ULOGA I ORGANIZACIJA TOKSIKOLOŠKE LABORATORIJE

Kvalitativna i kvantitativna analiza otrova

prof. dr Biljana Antonijević

Uloga i značaj toksikološke laboratorije

•U postavljanju dijagnoze

•U situacijama kada dijagnoza nije jasna

•U proceni efikasnosti terapije trovanja

Primeri dokaza po ekshumaciji (Weining, 1967)

Detekcija

Nakon …

godina

Detekcija

Nakon …

dana

As, Pb

Tl

Strihnin

Sb, Ba

Atropin,

Skopolamin

Morfin

(metab.)

Kolhicin

Paration

CO

9

8

6

5

3

1,1

0,8

0,7

0,6

P

HCN

F

Akonitin

Hg

Kiseline

Barbiturati

152

116

53

48

30

23

21

Supstanca Starost Starost Uloga laboratorije< 5 god. > 5 god. Smrtnost ZnačajHosp. Hosp.

Salicilati 7,8 7,8 4,5 +++Barbiturati 1,5 8,4 9,0 +++Petrolej pr. 9,7 0,5 0,0 -Pesticidi 5,3 1,0 3,5 +++Holinesteraza +++Hlor. ugljovod. ++Arsen +++Talijum ++Cijanidi +Korozivi 5,2 0,6 2,0 -Benzodiazepini 3,8 12,2 1,0 ++Tricikl. antidep. 1,4 3,4 3,5 ++Sr. za beljenje 2,4 0,2 0,0 -Fenotiazini 1,2 1,7 0,5 ++CO 0,1 0,5 7,0 ++Narkotici 0,2 0,8 7,0 ++Gvožđe 2,1 0,1 1,0 +++Sapun, deterg. 2,4 0,2 0,0 -

Procenat pacijenata usled trovanja i uloga laboratorije

+++ - ključna za terapiju ++ - značaj za dijagnozu, isključenje drugih mogućnosti + - koristi se za potvrdu - - nema značaja za terapiju i dijagnozu

Supstanca Razlog za analizuParacetamol Specifi čna terapijaSoli gvo žđa Specifi čna terapijaSalicilati Aktivno uklanjanjeFenobarbiton Aktivno uklanjanjeLitijum Aktivno uklanjanjeParakvat Aktivno uklanjanjeMetanol Specifi čna terapija i aktivno uklanjanjeBarbiturati Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanjaGlutetimid Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanjaMeprobamat Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanjaEtanol Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanjaHloralhidrat Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanjaTeofilin Kod sna žnih trovanja zbog izbora postupka uklanjanja

Indikacije za toksikološke analize

Materijal ili ambalaža

Neobjašnjena bolest

Nepoznato trovanje

Diferencijalna dijagnoza

Istorija bolestiIstraživanje Toksikološka analiza

Prethodna dijagnoza

»Poznata« ekspozicija

Izveštaj laboratorije

Procena težine trovanja

Konačna dijagnoza

Koordinacija klinike i laboratorije u dijagnozi trovanja

Metodologija u toksikološkim laboratorijama

•Maksimalna osetljivost

•Minimalna interferencija sa matriksom uzorka

•Jednostavna priprema uzorka

•Brzina

•Specifičnost

•Tačnost

•Visok informativni potencijal

Dobra laboratorijska praksa (DLP)Good Laboratory Practice (GLP)

DLP - koncept organizacije procesa rada u laboratoriji i uslove pod kojima se vrši planiranje, izvođenje, zapisivanje i prikazivanje rezultata

Američka agencija za hranu i lekove – 1976. god.(US Food and Drug Agency – FDA)

Američka agencija za zaštitu okoline – 1983. god.(US Environmental Protection Agency – EPA)

Evropska agencija za evaluaciju medicinskih proizvoda(European Agency for the Evaluation of Medical Products)

Japansko ministarstvo zdravlja(Japanese Ministry of Health and Welfare)

Međunarodna konferencija za harmonizaciju(International Conference on Harmonization)

ISO 17 025

Dobra laboratorijska praksa (DLP)

DLP

Saradnici

Oprema

Kontrolni i testuzorci

Rukovodilac

Služba obezbeđenjakvaliteta

Stand. operativne procedure (SOP)

Organizacija DLPLaboratorija koja funkcioniše u saglasnosti sa DLP standardimaispunjava uslove date šemom

Standardne operativne procedure (SOP) opisuju sve postupke u toksikološkoj laboratoriji za aktivnosti:

•Rutinski pregled, čišćenje, održavanje, kalibraciju i standarizaciju aparata

•Postupak koji se primenjuje ako dođe do kvara na nekom od aparata

•Opis analitičkih metoda

•Definisanje šta predstavlja sirove podatke

•Postupak za obradu, arhiviranje i pretraživanje podataka

•Opis kvalifikacija saradnika

•Mere u cilju očuvanja zdravlja saradnika

•Autorizovan pristup opremi

•Prijem i uzorkovanje kontrolnih i test uzoraka

•Propisivanje uslova i načina za arhiviranje dokumentacije, uzoraka, preparata i

pretraživanje arhive

•Uputstvo za šifrovanje studija, obradu podataka i korišćenje kompjuterizovanih

sistema

•Uputstvo za rad službe za kontrolu kvaliteta

Koje su prednosti i nedostaci?

Prednosti:Proces rada se bolje kontroliše i rezultati su kvalitetniji, služba interne kontrole kvaliteta obezbeđuje da se sve obavlja prema SOP-ovima, smanjena je potreba za ponavljanjem

Nedostaci:Uvođenje je skupo, značajno se povećava obim pisane dokumentacije, aktivnosti u laboratoriji postaju rutinske i stereotipne

Program kliničko-toksikološke laboratorije

Formiranje LISTE OTROVA

1. Farmaceutski proizvodi2. Pesticidi 3. Industrijske hemikalije

Lista sadrži:

•Naziv leka ili otrova•Tip analize (kvalitativna/kvantitativna), donja granica osetljivosti•Tip potrebnog uzorka (krv, urin, serum, lavat, …)•Količina uzorka•Vreme obrade

Lek, otrov, test Mogućnost analize Uzorak Vreme (h)Acetaldehid Ne postoji - -Alkohol, etil Kvant. Serum, urin 4Amfetamin Kval. Samo urin 4Disulfiram Ne postoji - -Arsen Semikvant. Samo urin 4Atropin Semikvant. Samo urin 24+Barbiturati Kvant. Serum 4Barbiturati Ne postoji Urin -Bromidi Kvant. Serum 4HbCO Kvant. Krv 4Hloralhidrat (kaotrihlorsirćetna kis.)

Semikvant. Urin 24+

Holinesteraza Kvant. Krv 4Kokain(kao metabolit)

Kval. Samo urin 24+

Kodein Semikvant. Samo urin 24+Diazepam (kaoskrining hipnotika)

Kval. Serum 4

Diazepam Kvant. Serum 24+Dikumarol Ne postoji - -Teški metali(As, Sb, Hg)

Kval. Samo urin 4

MetHb Kvan. Krv 4Morfin Kval. Samo urin 24+Fenol Kval. Serum 24+Fenol Kvant. Serzm 24+Salicilati Kvant. Serum, urin 4Sulfonamidi Semikvant. Urin 24

Lista lekova i otrova

Nivo 3 Nivo 2 Nivo 1Nacionalna laboratorija

Za populaciju od oko 2miliona stanovnika (1 – 4)

Regionalna laboratorija

Za populaciju između 1 i 2miliona stanovnika

Oblasni centar

Za populaciju od 20 000 do100 000 stanovnika uradijusu 10 – 50 km

Organizacija kliničko-toksikološke laboratorije

Nivo Obim poslova Druge aktivnosti1

2

3

Oblasni centar

Regionalna laboratorija

Nacionalna laboratorija

Identifikacija otrova in vitro(tablete, rastvarači), Hb CO,MetHb, kvalitativna procenanarkotika

Nivo 1 + narkotici, drugilekovi, alkohol u krvi,rastvarači

Svi toksikološki testovi

Preporuke za nivo 1;Istraživanje

Preporuke za nivoe1 i 2, istraživanje,edukacija

Program rada toksikoloških laboratorija

Nivo Osoblje OpremaKapacitet

Slučajevi-godišnje

Analit. Tehničari OtroviAlkohol u

krvi1

2

3

Oblasnicentar

Regionalnalaboratorija

Nacionalnalaboratorija

-

2-3

3-6

1

6

10-15

Fotometar (VIS/UV),TLC

Nivo 1 +spektrofotometar

(VIS/UV), GC, HPLC

Nivo 1,2 +Spektrofotometar(VIS/UV/IR), AAS, NMR,MS, imunoesej, ICP,

FD...

50

200

1000

-

2000

5000

Ljudi i oprema

Organizacija kliničko-toksikološke službe u R Srbiji

•Stanice za hitnu pomoć i domovi zdravlja

•Opšte bolnice i zdravstveni centri (+)

•Kliničko-bolnički centri (+)

•Nacionalni centar za kontrolu trovanja (+)

Zakon o zdravstvenoj zaštiti

Modeli proučavanja i rezultati

Toksikološki zahtevFormular (Uputnica)

Informacije o pacijentuIme, starost, pol, stanje svesti, istorija bolesti i dijagnoza, aktuelna terapija, znaci i simptomi, sumnja na lek ili otov, datum dobijanja uzorakaInformacije o lekaruIme lekara, telefon ili lokalZahtev za laboratorijuTraženi testoviLaboratorijski rezultatiŠta je rađeno, u kom uzorku, rezultati, ime analitičara, datum

Interpretacija laboratorijskih rezultata

Liste terapijskih, toksičnih i letalnih koncentracijaJedinstven sistem jedinica (SI sistem)

Laboratorijski rezultat

Vreme proteklo od unosa Stanje pacijenta

Optimizacija terapije

Lek Koncentracije (mg/l) PrimedbeTerapijske Toksične

Acetilsal. Kis. 150-300 500 Eliminacija zavisi oddoze. Podaci se odnosena salicilnu kis.

Amfetamin 0,02-0,03 0,2 Kod zloupotrebe uurinu konc. 30-50

Cijanidi 5Diazepam 0,1-1,0 5Digitoksin 0,02-0,035 0,035Etanol 500-1000Ethlorvinol 2-8 30Fenobarbiton 15-40 35Glutetimid 2-6 5Heroin Odmah prelazi u

diacetil morfinImipramin 0,125-0,250 0,5Izoniazid 1-7 20Kofein 3-15 50Hloralhidrat 2-12 20Hloramfenikol 10-25 25Hlorpromazin 0,05-0,30 0,75 Veliki br. metabolitaKokain 0,1-0,5 1Kodein 0,01-0,10 0,2Kinin 5-10 10Litijum 0,6-1,2 2 Kod hronične terapije

niže toksične konc.LSD 0,009Meprobamat 6-12 60 Podaci o konc.

neujednačeniMetadon 0,1-0,4 2Metakvalon 2-3 10Metildopa 1-5 7Morfin 0,165-0,08 0,2Nikotin Kod pušača 0,1-1 u

urinuParacetamol 10-30 200Prokain do 11 21Sekobarbital 1-2 5Teofilin 8-20 20Tiopenton 1-5 10Valproičnakis.

50-100 100

Terapijske i toksične koncentracijenekih lekova i otrova

“Real mistakes in analytical toxicology are real disasters”

““If one does not look one does not find”If one does not look one does not find”

Nedeljković M, Antonijević B. Uloga i značaj kliničko-toksikološke laboratorije. Arh farm 2005; 55: 266-279.