' menit dan mencapai puncaknya pada jam
kedua atau ketiga. "iasanya efeknya dapat dikontrol dengan pemberian obat
antypiretic, tetapi dapat dibayangkan bah#a kenaikan suhu pada pasien yang
sakit dapat memiliki konsekuensi yang parah pada penyakitnya.
+leh karena itu sangat penting untuk mengetahui mengenai pirogen dan
hal-hal lain yang menyangkut pirogen.
B. Rumusan Masalah
alam makalah ini akan dibahas mengenai pirogen, dari sejarah sampai
uji pirogen.
age
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
2/13
C. Tujuan
engetahui hal-hal yang berkaitan dengan pirogen, dari sejarah sampai
uji pirogen.
D. Manfaat
Semoga makalah ini dapat membantu pembaca dalam mengetahui hal-hal
yang berkaitan dengan pirogen.
age *
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
3/13
BAB II
PEMBAHASAN
A. Sejarah Pr!gen
Sejak zaman purbakala, demam telah dikenal sebagai tanda utama
penyakit,tetapi pengertian tentang patofisiologi demam tergolong relatif
masih baru. Substansiyang dapat menimbulkan demam disebut pirogen. Ada
dua macam pirogen, yaitu pirogen endogen yang dibentuk oleh sel-sel tubuh
sebagai respons terhadap stimulusdari luar (misal: toksin), dan pirogeneksogen yang berasal dari luar tubuh.
ada tahun &$, dr. aul "eeson menemukan bah#a demam timbul
karena adanya produk sel peradangan hospes yang merupakan pirogen
endogen. "elakangan ini, terbukti bah#a fagosit mononuklear merupakan
sumber utama pirogen endogen dan bah#a bermacam-macam produk sel
mononuklear dapat menjadi mediator timbulnya demam.
e#asa ini diduga bah#a pirogen adalah suatu protein yang identik
dengan interleukin-. i dalam hipotalamus zat ini merangsang penglepasan
asam arakidonatserta mengakibatkan peningkatan sintesis rostaglandin /*
yang langsung dapat menyebabkan suatu demam.
B. Defns Pr!gen
. enurut Sco!ille0s
irogen adalah penyebab demam atau bahan yang dibentuk oleh
mikroorganismeyang kadang-kadang ada dalam cairan parenteral danmenghasilkan panas ketika larutan disuntikkan pada pasien.
*. -enurut S(1irogena adalah produk metabolit dari mikroorganisme hidup dan
mikroorganisme mati yang menyebabkan respon spesifik pitretik setelah
penyuntikkan.
2. -enurut 3achman
age 2
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
4/13
irogen adalah produk metabolisme mikroorganisme hidup
umumnya bakteri dan kapang serta !irus telah dilaporkan sebagai
penghasil pirogen bakteri gram negatif memberikan zat pirogenik paten
sebagai endotoksi, secara kimia#i pirogen adalah lemak yang
berhubungan dengan senya#a molekul pembuat yang biasanya
merupakan polisakarida tetap juga bias merupakan suatu peptida.
$. -enurut 4S ).th irogen adalah produk dari pertumbuhan mikroorganisme bahan
pirogenik yang paling berbahaya adalah dihasilkan oleh bakteri gram
negatif (ebdotoksin) tetapi gram positifjuga menghasilkan pirogenik yang berbahaya.
C. Sum"er Pr!gen
irogen atau endoksin bakteri adalah produk metabolit dari pertumbuhan
mikroba, larut air, tahan panas, 3S-nya tidak dapat dihancurkan dengan
sterilasasi uap air5penyaringan (/ncyclopedia 66: *'2). irogen adalah produk
metabolisme mikroorganisme umumnya bakteri dankapang serta !irus telah
dilaporan sebagai penghasil pirogen. "akteri gram negatif memberikan zat
pirogenik paten seperti crudotoksin, secara kimia#i, pirogen adalah zat lemak
yang berhubungan dengan suatu molekul pemba#a yang biasanya merupakan
polisakarida, tapi juga merupakan suatu peptida.
irogen dibagi menjadi * kelas:
. irogen /ksogen
"erasal dari luar tubuh dan menginduksi kenaikan suhu ketika
diinjeksikan kepada manusia dan he#an, #alaupun lipopolisakarida
(endoksin) jelas berada di mana-mana. irogen eksogen penting, terdapat
perbedaan kimia yang besar yang belum disatukan dalam penyebab
kenaikan suhu, ketika diinjeksi diba#ah kesadaran yang cocok.
7mumnya kelas dari pirogen dan eksogen termasuk mikroba, komponen-
komponen mikroba dari bakteri gram negatif, gram positif, fungi, dan
!irus. 8uga pirogenik non mikroba seperti beberapa obat : steroid-steroid,
fraksi plasma dan bahan tambahan sintetik muarmil dipeptida. irogen
age $
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
5/13
endogen dihasilkan secara internal oleh inang dalam respon untuk
stimulasi berbagai pirogen eksogen.
*. irogen /ndogen
Adalah bahan sintetik yang homogen dengan berbagai sel tubuh
setelah dikeluarkan sebagai endotoksin oleh pirogen endogen.
irogen dapat masuk dalam sediaan dalam arti berupa mikroorganisme
hidup5mati. ungkin sumber terbesar dari berbagai kontaminasi adalah air
yang digunakan pada proses pembuatn. 9alaupun destilasi yang tepat akan
menyediakan air bebas pirogen, kondisi penyimpanannya harus tidak dapat
dimasuki oleh mikroorganisme dan pertumbuhannya dicegah.Sumber potensial yang lain dari kontaminasi adalah perlengkapan.
"ahan-bahan pirogenik melekat kuat pada gelas atau permukaan lain. 4esidu
dari larutan dalam peralatan yang digunakan sering terjadi menjadi kultur
bakteriyang terkontaminasi pirogenik. 9alaupun peralatan yang sudah dicuci
dibiarkan di udara dapat mengandung nutrisi yang nyata untuk pertumbuhan
mikroorganisme karena pengeringan tidak menghancurkan pirogen, pirogen
dapat tinggal dalam peralatan selama jangka panjang. encucian yang baik
akan menurunkan dan pemanasan kering akan mencegah kontaminasi
peralatan yang cocok untuk digunakan bahan terlarut dapat menjadi sumber
nitrogen. "ahan terlarut dapat mengkristal5mengendap dari larutan berair
yang mengandung kontaminasi pirogenik. ada proses ini, pirogen dapat
didihalangi melalui lapisan partikel. alam beberapa kasus, bahan terlarut
dapat dimurnikan dengan rekristalisasi dan pencucian pengendapan atau cara
lai untuk penghilangan pirogen. roses pembuatan harus diperhatikan sekali
dansecepat mungkin untuk meminimalkan kontaminasi. idak ada produk
yang seharusnya disiapkan dengan proses yang lengkap dalam satu hari kerja
termasuk sterilisasi.
Sehingga dapat disimpulkan sumber-sumber pirogen, yaitu sebagai
berikut:
. Air destilat yang telah terkontaminasi oleh bakteri yang tahan udara,
yang tumbuh dan menghasilkan endotoksin.
age %
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
6/13
*. ;at terlarut seperti ontaminasi dapat berasal daeri mikroorganisme di udara atau dari debu.
D. Men#egah $r!gen
Ada beberapa langkah yang dapat diambil untuk mencegah pemasukan
dan peningkatan pirogen dalam cairan parenteral. ?al paling penting adalah
dengan tepat merancang dan pengoperasian penyulingan, dicocokkan untuk
mencegah tetesan dari air mendidih kedalam destilat. estilat harus
dikumpulkan dalam #adah yang telah dibilas dengan air destilat segar.
erlakuan untuk menghilagkan tetesan-tetesan air yang terakumulasi yang
dapat mengandung pirogen atau untuk menghilangkan bahan pirogenik yang
dapat mengering dan melekat pada bagian dalam permukaan #adah.7saha
perlindungan menghindarkan kontaminasi destilat oleh bakteri tahan udara
harus dilatih. Air destilasi harus terlindung selama penggumpalan dan harus
digunakan sesegera mungkin setelah didestilasi untuk mencegah
perkembangbiakan bakteri yang mungkin ada. 3arutan seharusnya disaring,
dikemas, disegel, dan disterilkan dengan secepat mungkin.
8auh lebih baik mencegah pembentukan pirogen daripada mengusahakan
pemindahan atau penghancurannya. edua
metode ini digunakan, khususnya bila diperkirakan bah#a bahan kimia
terkontaminasi dengan pirogen. etode penyaring asbes aktif terdiri dari
sediaan larutan yang dile#atkan melalui penyaring asbes kompresi dari serumseitz no 2 pirogen diabsorbsi pada permukaan dari asbes dan oleh karena itu
pirogen dihilangkan dari larutan. 8uga telah disebutkan bah#a pirogen dapat
dihilangkan dengan filtrasi mele#ati alat penyaring yang lain. Arang aktif
juga menghilangkan pirogen dari larutan dengan absorbsi. 3arutan dikocok
dengan ', @ arang aktif serbuk halus selama %-' menit. Arang dibiarkan
mengendap dan cairan supernatan didekantasiatau arang dapat dihilangkan
dengan penyaringan kertas saring yang keras karena serbuk halus arang sulit
age
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
7/13
dihilangkan dengan kertas saring. ?udson menyarankan sistem penyaringan
menggunakan kombinasi pasir murni, kertas saring dan penyaring gelas
sinter. Arang yang tergranulasi tidak efektif menghilangkan pirogen.
8adi, cara yang dapat diambil untuk mencegah pemasukan dan
peningkatan pirogen dalam cairan parenteral adalah dengan tepat
merancancang dan pengopersaian penyulingan. Air destilasi harus terlindung
selama pengumpulan dan harus digunakan segera mungkin setelah destilasi
untuk mencegah perkembangbiakan bakteri yang mungkin ada.
E. Menghlangkan Pr!gen. enurut
irogen dapat dipindahkan dari suatu larutan melalui destilasi dan ini
merupakan metode paling tua untuk memperoleh air bebas progen, dasar
untuk memperoleh atau memproduksi parenteral !olume besar bebas
pirogen dalam skala besar. 7ltrafiltrasi sampai '' > adalah alat yang
efektif dari penyaringan endotoksin yang mempunyai " kira-kira *'
> tetapi pada kenyataannya ukuran agregat paling kurang ''' >.
+smosa balik juga efektif memindahkan partikel samapai nm, meliputi
endotoksin.
isisi lain, norit aktif, serat asbes dan polipropilen atau politeffiber
atau permukaan, seluruhnya efektif menyerap pirogen, utamanya melalui
interaksi hidrofobik. irogen atau endotoksin yang diadsorbsi dalam
permukaan lebih sulit untuk di pindahkan. ermukaan elestomerik seperti
pada segel dan penutup tidak dapat dipanaskan. irogen disini
disyaratkan untuk dipindahkan melalui pembilasan dengan air apirogenik. "anyak permukaan logam atau gelas dapat diolah secara
kimia, kebanyakan bahan pengoksidasi seperti peroBid atau permanganat
menjadi efektif. Sterilisasi panas kering tidak efektif, tekanan pada *'
psig disyaratkan selama paling kurang % jam untuk menghancurkan
kebanyakan endotoksin. etode depirogenisasi ini di pilih untuk
permukaan adalah panas kering pada suhu sekitar '-*%' o= paling
kurang 2' menit kondisi yang baik yang telah diset. engolah ini
age C
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
8/13
mengasumsikan bah#a peralatan pada bagian permukaan dapat
dipanaskan, dan tentu saja sangat sedikit produk yang dapat diolah
dengan cara ini. 9adah gelas, setelah pencucian dengan air untuk injeksi,
dikeringkan dan dipanaskan di ba#ah kondisi aliran laminar pada o!en
berkesinambungan suhu *%' o= atau lebih tinggi. >ondisi ini meliputi
kombinasi pengeringan, oksidasi dan pembakaran untuk menghancurkan
bahan pirogen.
*. enurut 4S th
irogen dapat dihancurkan melalui pemanasan pada temperatur
tinggi. rosedur yang direkombinasikan untuk depirogenasi gelas dan peralatan adalah pemanasan pada suhu *%' o= selama $% menit. elah
dilaporkan bah#a %' o= selama menit atau selama $ jam diharapkan
dapat menghancurkan pirogen. ?al itu dipastikan bah#a pencucian yang
teliti dengan deterjen akan menjadikan #adah gelas bebas pirogen jika
dilindungi selama proses produksi dan penyimpanan dari kontaminasi
pirogen berat. utaran autoklaf biasa tidak bisa melakukan hal ini.
emanasan dengan alkali kuat dan atau larutan oksidasi akan
menghancurkan pirogen. Suatu metode yang digunakan untuk
memindahkan pirogen dari larutan adalah adsobsi dalam bahan adsortif.
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
9/13
irogen dapat dihilangkan dari #adah logam dan gelas melalui panas
kering. >etika metode tidak praktis untuk ukuran #adah atau bukan
metode pilihan untuk alat-alat pada panas kering, pirogen dapat
dihilangkan melalui pembilasan #adah dengan baik dengan air untuk
injeksi bebas pirogen, pirogen larut air, dipindahkan melalui pembilasan
yang diulang.
%. Uj Pr!gen
7ntuk mendukung fakta bah#a larutan parenteral, perangkat serta untuk
administrasi mereka, bebas dari jumlah kontaminan berbahaya dari pirogenic,
Sampel diambil dari setiap batch produksi dikenakan tes resmi untuk pirogen.
es ini adalah tes biologis menggunakan kelinci sebagai he#an uji, karena
kelinci sangat sensitif terhadap pirogen.
. es terhadap >elinci
7ji pirogen menggunakan kelinci sehat yang telah dijaga dalam
keadaan lingkungan dan makanan yang tepat sebelum dilakukan uji.
emperatur normal atau temperatur control diukur untuk tiap he#an yang
akan digunakan. emperatur ini digunakan sebagai dasar penentuan
setiap kenaikan temperatur yang ditimbulakan akibat dari penyuntikan
larutan yang akan diuji. >elinci-kelinci yang digunakan temperaturnya
tidak boleh berbeda lebih dari ', satu dengan yang lainnya, dan
temperatur tubuh tersebut diperkirakan tidak akan meningkat.
8adikanlah alat suntik, jarum dan alat gelas bebas pirogen dengan
cara memanaskan pada temperatur *%' o
= selama tidak kurang dari 2'menit atau dengan cara lain yang sesuai. ?angatkan produk yang akan
diuji sampai temperatur 2C o= D * o=.
Suntikkan produk yang akan diuji pada !ena telinga setiap kelinci
sebanyak ' ml per kg berat badan, selesaikan tiap suntikan dalam #aktu
' menit dihitung dari a#al pemberian. =atat temperatur pada ,*, dan 2
jam sesudah penyuntikan. "ila masing-masing kelinci tidak ada ynag
temperaturnya meningkat ', o= atau lebih dari temperatur control
age &
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
10/13
masing-masing, dan jika hasil penjumlahan kenaikan temperatur dari 2
kelinci tidak lebih dari ,$ o=. aka zat yang diuji memenuhi persyaratan
bebas pirogen. 8ika kelinci-kelinci menunjukkan kenaikan temperatur ',
o= atau lebih atau hasil penjumlahan kenaikan temperatur 2 kelinci lebih
dari ,$ o=, ulangi dengan menggunakan % kelinci lain. 8ika tidak lebih
dari 2 dari kelinci, masing-masing menunjukkan kenaikan temperatur
', o= atau lebih dan jumlah kenaikan temperatur kelinci tidak lebih
dari 2,C o=, maka larutan memenuhi ppersyaratan bebas pirogen.
*. es 3imulus
"aru-baru ini telah ditemui bah#a ekstrak sel darah ketam sepatu
kuda (3imulus polyphemus) mengandung system enzim dan protein yang
menggumpal bila ada liposakarida dalam jumlah kecil. enemuan ini,
merangsang perkembanga uji 3imulus amebocyte lysate (3A3) untuk
mengetahui adanya pirogen dalam kerja penelitian dan penga#asan
selama proses berlangsung. 7sulan-usulan untuk uji produk akhir obat
dengan 3A3 sedang dipertimbangkan oleh 1A.
7ji 3A3 adalah metode spesifik untuk bakteri endotoksin, hanya
untuk pirogen yang signifikan pada kebanyakan pabrik farmasetikal dan
peralatan medis. es didasarkan pada mekanisme primiti!e
penggumpalan darah dari kepiting seperti >uda Amerika (3imulus
polyphemus). "erberapa enzim diletakkan pada sel darah amoeba
kepiting yang dipicuh oleh endotoksin perpanjangan koagulasi enzimatik
yang di akhiri dengan produksi di gel protenose.
es harus dihindarkan dari kontaminasi antimikroba sebelum
dihindarkan, tes ini penting untuk memastikan bah#a tidak ada factor
campuran dalam sediaan, peralatan tidak menyerap endotoksin (seperti
pada beberapa plastic) dan sensitifitas dari lisat diketahui.
4eagen tes 3A3 disediakan dengan lyopilisasi sel di mubasit
limulus. Eolume setara reagen 3A3 dan larutan tes (', mikron per
masing-masing)dicampurkan dalam gelas tube tes elipirogenasi. ube
diinkubasikan pada suhu 2C o= selama jam, setelah tes #adah dibaca.
ube diambil dari incubator dan diubah. "ekuan oleh yang rusak
age '
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
11/13
mengandung energy padatan merupakan factor dari tes positif. >etika
digunakan pada bagian ini bekuan gel uji a#alnya, mele#ati tes
kegagalan dibatasi dan reagen sensiti!e 3A3.
es 3A3 tambahan tes ini dapat digunakan dalam laboratorium
farmaseutikal. es ini spesifik untuk endotoksin gram negatif, di mana tes
pirogen kelinci sensiti!e untuk semua pirogen endotoksin dan sumber
lain dibanding gram negatif.
age
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
12/13
BAB III
PENUTUP
A. &esm$ulan
irogen pertama kali ditemukan pada tahun &$, oleh dr. aul "eeson
yang menemukan bah#a demam timbul karena adanya produk sel peradangan
hospes yang merupakan pirogen endogen.
irogen adalah senya#a organik yang menyebabkan demam, materi
penyebab demam ini adalah lipopolisakarida dari dinding luar sel bakteri.Sumber-sumber pirogen:
a. Air yang digunakan sebagai pelarut.
". 9adah dengan larutan yang telah kontak selama persiapan, pengemasan,
penyimpanan, atau administrasi.
#. "ahan kimia yang digunakan dalam persiapan dari larutan.
encegahan pirogen dapat dilakukan dengan cara sediaan harus
dikumpulkan dalam #adah yang telah dibilas dengan air destilat segar, air
destilasi harus terlindung selama penggumpalan dan harus digunakan
sesegera mungkin, dan larutan seharusnya disaring, dikemas, disegel, dan
disterilkan dengan secepat mungkin.
enghilangkan pirogen dapat melalui pemanasan pada temperatur tinggi,
pemanasan dengan alkali kuat dan atau larutan oksidasi akan menghancurkan
pirogen, atau dengan adsobsi dalam bahan adsortif
es pirogen yaitu:
a. 7ji pirogen menggunakan kelinci. b. 7ji pirogen dengan 3imulus amebocyte lysate (3A3).
B. Saran
>ami menyadari bah#a makalah ini belum sempurna, maka dari itu kami
sangat mengharapkan kritikan dan masukan dari pembaca. erima kasih.
age *
8/16/2019 Tekno Uji Pirogen
13/13
DA%TAR PUSTA&A
Ansel, ?o#ard =. &&. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. enerbit 76 ress:
8akarta
Aulton, ichael. &&'. Pharmaceutical Practice. +ritic 3i!ingston: 3ondon,