QUiMICA CLiNICA 1989; 8 (5): 337-340

Interferencias analiticas producidas por paracetamol

MT. Casamaj6 Dalmaua, F. Anroja Rib6a y R. Galimany Soleb

Resumen

51! ha estudiado fa interferencia ana/fliea de paraceta·mol en fa l:aloracion de di"t!rsos conslituyt!ntes, utilizandoespedmenes oble"idos de personas que dec1araron no to­mar medicacion.

En fa primera fase de deteccio" de Ju ifllerjerencia Sf!

procesarotl maestrus en las que se diso/ilio 10 cantidadde paracetamo! necesaria para que su cOllcelllraci6tl fi­nul juera fa equi!'ulente a fa dosis letal 50.

No se encontro interferencia ana/flieD en los metodosana1l'ticos de los s;guiemes cOllstituyemes: "emalies, he­moglobina y leucocilOS (H6000 Technicon), profrombi­nu (CoalTon Fl Boehringer MmmheimJ, hierro(JJ+/lJ)(tripiritJi/-rriazina), glucosa (hexoquinasa), urea (ureasa),creatininio (Jaffe cirterico), protefna (biuret), aspartatoaminotransferasa (lFCC), alanilfa aminotransferasa(IFCC), y-glutamiltrans!erasa (3-carhoxi-4-nitroanilida),fosfatasa alcalil/a (4-nitrofeniifosfato. DEA). Se hall6 in­terferencia analitica estadfsticamente significativa en las(letermirllleiones de plclquetas (/-/6000 Technicon), coles­teral (CHOD-/;'O/)), IIra10 (llricasa), triglicerido (GPO­POD) Y lactato deshidrogenasa (SFBC). Las determina­eiones bioqufmicas se PNlctical'o1/ en el analizadorUltrolab-Aurora (ItJstitllto lJehring).

Con los metodos que presental'OIl interferencia en 10primera fase, se practico 10 clUJIltijicaciOn de la mismaa cOllcentraeiones terapeutica y tuxica. Solamente se en­contru intel'fereneia signijicativa en los metodos analiti­cos de urato y colesterol, Los resultados obtenidos se re­preselltan graficamente (interferogramas),

• Sen"~i d"Analisis OiniquC$. C~nlre d'A.ssistencia Primitria .. Dr.RobeI1». Pla~a d~ la M~dicina, sin08915 Badalona (Ba~lona)

• Se"'i~i d"Analisis CliniquC$. Hospilal ..Germans Trias i Pujol».Carrel~ de Can)"el, sin08915 Badalona (Barcdona)R~ibido 6/4/89Acrplado lIn/89

Summary

The analytical interferences produced by paracetamolon the assays ofcertain blood constitllents have been sw­died using specimens obtained from subjects who did notrake drugs before the blood collection. In a first part, inorder to show the imerference. the samples were proces­sed with added paracetamol in a amoum of the equiva­lent of lethal dose. Analytical interference was not de­tected on the following analytical methods: red bloodcells, haemoglobin and white blood cells (H6ooo Techni­COlt). prothrombin (Coatrun Fl Boehringer Mannheim),iron(lI+11/) (tripirydil-triazine), glucose (hexokinase),urea (urease), creatinillium (Jaffe kinetic method), pro­tein (biurer), aspartate aminotranspherase (IFCC), ala­nine aminotranspherase (IFCC), y-glutamyltranspherase(3-carboxy-4-11itroanilide), alkaline phosphatase (4-nitro­phellylphosfate, DEA). A stmistical sigllljicative analy­tical imerference lVas fOlllul 011 the assays of platelets(/-/6000 Technicon), cholesterol (CHOD-POD), urate (uri­case), triglyceride (GPO-POD) and lactate dehydrogenase(SFBC), The biochemical assuys were run on the Ultrolab­Aurora (llIalyser (llistitllto Behring).

In a second ptJrt, the qlUlIIlIjication of tlie interferen­ce was eSllldied on those methods with a positive inter­ference detected in tlie first part, llsing toxic and theru­pewical doses of paracetamol. Only the assay methodsof /Irate and cholesterol showed significath:e interferen­ces. The obtained results are graphically expressed (in­terpherograms),

Introduccion

En ocasiones. se encuentran resultados de valoracio­nes analflicas cuya interprelacion es diffcil debido a di­versas causas; una de elias puede ser la existcncia de in­lerferencias produddas por la presencia en el especimende medicamentos ingeridos por el paciente. No se tralade un fen6meno inusual sino ampliameme descrito: exis­ten bancos de datos que recogen abundanle y variada in­formaci6n sobre alteraciones de resultados debidas a la

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medicaci6nil,~I. La ingesti6n de farmacos es un factor devariaci6n fisiol6gica y, en la producci6n de valores de re­fereneia, los individuos bajo medicaei6n deben constituirun grupo aparte 0 ser excluidos(l,.

EI efecto de los medicametllos sobre las pruebas de la­boratorio puede eonsiderarse desde dos aspectos distin­tos: el puramente analitico y el biol6gico. En el primercaso se trata de una interferencia que el propio farmacoo sus metabolitos ejercen en una etapa cualquiera de lavaloraci6n analitica, por reacei6n quimica competitiva 0interfereneia espectral. El efecto biol6gico se producecomo consecuencia de la aeci6n terapeutica 0 t6xica dela substancia yes, por tanto, un proceso fisiol6gico. Esevidente que para valorar el efecto biol6gico es necesarioconocer previamente las itllerferencias analiticas que sepueden cstudiar in viTro si se conoce bien c1 metabolis­mo del farmaco lUI .

En el presente trabajo se ha estudiado la interfercnciaanalitica que produce el paracetamol en las valoracionesde los constituyentes sanguineos mas habilUalmente so­licitados. Este farmaco estapresente en un gran numerode especialidades farmaceuticas analgesicas y antipireti­cas que sc administran a pacientes de todas las edades.Su uso ha aumentado ultimamente de fonna muy consi­derable, 10 que se explica por su buena tolerancia y reco­nocida eficacia. Por ser un medica men to que se dispen­sa sin receta, puede producirse un consumo incontroladoen los pacientes ambulatorios, previo a la obtenci6n delespecimen.

Material y metodos

Especimcncs

Sangre, mezda de sueros y mezda de plasmas obteni­dos de personas que dec1araron no to mar ningun tipo demedicaei6n en los tres dias anteriores a la extracciOn.

Medicamento

Paracetamol (N-acetil-p-aminofenol) Acofarma.

Aparatos

- H6000 (Technicon)- Coatron F2 (Boehringer Mannheim)- Ultrolab-Aurora (lnstituto Behring)

Reactivos

- Hierro AU407 (lTipiridil-triazina) InstillHo Behring- Glucosa BlO7 (hexoquinasa) Knickerbocker- Urea Dri-stat BUN Rate (ureasa) Beckman- Creatinina AU405 (Jaffe cinctico) Instituto Behring- Proteinas totales AU409 (biuret) Instituto Behring- Acido urico AU4[4 (uricasa) InstillHo Behring- Coleslerol S-2012 (CHaD-POD) Spinreact- Trigliccrido AU400 (GPO-POD) [nstituto Behring- Trigliccrido CCS 40012 (GPO-POD) Coulter- Triglieerido (GPO-POD) Spinreact- Trigliccrido Peridocrom 701882 (GPO-POD) Boehrin-

ger Mannheim- AST AU4[0 (lFCC) Instituto Behring

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- ALT AU411 (lFCC) Instituto Behring- Fosfatasa alcalina OURN30 (4-nitrofenilfosfato, DEA)

InstitulO Behring- Gamma-g[utamil-transfcrasa [4057 (3-carboxi-4-ni­

troanilida) Spinreact- LDH E541 (SFBC) Knickerbocker- Amilasa Testomar SVU07 (blocked PNP-G7) Institu-

to Behring

Proccdimiento

E[ estudio se efectuo en dos fases:

I. Deteccion de 10 inleljerencio.Se prepararon cinco mezclas de sueros, cuatro mezclas

de plasmas y cinco mueSlras de sangres distintas, todaselias con constituyellles a diferentes concentraciones. Lasmezclas de sueros se uti[izaron para las determinacionesbioquimicas, las mezclas de plasma cnlas determinacio­nes de coagu[acion y las muestras de sangre en [os recuell­tos celulares. En una parte de cada una de elias se disol­vi6 directamenle [a cantidad de paracetamol nccesariapara que su concentracion final fuera [a equivalente a ladosis letal 50, caku[ada para una masa corporal de 60 kgy un volumen total sangufneo de cinco litros. La concen­traci6n utilizada rue de 26,8 mmol/L (4,06 g/L)161. Nose adicion6 medicamellto a [a otra parte, que se uliliz6como testigo.

Las muestras que contenian paracetamol y sus corres­pondientes lesligos se procesaron en las misrnas seriesanaliticas, en las que se tuvo en cuenta [a posible conta­minaci6n debida al instrumento. Se cfecluaronlas deter­minaciones de los constituyentes mas habituales. La de­terminaci6n de trigliccrido se 11evo a cabo utilizandocuatro equipos de reactivos de composicion similar pemde diferente fabricante.

Para cada constituyente ana[izado se obtuvieron cin­co resultados de la muestra con paraeetamol y otros cin­co de la muestra sin paracetamol. Para ambos grupos deresultados se caleul6 la media, la desviaci6n cst an dar yla variancia, asi como el coeficiente de correlaci6n y larecta de regresion. Se verific6 la distribuci6n gaussianade los datos mediante [a prueba de Kolrnogorov-Smirnovy se efectu6 la comparaci6n de medias mediante la prue­ba I de StudentPl .

2. CU0l11ijicaci6n de la inle/ferenda.A partir de una unica mezc1a de sueros se prepararon

cinco alfcuotas en las que se diso[vio paracelamo[ en con­eentraciones decrecientes, procurando que dos de elias seeneontraran dentro de la concentraci6n terapcutica. [n­gerido por via oral, cl paraectamo[ se absorbe rapidamen­te, sobre todo a nivcl del intestino grueso. A [os 45 minu­tos despucs de [a absorci6n de 6,6 mmol (1,0 g) deparacetamol, se encuentra probablemente la concentra­ci6n sanguinea maxima, cuya media es 105 /ltl101/L(16 mg/L)181, por 10 que el intervalo terapcutico se esta­blece entre 66 y 132 /!mol (10 y 20 mg/L). En lodas [asaHeuotas se efcctu61a determinaci6n de [os eonstituyen­tes euyo metodo habia presemado intcrfercncia en [a pri­mera fase. Se obtuvicron cinco resultados cuyas mediasse compararon con [os de [a aUcuma testigo, mediantela prueba I de Student, previa verificacion de la distribu­ci6n gaussiana de los datos mediante la prucba dcKo[mogorov-Smi rnov.

Tabla IDelccci6n de la inlcrfert'ncia l)roducida pur paraeclamol a la cUllccnlracion de 26,8 mmol/L (4.06 gil)

CI1 hIs delerminaciones de dislinlos cOllsliluyenles

Y=/)X+(I

Constituycnte

Grado designif'icaci6n

(NS = no signiric31i\"o)

()': con paracclamol)(.\:: sin paracetamol)

b a

HcmalicsHcmoglobinaLcucocilOSPlllquclasProlrombinaHicrro(]l+[l])GlucosaUre,CreatininioProlcinaUr.110ColcstcrolTrigliceridoAspartalo aminolrullsfcr:1SOlAlunina aminOlransfcrasaj'.G1utami11 rnnsfcrasaFosfal3sa a1calinaLact310 dcshidrogcnasa«·Amilasa

NSNSNS

P < 0,01NSNSNSNSNSNS

P < 0.005p < 0,005P < 0.001

NSNSNSNS

P < 0.001NS

0.89

0,920.950,98

1.01

[0,38

-3.02-0,Q3-0,13

- 37.23

Tabla III)clcccioll de la intcrfcrcncia producida Ilor parnel'lamol a la conccnlracion de 26,8 mm(lI/L (4.06 giL)

en la determinacion trigliccrido por cualro equilJOS distinlos de reactivos

y=bx+o

COllstiluyel11e

Triglicerido

ReaClivo

(I) l. Gehring(2) Coulter(3) Boehringer /1.'1.(4) Spinrcaci

Grado designificllcion

p < 0,001P < 0,001P < 0,005P < 0,005

0': con paracelamo[)(x: sin paracelal11ol)

b "

0,980,820,890,94

Resultados

Detecci6n de la inlerferencia

sieian similar pero de diferelHes fabricantcs, hallandoseinterferencia en lodos elias. Los resultados plteden vcrseen la labIa II.

En la tabla I se presentan los resullados hallados enla primera fase, en la que Se utilizo una concemracionde 26,8 mmol/L (4,06 giL) de paracetamol. Se ha en­comrado interferencia analilica produdda por paraceta­mol en las siguicllIes determinacioncs: plaqllelas (Tech­nicon H6000), urato (llricasa ell Ullrolab-Aurora),colesterol (C1-IOD-POD ell Ultrolab-Aurora), trigliccri­do (GPO-POD en Ultrolab-Aurora) y lactato deshidro­genasa (SFBC en Uhrolab-Aurora).

Para el metodo analilko del trigliccrido, el estudio sercpilio ulilizando cuatro equipos de rcactivos de compo-

Cuantificaci6n

En la cuantificacion de las interfcrcndas dctecladas enla primera fase solamente se ha cncolllrado interferenciaestadislicamente significativa, a concenlraciolles terapeu­tica y toxica, en los mClOdos analiticos de urato y coles­tcro1. Se han calcu[ado [os cocicntcs entre las concentra­ciones halladas de cotlstituyelltc con y sin suslanciaitHerferente para cada concentracion de In misma. Con[os datos obtenidos Se han trazado los rcsl>CClivos inter­ferogramast91, que Se prcsentan en las figuras I y 2.

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Fil-\lIr.l l. Illlrrrcrograma dd paraeelamol para d Illt'lodo mmlilkode lIralO

Discusibll

Para varios aUlOrcsllO.ll.l:l el paracctarnol, a una con­celllracion de 0,66 a 9,90 rnmol/L (0,1 a 1,5 giL), no pro­duce ningllna inlerferencia en la valoracion de trigliccri­do, cuando se emplea un mClOdo enzinuitico con1ccturaen la zona llitravioleta del espectro. NOSOlOS, al utilizarmelOdos colorimetricos que usan peroxidasa (EC 1.11.1.7)acoplada, la hemos detectado para una concemraci6n de26,8 mmollL (4,06 giL), muy superior al intervalo teTa­peutico de cstc farmaco.

En la valoracion de llrato, los rnelOdos que conjuganla urato oxidasa (EC 1.7.3.3) Y la peroxidasa utilizan eIper6xido de hidr6geno para oxidar un crom6geno bajola acci6n dc la pcroxidasa. Durante csta scgunda etapa,los compucstos rcdllctorcs interficren con cl urato con­Sllmiendo c1 per6xido de hidr6geno. L'l. interferencia quenosotros dctcctamos es por dcfecto. Resultados similareslos encontraron Fossati y col.\l3) can cste mismo far­maco.

Del mismo modo, cn la valoraci6n dc co1csterol pormetodo enzimatico, las sustancias reductoras son susccp­tibles de actuar en la ultima ctapa de la reacci6n, produ­eicndo una interfercncia por defccto, cllya amplitud va­ria scgun la naluralcza de los dcrivados fcnolcs utilizados.En la lilcratura consult ada no csta dcscrila la interfcrcn­cia del paracetamol sobre cstc mClOdo analitico, aunqucsi sc ha observado para componcntcs rcductorcs como elascorbald l(),14'.

llihliol-\r.lria

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