Standardisation du test DMFA

Gaye A; Gadiaga L; Diop A;Konaté L; Boudin C, Sokhna, C

Définition du DMFA

C’est le test de gorgement direct des moustiques d’élevage à travers une membrane ou de l’anglo-saxon: Direct Membrane Feeding Assay

Objectifs du test DMFA

• Obtenir un taux de gorgement optimal• Obtenir un taux d’infection optimal

Technique d’élevage des moustiques

Facteurs essentiels liés aux larves Facteurs essentiels liés aux adultes

Facteurs liés aux larves (1)

Nature et quantités d’eau• Eau pure ou naturelle (à défaut: eau

robinet décontaminé pendant 48 heures)

• Quantité d’eau: ne doit pas dépasser un centimétre, c’est important pour le réchauffement de l’eau des larves

Facteurs liés aux larves (2)

Alimentation: farine nutritives riche en protéine; commercialisé sous le nom de Tetra Micro Min® (pour alevins)

Température: condition constante de température (28 – 30°C)

Facteurs liés aux adultes (1)

Température / humidité: condition constante de température (25°C) et d’humidité (70 -80%)

Alimentation: jus sucré, saccharose (10%): important, lors de l’émergence des adultes

Facteurs liés aux adultes (2)

Sélection des femelles agréssives

• Gorgement des moustiques de 3 jours affamés par 12 heures de diète sur lapin

• Aspirer les moustiques gorgés et les mettre dans une cage (femelles agressives)

• Sélection , faite tous les jours pour augmenter l’effectif des femelles agréssives

Facteurs liés aux adultes (3)

Le même principe est adopté pour la sélection des femelles agréssives sur membrane de parafilm

Matériels et Méthodes

Dispositif expérimental du test1

2

3

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5

6

7

8 9

1 0

1 1

1 2

Légendes:1: Thermoplongeur2: Bain-Marie3: Conduit d’entrée d’eau à 37°C dans les cellules4: Conduit de recyclage d’eau5: Voie pour introduire le sang6: Tuyau de connexion intercellulaire7: Cage à moustiques

8: Voie d’aération de la chambre basale9: Rampe de suspension des cellules de gorgement10: Cadre de support 11: Table12: Connexion au secteur éléctrique

Paramètres intervenant sur la standardisation du DMFA

Gorgement Infection• Étirement de la membrane.• Densité des moustiques• Mise à jeun des moustiques.

•Température du sang• Groupe sanguin

Résultats

Étirement de la membrane (gorgement)

Origine du sang Étirement

Taux de gorgement

(%)Comparaison

Sang Amoyen 51,1 Χ2 = 14,1

p < 10-3maximum 87,2

Sang Bmoyen 74 Χ2 = 5

p < 0,02maximum 91,5

Densité optimale de gorgement (gorgement)

Densité de moustiques Sang A Sang B

50 88,2 (51)

Χ2 = 41,6p < 10-4

85,4 (48)

Χ2 = 38,9p < 10-5100 91,6 (108) 92,1 (102)

150 59,0 (154) 58,9 (151)

Mise à jeun des moustiques (gorgement)

Taux de gorgement% (effectif)

1ère manipulation 2 ème manipulationJus sucré 47 (123) 54,4 (112)Eau 53 (148) 50,7 (142)À jeun (15 h) 84 (139) 88,2 (136)Comparaison Χ2 = 45,1 p < 10-4 Χ2 = 50,4 p < 10-4

Température du sang (infection)

1ere Manipulation 2eme Manipulation

Thermostat 37 38 39 40 37 38 39 40

Cellules 35,6 36,3 37 37,9 36 36,8 36,9 37,6

Groupes sanguins (infection)Variation du taux d’infection des moustiques gorgés sur un mélange de globules rouges parasités de groupe sanguin O+ et de sérums de même groupe (OWN homologue) ou de groupe sanguin différent (AB, B+ et A-).

00,10,20,30,40,50,60,70,8

% d

e m

oust

ique

s +

OW (homologue) AB (compatible) B+ (hétérologue) A- (hétérologue)

type de sérums testés

Conclusion

Facteurs importants pour la standardisation du DMFA sont:- Étirement de la membrane- Densité des moustiques- Diète des moustique-Température du sang- Groupe sanguin

Merci de votre aimable attention

MISOTRA