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. A1 - 1 -

RUTINAS ANALITICAS

2000

INDICE

1. RUTINA DE ANALISIS

1.1 HARINA

a. Determinación de Humedadb. Determinación de Proteína Totalc. Determinación de Proteínas Solublesd. Determinación TBV-N (Bases Volátiles Totales Nitrogenadas)e. Determinación de Grasaf. Determinación de Acidos Grasos Libres (Acidez)g. Determinación de Cenizas Totalesh. Determinación de Arenas i. Determinación de Clorurosj. Determinación de Histaminask. Determinación de Remanente de Antioxidante l. Digestibilidad ( Torry modificado)m. Granulometría

1.2 FASE LIQUIDA

a. Determinación de Grasa en Licores por Centrifugaciónb. Medición de Sólidos en Licoresc. Determinación de acidez en Aceite Crudod. Impurezas y Sólidos en Aceitee. Determinación de Humedad en Aceitef. Indice de Peróxidos en aceite

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g. Indice de Yodo en aceite

1.3 ANALISIS DE COMPOSITOS (Materia Prima, Licores, Tortas, Harina).

a. Determinación de Humedadb. Determinación de Grasac. Determinación de Proteína Totald. Determinación de Cenizase. Determinación de Clorurosf. Determinación de Acidez en Aceiteg. Determinación de Granulometría.

1.4 TBV–N EN MATERIA PRIMA Y CONCENTRADO (descarga y proceso)

1.5 ANALISIS DE AGUAS

a. Determinación de Sólidos Totales Disueltos (STD)b. Determinación de Clorurosc. Determinación de alcalinidad hidróxida (OH)d. Determinación de residual de sulfitose. Determinación de residual de fosfatosf. Medición pHg. Determinación de Dureza

1.6 LIMPIEZA DE P.A.C. Y CENTRIFUGAS

a. Valoración de soda caústica con una solución normalizada de H2SO4 1N .b. Valoración de ácido nítrico con una solución normalizada de NaOH 0,1N.c. Determinación de pureza de soda caústica en escamas

1.7 AGUA DE BOMBEO Y EFLUENTE

a. Determinación de Humedadb. Determinación de Grasac. Determinación de Proteínad. Medición de pH

1.8 ANALISIS DEL CUERPO RECEPTOR

a. Mediciones Físicas (Temperatura aire-agua, Transparencia, Profundidad)b. Medición de pHc. Determinación de Demanda Bioquímica de Oxígeno disuelto al quinto día

(DBO5)d. Determinación de Sólidos Totalese. Salinidad

2. ANEXOS : PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES E INDICADORES

2.1 Soluciones Normalizadas 2.2 Soluciones Porcentuales.

2.3 Indicadores.

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2.4 Preparación de soluciones para análisis de aceite: peróxidos e índice de yodo.2.5 Soluciones Reguladoras o Tampón.

1. RUTINA DE ANALISIS

Cualquier muestra para análisis químico deberá estar debidamente homogenizada y pulverizada y deberán archivarse herméticamente y separar una contramuestra.

1.1 HARINAa. HUMEDAD

Fundamento

El método consiste en determinar el porcentaje de agua contenida en la muestra por la pérdida de peso, debido a su eliminación por evaporación bajo condiciones de tiempo y temperatura establecidas por las normas.

Equipos y Materiales

- Balanza Analítica con 0,1 mg de precisión - Estufa con termoregulador - Placas Petri de 100 x 15 mm. - Desecador 250 mm con sílica gel

Procedimiento

- Pesar 5,0 g. de muestra pulverizada en placas Petri por duplicado.- Poner en la estufa por 21/2 horas a 130ºC + 5ºC- Cumplido el tiempo, retirar las placas al desecador, dejar enfriar

unos 30 min. y luego proceder a pesar.

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Cálculo

% Humedad = W1 - W2 x 100 WmDonde:

W1 = Peso de placa + muestra húmeda (g) W2 = Peso de placa + muestra seca (g) Wm = Peso de muestra (g)

Observaciones

- Tener mucho cuidado con la tapa del desecador al momento de introducir las placas calientes en el desecador y cuando se cierre la llave de la tapa.

- Regenerar la sílica gel periódicamente.

ReferenciasAsociation of Official Analytical Chemists, (A.O.A.C.) Official Methods of Analysis, 930.15 15th Edition, published by A.O.A.C. USA, 1990.

b. PROTEINAS TOTALES

FundamentoSe basa en la conversión de nitrógeno orgánico en inorgánico. El Sulfato de amonio formado se diluye y se alcaliniza con hidróxido de sodio; el amonio liberado se recepciona en una solución de ácido sulfúrico, el cual se valora con una solución de hidróxido de sodio normalizada.

MétodoKjeldhal

Equipos y Materiales- Equipo de Digestión y Destilación Kjeldahl- Balanza Analítica 0,1 mg. de precisión.- Balanza de precisión.- Balones Kjeldahl de 800 ml.- Erlenmeyer de 500 ml.- Papel filtro Whatman Nº 42 o papel Glasé- Bureta de 50 ml de 0,1 ml - Probeta de 25 ml.- Pipeta volumétrica o fiola de 100 ml.- Vaso de 600 ml.

Reactivos: Digestión: ( Estos pueden ser de las marcas Riedel de Haen, Mallinckrodt o J.T. Baker)- Sulfato de Potasio anhidro (K2SO4)- Sulfato de Cobre pentahidratado (CuSO4. 5 H2O) - Acido Sulfúrico concentrado p.a (H2SO4)

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Destilación :- Solución de Hidróxido de Sodio al 50%- Receptor : Solución H2SO4 0,1 N (valorado)- Indicador : rojo de metilo 0,1%- Titulante : Solución de Hidróxido de sodio 0,1 N (valorado)

Procedimiento:

Digestión:- Pesar 1,0 g. de muestra pulverizada en papel de filtro y colocar en el

balón Kjeldhal .- Adicionar 15,0 g. de sulfato de potasio, 1,0 g. de sulfato de cobre y

25 ml. de ácido sulfúrico concentrado.- Colocar los balones y encender las hornillas del equipo Kjeldhal

(reguladas a 3,5 amperios), proceder a digestar. Cuando el contenido del balón haya tomado color verde esmeralda, dejar 45 minutos adicionales.

- Dejar enfriar a temperatura ambiente y luego retirar los balones.

Destilación- Añadir con cuidado por las paredes del balón 400 ml. de agua

destilada, agitando hasta la total disolución de las sales.- Sumergir el extremo del tubo refrigerante en 100 ml de solución

receptora H2SO4 0,1 N, de modo que quede completamente cubierto y evitar pérdidas de valores.

- En seguida, agregar con cuidado por las paredes del balón 70 ml de Hidróxido de sodio al 50%, homogenizar el contenido con cuidado y conectar el balón a la unidad de destilación.

- Proceder a destilar hasta un volumen total de 300 ml.- Apagar la hornilla, retirar el refrigerante y con ayuda de una pizeta

enjuagar y recoger la solución restante del refrigerante en el mismo erlenmeyer receptor.

- A continuación, proceder a titular la solución recepcionada con NaOH 0,1 N, usando como indicador 4 - 5 gotas de rojo de metilo. El viraje es de rojo grosella a amarillo melón.

- Correr en paralelo una prueba en blanco, en las mismas condiciones anteriormente descrita.

Cálculo

%P = (Vb - Vg) x 0,014 x N x F x fs x 100

Wm Donde :

Vb = Gasto de NaOH 0,1 N de la prueba en blanco Vg = Gasto de NaOH 0,1 N de la muestra. 0,014 = Miliequivalente de nitrógeno. N = 0,1 N (Normalidad de la sol. NaOH) fs = Factor de la solución NaOH

F = Factor de conversión de nitrógeno a proteína (6,25).

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Wm = Peso de muestra.

Resumido:

%P = (Vb - Vg) x 0,875 x fs

Wm

Cuando las soluciones tienen factor, la fórmula es :

%P = ( V’ x f ’) - (V” x f ”) x 0,875

WmDonde: V’ x f ’ = Volumen y Factor del Acido Sulfúrico 0,1 N

V” x f ” = Volumen y Factor del Hidróxido de sodio 0,1N Wm = Peso de la muestra

Referencia

AOAC , 7.037, 14 th Edition, USA, 1984

Observaciones- Tener cuidado con el extremo del tubo refrigerante al momento de

sumergirlo en la solución receptora, su posición debe ser de tal modo que permita la evacuación libre de los vapores condensados, porque puede crear efecto de contrapresión y echar a perder el análisis.

- Comprobar periódicamente el factor de las soluciones.

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c. DETERMINACION DE PROTEINAS SOLUBLES

FundamentoLa solubilidad de la proteína total es de suma importancia ya que indica una mayor absorción de la fracción proteica de la harina y por lo tanto su aprovechamiento aumenta considerablemente. El contenido de proteínas solubles en la harina es consecuencia directa de la proporción de concentrado adicionado a la mezcla de tortas. De esa forma se comprueba que la harina es integral y que además el contenido de proteínas y de aminoácidos solubles le otorgarán una digestibilidad mayor.

MétodoSe basa en la disolución en agua de la fracción soluble de la harina y posterior determinación al filtrado del contenido de proteínas por Kjeldhal

Equipos y Materiales- Equipo Kjeldhal- Balanza Analítica 0,1 mg de precisión.- Balanza de precisión.- Balones Kjeldhal de 800 ml- Erlenmeyer de 500 ml- Papel filtro lento Nº 92- Bureta de 50 ml de 0,1 - Embudo de vidrio- Fiola de 250 ml- Calentador- Termómetro de vidrio- Pipeta volumétrica de 25 ml- Baño María

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ReactivosDigestión : - Sulfato de Potasio p.a: 15 g.- Sulfato de Cobre pentahidratado p.a. : 1,0 g.- Acido Sulfúrico concentrado p.a. : 25 ml

Destilación :- Agua destilada : 400 ml- Solución de Hidróxido de Sodio 50%: 70 ml- Receptor : 100 ml de H2SO4 0,1 N (valorada)- Indicador : 4 gotas de rojo de metilo 0,1%- Titulante : Solución de Hidróxido de sodio 0,1 N (valorada)

Procedimiento- Pesar 10,0 g. de muestra pulverizada en papel de filtro y colocarlo en

una fiola de 250 ml- Agregar 150 ml de agua destilada y agitar por 5 minutos.- Colocar en baño María a 90 - 95 °C por 1 hora. Retirarlo y dejar enfriar- Proceder a filtrar.- Del filtrado previamente homogenizado, tomar 25 ml. de muestra y a

partir de allí proceder a realizar el análisis de la misma manera que para la proteina total.

Cálculo

% P Soluble = % P1 x 100% PT

Donde: % P1 = ( Vb1 - Vg1 ) x 0,875 / Fx = ( Vb1 - Vg1 ) x 0,525

Fx = 10 g de harina x 25 ml Muestra150 ml de agua de dilución

P1: Es la proteína correspondiente al filtrado.Fx: Es la cantidad de muestra disuelta proporcional en 25 ml.Vb1: Gasto de la prueba en blanco.Vg1: Gasto de la muestra (filtrado). PT : Es la proteína total de la muestra harina.

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d. TBV-N (BASES VOLATILES TOTALES NITROGENADAS)

ObjetivoDeterminar la calidad de la harina en función a las bases volátiles.

PrincipioEl MgO al reaccionar con la muestra a temperatura de ebullición acelera la liberación de bases volátiles, las cuales son arrastradas por una corriente de vapor de agua y recibidas en una solución de ácido sulfúrico y valoradas directamente con hidróxido de sodio 0,1N.

MétodoKjeldhal

Equipos y Materiales- Balanza Analítica 0,1 mg- Balanza de Precisión- Equipo Destilación Kjeldhal.- Erlenmeyers de 250 ml- Papel libre de nitrógeno (filtro Nº 91 ó Glasé)- Bureta 10 ml de 0,05- Pipeta volumétrica de 20 ml- Balones Kjeldhal 800 ml

Reactivos- Oxido de Magnesio - Solución receptora: 20 ml ácido Sulfúrico 0,1 N (valorada) y

completar a 50 ml con agua destilada.- Solución de hidróxido de sodio 0,1N(valorado).- Indicador Rojo de Metilo 0,1%.- Vaselina líquida

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Procedimiento- Pesar 10,0 g. de muestra pulverizada en papel Glasé con una

precisión de 0,001g y transferir al balón Kjeldhal.- Sumergir el extremo del tubo refrigerante en el erlenmeyer que

contiene la solución receptora.- Adicionar 2,0 g. de oxido de magnesio y 2 ml de vaselina líquida.- Enseguida, agregar 150 ml de agua destilada , mezclar el

contenido y proceder a destilar por 10 min, contándose el tiempo a partir del inicio de la ebullición.

- Apagar la hornilla, desconectar el refrigerante y con ayuda de una pizeta enjuagar y recoger la solución restante de la alargadera en el mismo erlenmeyer receptor.

- Agregar 3 gotas de indicador rojo de metilo al destilado.- Titular con Hidróxido de Sodio 0,1 N, hasta un viraje de color

rosado a melón claro.- Realizar un ensayo en blanco paralelamente con el análisis

empleando el mismo procedimiento y las mismas cantidades de reactivos, sin la muestra.

Cálculo

Mg N2/100 g. de muestra = (Vb – Vg) x Fc x 140

Wm Donde

Vb = Volumen de gasto del blanco Vg = Volumen de gasto de la muestra Fc = Factor de corrección de NaOH 0,1 N Wm = Peso de muestra

Observación:- Expresar el resultado con una precisión de 0,1 mg.- Comprobar periódicamente el factor de la solución titulante a fin de

considerar en el cálculo.- Las cocinillas del destilador deberán ser revisadas periódicamente

a fin de obtener un rendimiento de volumen necesario, aproximadamente 125 ml de volumen total.

- El agua destilada a usar debe ser recientemente obtenida y enfriada.

ReferenciaNTP 201.032- 1982

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e. GRASA

FundamentoEl contenido total de grasa es extraído de la muestra, usando como solvente hexano y el extracto obtenido se pesa después de haberse evaporado el solvente.

Equipos y Materiales- Balanza analítica con 0,1 mg de precisión- Equipo extractor soxhlet- Balón Soxhlet 250 ml- Campana extractora de gases.- Estufa con termoregulador- Desecador con sílica gel- Papel filtro Whatman Nº 42 o Albet Nº 150.

Reactivos- Hexano p.a.

Procedimiento- Pesar 2,0 g de muestra y elaborar un cartucho de papel filtro de tal

modo que la muestra se encierre herméticamente. - Retirar el balón soxhlet del desecador y pesar.- En la campana extractora de gases prendida, tomar aproximadamente

150 ml de hexano, agregar una parte del solvente al balón, colocar el cartucho en la cámara de extracción y añadir el solvente restante a la cámara. Conectar la cámara con el balón y el tubo refrigerante.

- Abrir la llave de ingreso de agua, encender la hornilla y regular a la temperatura que permita de 10 – 12 sifoneos por hora.

- Mantener estas condiciones durante 4 horas.- Finalizado la prueba se procede a recuperar el solvente, disminuyendo

la temperatura de la cocinilla y con el extractor de gases encendido. Es necesario tener mucho cuidado en esta etapa.

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- Llevar el balón a la estufa de 30 – 40 min. a 105ºC para terminar la evaporación del solvente.

- Enfriar en el desecador y proceder a pesar el balón.

Cálculo% Grasa = W2 - W1 x 100

Wm

Donde: W1 = Peso del balón vacío (g)

W2 = Peso del balón + extracto (g) Wm = Peso de muestra (g)

ReferenciaNTN 204.033 1985A.O.A.C 7.062 , 14 th Edition , 1984

ObservaciónDestilar el Hexano cuando se contamine.

f. ACIDOS GRASOS LIBRES (Acidez - FFA)

Objetivo Determinar Acidos Grasos Libres en Harina de pescado

FundamentoEsta determinación mide el grado de descomposición lipolítica (hidrólisis), esto es la formación de ácidos de peso molecular más bajo, la acidez libre se puede expresar como grados o índice de acidez.

Se basa en la neutralización de los Acidos Grasos Libres con una solución alcalina.

MétodoSe basa en la titulación del extracto graso de harina con solución de Hidróxido de sodio (grado de acidez) o con hidróxido de potasio (índice de acidez).

Equipos y Materiales - Probeta 50 ml - Micro bureta automática 5 ml, 0,01- Plancha calentadora - Pipeta volumétrica, 2 ml

Reactivos- Alcohol etílico rectificado al 95% (neutralizado con soda 0,1 N) - Indicador Fenolftaleína al 1% - Hidróxido de sodio 0,1 N estandarizada.

Procedimiento- A partir del extracto obtenido en la determinación de grasa, adicionar

50 ml de alcohol neutralizado. - Proceder a calentar suavemente la solución sin llegar al punto de

ebullición.

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- Dejar enfriar y agregar 2 ml de fenolftaleína al 1%.- Titular con hidróxido de sodio 0,1 N, agitando vigorosamente hasta la

aparición del primer color rosado que permanezca por lo menos 30 segundos de intensidad similar al obtenido en la neutralización del alcohol.

Calculo

% FFA = Vg x fc x 2,82 Wm

Donde :

FFA = Porcentaje de acidez libre (expresado como ácido oleico) Fc = Factor de corrección de NaOH 0,1N Wm = Peso del extracto (grasa)

ReferenciaAOAC Ca 5ª - 40, Volumen B (1993)

g. CENIZAS TOTALES

FundamentoEl método se basa en la descomposición de la materia orgánica por calcinación entre 550 – 600ºC

Equipos y Materiales- Balanza analítica de 0,1 mg de precisión. - Horno Mufla eléctrica- Cocinilla eléctrica- Campana extractora de gases.- Crisol de porcelana (26 mm.) - Desecador con sílica gel.- Pinza 40 cm.

Procedimiento- Calentar los crisoles durante 30 min. a 500ºC en la mufla, luego retirar

y dejar enfriar en el desecador.- Pesar en el crisol 1,0 g. de muestra. Proceder a quemar en la cocinilla

bajo la campana extractora hasta la total carbonización de la muestra. - Encender la mufla eléctrica.- Calcinar la muestra en la mufla a 550ºC por 4 horas hasta la formación

de cenizas blancas o blanco grisáceo. Al finalizar la prueba, apagar el equipo y dejar el crisol unos 10 minutos

- Retirar los crisoles y colocarlo en el desecador, dejar enfriar a temperatura ambiente y pesar el residuo. Se debe tener cuidado al momento de poner los crisoles calientes dentro del desecador, para esto es preferible abrir la llave de la tapa y esperar unos segundos y después se vuelve a cerrar la llave.

Cálculo

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% Cenizas = W2 - W1 x 100 Wm

Donde :

W1 = Peso del crisol vacío (g) W2 = Peso del crisol + residuo (g) Wm = Peso de muestra (g)

Referencias

A.O.A.C. 7.009,14 th Edition (1984)N.T.N. 204.022

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h. ARENAS

DefiniciónArena : Es la ceniza insoluble en ácido clorhídrico.

Principio del MétodoSe basa en el tratamiento dado a las cenizas obtenidas con ácido clorhídrico, seguido de : filtración, secado, incineración y pesada del residuo (sílice).

Equipos y Materiales- Balanza analítica, 0,1 mg- Crisoles de porcelana Gooch - Vasos de 250 ml- Mufla eléctrica- Plancha de calentamiento- Estufa - Desecador- Papel filtro N°42- Campana extractora de gases

Reactivos- Acido Clorhídrico 3 N

Procedimiento- Se pesa aproximadamente 5 g. de muestra y se hace la

determinación de cenizas.- Se transfiere la ceniza obtenida a un vaso agregando 75 ml de HCl

3N. - Se hace hervir por 15 min. a temperatura moderada, luego filtrar la

solución tibia empleando dos hojas de papel filtro. Lavar el residuo con agua destilada caliente hasta dejarlo libre de ácido.

- Tomar un crisol y tararlo. Acomodar el papel filtro dentro del crisol y llevar a estufa a 103°C por 1 hora. Luego incinerar en la mufla a 550°C por 30 min.

- Retirar el crisol y dejar enfriar en el desecador, luego proceder a pesar.

Cálculo

% Arena = (M2 - M1) x 100 Wm

Donde : M1 = Peso del crisol vacío (g) M2 = Peso de crisol + residuo(arena) (g) Wm = Peso de muestra

ReferenciaN.T.N. 204.024 1982

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i. CLORUROS

PrincipioEsta basado en la insolubilidad del Tiocianato de plata y la reacción de un ligero exceso con el indicador férrico.

MétodoVollhard

Equipos y Materiales- Balanza analítica 0,1 mg- Campana extractora de gases. - Erlenmeyer de 250 ml- Bureta de 25 ml, 0,1 ml- Plancha u hornilla eléctrica- Pipetas de 10 y 5 ml

Reactivos- Acido Nitrico concentrado al 70% p.a. - Nitrato de Plata 0,1N. normalizado- Tiocianato de Amonio 0,1 N. normalizado- Indicador : Solución saturada de Sulfato Férrico de Amonio al 40%.

Procedimiento- Pesar 1,0 g. de muestra y transferir a un erlenmeyer de 250 ml - Dentro de la campana y con el extractor encendido, adicionar 10 ml de

solución nitrato de plata y 4,0 ml de ácido nítrico por las paredes del erlenmeyer.

- Poner a calentar (suavemente) el contenido en la plancha eléctrica, hasta que todos los sólidos a excepción del cloruro de plata, se hayan disuelto.

- Retirar y dejar enfriar a temperatura ambiente.- A continuación adicionar 50 ml de agua

destilada y 3,0 ml de solución indicadora.- Proceder a titular con la solución de tiocianato de amonio hasta que

una coloración rojo ladrillo persista por 1 minuto.- Realizar un ensayo en blanco, usando los mismos reactivos y

procedimiento pero omitiendo la muestra.

Cálculo

%Cl = (Vb - Vg) x 5,845 x 0,1

Wm Donde Cl = % Cloruro de sodio Wm = Peso de la muestra

Vg = Volumen de gasto de Tiocianato de amonio 0,1 N (muestra)

Vb = Volumen de gasto de Tiocianato de amonio 0,1 N (blanco)

ReferenciaNTP 204 031 1985

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j. HISTAMINAS

ObjetivoDeterminación de histamina presente en la harina de pescado.

PrincipioLa histamina se extrae de la muestra con ácido tricloroacético, se aisla del extracto por cromatografía de intercambio catiónico luego se deriva con OPA (o-ftalaldehido) a fluophoro, el cual es determinado por análisis fluorométrico.

MétodoFluorométrico.

Equipos y Materiales- Fluorómetro : Longitud de onda EX = 360 nm y EM = 450 nm.- Balanza analítica y de precisión.- Agitador magnético- peachímetro.- Cronómetro con alarma.- Micropipeta : 1 a 40 ul y 40 a 200 ul.- Erlenmeyer : 250 ml.- Fiola : 10, 25, 50, 100, 1 000 y 2 000 ml.- Vasos : 50, 100, 250 y 1 000 ml.- Pipeta volumétrica : 1 y 2 ml.- Pipeta graduada : 10 y 25 ml.- Probeta : 10 y 25 ml.- Columna cromatográfica con llave de teflón- Embudo.- Bagetas de vidrio- Papel de filtro .- Lana de vidrio

Reactivos- Acetato de sodio (p.a.)- Resina de intercambio catiónico - Amberlite CG-50.- Acido acético glacial p.a..- Metanol.- Hidróxido de sodio (p.a.)- Acido tricloroacético.- Acido clorhídrico.- Histamina dihidrocloruro (p.a.)- OPA (o-ftalaldehido) 97 % (p.a.)

Procedimiento

Preparación de muestra:1. Pesar 5 g. de muestra, añadir 90 ml. de ácido tricloroacético al 5%.

Agitar por 5 min, dejar sedimentar y luego filtrar en papel whatman Nº 42.

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2. Pipetear 0,2 ml. (200 ul. con micropipeta) del extracto (filtrado) a una fiola de 25 ml enrasar con buffer de acetato de sodio 0,2 N y homogenizar.

Preparación de columna1. Pesar 1,0 g. de resina amberlite y depositarlo en la columna donde

previamente se ha colocado lana de vidrio. Agregar 50 mal de buffer de acetato 0,2N (pH = 4,62).

2. Drenar el buffer de la columna sin dejarla seca y transferir cuantitativamente los 25 ml de sal muestra, enjuagando el contenido de la fiola con tres porciones de 5 ml de agua destilada.

3. Lavar la columna con 130 ml de buffer y descartar los lavados.

EluciónDesorber (Eluir) la histamina retenida en la resina con 18 ml de HCl 0,2N (en 3 porciones de 6 ml) y al final 2 ml de agua destilada. El drenaje debe ser gota a gota y se recibe en una fiola de 25 ml

Regeneración de resina Lavar la columna con 25 ml de buffer. Agregar 50 ml de HCl 0,2N y hacer drenar lentamente y descartar. Luego seguir agregando buffer hasta que el líquido de descarte tenga un pH de 4,62 ( 150 ml aproximadamente).

Preparación para la lecturaDe la solución eluida, tomar 2 ml de muestra previamente homogenizada, agregar 1ml. de NaOH 1N. y 0,1 ml (100ul) de OPA al 1% en metanol; mezclar y dejar en reposo por 3,5 min, evitando la luz directa. Luego agregar 2 ml de HCl 0,7N agitar y leer en el equipo inmediatamente.

Preparación de Curva Standard 1. Pipetear 200 ul (0,2 ml) de los estándares de Histamina p.a. ya

preparados ( 0,0 - 2,5 - 5,0 - 7,5 - 10,0 - 15,0 y 20,0 ppm) en fiolas de 25 ml y enrasar con solución buffer 0,2 N, y mezclar.

2. Transferir cuantitativamente la sal muestra a la columna que ya esta lista para usar, luego enjuagar con 3 porciones de 5 ml de agua destilada.

3. Lavar la columna con 130 ml de buffer y descartar los lavados.4. Eluir la histamina retenida en la columna con 18 ml de HCl 0,2 N y 2

ml de agua destilada.5. Tomar 2 ml de muestra eluida + 1 ml de NaOH 1 N. y 0,1 ml de OPA

1%. Mezclar y dejar reposar por 3,5 min.6. Adicionar 2 ml de HCl 0,7 N. y leer en el fluorómetro.

Todo este procedimiento es idéntico al realizado con la muestra de harina.

Cálculo 1. Elaborar la curva Standard vs. concentración de histamina (ppm) con

los estándares. Esto se hace en el equipo.2. Comparar la fluorescencia de la muestra con la curva Standard y

determinar la concentración de histamina de la muestra.

Hm = [ ] x f d.Donde : Hm = Concentración de Histamina en ppm

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[ ] = concentración fd = factor de dilución.

Referencia

METODO SHIMADZU - CIA LABORATORIO JAPON 1994

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Estándares de Histaminas

Concentraciónppm

TCA 5%

50 ml 100 ml

Hm p.a.mg

Hm p.a.mg

0,0 0,000 0,000

2,5 0,125 0,250

5,0 0,250 0,500

7,5 0,375 0,750

10,0 0,500 1,000

15,0 0,750 1,500

20,0 1,000 2,000

25,0 1,250 2,500

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. A21 - 21 -

k. REMANENTE DE ANTIOXIDANTE

Fundamento

Determinar el contenido de remanente de antioxidante presente en la harina de pescado

Principio

La determinación es por fluorescencia, luego de remover las interferencias naturales por extracción.

Equipos y Materiales

- Fluorómetro: Longitud de onda EX = 360 nm y EM = 450 nm

- Balanza analítica y de precisión

- Pera de decantación de 250 ml

- Fiola 50 , 100 ml

- Vasos 250 ml

- Embudo

- Pipeta volumétrica 25 ml

- Probeta 100 ml

- Papel de filtro Nº 91

Reactivos

- Etoxiquina

- Metanol

- Eter de Petróleo

- Cloruro de sodio - Sulfato de sodio anhidro

Preparación de Curva de Calibración: Solución Standard de Etoxiquina

Pesar 100 mg de etoxiquina pura y enrasar a 100 ml con éter de petróleo, disolver hasta completa disolución ( esta es la solución A; 1 mg/ml )

- Solución A = 1000 ug/ml ( 1 000 ppm )

Diluir 5 ml de la solución A en 100 ml de éter de petróleo

- Solución B = 50 ug/ml ( 50 ppm )

Diluir 1 ml de la solución B en 50 ml de éter de petróleo

- Solución C = 1 ug/ml ( 1 ppm )

Diluir 2 ml de la solución B en 50 ml de éter de petróleo

- Solución D = 2 ug/ml ( 2 ppm )

Diluir 3 ml de la solución B en 50 ml de éter de petróleo

- Solución E = 3 ug/ml ( 3 ppm )

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Diluir 4 ml de la solución B en 50 ml de éter de petróleo

- Solución F = 4 ug/ml ( 4 ppm )

Diluir 5 ml de la solución B en 50 ml de éter de petróleo

- Solución G = 5 ug/ml ( 5 ppm)

Agitar las muestras y leerlas directamente en el fluorómetro. A partir de estos valores elaborar en el equipo la curva standard

Procedimiento

- Pesar 5g. de muestra en una fiola, agregar 20 ml de Metanol y agitar por 10 min, luego enrasar con metanol a 50 ml y volver agitar por 10 min adicionales. Dejar decantar por 30 min.

- Trasladar con sumo cuidado una alícuota de 10 ml de muestra solución a una pera de decantación de 250 ml Adicionar aproximadamente 100 ml de agua destilada, 50 ml de éter de petróleo, luego agitar vigorosamente por 5 min.

- Dejar reposar unos minutos y agregar 10 ml de solución salina saturada y agitar. Una vez que la emulsión se rompa (formación de fases), recibir la parte acuosa en un vaso de 250 ml.

- La fase etérea se recibe en una fiola de 100 ml, en la que previamente se ha colocado un embudo con papel de filtro y 1 g. de sulfato de sodio anhidro.

- Lo recibido en el vaso se vierte nuevamente a la pera, se enjuaga con 25 ml de éter de petróleo se agita por 3 min y se deja decantar.

- La fase acuosa se recupera nuevamente en el vaso y la parte etérea se sigue recibiendo en la fiola de 100 ml

- La fase acuosa se agrega nuevamente a la pera con 25 ml de éter de petróleo, se agita por 1 min, se deja decantar.

- Finalmente la fase acuosa se descarta y la etérea se recibe en la fiola, se enjuaga la pera el vaso y se enrasa la fiola a 100 ml

- Se agita bien y se procede a realizar la lectura en el fluorómetro .

- Emisión = 450 Excitación = 360

Cálculo

1. Elaborar la curva standard vs. Concentración de etoxiquina (ppm).2. Comparar la fluorescencia de la muestra con la curva Standard y

determinar la concentración de etoxiquina de la muestra.

A/O = [ ] x fd

W m

Donde:

A/O = Concentración de A/O en ppm en la muestra (harina)

[ ] = concentración en ppm fd = factor de dilución

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-

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i. DIGESTIBILIDAD (TORRY MODIFICADO)

Objetivo

Determinar la cantidad de proteína total que puede solubilizarse en presencia de una solución acidificada de pepsina.

Principio

Se coloca la muestra con una solución acidificada de pepsina en un digestor por 16 Horas, manteniendo una temperatura de 45 ºC, luego se retira y filtra.

Se determina proteína por el método Kjeldhal.

Equipos y Materiales:

- Balanza analítica de 0,1 mg y de precisión

- Estufa con agitador incorporado

- Equipo de filtración: Kitasato 500 ml, Buchner , papel de filtro # 541 y Bomba de vacío

- Frascos 250 ml con tapa rosca

- Fiola 100 y 1 000 ml

- Vasos 250 ml

- Pipeta volumétrica 2 ml

- Probeta 100 ml

- Todo lo necesario para determinar proteína total

Reactivos:

- HCl 0,075 N

- Pepsina en solución Acida 0,0002 % (Actividad 1:10 000)

(0,1 g. en 100 ml de HCl 0,075 N Solución A ==> 2 ml Sol A en 1000 de HCl 0,075 N)

Procedimiento:

- Pesar 1,0g. de muestra, pulverizar ( pasar por malla Nº 18 ) y colocarla en un frasco de 50 ml

- Añadir 150 ml de solución de pepsina/HCl 0,0002% (42 a 45 ºC), mezclar para homogenizar

- Incubar a 45 ºC por 16 hr, con agitación constante (20 rpm aproximadamente).

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- Enfriar y filtrar a través del embudo buchner con papel de filtro , usar la bomba de vacío a presión reducida durante el proceso de filtrado, luego

lavar con agua tibia ( 40 oC) el residuo por lo menos tres veces incluyendo los bordes.

- Secar el papel de filtro y su contenido en la estufa.

- Determinar Nitrógeno por el método Kjeldhal.

Cálculo:

% d = PT - PI x 100

PT

Donde:

d = Digestibilidad a la pepsina

PT = Proteína total

PI = Proteína Insoluble

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. A26 - 26 -

m. GRANULOMETRIA

FundamentoLa granulometría es el índice del tamaño de las partículas que componen la harina, esto es especialmente importante para los fabricantes de pellets que requieren tamaños con altos porcentajes de finos.La granulometría permite controlar la operación de los equipos de molienda.

MétodoTamizado mecánico en mallas de diferentes diámetros de aberturas, para cuantificar las retenciones en cada una de ellas.

Aparatos y materiales- Vibrador de tamices- Balanza de precisión- Juego de tamices Nº12 y 18- Vaso de plástico de 250 ml

Procedimiento- Pesar 100 g. de harina previamente homogenizada. - Armar el juego de mallas N° 12 y 18 U.S. Standard, agregar la

muestra. - Poner el juego de mallas en el Vibrador por cinco minutos o agitar

enérgicamente a mano.- Retirar las mallas y proceder a pesar la fracción retenida de cada una

de ellas. Por diferencia determinar el porcentaje de finos que pasa la malla Nº18.

ReferenciaMANUAL DE CERPER . 1990.

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. A27 - 27 -

1.2 FASE LIQUIDA

a. MEDICION DE GRASA EN LICORES

Fundamento

Se basa en la acción del ácido sulfúrico al carbonizar la materia orgánica y la separación del contenido graso por la acción del alcohol amílico ayudado por la fuerza centrífuga ( método Gerber).Se aplica al agua de cola, concentrado y licor de separadora.

Equipos y Materiales

- Equipo de Centrifugación 1420 r.p.m., 65°C- Butirómetros 0 – 8%- Gradilla para butirómetros- Pipetas graduadas de 1, 10 y 20 ml

Reactivos

- Acido sulfúrico industrial 85%- Alcohol amílico

Procedimiento

- Con una pipeta tomar 11 ml de muestra y verterlo en el butirómetro.- Agregar con cuidado por la pared del butirómetro 10 ml de ácido

sulfúrico y enseguida 1 ml de alcohol amílico y taparlos.- Mezclar el contenido invirtiendo el butirómetro (suavemente).- Colocar en los tubos de la centrífuga de tal modo que los butirómetros

estén balanceados - Centrifugar por cinco minutos.- Invertir la posición del butirómetro y proceder a leer el contenido de

grasa en la escala.

NotaLa muestra de concentrado es recomendable diluirlo a la mitad con la finalidad de que el ácido sulfúrico no carbonice demasiado los sólidos y provoque el espumeo y derrame de muestra.Al momento de hacer la lectura duplicar el valor leído.

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b. MEDICION DE SOLIDOS EN LICORES

Fundamento

Se basa en la refracción de la luz que incide sobre el prisma que es proporcional a la concentración de sólidos en la muestra.Es aplicable al agua de cola, licor de separadora, licor de prensa y concentrado.

Instrumentos y Materiales

- Refractómetros de mano, escala: Brix (0-32%), (28-62%) - Baguetas

Procedimiento

- Homogenizar una cantidad representativa de muestra y con la ayuda de una bagueta poner de una a dos gotas en el prisma y cerrar suavemente la tapa, la muestra debe ser totalmente esparcido sobre la superficie del prisma.

- Observar por la mirilla y leer la escala donde la línea intercepta el límite.

- Limpiar el prisma con un algodón húmedo.

ObservaciónCalibrar periódicamente los refractómetros como está establecido en el Manual de Instrumentos.

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. A29 - 29 -

c. DETERMINACION ACIDEZ EN ACEITE CRUDO

FundamentoSe basa en la neutralización de los ácidos grasos libres presentes en el aceite con una solución valorada de Hidróxido de sodio.La acidez refleja el grado de añejamiento de la materia prima.

Aparatos y Materiales- Balanza analítica 0,1 mg- Plancha de calentamiento- Erlemneyer de 250 ml- Probeta de 50 ml- Bureta de 10 ml de 0,05ml.

Reactivos- Hidróxido de sodio 0,1 N- Alcohol neutralizado- Fenolftaleína al 1%

Procedimiento- Pesar 10 g de muestra en un erlenmeyer.- Agregar 50 ml de alcohol neutralizado.- Calentar el contenido sin llegar a ebullición, retirar y dejar enfriar a

temperatura ambiente.- Agregar 6 – 7 gotas de fenolftaleína.- Proceder a titular con hidróxido de sodio 0,1 N., el viraje es hasta un

rojo grosella similar al del alcohol neutralizado, que debe persistir por lo menos un minuto.

Cálculo

%FFA = Vg x 2,82 x fcWm

Donde:

Vg = Volumen de gasto de hidróxido de sodio 0,1N 2,82 = Factor de conversión expresado en acidez oléica

fc = Factor del hidróxido de sodio Wm = Peso de muestra

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d. IMPUREZAS Y SOLIDOS EN ACEITE

Fundamento

Se basa en la separación mecánica ejercido por la fuerza centrífuga generada por la alta velocidad rotacional de la centrifugadora.

Equipo y Materiales

- Centrífuga 1420 r.p.m. - Tubos graduados 15 ml- Gradilla para tubos

Procedimiento

- Tomar una muestra representativa y homogenizada y verterlos en los tubos hasta la marca de 10

- Colocar los tubos en la centrífuga de tal manera que los tubos se encuentren en posiciones balanceadas

- Poner a centrifugar por 5 minutos.- Retirar los tubos y proceder a leer multiplicando el valor por 10.

Observación

En este procedimiento se separa también el contenido de agua y se puede leer de una forma aproximada.

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e. HUMEDAD EN ACEITE

Fundamento

Se basa en la evaporación de partículas de agua presentes en el aceite en forma de burbujas.

Aparatos y Materiales

- Balanza analítica, 0,1 mg - Estufa- Vasos de 50 ml- Desecador con sílica gel

Procedimiento

- Pesar 5 g. de muestra en un vaso.- Llevar a estufa a 105°C hasta que desaparezcan las burbujas, tener

cuidado de no sobrepasar la evaporación.- Retirar y colocar en el desecador y dejar enfriar.- Volver a pesar el vaso.

Cálculo

% Humedad = W1 - W2 x 100

WmDonde:

W1 = Peso de vaso + muestra húmeda (g) W2 = Peso de vaso + muestra seca (g) Wm = Peso de muestra (g)

Observación

Se puede emplear placas Petri en lugar de vasos.

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f. INDICE DE PEROXIDOS EN ACEITE

Fundamento:

Los peróxidos se determinan cuantitativamente por su capacidad para liberar Iodo al reaccionar con KI en presencia de ácido acético Glacial.El índice de peróxidos de una grasa es una medida de su contenido en O2 por K de grasa.

Materiales y Equipos:- Balanza de precisión - Frascos Erlenmeyer con tapa de vidrio esmerilada (250ml.)- Pipetas- Probeta- Bureta de 25 ml de 0,1 ml división

Reactivos:- Mezcla de Acido Acético y Cloroformo (60ml. ácido acético y 40ml.

cloroformo)- Solución de Ioduro de Potasio(5g en 2ml de agua destilada. Usar

frasco ámbar)- Solución Tiosulfato de Sodio 0.01N(se toma 100ml. de tiosulfato 0.1N.

para un litro) - Solución indicadora de almidón.

Procedimiento:- Se pesa 5 g. de muestra (balanza de precisión) en un frasco

Erlenmeyer de 250ml.- Adicionar 30ml. mezcla de ácido acético y cloroformo (probeta) se tapa

y homogeniza.- Luego agregar 0.5ml. de KI saturado (pipeta graduada), agitar por 10

minutos y dejar reposar por un minuto.- Después agregar 30ml. de agua destilada mas 10 gotas de almidón.- Titular con Tiosulfato de sodio, gota a gota hasta que el color rojo

desaparezca.

Calculo:

% peróxidos = Vg x N x 1000 Wm

Donde :

Vg = volumen gasto (solución Tiosulfato de sodio usado en la titulación)

N = normalidad de la solución Tiosulfato de sodio. 1000 = miliequivalente de peróxido por 100g. de muestra.

Wm = Peso de muestra

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g. DETERMINACION DE INDICE DE YODO: METODO DE WIJS

Fundamento: El índice de iodo es una medida de la no saturación de los aceites y grasas y se expresan en términos del número de centigramo de iodo absorbido por g. de muestra (% de iodo absorbido).

Materiales y Equipos:- Balanza analítica - Vaso 50 ml- Erlenmeyer con tapa de vidrio esmerilada (500ml)- Pipeta volumétrica 20ml y 25ml- Bureta 50ml

Reactivos:- Tetracloruro de Carbono (CCL4)- Solución wijs- Solución Ioduro de Potasio.- Solución de Tiosulfato de sodio al 0,1N(estandarizado)- Solución indicadora de almidón.

Procedimiento:

- Verter en un vaso 20ml. de muestra homogeneizada y llevar a la estufa por 30 minutos.

- Después de evaporar la humedad sacar la muestra a enfriar y pesar de 0,15 a 0,17g. en un frasco erlenmeyer de 500ml.

- Luego, agregar 20 ml. de CCL4 mas 25ml. de solución wijs- Guardar por media hora en lugar oscuro.- Agregar 20 ml de KI(15%) más 100ml. de agua destilada, agitar

vigorosamente.- Titular con Tiosulfato de sodio 0,1N. gota a gota hasta un color

amarillo, agitando vigorosamente.- Luego agregar 5gotas de indicador almidón al 1%, seguir titulando

hasta que desaparezca la coloración azul.- Correr un blanco, al empezar una nueva solución wijs ó Tiosulfato de

sodio 0,1N.

Cálculo: % Indice Iodo = (Vb - Vg) x N x 12,69 Wm.

Donde:

Vb = volumen de gasto (blanco) Vg = volumen de gasto (muestra) N = normalidad de tiosulfato de sodio.

Wm = Peso de muestra

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1.3 ANALISIS DE COMPOSITOS (Materia Prima, Licores, Tortas y harina)

Los licores que se analizan son: Agua de cola, licor de prensas, licor de separadoras y concentrado.Las tortas que se analizan son: Torta de prensa y de separadoras.

a. DETERMINACION DE HUMEDAD

Equipos y Materiales

- Balanza Analítica con 0,1 mg de precisión - Estufa - Licuadora y procesador de alimentos.- Placas Petri de 100 x 15mm.- Placas Petri de 120 x 20 mm. - Vasos de plástico de 100ml.- Baguetas- Desecador 250 mm con sílica gel.

Procedimiento

- Homogenizar todas las muestras de compósito antes de realizar cualquier análisis.

- Pesar 5 g. de muestra de cada compósito en placas Petri de 100 x 15 por duplicado, a excepción de los licores de prensa y de separadoras que debe hacerse en placas de 120 x 20 y de 25 g por duplicado, con la finalidad de determinar su contenido de grasa en base seca.

- Colocar las muestras en la estufa a 130 °C por 3 horas con excepción de la harina que debe ser retirada a las 2,5 horas.

- Retirar al desecador y dejar enfriar.- Pesar las placas.- Anotar todos los datos en el cuaderno de compósitos.

CálculoSe procede de la forma conocida.

Observación

- La humedad se determina a todas las muestras de compósito sin excepción.

- La materia prima deberá ser triturada para el análisis.

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b. DETERMINACION DE GRASA

ProcedimientoSe usa los mismos aparatos, materiales y reactivo que en el análisis de harina.

Para Materia Prima y Tortas :- Pesar 2 g. de muestra y llevar a secar en la estufa de 30 a 40

min. a 105 °C para evaporar parte de la humedad.- Retirar y dejar enfriar.- En adelante, proceder de la misma forma que para la

determinación de grasa en la harina.

Para el compósito de licores, solamente se determina la grasa por este método al licor de prensa y de separadoras, a partir del residuo que resulta de la determinación de la humedad, previamente pulverizadas en un mortero, y se procede de la forma conocida.

Para el compósito de harina se procede de igual forma que la indicada en el análisis de harina.

c. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

Se hace la determinación de proteína total al compósito de materia prima y harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el análisis de harina.

d. DETERMINACION DE CENIZAS TOTALES

Se hace la determinación de cenizas totales al compósito de materia prima y harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el análisis de harina.

e. DETERMINACION DE CLORUROS

Se hace la determinación de cloruros al compósito de materia prima y harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el análisis de harina.

f. DETERMINACION DE ACIDEZ EN ACEITE

Se procede de igual manera que en la determinación que se realiza al aceite crudo.

g. GRANULOMETRIA EN HARINA DE COMPOSITO

Se procede de igual manera que en la harina de rumas.

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1.4 TBV-N EN MATERIA PRIMA ( DESCARGA, PROCESO) YCONCENTRADO

Se aplica el mismo principio, método, procedimiento, los mismos equipos, materiales y reactivos que en el análisis de harina.

La diferencia esta en las cantidades de solución receptora;Para materia prima: 10 ml de ácido sulfúrico 0,1 NPara concentrado: 20 ml de ácido sulfúrico 0,1 N ; ambos se completan hasta un volumen de 50 ml con agua destilada.Ambas muestras se deben pesar en vaso de vidrioA la materia prima se añade 1 ml de vaselina y al concentrado 2 mlEl volumen total recibido es aproximadamente 125 ml.

El cálculo es igual que en la harina.Los valores determinados se anotan en el formato correspondiente y periódicamente se comprueba el factor de las soluciones.

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1.5 ANALISIS DE AGUA DE CALDEROS, AGUA DE ALIMENTACION, AGUA BLANDA, CONDENSADO Y AGUA DURA

a. DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES DISUELTOS (STD)

Fundamento:

Los sólidos disueltos corresponden a la materia soluble en el agua. La medida de la conductividad específica de una muestra de agua de caldera neutralizada, es una forma rápida y precisa para determinar la concentración de sólidos disueltos.Cuando el agua se evapora en el caldero, el vapor se forma de agua pura y no arrastra sólidos. En consecuencia, los sólidos se van concentrando en el agua de caldero. Para controlar estos sólidos hay que purgar los calderos y reponer el agua descargada con agua de alimentación que contiene menor cantidad de sólidos.

Métodos de Determinación:

1) Por evaporación y2) Por conductividad

1) POR EVAPORACION:

Materiales y Equipos

- Estufa con termorregulador- Balanza Analítica 0,1 mg- Placas Petri de 100 x 15 mm- Pipeta Volumétrica de 5 ml

Procedimiento:

- Tomar 5 ml de muestra homogenizada con una pipeta volumétrica y verter en una placa previamente tarada.

- Llevar a estufa a 105°C hasta total evaporación.- Retirar la placa y dejar enfriar en el desecador y procederá

pesar.

Cálculo:

STD = (W1 – Wo ) = g. 103 mg x 103 ml = ( ) 200 000 ppm Vm (5 ml) g L

Donde: Wo = Peso de placa

W1 = Peso de placa + residuo Vm = Volumen de muestra (5 ml).

1 ppm = 1 mg/ L

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2) METODO DE CONDUCTIVIDAD

Materiales y Equipos

- Conductímetro- Vasos de vidrio de 100 ml

Reactivos

- Solución de ácido sulfúrico 0,1N- Fenolftaleína al 1%

Procedimiento:

- Medir 100 ml de muestra sin filtrar.- Agregar 2 – 3 gotas de indicador Fenolftaleína,- Neutralizar la muestra con ácido sulfúrico 0,1N hasta que la

muestra retome su color original, ya que OH presente o alcalinidad libre altera los resultados.

- Sumergir la celda de medición en una solución 0,01 mol/l. KCl. Realizar el ajuste de la constante de celda y la compensación de temperatura. La medición se realiza directamente y se expresa en mg/l.

- Para mayor información ver la traducción del conductímetro Schott Handylab LF1 con celda LF513 T

Comentario: Los sólidos disueltos influyen en el arrastre por formación de espumas.

Control : Máximo 5 000 ppm ( para agua de calderos ).

Máximo 100 ppm ( para retorno de condensados ).

Máximo 650 ppm ( para agua de alimentación ).

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b. DETERMINACION DE CLORUROS

Fundamento:El agua contiene impurezas en suspensión, gases y ácidos en solución, álcalis libres y sales solubles, que tienen influencia en la generación de vapor.Los cloruros generalmente permanecen inalterables durante el proceso de tratamiento de agua y en el agua interna de calderos, su determinación resulta un método útil para:- Efectuar una relación entre el total de sólidos disueltos y los cloruros.- Calcular el porcentaje de purgas en la caldera.- Determinar la regeneración y enjuague apropiados en los

ablandadores. METODO VOLUMETRICO (MOHR)

Por el método de mohr puede determinarse cloruros en solución neutra,

utilizando K2CrO4 como indicador y titulando con solución valorada de Nitrato de plata.El método es aplicable sólo para la titulación en un medio neutro o débilmente alcalino (pH = 6,5 - 10) por cuanto el Ag2CrO4 es soluble en ácidos y en su presencia no precipita.

Cl- + AgNO3 ------------- AgCl + NO3

-

Materiales

- Bureta de 25 ml 0,1- Erlenmeyer de 100 ml- Pipeta de 1 ml

Reactivos

- Solución de Nitrato de plata 0,1 N Estandarizado.- Solución indicadora de Cromato de potasio al 10%

Procedimiento: - Medir 10 ml de muestra filtrada. Si el agua tiene acidez añadir

Na2CO3 y si es alcalina añadir H2SO4 hasta neutralización (opcional).- Añadir 3 gotas de indicador Cromato de potasio al 10%.- Titular con Nitrato de plata 0,1N lentamente, agitando constantemente

la muestra hasta un viraje a un color rojo ladrillo estable.- Efectuar la misma prueba simultáneamente con agua destilada que

sirve de comparación (blanco).

Cálculo:

%NaCl = (Vg - Vb) X 585

Donde:Vg = Volumen gastado de Nitrato de plata 0,1 N

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. A41 - 41 -

Vb = Volumen gastado de Nitrato de plata 0,1 N en el agua

destilada585 = Equivalente-gramo de NaCl expresado en ppm.

c. DETERMINACION DE ALCALINIDAD

Fundamento:

Corresponde principalmente a la presencia de carbonatos, bicarbonatos y/o hidróxidos.

Método:

Se determina por titulación de la muestra con una solución valorada de ácido sulfúrico, estableciendo los puntos sucesivos en equivalencias de bicarbonato y ácido carbónico.

Existen tres tipos de alcalinidad:Alcalinidad P (parcial) o F (Fenolftaleína) pH = 8,3Alcalinidad T (total) o M (anaranjado de metilo) pH = 4,3Alcalinidad Hidróxida : OH

Materiales:

- Bureta automática de 10 ml; 0,05 ml división- Probeta de 100 ml de plástico- Erlenmeyer de 100 ml

Reactivos:

- Solución ácido Sulfúrico 0,1 N- Indicador Fenolftaleína 1%- Anaranjado de metilo 0,2%

Procedimiento:

Alcalinidad Parcial:Tomar 50 ml de muestra, si esta presenta altos niveles de turbidez que impidan apreciar el punto final de la titulación, proceder a filtrarAñadir 2 gotas de solución de Fenolftaleína, la muestra tomará una coloración rojo grosella.Titular con ácido sulfúrico 0,1 N hasta desaparición del color rojo grosella.Anotar el volumen de gasto y no enrasar la bureta.

Alcalinidad Total:Agregar 3 gotas de anaranjado de metilo al contenido de la muestra anterior, esta tomará una coloración naranja.Continuar la titulación hasta la aparición de un color naranja rosado.Anotar el gasto.

Cálculo:

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. A42 - 42 -

AP = Vg x 100

AT = Vg t x 100

A(OH) = 2 AP – AT

Donde:Vg = Volumen de gasto (H2SO4 0,1 N) Vgt = Volumen de gasto total (H2SO4 0,1 N)

Comentario:

- Se debe mantener suficiente alcalinidad para prevenir corrosiones (pH= 10 - 11,7)

- Una elevada concentración de álcali ocasiona espumaje y arrastre en el vapor y también corrosión cáustica en el caldero.

- Alcalinidad por CO3.HCO3 produce CO2 con el vapor y es la fuente de corrosión de condensados.

Control: 150 - 1 000 ppm ( para agua de calderos ).

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. A43 - 43 -

d. DETERMINACION DE RESIDUAL DE SULFITOS

Fundamento:

El agua de alimentación del caldero contiene oxigeno disuelto él cual si no es eliminado puede provocar corrosión en el sistema de tubería interna del caldero. Existen productos químicos secuestradores de oxígeno basándose en sulfito de sodio catalizado.

Método:Consiste en la determinación de la concentración en ppm del remanente de producto como medio de protección contra la corrosión.

Materiales:

- Erlenmeyer de 250 ml- Probeta de 100 ml plástico.- Bureta de 25 ml 0,1- Pipeta de 1 ml

Reactivos:Solución de Almidón 1,0 % en agua destilada (conservar en refrigeración)Solución de ácido sulfúrico 50 %

Solución de Ioduro - Yodato (Titulante)0,31 g. Bicarbonato de sodio4,35 g. Ioduro de potasio0,45 g. Yodato de potasioDisolver en 1,0 litro de agua destilada.

Procedimiento:

- Tomar 100 ml de muestra a temperatura ambiente herméticamente cerrado

- Agregar 10 gotas de solución de almidón y agitar.- Agregar 10 gotas de ácido sulfúrico al 50 % y agitar.- Titular con Ioduro Yodato hasta un viraje de color celeste cielo.

Cálculo:

ppm = Gasto x 5

Control: 20 - 40 ppm ( para agua de calderos ).

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. A44 - 44 -

DETERMINACION DE SULFITOS (METODO NALCO)

Procedimiento:

- Tomar 25 ml de muestra (agua de caldera enfriada a temperatura ambiente en un recipiente cerrado).

- Agregar 1,0 ml del reactivo SO 726 y agitar.- Agregar 1,0 ml del reactivo SO 270 y agitar- Titular gota a gota con el reactivo SO 271, hasta que la muestra

cambie a color celeste - cielo.

Cálculo:

ppm SO3 = ml gastados SO 271 x 10

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. A45 - 45 -

e. DETERMINACION DE RESIDUAL DE FOSFATOS (METODO NALCO)

Fundamento:El agua de alimentación del caldero conserva una cantidad de dureza la cual debe de ser solubilizada mediante un mecanismo que inhiba la formación de incrustaciones a través de un producto químico.

Método:Consiste en la determinación de la concentración en ppm del remanente de producto como medio de solubilización de la dureza, dispersión del hierro y otros sólidos suspendidos.

Equipo y Materiales:- Caja y Disco comparador de fosfatos.- Pipetas de 1 ml y 10 ml- Cronómetro.

Reactivos:- Solución Nalco SO-726- Solución Nalco SO-355- Solución Nalco SO-5091 (xp-2) al 1% en agua destilada.

Procedimiento:- Verter 10 ml de muestra tanto a la celda de la izquierda (blanco),

como a la celda de la derecha- Pipetear 0,5 ml de solución Nalco SO-726 al contenido de la celda

izquierda y 0,5 ml de Nalco SO-355 al contenido de la celda derecha y agitar.

- Pipetear 0,5 ml de solución Nalco SO-0191 (xp-2) al contenido de ambas celdas, agitar y dejar en reposo por 10 minutos.

Lectura:- Hacer girar el disco hasta la posición en la cual la muestra es

comparable con el color que presenta el blanco- La posición que indique (de 0 a 24) es su valor correspondiente en

ppm.- Se pueden hacer diluciones en caso que el color de la muestra

excediera los colores del rango de la celda de comparación.

Control : 15 - 25 ppm ( para agua de calderos ).

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. A46 - 46 -

f. MEDICION DE pH

Fundamento:

El pH o potencial de hidrógeno (hidronio H 3 O+) de una solución acuosa

es la medida de la acidez, neutralidad o alcalinidad de la solución.

Matemáticamente se define de la siguiente manera:

pH = Log 1

[H+]

pH = - Log [H+]

En la práctica es una escala de 0 a 14, donde el tramo ascendente desde 0 a 7 (ácido), 7 es neutro y de 7 a 14 (alcalino).

Métodos de Medición:

- Tiras de papel impregnados de reactivos, en contacto con las

muestras cambian de color o de tonalidad en función del valor del pH.

- Aparatos llamados pH metros o potenciómetros, basados en las

leyes de la electro-química y son aplicados en mediciones directas

sobre muestras de agua.

Calibración del pH Metro: - Ajuste instrumental o calibración del potenciómetro siguiendo las

instrucciones del fabricante (manual del equipo).

Procedimiento:- En un vaso de precipitación adicionar aproximadamente 50 ml de

muestra de agua filtrada.- Introducir el electrodo de referencia y el compensador de temperatura

en la muestra. La temperatura de la muestra debe ser igual a la que marca el control respectivo del instrumento, pues un desfase hace variar los resultados.

- Anotar el valor obtenido que se mostrará en pantalla y repetir el procedimiento para las demás muestras.

- Retirar el electrodo, lavarlo con agua destilada y secarlo cuidadosamente con papel secante.

- Dejar sumergido en solución Buffer pH = 4,01

Control : 10,5 - 12 ( para agua de calderos ).

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h. DETERMINACION DE DUREZA

Fundamento:Las aguas son duras o blandas. Las sales presentes en una agua dura son los bicarbonatos, carbonatos, cloruros, sulfatos de calcio y magnesio.

Método:Titulación con EDTA

En la determinación de la dureza total de una agua se titula la muestra con un agente secuestrante, como la sal disódica del ácido Etilendiaminotetraacético (EDTA) que permite un cálculo fácil y exacto. El reactivo forma iones complejos solubles con los iones calcio y magnesio en presencia de un tinte orgánico (eriocromo) por el cual se logra determinar visualmente el punto final de la titulación.

La dureza mide el contenido de Ca y Mg en términos de carbonato de calcio (CaCO3).

Materiales:

- Bureta de 10 ml 0,05- Erlenmeyer de 250 ml- Pipeta de 1 ml- Probeta de 100 ml de plástico

Reactivos:

1)Solución de EDTA 0,01M : Pesar: 4,0 g de EDTA + 0,86 g. de NaOH, enrasar a 1 litro con agua destilada

2) Solución Buffer pH = 9Pesar: 10,0 g. Hidróxido de sodio p.a.; 10,0 g. Sulfito de sodio p.a.; 40,0 g. Tetraborato de sodio p.a.; 10,0 g. Tartrato de sodio y potasio p.a.Disolver todos estos reactivos en un fiola y enrasar a 1 litro con agua destilada

3) Indicador negro de eriocromoPesar 1,0 g. de negro de eriocromoAgregar 30 ml de carbonato de sodio al 0,2%.Disolver en fiola y enrasar con alcohol isopropílico (2-propanol) a 100 ml

VIRAJE: rojo vino ----- azul celeste.

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Procedimiento:

- Medir 100 ml de muestra a temperatura ambiente, transferirlo a un erlenmeyer de 250 ml

- Adicionar 1 ml de solución buffer pH = 9 y agitar- Añadir 3 gotas de solución indicadora negro de eriocromo y agitar.- Titular con solución EDTA.

viraje de color rojo vino a azul - celeste.

Cálculo:

DUREZA CaCO3 ppm = Vg x f x 1000

Vm

Donde: f = factor del EDTA. Vg = ml gastados de EDTA Vm = muestra (100 ml)

Por lo tanto la fórmula resumida para aguas de baja dureza es:

DUREZA CaCO3 ppm = Vg x 10

Si la muestra es agua dura (agua de pozo), tomar solo 25 ml de muestra.Y para aguas de alta dureza la fórmula es:

DUREZA CaCO3 ppm = Vg x 40

Observaciones:

- Preparar todas las soluciones con agua destilada hervida y filtrada.- Las soluciones que presentan coloración deben ser filtradas antes del

análisis.

Control : Máximo 8 ppm ( para agua blanda ) Máximo 5 ppm ( para agua de alimentación a calderos )

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1.6 LIMPIEZA DE P.A.C. Y CENTRIFUGAS

a. VALORACION DE SODA CON UNA SOLUCION NORMALIZADA DE H2SO4 1N.

Fundamento:Corrientemente se emplean soluciones valoradas de ácido clorhídrico o de ácido sulfúrico. La concentración de soda se determina titulándola con la solución de H2SO4 , cuya concentración ha sido determinada a partir de la sustancia patrón primario (borato de sodio).

Materiales:- Erlenmeyer de 250 ml- Pipeta volumétrica de 5 ml- Bureta de 25 ml de 0,1 ml división

Reactivos:- Solución de H2SO4,1N - Fenoltaleína al 1%

Procedimiento:- Tomar 5 ml de muestra de soda homogenizada- Diluir a 50 ml con agua destilada (opcional)- Agregar 5-6 gotas de fenolftaleína - Colocar la solución de H2SO41N en la bureta- Titular hasta desaparición del color rosado

Cálculo:

NNaOH x Vm = N x Vg

NNaOH = 1 x Vg = 0,2 Vg

5

NNaOH = # Eq ; # Eq = W ; Peq = M

Volumen Peq Valencia

W = NNaOH x Peq x volumen = NNaOH x 40 x 1L

W = 0,2 x 40 x 1 = 8 Vg

W ------- 1 000 mlx (g) ------- 100 ml x = W/10 = 8 Vg 10

Donde:

Vg = Volumen gastado de HCl

x = 0,8 Vg

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x = % de soda en la muestra

b. VALORACION DE ACIDO NITRICO CON UNA SOLUCION NORMALIZADA DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1N

Fundamento:Para tener la posibilidad de determinar el contenido de diferentes ácidos en soluciones se prepara una solución valorada de un álcali, por ejemplo NaOH.

Reactivos:

- Solución de NaOH 0,1N:- Indicador: fenolftaleína al 1%

Procedimiento:- Tomar 5 ml de muestra de ácido nítrico.- Diluir a 50 ml con agua destilada (opcional).- Agregar 2 a 3 gotas de fenolftaleína .- Colocar la solución de NaOH 0,1 N en la bureta.- Titular hasta la aparición de un color rojo grosella.

Cálculo:

NHNO3 x Vm = NNaOH x Vg

NHNO3 = 0,1 x Vg = 0,02 Vg 5

NHNO3 = # Eq ; # Eq = W ; Peq = M Volumen Peq Valencia

W = NHNO3 x Peq x volumen = NHNO3 x 63 x 1L

w = 0,02 x 63 x 1 x Vg = 1,26 Vg

W --------- 1 000 mlx (g) --------- 100 ml

x = W/10 = 1,26 Vg 10x = 0,126 x Vg

Donde: Vg = Volumen gastado de NaOH

x = % en peso de ácido Nítrico en la muestra

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c. DETERMINACION DE PUREZA DE SODA (ESCAMAS)

Procedimiento

- Pesar 1,0 g de soda (escamas o lentejas).- Completar a 50 ml con agua destilada.- Añadir 3 – 4 gotas de indicador fenolftaleína al 1%.- Titular con solución de ácido sulfúrico 0,5N (N1), anotar el gasto (V1) .- Añadir 3 –4 gotas de anaranjado de metilo 0,1%- Titular con solución de ácido sulfúrico 0,05N (N2) , anotar el gasto

(V2).

Cálculo :

NaOH = ( N1 V1 - N2 V2 ) X 4,0 W

Donde :

N1 = 0,5N2 = 0,05W = Peso de la soda.

Ejemplo :

W de la soda en escamas = 1,0144 gV1 = 49,1 mlV2 = 1,8 ml

Concentración de Na OH = 96,45 %

Referencias :

CATALOGO DE PROVEEDOR : INDUSTRIAL Y COMERCIAL QUIMICA ANDINA S.A

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1.7 AGUA DE BOMBEO Y EFLUENTE

El tratamiento del agua de bombeo de pescado ( Descarga) se realiza en los equipos de recuperación de primera y segunda fase. El objetivo es recuperar los sólidos, grasa y eliminar un efluente tratado ( Emisor).Así, el nivel de contaminación del cuerpo receptor se puede controlar para reducir el impacto ambiental sobre las aguas circundantes a la tubería emisor.Por esta razón se muestrea el agua de bombeo y el efluente de tratamiento para hacer las determinaciones analíticas que a continuación se describen:

a. DETERMINACION DE HUMEDAD

El principio, el método, los equipos y materiales son los mismos que en la determinación de la humedad en la harina.

Procedimiento:- Licuar previamente las muestras- Pesar 30 g. de muestra en placas Petri 120 x 20 mm por triplicado.- Colocar en estufa por 4 horas a 105ºC + 5ºC- Observar que el contenido de agua haya evaporado totalmente.- Retirar de la estufa y dejar enfriar en el desecador unos 30 a 40

min. Y luego pesar.- El cálculo que se aplica es igual - Todos los datos se anotan en el formato correspondiente.

b. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

Se realiza de la misma forma que para el análisis de Harina. La muestra se obtiene a partir del residuo que resulta de la evaporación de la muestra.Proceder con la ayuda de una espátula a remover los residuos de las placas, y a continuación pulverizarlas en un mortero.

c. DETERMINACION DE GRASA

Se realiza de la misma forma que para el análisis de Harina. La muestra es obtenida a partir del residuo pulverizado.

D. MEDICION DE pH

Se procede de la misma forma que para el análisis de agua.

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1.8 ANALISIS DEL CUERPO RECEPTOR.

El objetivo consiste en medir el grado de contaminación que se ocasiona al entorno por el vertimiento del efluente de tratamiento, fundamentalmente debido a la presencia de material orgánico y coliformes fecales.

La selección de los puntos de Muestreo, Procedimientos de Muestreo y Metodología de los análisis están dados en el Protocolo de Monitoreo de los Efluentes de la Industria Pesquera de Consumo Humano indirecto aprobado por el Ministerio de Pesquería y propuesto por el IMARPE.

El muestreo de las aguas de las estaciones se tomará a nivel de superficie. La frecuencia será una vez al mes.

a . Mediciones Físicas : (Temperatura del aire - agua, transparencia, profundidad).

Objetivo

Conocer las condiciones ambientales a las que se encuentra el aire y el agua. Todas estas mediciones se realizan in situ.

Materiales e Instrumentos

- Balde de 20 l.- Termómetro de vidrio- Disco Sechi con su respectivo cable señalizado cada metro.

Procedimiento:Medir y anotar la temperatura ambiental en el formato correspondiente, así como la temperatura del agua.

- Transparencia:Dejar caer el Disco Sechi hasta una profundidad donde se pueda apreciar el color del disco (blanco). Anotar dicho valor en el formato.

- Profundidad:En la medición anterior dejar caer hasta que el disco toque el fondo marino.Anotar dicho valor en el formato.

b. Medición de pH

Es la primera medición que se realiza una vez que las muestras han sido traídas al Laboratorio y se procede de la misma forma como se hace en el agua.

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c. Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno al 5to. día (DBO5)

1. Por método del oxímetro:

Objetivo:

Se hace con la finalidad de cuantificar el oxígeno disuelto consumido bajo condiciones específicas por oxidación biológica de la materia orgánica en el agua.

Instrumentos y Materiales:

- Oxímetro.- Agitador Magnético- Difusor de Aire- Fiola 2 l.- Probeta 50 ml- Frascos DBO de 300 ml de tapa esmerilada (color ámbar)

Reactivos:

Sales de dilución:Sol. fosfato :- KH2PO4 8,5 g.- K2HPO4 21,75 g- Na2HPO4.7H2O 33,4 g- NH4Cl 1,7 g

Pesar estas cantidades y enrasar a 1L con agua destilada.

Por separado preparar las sgts. Soluciones:- Sulfato de Magnesio heptahidratado: 22,5 g L- Cloruro de calcio: 27,5 g L- Cloruro férrico hexahidratado: 0,25 g L

Procedimiento:

- La muestra debe tener pH entre 6 - 8 ( de lo contrario neutralizar con NaOH 20 g L ó HCl 0,5 mol/l.)

- Preparar agua de dilución añadiendo 1 ml de cada sal de dilución y enrasar a 1L con agua destilada, en cantidad suficiente a la que se requiera para realizar todas las diluciones necesarias de las muestras de las estaciones.

- Airear por 1 hora a temperatura ambiente el agua de dilución.- Proceder a hacer la lectura de oxígeno disuelto de cada muestra

de estación (inicial)- Hacer diluciones convenientes (1:50 , 1:20)- Preparar frascos de DBO5 por duplicado. Sembrar en replica las

diluciones realizadas en el paso anterior y enrasarlo con agua de dilución evitando la formación de burbujas.

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- Determinar el oxígeno inicial (0 días) de cada una de las replicas (muestras de estaciones, mediante el método del oxímetro). Considerar un blanco.

- Incubar la segunda replica de la serie a una temperatura de 20°C ± 1°C por 5 días y proceder a realizar la medición de oxígeno disuelto final (5to día ).

- Considerar un blanco.

Cálculo:

DBO5 = (C1 - C2) Vt Ve * (C3 - C4) Vt Vt Ve

Donde:

C1, C2: Concentración de oxígeno disuelto (OD) en mg./l.C1 : OD inicial de la muestra estaciónC2 : OD final de la muestra estación

C3 : Concentración de oxígeno disuelto en mg/l de la soluc. blanco, tiempo cero

C4 : Concentración de oxígeno disuelto en mg/l de la soluc. blanco, tiempo 5 días

Ve : Volumen (ml) de la muestra para preparar la dilución prueba.Vt : Volumen total (ml) de la solución problema.

El blanco es agua de dilución.

Nota:Para obtener el oxígeno residual o el consumo de OD se exige un criterio tal que:

C1 < (C1 - C2) < 2 C1

3 3

2. Método Winkler modificado

Objetivo:Proporcionar un método técnico - práctico para ejecutar las

acciones de monitoreo de

los efluentes de la industria pesquera de consumo humano indirecto, al cual deben sujetarse los responsables de las emisiones y vertimientos de desechos al medio marino.

Fundamento:La muestra a analizar debe ser tratada con una solución alcalina de sal manganosa, al mismo tiempo que se le protege del aire para evitar la oxigenación. Al principio se forma un precipitado blanco de hidróxido de manganoso.

Mn+2 Cl-21 + 2NaOH- Mn+2(OH)- 2

1 + 2Cl -1 Na+1

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Este precipitado en presencia de oxígeno disuelto toma un color marrón y reacciona con el hidróxido manganoso, transformándose en hidróxido mangánico.

2Mn+2(OH) -21 + 1/2 02 + H2O 2Mn +3 (OH) -

31

Cuando este precipitado es acidulado en exceso en presencia de un yoduro, el yodo es liberado en una cantidad de oxígeno disuelto en la muestra.

Mn+3(OH) 3- + 3H2SO4 + 2NaI 2Mn+SO4 + Na2SO4 + 6H2O + I2

0

El yodo liberado es titulado con una solución valorada 0.02 de tiosulfato de sodio :

I2º + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6

Método:Por el reactivo Winkler. Se basa en la titulación de yodo libre con la solución de tiosulfato de sodio.

Equipos y Materiales :- Frascos DBO, tapa esmerilada de 300 ml de preferencia ámbar.- Erlenmeyer de 500 ml- Bureta de 10 ml- Pipeta volumétrica de 10 ml- Pipeta volumétrica de 1 ml- Agitador magnético.- Balanza analítica.- Incubador DBO: 20 1º C.

Reactivos :Cloruro Manganoso:Disolver 600 g. de MnCl2. 4H2O en un litro de agua destilada.

Solución de Hidróxido de Sodio-Ioduro de Sodio:Disolver 320 g de NaOH y 600 g de ni se disuelve en agua destilada por separado, luego se mezcla y se diluye a 1 litro . Se guarda en frascos ámbar.

Acido Sulfúrico 10 N:Disolver 280 ml. de H2SO4 concentrado en un litro de agua.

Solución Indicador de Almidón 2%:Añadir 2 g. de almidón soluble en 100 ml de agua caliente, mezclar y filtrar. Agregar 0.5 ml de formol como preservante. Este indicador es estable por 30 días.

Solución de Tiosulfato de Sodio 0.02 N:Disolver 5 g de Na2S2O3. 5H2O y 0.1 de NaCO3 en agua destilada previamente hervida para expeler el CO2 y se completa a 1 litro.

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Solución Standard 0,01N:Disolver 0,3567g. de KIO3 en 1 litro de agua destilada.

Procedimiento :

- Quitar la tapa de la botella y agregar 1 ml de solución MnCl2 y 1 ml de la solución NaOH - NaI introducir la pipeta con las soluciones ¼ de pulgada por debajo de la superficie del líquido. Se formará un precipitado que se hunde rápidamente hacia el fondo de la botella.

- Tapar la botella de tal manera que no queden atrapadas burbujas en la misma, entonces agitar vigorosamente para mezclar el precipitado. Dejar sedimentar por 5 minutos y mezclar nuevamente.

- Dejar sedimentar el precipitado aproximadamente hasta la mitad del volumen de la botella; entonces quitar la tapa de la botella y agregar 1 ml de H2SO4 10 N. Tapar nuevamente y agitar vigorosamente hasta que todo el precipitado se haya disuelto. La introducción del ácido puede causar la formación de burbujas por la liberación de CO2 y N2 ; esto no afecta sin embargo, dado que la muestra se analiza sobre una alícuota de 200 ml. La muestra está lista para ser titulada.

Análisis de comprobaciones

Determinación del blanco

Se lleva a cabo para determinar la corrección a aplicar con motivo de la cantidad de sustancias oxidantes capaces de liberar I2 o sustancias reductoras presentes como impurezas en los reactivos.El blanco debe determinarse después de haberse preparado los reactivos para comprobar que son satisfactorios y que el equipo de titulación funciona correctamente. Además los blancos deben ser determinados antes de cada serie de análisis de muestras de oxígeno.

En un erlenmeyer que contiene 50 ml de agua destilada se agrega 1 ml de H2 SO4 y 1 ml de la solución NaOH - NaI, se agita.Después se agrega 1 ml de la solución Mn Cl2. Si no aparece coloración azul los reactivos están libres de oxidantes. Si aparece este color se titula. Si se gasta mas de 0,05 ml de la solución de tiosulfato de sodio deberá verificarse cual de los elementos contiene sustancias oxidantes. Si en alguno de los reactivos existen sustancias oxidantes en mínima cantidad deberá hacerse una corrección en blanco.

Normalización:

Es el proceso que tiende a determinar los pequeños cambios que ocurren en la solución de tiosulfato de sodio. La normalización debe llevarse a cabo ante de cada serie de análisis. .

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Pipetear 10 ml de la solución de Yodato de Potasio a un erlenmeyer de 125 ml y agregarle 50 ml de agua destilada.Agregar 1ml de H2SO4 10N mas 1ml de solución de NaOH - NaI y agitar vigorosamente. Titular con la solución de tiosulfato de sodio 0.02N hasta que la solución anaranjada (Iodo liberado) se torne amarillo pálido.Agregar 1ml. de solución de almidón, esto hará que la solución se torne azul, continuar agregando hasta que el color azul desaparezca y se vuelva incoloro.Leer la bureta y anotar el gasto en V (primera determinación).Repetir los pasos anteriores de 3 a 5 veces , anotar los gastos y calcular el V(promedio)

El factor (F) es calculado de la siguiente manera:

F = 5V

Donde:V = consumo de tiosulfato para 10 ml. de Yodato de

potasio.

Titulación

Las muestras de oxígeno deben ser titulados dentro de las 4 hr del momento en que fueron tratadas, siempre seguir la misma técnica para cada muestra. Llenar la bureta.Colocar en un erlenmeyer limpio una barrita de agitador magnético, deben enjuagarse con agua destilada entre cada valoración.Agitar vigorosamente la botella de muestra, quitar la tapa de la botella lentamente, medir la cantidad de muestra a titular.Colocar el matraz bajo el pico de la bureta, poner en marcha el agitador y agitar constantemente sin provocar salpicaduras, comenzar a titular con tiosulfato de sodio hasta que el amarillo profundo de la muestra se vuelva amarillo pálido.Agregar 1ml de solución de almidón. Esto producirá un color azul profundo, continuar agregando el tiosulfato gota a gota hasta la decoloración de la solución.

Cálculo

Después que las muestras han sido valoradas, se calcula de la siguiente forma:

1 equivalente de tiosulfato = 8 g de oxígeno. 1ml 0,02N = 0,16 mg de oxígeno.

= 0,112 ml de oxígeno

O2 (mg/L) = a x F x 8 x 1 000 50 (b-2)

Donde:a = consumo de tiosulfato en la titulación.

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b = volumen de la muestra a titular.F = factor del tiosulfato = 5 V

d. Determinación de Sólidos Totales:

Fundamento:

También considerado como residuo total. Es el material que queda en el recipiente después de un secado a una temperatura definida de105°C. Comprende el residuo filtrable. Está constituido por partículas orgánicas e inorgánicas.

Equipos y Materiales:

- Estufa- Balanza analítica 0,1 mg- Desecador- Placas Petri de 120 x 20 mm- Pipeta volumétrica de 10 ml

Procedimiento:

- Tomar 10 ml y verterlo en las placas Petri, previamente tarada, por duplicado y colocarlo en la estufa a 70°C hasta sequedad.

- Luego subir la temperatura a 103 - 105 °C por 1 o 2 horas.- Dejar enfriar en el desecador y luego proceder a pesar.

Cálculo:

ST = (W2 - W1) x 1 000,000 Vm

Donde: W2 : Peso de placa + residuo g. W1 : Peso de placa g. Vm : 10 ml

1 000,000: Factor de conversión a mg/l.

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e. Determinación de Salinidad.

Materiales:

- Erlenmeyer de 250 ml- Bureta de 25 ml de 0,1 ml de graduación.- Pipeta volumétrica de 1 y 10 ml

Reactivos- Solución de Nitrato de Plata 0,1 N(titulante).- Solución indicadora de Cromato de Potasio al 10%.

Procedimiento:

- Homogenizar y con la pipeta volumétrica tomar una alícuota de 10 ml de muestra.

- Transferir al Erlenmeyer y completar a 30 ml con agua destilada (opcional).

- Proceder a titular agregando previamente de 4 a 5 gotas de indicador. El viraje es de amarillo a rojo ladrillo.

- Anotar el volumen de gasto y proceder al calcular.

Cálculo:

% Cl = Vg x 35,4 x NAgN03 / Vm

% Sal = 0,030 + 1,805 ( %Cl )

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2. ANEXOS : PREPARACION Y STANDARIZACION DE SOLUCIONES E INDICADORES

2.1 Soluciones Normalizadas

a. NaOH 0,1 N

4,3 g 1 L H2O

Estandarizar con Biftalato de potasio (BK)

0,2042 g 10 ml H2O

Calentar ligeramente hasta disolución total

Indicador : Fenolftaleína al 1% ( 3 gotas)

Viraje: de incoloro a rojo grosella.

Nota: Secar el biftalato de potasio a 125°C por 2 horas. y conservarlo en desecador.

b. H2SO4 0,1 N.

3,0 ml 1 L H2O

Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,1907 g 10 ml H2O

Calentar ligeramente hasta disolución total

Indicador : Rojo de metilo 0,1 % (3 gotas)

Viraje: de rojo a melón claro

Nota: El patrón no debe ser secado, solamente debe conservarse en el desecador.

c. Ag NO3 0,1 N.

17,3 g. 1 L H2O

Estandarizar con Cloruro de Sodio

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0,0584 g 10 ml H2O

Disolver completamente

Indicador : Cromato de Potasio al 10 % ( 3 gotas)

Viraje: de amarillo a rojo ladrillo.

Nota: Secar el cloruro de sodio a 125°C por 2 horas. y conservarlo endesecador.

d. NH4 SCN 0,1 N. (Tiocianato de amonio)

8,0 g. 1 L. H2O

Estandarizar con AgNO3 0,1 N Normalizado

Volumen sol. Patrón : 20 ml

Indicador : 3 – 4 gotas de solución saturada de Sulfato férrico de amonio( al 40%)

Viraje: de amarillo a rojo ladrillo

e. H2SO4 1 N.

30 ml 1 L H2O Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,9534 g 5 ml H2O ( llevar a 10 ml )

f. H2SO4 0,5 N.

15 ml 1 L H2O Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,4767 g 5 ml H2O ( llevar a 10 ml )

g. H2SO4 0,05 N.

1,6 ml 1 L H2O Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,0953 g 10 ml H2O

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h. NaOH 1 N

43 g 1 L H2O

Estandarizar con Biftalato de potasio (BK)

1,0211 g 5 ml H2O (llevar a 10 ml)

2.2 Soluciones Porcentuales

a. H2SO4 al 85,0% ( industrial)

( d = 1,80 y % Pureza = 90,5 )

522 ml 1L

b. H2SO4 al 50% ( p.a.)

d = 1,84 ; pureza = 96,9%

28,04 ml 100 ml agua destilada

c. H3BO3 1%

Disolver 10 g de ácido bórico en 1 L agua destilada

Nota: El ácido se disuelve mejor en agua caliente.

d. H3BO3 2%

Disolver 20 g de ácido bórico en 1 L agua destilada

2.3 Soluciones Indicadoras

a. Fenolftaleína al 1%

1,0 g 100 ml de alcohol etílico absoluto

b. Rojo de Metilo al 0,1%

0,1 g 100 ml de alcohol etílico absoluto

c. Anaranjado de Metilo al 0,2%

0,2 g 100 ml de agua destilada

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d. Cromato de Potasio al 10% K2CrO4

10,0 g 100 ml de agua destilada

e. Solución saturada de Sulfato férrico de amonio (SO4)2NH4Fe

40 g 100 ml de agua destilada

f. Negro de eriocromo

Ver análisis de aguas (dureza)

g. Solución de almidón al 1%

1 g 100 ml de agua destilada

Disolver en caliente hasta total disolución, dejar enfriar y filtrar.Conservar en refrigeración

h. Tashiro (TBVN método Buchi)

125 mg de rojo de metilo + 82,5 mg de azul de metileno disueltos en 100 ml de alcohol etílico absoluto.Conservar en gotero ámbar.

i. Indicador Proteína (método Buchi)

50 ml sol. 0,1% Verde de bromocresol en alcohol absoluto + 35 ml sol. rojo de metilo 0,1% en alcohol absoluto.Mezclar ambos y conservar en gotero ámbar.

2.4 Preparación de soluciones para análisis de aceite

a. Solución Patrón de Bicromato de Potasio

4,9035 g ----------------- 1,0 L.

b. Solución Tiosulfato de Sodio 0,1 N

24,8112 g ---------------- l,0 L.

c. Solución de Ioduro de Potasio al 15 %

15 g ----------------- 100 ml

d. Solución Saturada de Ioduro de Potasio

5 g ---------------- 2 ml

e. Mezcla de Acido Acético Glacial y Cloroformo

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3/2 --------------- l,0 L.

2.5 Solución Reguladora, amortiguadora o tampón

Son soluciones caracterizadas por que su pH permanece invariable a la disolución y por que admiten cantidades moderadas de ácido o álcali, sin que con ello su pH cambie prácticamente. Contiene siempre: Un ácido débil Un exceso de una base conjugadaEjemplo:

a) Acido Acético y Acetato de Sodio, pH = 4,62Pesar 32,2 g de acetato de sodioDisolver en agua destiladaAgregar 23,4 ml de Acido Acético glacialEnrasar a 4,0 litros de agua destilada

b) Amoniaco y cloruro de amonio pH = 10Disolver 65,5 g de cloruro de amonio en 300 ml de agua destiladaAgregar 570 ml de hidróxido de amonio y completar a 1 litro

c) Acido bórico y Borato de sodio

Aplicaciones:Las soluciones reguladoras son muy empleadas en análisis siempre que se debe fijar el pH de un medio y que este permanezca inalterable en operaciones sucesivas.

d) Buffer pH= 9

Ver análisis de aguas (dureza)

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