Tekno Uji Pirogen

Embed Size (px)

Citation preview

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    1/13

    BAB I

    PENDAHULUAN

    A. Latar Belakang

    Sejak zaman purbakala, demam telah dikenal sebagai tanda utama

     penyakit, tetapi pengertian tentang patofisiologi demam tergolong relatif 

    masih baru. Substansi yang dapat menimbulkan demam disebut pirogen. Ada

    dua macam pirogen, yaitu pirogen endogen yang dibentuk oleh sel-sel tubuh

    sebagai respons terhadap stimulusdari luar (misal: toksin), dan pirogeneksogen yang berasal dari luar tubuh.

    irogen adalah produk metabolisme mikroorganisme umumnya bakteri

    dankapang serta !irus telah dilaporan sebagai penghasil pirogen. "akteri

    gram negatif memberikan zat pirogenik paten seperti crudotoksin, secara

    kimia#i, pirogen adalah zat lemak yang berhubungan dengan suatu molekul

     pemba#a yang biasanya merupakan polisakarida, tapi juga merupakan suatu

     peptida.

    ada manusia reaksi pirogenic dimanifestasikan dengan demam dan

    menggigil. Setelah diinjeksikan sekitar $%-&' menit, kemudian terjadi

    kenaikan suhu tubuh, diikuti dengan menggigil, sakit kepala dan malaise.

    ingin berlangsung ' sampai *' menit dan mencapai puncaknya pada jam

    kedua atau ketiga. "iasanya efeknya dapat dikontrol dengan pemberian obat

    antypiretic, tetapi dapat dibayangkan bah#a kenaikan suhu pada pasien yang

    sakit dapat memiliki konsekuensi yang parah pada penyakitnya.

    +leh karena itu sangat penting untuk mengetahui mengenai pirogen dan

    hal-hal lain yang menyangkut pirogen.

    B. Rumusan Masalah

    alam makalah ini akan dibahas mengenai pirogen, dari sejarah sampai

    uji pirogen.

    age  

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    2/13

    C. Tujuan

    engetahui hal-hal yang berkaitan dengan pirogen, dari sejarah sampai

    uji pirogen.

    D. Manfaat

    Semoga makalah ini dapat membantu pembaca dalam mengetahui hal-hal

    yang berkaitan dengan pirogen.

    age * 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    3/13

    BAB II

    PEMBAHASAN

    A. Sejarah Pr!gen

    Sejak zaman purbakala, demam telah dikenal sebagai tanda utama

     penyakit,tetapi pengertian tentang patofisiologi demam tergolong relatif 

    masih baru. Substansiyang dapat menimbulkan demam disebut pirogen. Ada

    dua macam pirogen, yaitu pirogen endogen yang dibentuk oleh sel-sel tubuh

    sebagai respons terhadap stimulusdari luar (misal: toksin), dan pirogeneksogen yang berasal dari luar tubuh.

    ada tahun &$, dr. aul "eeson menemukan bah#a demam timbul

    karena adanya produk sel peradangan hospes yang merupakan pirogen

    endogen. "elakangan ini, terbukti bah#a fagosit mononuklear merupakan

    sumber utama pirogen endogen dan bah#a bermacam-macam produk sel

    mononuklear dapat menjadi mediator timbulnya demam.

    e#asa ini diduga bah#a pirogen adalah suatu protein yang identik 

    dengan interleukin-. i dalam hipotalamus zat ini merangsang penglepasan

    asam arakidonatserta mengakibatkan peningkatan sintesis rostaglandin /*

    yang langsung dapat menyebabkan suatu demam.

    B. Defns Pr!gen

    . enurut Sco!ille0s

    irogen adalah penyebab demam atau bahan yang dibentuk oleh

    mikroorganismeyang kadang-kadang ada dalam cairan parenteral danmenghasilkan panas ketika larutan disuntikkan pada pasien.

    *. -enurut S(1irogena adalah produk metabolit dari mikroorganisme hidup dan

    mikroorganisme mati yang menyebabkan respon spesifik pitretik setelah

     penyuntikkan.

    2. -enurut 3achman

    age 2 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    4/13

    irogen adalah produk metabolisme mikroorganisme hidup

    umumnya bakteri dan kapang serta !irus telah dilaporkan sebagai

     penghasil pirogen bakteri gram negatif memberikan zat pirogenik paten

    sebagai endotoksi, secara kimia#i pirogen adalah lemak yang

     berhubungan dengan senya#a molekul pembuat yang biasanya

    merupakan polisakarida tetap juga bias merupakan suatu peptida.

    $. -enurut 4S ).th irogen adalah produk dari pertumbuhan mikroorganisme bahan

     pirogenik yang paling berbahaya adalah dihasilkan oleh bakteri gram

    negatif (ebdotoksin) tetapi gram positifjuga menghasilkan pirogenik yang berbahaya.

    C. Sum"er Pr!gen

    irogen atau endoksin bakteri adalah produk metabolit dari pertumbuhan

    mikroba, larut air, tahan panas, 3S-nya tidak dapat dihancurkan dengan

    sterilasasi uap air5penyaringan (/ncyclopedia 66: *'2). irogen adalah produk 

    metabolisme mikroorganisme umumnya bakteri dankapang serta !irus telah

    dilaporan sebagai penghasil pirogen. "akteri gram negatif memberikan zat

     pirogenik paten seperti crudotoksin, secara kimia#i, pirogen adalah zat lemak 

    yang berhubungan dengan suatu molekul pemba#a yang biasanya merupakan

     polisakarida, tapi juga merupakan suatu peptida.

    irogen dibagi menjadi * kelas:

    . irogen /ksogen

    "erasal dari luar tubuh dan menginduksi kenaikan suhu ketika

    diinjeksikan kepada manusia dan he#an, #alaupun lipopolisakarida

    (endoksin) jelas berada di mana-mana. irogen eksogen penting, terdapat

     perbedaan kimia yang besar yang belum disatukan dalam penyebab

    kenaikan suhu, ketika diinjeksi diba#ah kesadaran yang cocok.

    7mumnya kelas dari pirogen dan eksogen termasuk mikroba, komponen-

    komponen mikroba dari bakteri gram negatif, gram positif, fungi, dan

    !irus. 8uga pirogenik non mikroba seperti beberapa obat : steroid-steroid,

    fraksi plasma dan bahan tambahan sintetik muarmil dipeptida. irogen

    age $ 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    5/13

    endogen dihasilkan secara internal oleh inang dalam respon untuk 

    stimulasi berbagai pirogen eksogen.

    *. irogen /ndogen

    Adalah bahan sintetik yang homogen dengan berbagai sel tubuh

    setelah dikeluarkan sebagai endotoksin oleh pirogen endogen.

    irogen dapat masuk dalam sediaan dalam arti berupa mikroorganisme

    hidup5mati. ungkin sumber terbesar dari berbagai kontaminasi adalah air 

    yang digunakan pada proses pembuatn. 9alaupun destilasi yang tepat akan

    menyediakan air bebas pirogen, kondisi penyimpanannya harus tidak dapat

    dimasuki oleh mikroorganisme dan pertumbuhannya dicegah.Sumber potensial yang lain dari kontaminasi adalah perlengkapan.

    "ahan-bahan pirogenik melekat kuat pada gelas atau permukaan lain. 4esidu

    dari larutan dalam peralatan yang digunakan sering terjadi menjadi kultur 

     bakteriyang terkontaminasi pirogenik. 9alaupun peralatan yang sudah dicuci

    dibiarkan di udara dapat mengandung nutrisi yang nyata untuk pertumbuhan

    mikroorganisme karena pengeringan tidak menghancurkan pirogen, pirogen

    dapat tinggal dalam peralatan selama jangka panjang. encucian yang baik 

    akan menurunkan dan pemanasan kering akan mencegah kontaminasi

     peralatan yang cocok untuk digunakan bahan terlarut dapat menjadi sumber 

    nitrogen. "ahan terlarut dapat mengkristal5mengendap dari larutan berair 

    yang mengandung kontaminasi pirogenik. ada proses ini, pirogen dapat

    didihalangi melalui lapisan partikel. alam beberapa kasus, bahan terlarut

    dapat dimurnikan dengan rekristalisasi dan pencucian pengendapan atau cara

    lai untuk penghilangan pirogen. roses pembuatan harus diperhatikan sekali

    dansecepat mungkin untuk meminimalkan kontaminasi. idak ada produk 

    yang seharusnya disiapkan dengan proses yang lengkap dalam satu hari kerja

    termasuk sterilisasi.

    Sehingga dapat disimpulkan sumber-sumber pirogen, yaitu sebagai

     berikut:

    . Air destilat yang telah terkontaminasi oleh bakteri yang tahan udara,

    yang tumbuh dan menghasilkan endotoksin.

    age % 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    6/13

    *. ;at terlarut seperti ontaminasi dapat berasal daeri mikroorganisme di udara atau dari debu.

    D. Men#egah $r!gen

    Ada beberapa langkah yang dapat diambil untuk mencegah pemasukan

    dan peningkatan pirogen dalam cairan parenteral. ?al paling penting adalah

    dengan tepat merancang dan pengoperasian penyulingan, dicocokkan untuk 

    mencegah tetesan dari air mendidih kedalam destilat. estilat harus

    dikumpulkan dalam #adah yang telah dibilas dengan air destilat segar.

    erlakuan untuk menghilagkan tetesan-tetesan air yang terakumulasi yang

    dapat mengandung pirogen atau untuk menghilangkan bahan pirogenik yang

    dapat mengering dan melekat pada bagian dalam permukaan #adah.7saha

     perlindungan menghindarkan kontaminasi destilat oleh bakteri tahan udara

    harus dilatih. Air destilasi harus terlindung selama penggumpalan dan harus

    digunakan sesegera mungkin setelah didestilasi untuk mencegah

     perkembangbiakan bakteri yang mungkin ada. 3arutan seharusnya disaring,

    dikemas, disegel, dan disterilkan dengan secepat mungkin.

    8auh lebih baik mencegah pembentukan pirogen daripada mengusahakan

     pemindahan atau penghancurannya. edua

    metode ini digunakan, khususnya bila diperkirakan bah#a bahan kimia

    terkontaminasi dengan pirogen. etode penyaring asbes aktif terdiri dari

    sediaan larutan yang dile#atkan melalui penyaring asbes kompresi dari serumseitz no 2 pirogen diabsorbsi pada permukaan dari asbes dan oleh karena itu

     pirogen dihilangkan dari larutan. 8uga telah disebutkan bah#a pirogen dapat

    dihilangkan dengan filtrasi mele#ati alat penyaring yang lain. Arang aktif 

     juga menghilangkan pirogen dari larutan dengan absorbsi. 3arutan dikocok 

    dengan ', @ arang aktif serbuk halus selama %-' menit. Arang dibiarkan

    mengendap dan cairan supernatan didekantasiatau arang dapat dihilangkan

    dengan penyaringan kertas saring yang keras karena serbuk halus arang sulit

    age  

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    7/13

    dihilangkan dengan kertas saring. ?udson menyarankan sistem penyaringan

    menggunakan kombinasi pasir murni, kertas saring dan penyaring gelas

    sinter. Arang yang tergranulasi tidak efektif menghilangkan pirogen.

    8adi, cara yang dapat diambil untuk mencegah pemasukan dan

     peningkatan pirogen dalam cairan parenteral adalah dengan tepat

    merancancang dan pengopersaian penyulingan. Air destilasi harus terlindung

    selama pengumpulan dan harus digunakan segera mungkin setelah destilasi

    untuk mencegah perkembangbiakan bakteri yang mungkin ada.

    E. Menghlangkan Pr!gen. enurut

    irogen dapat dipindahkan dari suatu larutan melalui destilasi dan ini

    merupakan metode paling tua untuk memperoleh air bebas progen, dasar 

    untuk memperoleh atau memproduksi parenteral !olume besar bebas

     pirogen dalam skala besar. 7ltrafiltrasi sampai '' > adalah alat yang

    efektif dari penyaringan endotoksin yang mempunyai " kira-kira *'

    > tetapi pada kenyataannya ukuran agregat paling kurang ''' >.

    +smosa balik juga efektif memindahkan partikel samapai nm, meliputi

    endotoksin.

    isisi lain, norit aktif, serat asbes dan polipropilen atau politeffiber 

    atau permukaan, seluruhnya efektif menyerap pirogen, utamanya melalui

    interaksi hidrofobik. irogen atau endotoksin yang diadsorbsi dalam

     permukaan lebih sulit untuk di pindahkan. ermukaan elestomerik seperti

     pada segel dan penutup tidak dapat dipanaskan. irogen disini

    disyaratkan untuk dipindahkan melalui pembilasan dengan air apirogenik. "anyak permukaan logam atau gelas dapat diolah secara

    kimia, kebanyakan bahan pengoksidasi seperti peroBid atau permanganat

    menjadi efektif. Sterilisasi panas kering tidak efektif, tekanan pada *'

     psig disyaratkan selama paling kurang % jam untuk menghancurkan

    kebanyakan endotoksin. etode depirogenisasi ini di pilih untuk 

     permukaan adalah panas kering pada suhu sekitar '-*%' o= paling

    kurang 2' menit kondisi yang baik yang telah diset. engolah ini

    age C 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    8/13

    mengasumsikan bah#a peralatan pada bagian permukaan dapat

    dipanaskan, dan tentu saja sangat sedikit produk yang dapat diolah

    dengan cara ini. 9adah gelas, setelah pencucian dengan air untuk injeksi,

    dikeringkan dan dipanaskan di ba#ah kondisi aliran laminar pada o!en

     berkesinambungan suhu *%' o= atau lebih tinggi. >ondisi ini meliputi

    kombinasi pengeringan, oksidasi dan pembakaran untuk menghancurkan

     bahan pirogen.

    *. enurut 4S th

    irogen dapat dihancurkan melalui pemanasan pada temperatur 

    tinggi. rosedur yang direkombinasikan untuk depirogenasi gelas dan peralatan adalah pemanasan pada suhu *%' o= selama $% menit. elah

    dilaporkan bah#a %' o= selama menit atau selama $ jam diharapkan

    dapat menghancurkan pirogen. ?al itu dipastikan bah#a pencucian yang

    teliti dengan deterjen akan menjadikan #adah gelas bebas pirogen jika

    dilindungi selama proses produksi dan penyimpanan dari kontaminasi

     pirogen berat. utaran autoklaf biasa tidak bisa melakukan hal ini.

    emanasan dengan alkali kuat dan atau larutan oksidasi akan

    menghancurkan pirogen. Suatu metode yang digunakan untuk 

    memindahkan pirogen dari larutan adalah adsobsi dalam bahan adsortif.

     

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    9/13

    irogen dapat dihilangkan dari #adah logam dan gelas melalui panas

    kering. >etika metode tidak praktis untuk ukuran #adah atau bukan

    metode pilihan untuk alat-alat pada panas kering, pirogen dapat

    dihilangkan melalui pembilasan #adah dengan baik dengan air untuk 

    injeksi bebas pirogen, pirogen larut air, dipindahkan melalui pembilasan

    yang diulang.

    %. Uj Pr!gen

    7ntuk mendukung fakta bah#a larutan parenteral, perangkat serta untuk 

    administrasi mereka, bebas dari jumlah kontaminan berbahaya dari pirogenic,

    Sampel diambil dari setiap batch produksi dikenakan tes resmi untuk pirogen.

    es ini adalah tes biologis menggunakan kelinci sebagai he#an uji, karena

    kelinci sangat sensitif terhadap pirogen.

    . es terhadap >elinci

    7ji pirogen menggunakan kelinci sehat yang telah dijaga dalam

    keadaan lingkungan dan makanan yang tepat sebelum dilakukan uji.

    emperatur normal atau temperatur control diukur untuk tiap he#an yang

    akan digunakan. emperatur ini digunakan sebagai dasar penentuan

    setiap kenaikan temperatur yang ditimbulakan akibat dari penyuntikan

    larutan yang akan diuji. >elinci-kelinci yang digunakan temperaturnya

    tidak boleh berbeda lebih dari ', satu dengan yang lainnya, dan

    temperatur tubuh tersebut diperkirakan tidak akan meningkat.

    8adikanlah alat suntik, jarum dan alat gelas bebas pirogen dengan

    cara memanaskan pada temperatur *%'  o

    = selama tidak kurang dari 2'menit atau dengan cara lain yang sesuai. ?angatkan produk yang akan

    diuji sampai temperatur 2C o= D * o=.

    Suntikkan produk yang akan diuji pada !ena telinga setiap kelinci

    sebanyak ' ml per kg berat badan, selesaikan tiap suntikan dalam #aktu

    ' menit dihitung dari a#al pemberian. =atat temperatur pada ,*, dan 2

     jam sesudah penyuntikan. "ila masing-masing kelinci tidak ada ynag

    temperaturnya meningkat ',  o= atau lebih dari temperatur control

    age & 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    10/13

    masing-masing, dan jika hasil penjumlahan kenaikan temperatur dari 2

    kelinci tidak lebih dari ,$ o=. aka zat yang diuji memenuhi persyaratan

     bebas pirogen. 8ika kelinci-kelinci menunjukkan kenaikan temperatur ',

    o= atau lebih atau hasil penjumlahan kenaikan temperatur 2 kelinci lebih

    dari ,$  o=, ulangi dengan menggunakan % kelinci lain. 8ika tidak lebih

    dari 2 dari kelinci, masing-masing menunjukkan kenaikan temperatur 

    ',  o= atau lebih dan jumlah kenaikan temperatur kelinci tidak lebih

    dari 2,C o=, maka larutan memenuhi ppersyaratan bebas pirogen.

    *. es 3imulus

    "aru-baru ini telah ditemui bah#a ekstrak sel darah ketam sepatu

    kuda (3imulus polyphemus) mengandung system enzim dan protein yang

    menggumpal bila ada liposakarida dalam jumlah kecil. enemuan ini,

    merangsang perkembanga uji 3imulus amebocyte lysate (3A3) untuk 

    mengetahui adanya pirogen dalam kerja penelitian dan penga#asan

    selama proses berlangsung. 7sulan-usulan untuk uji produk akhir obat

    dengan 3A3 sedang dipertimbangkan oleh 1A.

    7ji 3A3 adalah metode spesifik untuk bakteri endotoksin, hanya

    untuk pirogen yang signifikan pada kebanyakan pabrik farmasetikal dan

     peralatan medis. es didasarkan pada mekanisme primiti!e

     penggumpalan darah dari kepiting seperti >uda Amerika (3imulus

     polyphemus). "erberapa enzim diletakkan pada sel darah amoeba

    kepiting yang dipicuh oleh endotoksin perpanjangan koagulasi enzimatik 

    yang di akhiri dengan produksi di gel protenose.

    es harus dihindarkan dari kontaminasi antimikroba sebelum

    dihindarkan, tes ini penting untuk memastikan bah#a tidak ada factor 

    campuran dalam sediaan, peralatan tidak menyerap endotoksin (seperti

     pada beberapa plastic) dan sensitifitas dari lisat diketahui.

    4eagen tes 3A3 disediakan dengan lyopilisasi sel di mubasit

    limulus. Eolume setara reagen 3A3 dan larutan tes (', mikron per 

    masing-masing)dicampurkan dalam gelas tube tes elipirogenasi. ube

    diinkubasikan pada suhu 2C o= selama jam, setelah tes #adah dibaca.

    ube diambil dari incubator dan diubah. "ekuan oleh yang rusak 

    age ' 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    11/13

    mengandung energy padatan merupakan factor dari tes positif. >etika

    digunakan pada bagian ini bekuan gel uji a#alnya, mele#ati tes

    kegagalan dibatasi dan reagen sensiti!e 3A3.

    es 3A3 tambahan tes ini dapat digunakan dalam laboratorium

    farmaseutikal. es ini spesifik untuk endotoksin gram negatif, di mana tes

     pirogen kelinci sensiti!e untuk semua pirogen endotoksin dan sumber 

    lain dibanding gram negatif.

    age  

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    12/13

    BAB III

    PENUTUP

    A. &esm$ulan

    irogen pertama kali ditemukan pada tahun &$, oleh dr. aul "eeson

    yang menemukan bah#a demam timbul karena adanya produk sel peradangan

    hospes yang merupakan pirogen endogen.

    irogen adalah senya#a organik yang menyebabkan demam, materi

     penyebab demam ini adalah lipopolisakarida dari dinding luar sel bakteri.Sumber-sumber pirogen:

    a. Air yang digunakan sebagai pelarut.

    ". 9adah dengan larutan yang telah kontak selama persiapan, pengemasan,

     penyimpanan, atau administrasi.

    #. "ahan kimia yang digunakan dalam persiapan dari larutan.

    encegahan pirogen dapat dilakukan dengan cara sediaan harus

    dikumpulkan dalam #adah yang telah dibilas dengan air destilat segar, air 

    destilasi harus terlindung selama penggumpalan dan harus digunakan

    sesegera mungkin, dan larutan seharusnya disaring, dikemas, disegel, dan

    disterilkan dengan secepat mungkin.

    enghilangkan pirogen dapat melalui pemanasan pada temperatur tinggi,

     pemanasan dengan alkali kuat dan atau larutan oksidasi akan menghancurkan

     pirogen, atau dengan adsobsi dalam bahan adsortif 

    es pirogen yaitu:

    a. 7ji pirogen menggunakan kelinci. b. 7ji pirogen dengan 3imulus amebocyte lysate (3A3).

    B. Saran

    >ami menyadari bah#a makalah ini belum sempurna, maka dari itu kami

    sangat mengharapkan kritikan dan masukan dari pembaca. erima kasih.

    age * 

  • 8/16/2019 Tekno Uji Pirogen

    13/13

    DA%TAR PUSTA&A

    Ansel, ?o#ard =. &&. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. enerbit 76 ress:

    8akarta

    Aulton, ichael. &&'. Pharmaceutical Practice. +ritic 3i!ingston: 3ondon,