Vežba br. 2

Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pepsinaIspitivanje uslova za aktivaciju i delovanje tripsina

Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pankreasne amilaze

UNIVERZITET U BEOGRADUFAKULTET VETERINARSKE MEDICINE

KATEDRA ZA FIZIOLOGIJU I BIOHEMIJU

II vežba- ključna pitanja i zadaciFermenti želudačnog soka?

Pepsin-aktivacija?

Pepsin-način delovanja?

Pepsin-optimalni uslovi za delovanje, otpornost?

Fermenti pankreasa?

Tripsin-optimalni uslovi za delovanje

Tripsin aktivacija?

Pankreasna amilaza

II vežba- ključna pitanja i zadaciFermenti želudačnog soka?

Pepsin-aktivacija?

Pepsin-način delovanja?

Pepsin-optimalni uslovi za delovanje, otpornost?

Fermenti pankreasa

Tripsin-optimalni uslovi za delovanje

Tripsin aktivacija?

Pankreasna amilaza

Zadaci: 1.Ispitivanje delovanja pepsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!

2. Ispitivanje delovanja tripsina

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze

Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)Obavezan rezultat u svesci!

FERMENTI ŽELUDAČNOG SOKA

- pepsin, lab ferment, želudačna lipaza -

Lab ferment (himozin)

• stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki

Kazein mleka parakazeinCa ⁺⁺

Ca parakazeinat (sir)

• optimalan pH je 5-6

Želudačna lipaza

• razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja• manje značajna od pankreasne lipaze

FERMENTI ŽELUDAČNOG SOKA

- pepsin, lab ferment, želudačna lipaza -

Lab ferment (himozin)

• stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki

Kazein mleka parakazeinCa ⁺⁺

Ca parakazeinat (sir)

• optimalan pH je 5-6

Želudačna lipaza

• razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja• manje značajna od pankreasne lipaze

neaktivni oblik (proferment) pepsina je pepsinogen

pepsinogenH⁺ (HCl)

pepsin

• spada u grupu hidrolaza• endopeptidaza (prema mestu delovanja na peptide)

Pepsin

• razlaže potporne belančevine vezivno tkivnih opni (kolagene i elastine)

Pepsin

• optimalan pH je 1,5 – 2 (2,5)

• pepsin se denaturiše u baznoj sredini

PRIPREMA EKSTRAKTA

Kiseli ekstrakt

• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru HCl P

Neutralisani ekstrakt

• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ do pH - 7 P

Alkalizovani ekstrakt

• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ u višku dok pH ne postane bazan P

Bazni ekstrakt

• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru Na₂CO₃ PG

Supstrat

• koagulisano belance

proteini su nerastvorljivi nema peptida u rastvoru

delovanjem enzima peptidi u rastvoru

5ml HCl

KE 3, 4 kapi

2- 3 kockicekoag.belance

5ml

NE

HCl

3, 4 kapi

2- 3 kockicekoag.belance

2- 3 kockicekoag.belance

2- 3 kockicekoag.belance

BEAE

5ml5ml

3, 4 kapi3, 4 kapi

HClHCl

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru

Biuret

5ml2ml

parkapi

rastvora1,25 M NaOH

0,01 M CuSO₄

(+) (+) (+)(-)

P P P PG

P

PANKREASNI SOK

•bezbojna, prozirna, sluzava tečnost alkalne elektrohemijske reakcije (pH 8)

Glavni proteolitički enzimi pankreasa su tripsin i himotripsin

•proizvod lučenja egzokrinog dela pankreasa

•neorganski sastojci (voda, NaHCO₃) i organski (fermenti)

tripsinogen

crevni enzim enterokinaza

tripsinduodenumpankreasni sok

• tripsin razlaže belančevine do nižih peptida• optimalan pH je 7,5 do 9

Tripsin

5ml Na₂CO₃

4 kapi PE i CE

belance

5ml5ml 5ml 5mlNa₂CO₃ Na₂CO₃ Na₂CO₃ HCl

4 kapi 4 kapi 4 kapi 4 kapiCE p.PE i CE PE i CEPE

belance belance belance belance

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru

PE – ekstrakt pankreasa CE – ekstrakt crevne sluzokožep.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa

(+) (-) (-) (-) (-)

• Spada u grupu enzima hidrolaza, razlaže skrob i glikogen do disaharida maltoze• Optimalan pH je 5,5 do 6,7

PANKREASNA AMILAZA

PANKREASNA AMILAZA

skrob4ml 4ml skrob

4kapi 4kapiPE p.PE

PE – ekstrakt pankreasa p.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa

• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Felingova proba

(+) (-)

Hvala na pažnjiHvala na pažnji