Zentrum für Humangenetik

DNA BABY 100+

Skrining decena urođene greške metabolizma (IEM)

www.DNAplus.rs

www.DNAplus.rs

STATUS Skrining novorođenčadi na međunarodnom planu

Skrining novorođenčadi

DNA PLUS

Skrining novorođenčadi se masovno izvodi u 52 zemlje

SAD do 45 poremedaja

Nemačka 14 poremedaja

Austrija 14 poremedaja

Engleska 5 poremedaja

Španija 2-7 poremedaja

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Razvoj tehnologije

Gasna hromatografija sa mas spektrometrijom

DNA PLUS

Razvijenskrining

fenilketonurije (PKU)

Imunotestovi(ELISA)

Enzim testovi

(DELFIA)

AutomacijaMS/MS

(Tandem Mas spektrometrija )

GC/MS(Gasna

Hromatografija/Mas

spektrometrija )

1970

1980 1990 2001 2005

Danas

Vedina nacionalnih skrining programa DNA Plus

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Uobičajena tehnologija prilikom skrininga novorođenčadi:

Tandem Mas spektrometrija MS/MS

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Tandem Mas spektrometrija (MS/MS)

Najčešde upotrebljavana tehnologija za skrining novorođenčadi

DNA PLUS

Prednosti MS/MSJedan test za više poremedaja (20- 40 poremedaja)Pogodno za masovnu upotrebuDijagnoza u asimptomatičnoj faziRedukovani lažno pozitivni i lažno negativni rezultati u odnosu na stari konvencionalni

metodPoboljšana relativna osetiljivost analizeViše testova na minimalnoj količini krviSkradivanje vremena potrebnog za analizu

Nedostaci MS/MSInvazivni metod (krv se uzima iz pete -> infekcije)Ne mogu se utvrditi svi poremedaji iz uzete krvi u toku ranog neonatalnog periodaNe porkriva sve grupe poremedajaKoncentracija supstanci koje se analiziraju u krvi se vremenom menjaUobičajeni lažni negativni i lažni pozitivni rezultatiTestovi provere za pozitivne rezultateNespecifičan za analizu org. kiselina – najčešde kod Urođenih grešaka metabo. (IEM)Skrining se vrši u prvih 30 dana od rođenja; ne preporučuje se za decu starijeg uzrasta (Odeljenje intenzivne nege)

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Tandem Mas spektrometrija (MS/MS)

Najčešde upotrebljavana tehnologija za skrining novorođenčadi

DNA PLUS

Najvedi problemi sa MS/MS

Niska specifičnost za identifikovanje poremedaja –> Potrebno ponavljati testove

Nedovoljno markera po poremedaju

Marker Moguda oboljenja

[C3-AC]

(ukazuje na bilo koje od 2 oboljenja)

??? Metilmalonična acidemija(MMA)

??? Propionička acidemija(PA)

hidroksiC5-AC

(ukazuje na bilo koje od 5 oboljenja)

??? Neostatak multiple karboksilaze(MCD)

??? Nedostatak 3-metilkrotonilkarboksilaze

??? Nedostatak 3-ketotiolaze

??? Nedostatak 3-metilglutakonil-CoAhidrataze

??? Nedostatak 3HMG-CoA liaze

C5-AC

(ukazuje na bilo koje od 4 oboljenja)

??? Izovalerična acidemija

??? Nedostatak 2-metilbutiril-CoA dehidrogenaze

??? Nedostatak izobutiril-CoA dehidrogenaze

??? Glutarična acidurija tip I

Oboljenje Marker

PKU(Fenilketonurija)

Phe

Leucinoza Leu

Val

Homocistinurija Met

Homo-cys

Tirosinemija Tyrosine

Galaktozemija Me može se utvrditi uz pomodMS/MS

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

NAŠA TEHNOLOGIJAslededa generacija

u skiningu novoređenčadi:

GASNA HROMATOGRAFIJA I MAS SPEKTROMETRIJA

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA GC/MS – Tehnologija sledede generacije

Najnaprednija tehnologija za skrining novorođenčadi

DNA PLUS

Tehnološki princip1. KORAK – Gasna hromatografija izdvaja komponente iz mešavine

2. KORAK – Mas spektrometrija utvrđuje komponente na osnovu odnosa mase i veličine

3. KORAK – Poređenje metabolita sa internim strandardima

50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 6500.0

25.0

50.0

75.0

100.0

%

73

273

147

347 375211183305 46523111555 437393 553537505 643597

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA GC/MS – Tehnologija sledede generacije

Najnaprednija tehnologija za skrining novorođenčadi

DNA PLUS

Prednosti naše tehnologije - GC/MS

Jedna analiza pokriva do 101 poremedaja

Može se koristiti uzorak urina (neinvazivna metoda)

Jednostavan transport osušenih uzoraka urina

~5x više markera po poremedaju (momentalno precizno utvrđivanje)

Nedostaci naše tehnologije - GS/MS

Tehnološka složenost

Veda cena

Zahteva stručnost

www.DNAplus.rs

UZORAK Uzorak za skrining novorođenčadi

Zašto se koristi urin kao uzorak?

DNA PLUS

Enzym

Prednosti uzoraka urina

Neinvazivan metod, nema rizika od infekcije

Ne izaziva neugodnost kod bebe

Jednostavan transport osušenih uzoraka urina

Metabolita ima više u urinu, jer se oni u krvi akumuliraju samo onda kada prevazilaze kapacitet bubrežne filtracije

Krvotok

Urin

Mali broj metabolita

Bubrezi

Metaboliti se filtriraju iz krvotoka

Metaboliti se akumuliraju u urinu

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Poređenje

MS/MS nasuprot GC/MS

DNA PLUS

MS/MS (standardna tehnologija) GC/MS (tehnologija sledede generacije)

Proces se sastoji iz DVA KORAKA

1) Skrining2) Ponovljanje skrininga kod

pozitivnih>>> Dijagnoza

Dijagnoza iz krvi je moguda samo kada ima toliko metabolita da bubrezi ne mogu uspešno da ih filtriraju iz krvotoka

Proces se sastoji iz JEDNOG KORAKA

1) Skrining & Potvrda>>> Dijagnoza

Metaboliti su produkti razlaganja koje bubrezi filtriraju iz krvi. Prema tome, koncentracija metabolita u urinu je dovoljna za njihovo prepoznavanje i “merenje”.

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Poređenje

MS/MS nasuprot GC/MS

DNA PLUS

MS/MS (standardna tehnologija) GC/MS (tehnologija sledede generacije)

Do 45 poremedaja

Oblasti:

Poremedaji masnih kiselina Neke organske i amino kiseline

Do 101 poremedaja

Oblasti:

Šederi Amino kiseline Organske kiseline Masne kiseline Laktat, Piruvat + TCA ciklus Peroksisomal Purin, poremedaji pirimidina Neki mitohondrijalni poremedaji

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Poređenje

MS/MS nasuprot GC/MS

DNA PLUS

MS/MS (standardna tehnologija) GC/MS (Tehnologija sledede generacije)

Obično se mere pojedinačni markeri

Oboljenje Fenilketonurija: Phe

>>> povišen u 5 drugih poremedaja, pa je potrebno ponovno testiranje

Oboljenje Leucinoza: Leu Val

>>> povišen u nekoliko poremedaja, pa je potrebno ponovno testiranje

Više markera se meri odjednom

Oboljenje Fenilketonurija: Phe PA PL 2HPA PPA

>>> momentalna precizna dijagnoza

Oboljenje Leucinoza: Leu Isoleu Val 2HIV 3HIV 2HIC

>>> momentalna precizna dijagnoza

www.DNAplus.rs

TEHNOLOGIJA Poređenje

MS/MS nasuprot GC/MS

DNA PLUS

MS/MS (standardna tehnologija) GC/MS (Tehnologija sledede generacije)

Invazivna metoda (uzimanje uzorka krvi)

Transport krvi preko granice otežan zbog zakonske regulative. Obavezno pladanje izvozne takse u iznosu od 75 eur-a.

Neinvazivna metoda (uzimanje uzorka urina)

Jednostavan transport uzorka.

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Prikaz DNA Baby 100+

www.DNAplus.rs

PROIZVOD Baby 100+

Testiranje dece na više od 100 genetskih poremedaja

DNA PLUS

Testiranje na više od 100 poremedaja koji se mogu lečiti i/ili sprečiti

Uzorak urina uzima se kod kude uz pomod posebnog seta

Bebe se značajno razvijaju u prvih 5 godina

Neidentifikovani metabolički poremedaji mogu usporiti razvoj i dovesti do:

Mentalne retardacijeFizičke retardacijePoteškoda prilikom učenjaAgresije i letargijeI mnogih drugih poremedaja…

Prevencija ili lečenje na vreme>>> NAJBOLJI MOGUĆI razvoj deteta

www.DNAplus.rs

PROIZVOD Skrining novorođenčadi

Testiranje na 101 poremedaj

DNA PLUS

2 ketoglutamaričma acidurija 2-ketoadipična acidurija 3-hydroksi-3-metilglutarična acidurija Nedostatak 3-hidroksiisobutiril CoA dekarboksilazeNedostatak 3-metilkrotonil CoA karboksilaze [3-MCC] 3-metilglutakonička acidurija 4-hidroksibutirička acidurija Nedostatak acetoacetil CoA tiolazeNedostatak adenine fosforibosil transferazeNedostatak adenoisne deaminazeAlkaptonurija Argininemija Argininosucinička acidurija Nedostatak biotinidazeKanavanova bolestDeficijencija karbamilfosfatne sintetaze ICitrulinemijaCistationurijaCistinurija Nedostatak Citohroma aa3/bNedostatak Citohroma C oksidaze D-glicerička acidurijaDihidrolipoil dehidrogenazaNedostatak DihidropiridinazeEndogenozna sukrozeurijaEtil malonična acidurija Formiminoglutamička acidurija Nedostatak fructoza-1,6-difosfatazeNedostatak Fumarat hidratazeGalaktozemija Glutarična acidurija tip I Glutarična acidurija tip II Glutationurija Glicerolurija Glicozurija Hartnupova bolestHokinsonurija Histidinemija Histidinurija Homocistinurija Hidroksilisinurija Hiper hidroksiprolinemija

Hiperglicinurija Hiperleucin-izoleucinemija Hipermetioninemija Sindrom hiperornitininemija Hiperamonemija-hiperhomocitrulinemija [HHH] Hiperpipekolatemija Hiperprolinemija Tip-1 Hiperprolinemija Tip-II Imidiazol amino acidurija Iminoglicinurija Infantilno Refsumovo oboljenjeIzovalerična acidemija Intolerancija na laktozuLijev sindromLeš-Nihanov sindrom Nedostatak dugačkog lanca acil-CoA dehidrogenazeLizinurija Lizinurička proteinska intolerancijaLeucinozaNedostatak srednjeg lanca acil CoA dehidrogenaze Metilmalonička acidemija Metilmalonička acidemija [MMA] zbog patološkog metabolizma, apsorpcje i transporta vitamin B12 Nedostatak metilmaloničke semialdehid dehidrogenaze [MMSDH] Mevalonična acidemija Nedostatak multiple karboksilaze [MCD] Nedostatak N-acetilglutamat sintetaze [NAGS] Neonatala adrenoleukodistrofijaNeuroblastom NICCD Nedostatak Ornitin transkarbamilaze [OTC] Orotična acidurija Parcijalni nedostatak hipoksanthin-adenin fosforibozil transferazeFenilketonurija [PKU] Primarna hiperoksalurija Propioničda acidemija Piroglutamička acidurija - 5 oksoprolinemija Nedostatak piruvat karboksilaze Nedostatak piruvat dekarboksilaze Piruvat dehidrogenazaNedostatak piruvat dehidrogenaze fosfataze Saharopinurija Sarkozinski metabolički poremedajSCOT

Nedostatak serum karnozinaze Nedostatak kratkog lanca acil CoA dehidrogenaze Nedostatak tetrahidrobiopterinaTimin uracilurija Transienta tirosinemija u detinjstvuTriptofanurija sa patuljastim rastomTirosinemija usled disfunkcije jetreTirosinemija Tip I Tirosinemija Tip II Tirosinemija Tip III Valinemija Ksantinurija Ksanturenična acidurija Sindrom poput ZelvegerovogZelvegerov sindrom ß-aminoisobutirička acidurija ß-merkaptolaktatna disulfidurija

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Primer jedne bolesti

www.DNAplus.rs

PRIMER DNA+Baby 100+ Argininemija

Jedan primer – nedostatak enzima

DNA PLUS

Normalan proces:

Energija se dobija iz unete hrane

Neuravnotežena ishrana -> Energija dolazi iz zaliha

Ovo stvara toksični amonijak

Enzim neutrališe amonijak

Određeni gen stvara enzim

Neutralisani produkti razlaganja izlučuju se kroz urin

Energija

Hrana

Zalihe

Amonijak

Urin

Enzim Enzim-Gen

www.DNAplus.rs

PROBLEM DNA+Baby 100+ Argininemija DNA PLUS

Enzym

Defektni gen:

Kada energija dolazi iz hrane -> Nema problema

Kada energija dolazi iz zaliha -> Amonijak

Amonijak se nagomilava

Organi (mozak) su oštedeniGubitak apetitaLetargijaPovradanjeKomai smrt

Metaboliti se izlučuju kroz urin

Energija

Hrana

Zalihe

Amonijak

Urin

Jedan primer – nedostatak enzima

Geni

www.DNAplus.rs

PRIMER DNA+Baby 100+ Argininemija

Rezultat

DNA PLUS

Gasna hromatografija I Mas spektrometrija

Nekoliko markera je povišeno i poremedaj se precizno utvrđuje

www.DNAplus.rs

REŠENJE Argininemija

Kako se bolest može sprečiti?

DNA PLUS

Energija iz hrane

Izbegavajte duge periode između obrokaVečernja kasna užinaIshrana bogata kalorijamaNiskoproteinska ishrana

Obratite pažnju na simptome

Tokom pojave simptoma - > Lečenje odrđenim lekovima

Normal razvoj deteta

Energija

Hrana

Zalihe

Amonijak

Urin

Geni

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Kako izgleda proces testiranja ?

www.DNAplus.rs

PROIZVOD DNA+Baby 100+

Proces

DNA PLUS

Proces:

1) Roditelji dobijaju set koji sadrži:1) Uputstvo2) Saglasnost3) Set za uzimanje uzorka urina

2) Uzima se uzorakUrin se upija filter papirom

3) Uzorak se šalje u DNA Plus

4) DNA Plus analizira uzorak

5) Pravi se izveštaj i šalje lekaru/roditelju

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Kako se DNA Baby 100+ može primeniti na

Odeljenju intenzivne nege ?

www.DNAplus.rs

ICU Prednosti kod ICU slučajeva

Zašto koristiti GC/MS na odeljenju intenzivne nege?

DNA PLUS

Prednosti naše tehnologije za ICU

101 analiza se uradi odjednom, bez gubljenja vremena

Rezultati i medicinsko mišljenje u roku od 25 dana

(urgentni slučajevi 8-10 dana)

Jeftinije nego da se testira svaki poremedaj posebno

Veoma precizni rezultati testiranjem više markera odjednom

www.DNAplus.rs

DNA PLUS

Naši kapaciteti iiskustvo u

skriningu novorođenčadi i u ICU slučajevima

www.DNAplus.rs

NAŠI KAPACITETI Prednosti u ICU slučajevima

Zašto koristiti GC/MS na odeljenju intenzivne nege?

DNA PLUS

Veliko iskustvo u:Prenatalnom SkrininguCitogeneticiMolekularnoj dijagnosticiGenetskom savetovanju

Mreža od 100+ laboratorija i 1000+ lekara

550 m² centralne laboratorije i nekoliko pomodnih laboratorija

Međunarodne pokretne laboratorije koje se postavljaju tamo gde postoji

potreba

~5000 uzoraka dobijenih od novorođenčadi se obrađuje mesečno

~1200 prenatalnih uzoraka se ispituje mesečno

20 stalno zaposlenih stručnjaka sa dugogodišnjim iskustvom

analizira rezultate i daje medicinsko mišljenje

www.DNAplus.rs

NAŠI KAPACITETI Standardi najvišeg kvaliteta

Sertifikati i kontrola kvaliteta

DNA PLUS

Sertifikati: 1. ISO 9001:2008 – Obezbeđivanje usluga genetskog skrininga i testiranja2. ISO/IEC17025/20073. Odobrenje vlade za vršenje genetske analize

Oprema: Odobrena od Američkeagencije za hranu i lekove (FDA)

Nacionalni akreditacioni odbor za kalibraciju laboratorija (NABL)Sertifikat za kalibraciju opreme

Kontrola kvaliteta: Six Sigma

Zentrum für Humangenetik

CORD iPS dooEkskluzivni zastupnik DNA PLUS info centar 0800 808 808021 31 01 333. 021 31 01 334www.DNAplus.rs

www.DNAplus.rs

Kontaktirajte CORD iPS