SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar .../Pengaruh...Hasil Penelitian: Pada penelitian ini diperoleh jumlah rerata inti sel nekrosis pada KK sebesar 22,64 ± 6,721, KP

perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

commit to user

PENGARUH EKSTRAK DAUN KATUK (Sauropus androgynus) SEBAGAI

HEPATOPROTEKTOR TERHADAP KERUSAKAN HISTOLOGIS

HEPAR TIKUS PUTIH YANG DIPAPAR PARASETAMOL

SKRIPSI

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

Albert Krisnayudha Sinuraya

G0008048

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2011


commit to user

iv

ABSTRAK

Albert K. Sinuraya, G0008048, 2011. Pengaruh Ekstrak Daun Katuk (Sauropus androgynus) sebagai Hepatoprotektor terhadap Kerusakan Histologis Hepar Tikus Putih yang Dipapar Parasetamol, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta

Tujuan Penelitian: Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun katuk dan pengaruh peningkatan dosis ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

Metode Penelitian: Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan the post test only control group design. Tikus putih galur Wistar jantan sebanyak 28 ekor dibagi dalam 4 kelompok yaitu kelompok kontrol (KK) dan kelompok perlakuan 1 - 3 (KP 1 - 3). Kelompok kontrol tikus putih diberi CMC 0,5 % sebanyak 1 ml per hari selama 13 hari berturut-turut. Kelompok perlakuan 1 - 3 diberikan parasetamol 0,27 gram/200 gram BB pada hari ke-11 sampai ke-13. Kelompok perlakuan 2 diberikan ekstrak daun katuk dosis 16,2 mg/200 gram BB, dan kelompok perlakuan 3 diberikan ekstrak daun katuk dosis 32,4 mg/200 gram BB. Perlakuan diberikan pada hari ke-1 sampai hari ke-13. Pada hari ke-14 semua tikus putih dikorbankan dan diambil heparnya untuk pembuatan preparat. Kerusakan sel hepar tikus putih diamati dengan menghitung jumlah inti sel yang mengalami nekrosis pada daerah sentrilobuler hepar. Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan uji One Way ANOVA dan uji LSD.

Hasil Penelitian: Pada penelitian ini diperoleh jumlah rerata inti sel nekrosis pada KK sebesar 22,64 ± 6,721, KP 1 sebesar 52,57 ± 5,110, KP 2 sebesar 35,29 ± 4,762, dan KP 3 sebesar 12,86 ± 4,655. Hasil uji statistik One Way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna di antara keempat kelompok penelitian dengan p = 0,000 (p < 0,005). Hasil uji statistik LSD juga menunjukkan perbedaan yang bermakna antara keempat kelompok dengan masing-masing p = 0,000 (p < 0,05)

Simpulan Penelitian: Simpulan dalam penelitian ini ialah pemberian ekstrak daun katuk dapat mencegah kerusakan sel hepar pada tikus putih yang dipapar parasetamol. Pemberian ekstrak daun katuk dengan dosis bertingkat juga terbukti semakin meningkatkan efek proteksinya terhadap hepar.

Kata Kunci: daun katuk, parasetamol, kerusakan sel hepar


commit to user

v

ABSTRACT

Albert K. Sinuraya, G0008048, 2011. The Effect of Katuk Leaf Extract (Sauropus androgynus) as Hepatoprotector Toward the Liver Histological Appearance of Paracetamol Experimented White Mouse. Medical Faculty of Sebelas Maret University, Surakarta.

Objective: To find out the effect of katuk leaf (Sauropus androgynus) as hepatoprotector toward the liver histological appearance of paracetamol experimented white mouse.

Method: The research is experimental labolatoric research with the postest-only control group design. Twenty eight male mice galur wistar were divided into four groups. These groups were control group (KK) and 3 treated groups (KP 1 - 3). Control group got 1 ml CMC 0,5 % once a day for 13 days. KP 1 - 3 was treated by parasetamol 0,27 g/200 g BB in 11th-13th day. KP 2 was given katuk leaf extract with 16,2 mg/200 g BB dosages, whereas KP 3 was given 32,4 mg/200 g BB. The treatments were given within 13 days. In the 14th day, all mice were sacrificed for liver histopathological study. The liver cells’ damage were observed by number of necrosis cells on the central lobular of liver. Then the data was analyzed using One Way ANOVA test and LSD test.

Results: Average number of necrotic nucleus in the KK was 22,64 ± 6,721, KP 1 was 52,57 ± 5,110, KP 2 was 35,29 ± 4,762, and KP 3 was 12,86 ± 4.655. The results of One Way ANOVA statistical test showed a significant difference in all four groups, p = 0,000 (p < 0,05). The results of LSD test also showed a significant differences between the four groups with each p = 0,000 (p < 0,05).

Conclusion: This research conclude that katuk leaf (Sauropus androgynus) extract is able to prevent liver cells’ damage of parasetamol experimented white mouse. Increased dosage of katuk leaf extract can increase its protection towards the liver cells.

Keywords: katuk leaf, paracetamol, liver cells’ damage


commit to user

vii

DAFTAR ISI

PRAKATA .............................................................................................................. vi

DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................... x

DAFTAR TABEL ................................................................................................... xi

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii

BAB I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah ....................................................................... 1

B. Perumusan Masalah ............................................................................. 3

C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 3

D. Manfaat Penelitian ............................................................................... 4

BAB II. LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 5

1. Katuk .............................................................................................. 5

a. Taksonomi ................................................................................ 5

b. Nama Lain ................................................................................. 5

c. Karakteristik dan Morfologi ..................................................... 6

d. Kandungan Senyawa Kimia ...................................................... 7

2. Hepar .............................................................................................. 7

a. Lobulus Hepar ........................................................................... 8

b. Parenkim Sel-sel Hepar ............................................................ 9

c. Sinusoid Hepar .......................................................................... 9


commit to user

viii

d. Kanalikuli Biliferus ............................................................... 10

e. Triad Portal ........................................................................... 10

f. Daya Regenerasi Sel Hepar .................................................. 10

g. Kerusakan Sel Hepar ............................................................. 11

3. Parasetamol ................................................................................. 12

a. Farmakodinamik ................................................................... 12

b. Farmakokinetik ..................................................................... 13

c. Indikasi .................................................................................. 13

d. Efek Samping ........................................................................ 14

4. Stres Oksidatif ............................................................................ 14

5. Antioksidan ................................................................................. 19

6. Daun Katuk sebagai Antioksidan ............................................... 21

B. Kerangka Pemikiran ......................................................................... 23

C. Hipotesis ........................................................................................... 24

BAB III. METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian ................................................................................. 25

B. Lokasi Penelitian .............................................................................. 25

C. Subjek Penelitian .............................................................................. 25

D. Teknik Sampling .............................................................................. 26

E. Desain Penelitian .............................................................................. 26

F. Identifikasi Variabel Penelitian ........................................................ 27

G. Definisi Operasional Variabel Penelitian ......................................... 28

H. Instrumentasi dan Bahan Penelitian ................................................. 30


commit to user

ix

I. Cara Kerja ........................................................................................ 31

J. Teknik Analisis Data Statistik .......................................................... 37

BAB IV. HASIL PENELITIAN

A. Data Hasil Penelitian ........................................................................ 38

B. Analisis Data .................................................................................... 40

1. Uji Normalitas ............................................................................ 40

2. Uji One Way ANOVA ................................................................ 40

3. Uji LSD ....................................................................................... 41

BAB V. PEMBAHASAN .................................................................................... 43

BAB VI. SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan ........................................................................................... 47

B. Saran ................................................................................................. 47

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 49

LAMPIRAN ........................................................................................................... 54


commit to user

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Hepar adalah organ terbesar dengan berat sekitar 2 % dari berat total

tubuh yang berfungsi dalam penyaringan dan penyimpanan darah,

pembentukan empedu, penyimpanan vitamin dan besi, pembentukan faktor

koagulasi, serta metabolisme karbohidrat, protein, lemak, hormon, dan zat

kimia asing (Guyton dan Hall, 2007). Peran hepar dalam memetabolisme

berbagai zat kimia yang masuk ke dalam tubuh menyebabkan hepar menjadi

sangat rentan terhadap kerusakan. Zat kimia dapat berupa senyawa obat dan

salah satu contoh obat yang dapat menimbulkan kerusakan hepar adalah

parasetamol (Mehta, 2010).

Parasetamol (asetaminofen) telah digunakan sejak tahun 1893

sebagai obat dengan efek antipiretik dan analgesik. Parasetamol dijual

sebagai obat bebas di Indonesia. Ketika diminum dalam dosis terapi,

parasetamol telah terbukti aman. Sebagian besar dikonversi melalui

metabolisme tahap II oleh konjugasi dengan sulfat dan glukoronat, dan

sebagian kecil lainnya teroksidasi melalui metabolisme tahap I oleh enzim

sitokrom P450. Sitokrom P450 3A4 dan sitokrom P450 2E1 mengkonversi

sekitar 5 % dari parasetamol menjadi metabolit perantara yang sangat

reaktif, N-asetil-p-benzoquinoneimine (NAPQI), yang kemudian


commit to user

2

dikonjugasi oleh glutation membentuk sistein dan konjugat mercapturic

acid yang tidak beracun (Farrel, 2010).

Penggunaan parasetamol yang berlebihan dan terus menerus (drug

abuse) membuat jalur sulfat dan glukoronat menjadi jenuh sehingga jalur

detoksifikasi parasetamol lebih banyak dilakukan oleh sitokrom P450.

Akibatnya NAPQI menjadi sangat banyak dan pasokan glutation untuk sel

hepar berkurang. Saat itu juga NAPQI masih dalam bentuk racun dalam

hepar dan bereaksi dengan molekul membran sel, mengakibatkan kerusakan

dan kematian sel hepar dan akhirnya menyebabkan nekrosis hepar akut

(Farrel, 2010).

Guna mencegah terjadinya efek buruk dari radikal bebas, maka

tubuh memerlukan antioksidan yang merupakan senyawa kimia dengan sifat

reduktor. Mekanisme kerja antioksidan ada dua, yaitu sebagai donor atom

hydrogen sehingga radikal bebas menjadi lebih stabil dan yang kedua adalah

untuk memperlambat laju autooksidasi. Penggunaan antioksidan alami

sudah mulai marak akhir-akhir ini seiring dengan semakin besarnya

pemahaman masyarakat tentang peranannya dalam menghambat penyakit

degeneratif seperti penyakit jantung, arteriosklerosis, kanker, serta penuaan

(Gunawan, 2010).

Daun katuk sudah banyak dikenal orang Indonesia dan banyak

digunakan sebagai sayuran. Daun katuk mengandung berbagai jenis

antioksidan antara lain flavonoid, vitamin C, dan vitamin A. Kandungan


commit to user

3

protein dan vitamin A yang tinggi membuat daun katuk digunakan sebagai

food additive untuk ibu-ibu yang menyusui (Subekti, 2007).

Penelitian yang dilakukan oleh Sa’roni (2004) meyebutkan bahwa

dosis daun katuk sebanyak 900 mg/hari dapat meningkatkan produksi ASI.

Namun sejauh ini manfaat pemberian ekstrak daun katuk sebagai

hepatoprotektor belum diketahui.

Dengan besarnya potensi antioksidan yang terkandung dalam ekstrak

daun katuk dan efek proteksi daun katuk terhadap hepar belum banyak

diteliti, maka peneliti ingin mengetahui bagaimana efek proteksi yang

diberikan oleh ekstrak daun katuk terhadap hepar tikus putih yang dipapar

parasetamol.

B. Perumusan Masalah

Perumusan masalah dalam penelitian ini adalah:

1. Apakah pemberian ekstrak daun katuk dapat digunakan sebagai

hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang

dipapar parasetamol?

2. Apakah peningkatan dosis ekstrak daun katuk dapat meningkatkan efek


dipapar parasetamol?

C. Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun katuk sebagai


dipapar parasetamol.


commit to user

4

2. Untuk mengetahui pengaruh peningkatan dosis ekstrak daun katuk

sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih

yang dipapar parasetamol.

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat Teoritis

Penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai bahan

informasi dan bahan kajian mengenai pengaruh ekstrak daun katuk

sebagai hepatoprotektor.

2. Manfaat Aplikatif

Penelitian ini diharapkan dapat dipakai sebagai bahan acuan

untuk penelitian lebih lanjut, misalnya penelitian dengan subjek

manusia.


commit to user

5

BAB II

LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka

1. Katuk (Sauropus androgynus)

a. Taksonomi

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas : Magnoliopsida (Berkeping ganda)

Sub kelas : Rosidae

Ordo : Euphorbiales

Famili : Euphorbiaceae

Genus : Sauropus

Spesies : Sauropus androgynus (L.) Merr.

(Plantamor, 2011)

b. Nama Lain

Katuk mempunyai beberapa nama yang berbeda di setiap

daerah di Indonesia antara lain memata, sekop manis (Melayu),

simani (Minangkabau), katuk (Sunda), sibabing, katu, katukan

(Jawa), dan kerakur (Madura). Di luar negeri tanaman ini bernama

sweet leaf bush/star gooseberry (Inggris), cekur manis/cekak


commit to user

6

manis/tarok manis (Malaysia), phuk waan ban (Thailand), so kun

mu (Cina), dan ruridama no (Jepang). (Plantamor, 2011)

c. Karakteristik dan Morfologi

Gambar 1. Daun Katuk (Herbal, 2010)

Tanaman katuk termasuk tanaman perdu dengan tinggi

mencapai 3,5 meter. Tanaman katuk banyak terdapat di Asia

Tenggara dan tumbuh baik di dataran rendah hingga 1.300 meter

di atas permukaan laut (Herbal, 2010).

Tanaman katuk tumbuh menahun (parennial) dan

merumpun. Susunan morfologi tanaman katuk terdiri atas akar,

batang, daun, bunga, buah dan biji. Buahnya berbentuk kecil dan

berwarna putih. Daun katuk kecil, dengan warna hijau gelap,

panjangnya 5 - 6 cm. Bunga tanaman katuk berwarna merah gelap

atau kuning dengan bercak merah gelap (Herbal, 2010).

Sistem perakaran tanaman katuk menyebar ke segala arah

dan dapat mencapai kedalaman antara 30 cm - 50 cm. Batang

tanaman tumbuh tegak dan berkayu. Pada stadium muda, batang

tanaman berwarna hijau dan setelah tua berubah menjadi kelabu

keputih-putihan (Herbal, 2010).


commit to user

7

d. Kandungan Senyawa Kimia

Daun katuk mengandung energi (59 kkal/100 gr), protein

(4,8 gr/100 gr), lemak (1 gr/100 gr), karbohidrat (11 gr/100 gr),

dan air (17 gr/100 gr). Vitamin A yang didapat dari 100 gram daun

Katuk adalah 10.370 SI, vitamin C ( 239 mg/100 gr), dan vitamin

B1 (0,1 mg/100 gr). Kadar serat per 100 gram daun katuk 1,5

gram. Komposisi mineral pada daun katuk juga tinggi, yaitu

dominan kalsium (204 mg/100 gr), fosfor (83 mg/100 gr), dan besi

(2,7 mg/100 gr). Daun katuk juga mengandung banyak flavonoid

(831,70 mg/100 gr). Golongan flavonoid utama yang terdapat

dalam daun katuk adalah golongan flavonol OH-3 tersulih atau

golongan flavon (Zuhra, 2008).

2. Hepar

Hepar merupakan organ terbesar yang ada di dalam tubuh,

konsistensinya lunak dan terletak di bawah diafragma dalam cavum

abdomen regio hipochondriaca dextra sampai regio epigastrica. Hepar

mempunyai peran yang sangat penting, di antaranya sebagai tempat

penyaringan dan penyimpanan darah, pembentukan empedu,

penyimpanan vitamin dan besi, pembentukan faktor koagulasi, serta

metabolisme karbohidrat, protein, lemak, hormon, dan zat kimia asing

(Guyton dan Hall, 2007).

Struktur histologis hepar terdiri dari beberapa lobus dan tiap

lobus terbagi menjadi lobulus-lobulus, yang merupakan unit


commit to user

8

mikroskopis dan fungsional organ. Setiap lobulus merupakan badan

heksagonal yang terdiri dari lempeng-lempeng sel hepar berbentuk

kubus, tersusun radier mengelilingi vena sentralis yang mengalirkan

darah dari lobulus. Di antara lempengan sel hepar terdapat kapiler-

kapiler yang dinamakan sinusoid, yang merupakan cabang vena porta

dan arteri hepatika. Sinusoid ini dibatasi oleh sel fagositik atau sel

kupffer, yang berfungsi seperti sistem monosit-makrofag. Selain

cabang-cabang vena porta dan arteri hepatika yang melingkari bagian

perifer lobulus hepar, juga terdapat saluran empedu (Price dan Wilson,

2005).

a. Lobulus hepar

Lobulus hepar sebagai kesatuan histologis berbentuk prisma

poligonal, diameter 1-2 mm, penampang melintang tampak sebagai

heksagonal dengan pusatnya vena sentralis dan sudut-sudut luar

lobuli terdapat kanalis porta (Leeson et al., 1996).

Pembagian lobulus hepar sebagai unit fungsional dibagi

menjadi 3 zona:

1) Zona 1: zona aktif, sel-selnya paling dekat dengan pembuluh

darah, akibatnya zona ini yang pertama kali dipengaruhi oleh

perubahan darah yang masuk, disebut juga “zone of permanent

function”.


commit to user

9

2) Zona 2: zona intermedia, sel-selnya memberi respon kedua

terhadap perubahan dalam darah, disebut juga “intermediate

zone”.

3) Zona 3: zona pasif, aktivitas sel-selnya rendah dan tampak

aktif bila kebutuhan meningkat (Lesson et al., 1996).

b. Parenkim sel-sel hepar

Parenkim hepar terdiri dari sel sel hepar atau hepatosit,

yang tersusun radier, bertumpukan, dan membentuk lapisan sel

yang tebal satu sama lain. Parenkim hepar tersusun dalam

rangkaian lempeng-lempeng atau lembaran-lembaran cabang dan

beranastomosis dengan bebas, membentuk struktur seperti busa.

Celah di antara lempeng-lempeng tersebut mengandung sinusoid-

sinusoid kapiler yang disebut sinusoid hepar. Hepatosit berbentuk

poligonal, berukuran sekitar 20 - 35 µm dengan membran sel yang

jelas. Inti sel bulat atau lonjong dengan permukaan teratur dan

besarnya bervariasi antara sel yang satu dengan yang lainnya.

Setiap inti mempunyai granula kromatin yang tampak jelas dan

tersebar dengan satu atau lebih anak inti (Lesson et al., 1996).

c. Sinusoid hepar

Sinusoid hepar merupakan suatu pembuluh yang melebar

tidak teratur dan hanya terdiri dari satu lapisan sel-sel endotel yang

tidak kontinyu. Sinusoid kapiler hepar mempunyai batas yang tidak

sempurna dan memungkinkan pengaliran makromolekul dengan


commit to user

10

mudah dari lumen ke sel-sel hepar dan sebaliknya. Sinusoid

dikelilingi dan disokong oleh selubung serabut retikuler halus yang

penting untuk mempertahankan bentuknya (Juncqueira dan

Carneiro, 2007).

d. Kanalikuli biliferus

Merupakan celah tubuler yang hanya dibatasi oleh

membran plasma hepatosit dan mempunyai sedikit mikrovili pada

bagian dalamnya. Kanalikuli biliferus membentuk anastomosis

yang kompleks di sepanjang lempeng-lempeng lobulus hepar dan

berakhir dalam daerah porta. Oleh karena itu, empedu mengalir

berlawanan arah dengan aliran darah, yaitu dari tengah ke tepi

lobulus. Beberapa kanalikuli biliferus membentuk duktulus

biliferus yang bermuara dalam duktus biliferus dalam segitiga

porta. Duktus biliferus bersatu dan membentuk duktus hepar

(Juncquiera dan Carneiro, 2007).

e. Triad portal

Merupakan tempat-tempat di mana tiga atau lebih unit

lobulus bertemu dimana terdapat akumulasi jaringan pengikat.

Triad portal mengandung cabang dari vena porta, arteri hepatika,

dan duktus biliferus (Juncquiera dan Carneiro, 2007).

f. Daya regenerasi sel hepar

Hepar mempunyai kemampuan regenerasi yang

mengagumkan. Daya regenerasi hepar setelah mengalami trauma


commit to user

11

atau mendapat zat-zat toksik sangat tinggi (Lesson et al., 1996).

Kehilangan jaringan hepar akibat kerja zat-zat toksik atau

pembedahan memacu suatu mekanisme di mana sel-sel hepar mulai

membelah dan hal ini terus berlangsung sampai perbaikan masa

jaringan semula tercapai (Juncquiera dan Carneiro, 2007).

g. Kerusakan sel hepar

Hepar yang normal, tanpa jejas mempunyai parenkim yang

tidak tumpang tindih satu sama lainnya dan mempunyai kapasitas

regenerasi yang luar biasa. Regenerasi yang sukses bergantung

pada tipe, derajat, dan lamanya jejas serta integritas dari jaringan

yang tersisa. Beberapa jaringan, seperti pada kulit dan hepar relatif

baik regenerasinya dibanding jaringan lainnya. Ketiadaan

regenerasi, maka jaringan fungsional akan digantikan oleh jaringan

fibrotik yang mengandung banyak kolagen (Philips, 1997).

Respons hepar terhadap jejas dapat memberikan beberapa

tampakan histologis yang melibatkan hepatosit, sel vaskuler, dan

saluran empedu (Damjanov, 1996).

Kematian sel dan jaringan pada tubuh yang hidup disebut

nekrosis. Secara mikroskopis jaringan nekrosis seluruhnya

berwarna kemerahan dan tidak mengambil zat warna hematoksilin,

sering pucat.

Pada nekrosis kerusakan banyak terjadi pada inti, perubahan

inti di antaranya adalah:


commit to user

12

1) Inti menyusut, batas tidak teratur.

2) Inti tampak lebih padat, warnanya gelap hitam (piknotik).

3) Inti terbagi-bagi atas fragmen-fragmen, robek (karioreksis).

4) Inti tidak lagi mengambil zat warna, karena itu pucat dan tidak

nyata (kariolisis) (Price dan Wilson, 2005).

Tampilan morfologik jaringan nekrosis bervariasi,

tergantung pada hasil aktivitas litik di dalam jaringan mati.

Umumnya perubahan-perubahan lisis yang terjadi pada semua

bagian sel, tetapi perubahan pada inti sel adalah petunjuk paling

jelas pada kematian sel (Price dan Wilson, 2005).

3. Parasetamol (Asetaminofen)

a. Farmakodinamik

Efek analgesik parasetamol serupa dengan salisilat yaitu

menghilangkan atau mengurangi nyeri ringan sampai sedang.

Keduanya menurunkan suhu tubuh dengan mekanisme yang diduga

juga berdasarkan efek sentral seperti salisilat (Wilmana dan

Gunawan, 2007).

Efek anti inflamasinya sangat lemah, oleh karena itu

parasetamol tidak digunakan sebagai antireumatik. Parasetamol

merupakan penghambat biosintesis prostaglandin yang lemah.

Efek iritasi, erosi, dan perdarahan lambung tidak terlihat pada

kedua obat ini, demikian juga dengan gangguan pernapasan dan

keseimbangan asam basa (Wilmana dan Gunawan, 2007).


commit to user

13

b. Farmakokinetik

Parasetamol diberikan per oral. Absorbsi tergantung pada

kecepatan pengosongan lambung, dan kadar puncak di dalam darah

biasanya tercapai dalam waktu 30 - 60 menit. Parasetamol sedikit

terikat dengan protein plasma dan sebagian dimetabolisme oleh

enzim mikrosom hepar dan diubah menjadi asetaminofen sulfat dan

glukoronida yang secara farmakologi tidak aktif. Kurang dari 5%

diekskresikan dalam bentuk tidak berubah. Suatu metabolit minor

tetapi sangat aktif (N-asetil-p-benzokuinon), penting pada dosis

besar, karena toksisitasnya terhadap hepar dan ginjal. Waktu paruh

parasetamol 2-3 jam dan relatif tidak dipengaruhi oleh fungsi

ginjal. Pada jumlah toksik atau penyakit hepar, waktu paruhnya

bisa meningkat dua kali lipat atau lebih (Katzung, 2002).

c. Indikasi

Khasiatnya analgetik dan antipiretik, tetapi tidak

antiradang. Efek analgetisnya diperkuat oleh kodein dan kafein

(Tjay dan Raharja, 2002). Obat ini berguna untuk nyeri ringan

sampai sedang seperti sakit kepala, mialgia, nyeri persalinan, dan

keadaan lain di mana aspirin efektif sebagai analgesik. Parasetamol

tidak efektif untuk mengatasi inflamasi seperti artritis reumatoid,

meskipun dapat dipakai sebagai obat tambahan analgesik dalam

terapi antiinflamasi. Parasetamol lebih disukai daripada aspirin

pada pasien dengan hemofilia atau dengan riwayat ulkus peptikum


commit to user

14

dan juga pada pasien yang mengalami bronkospasme yang dipicu

akibat aspirin (Katzung, 2002).

d. Efek samping

Efek samping yang sering terjadi antara lain reaksi

hipersensitivitas dan kelainan darah (Tjay dan Raharja, 2002). Efek

merugikan paling serius akibat overdosis asetaminofen akut berupa

nekrosis hati yang fatal. Nekrosis tubulus ginjal dan koma

hipoglikemik mungkin juga terjadi (Hardman et al., 2008).

Hepatotoksisitas dapat terjadi pada pemberian dosis tunggal 10 -

15 gram (200 - 250 mg/kgBB) parasetamol (Wilmana dan

Gunawan, 2007). Selain itu overdosis dapat menimbulkan gejala

antara lain mual, muntah, dan anoreksia.

4. Stres Oksidatif

Oksigen merupakan substansi esensial karena perannya yang

begitu besar bagi metabolisme sel untuk menghasilkan energi bagi

kehidupan sel. Di dalam sel, 90 % oksigen digunakan dalam rantai

transport elektron di mitokondria sitokrom oksidase (Arief, 2009).

Oksigen juga memiliki potensi toksik, karena selain mendorong

terjadinya reduksi oksigen yang bertahap untuk membentuk ATP dalam

rantai transpor elektron, juga menyebabkan terbentuknya radikal

oksigen dan senyawa oksigen reaktif {Reactive oxygen species (ROS)}

yang mampu menyebabkan cedera sel. Contoh senyawa oksigen reaktif

antara lain adalah radikal superoksida, radikal hidroksil, hidrogen


commit to user

15

peroksida, dan radikal peroksida. Proses-proses yang secara alami

menghasilkan senyawa oksigen reaktif adalah rantai respirasi

mitokondria, reaksi oksidase, maupun pada peristiwa fagositosis oleh

granulosit sistem imun (Videla, 2009).

Stres oksidatif adalah ketidakseimbangan antara produksi

oksigen reaktif dengan kemampuan sistem biologik tubuh untuk

mendetoksifikasi senyawa reaktif atau memperbaiki kerusakan sel

(Otero et al., 2009). Keadaan ini menyebabkan kelebihan radikal bebas,

yang akan bereaksi dengan lemak, protein, asam nukleat seluler,

sehingga terjadi kerusakan lokal dan disfungsi organ tertentu. Jika stres

oksidatif ini berlangsung lama, akan menyebabkan kerusakan sel atau

jaringan, yang selanjutnya merupakan penyebab timbulnya keganasan,

inflamasi, aterosklerosis, penuaan, dan iskemia (Arief, 2009).

Stres oksidatif disebabkan oleh radikal bebas yang berlebihan.

Radikal bebas yang merupakan spesies kimiawi dengan satu elektron

tak berpasangan di orbital terluar menyebabkan radikal bebas sangat

tidak stabil dan mudah bereaksi dengan zat kimia organik maupun

anorganik. Sifat ini menimbulkan perubahan kimiawi dan dapat

merusak berbagai komponen sel. Tiga reaksi yang paling relevan

dengan jejas sel yang diperantarai radikal bebas yaitu peroksidasi lipid

membrane, fragmentasi DNA, dan ikatan silang protein (Robbins et al.,

2004).


commit to user

16

Membran sel hampir seluruhnya terdiri dari protein dan lipid.

Struktur dasarnya ialah sebuah lapisan lipid bilayer dan di antara

lapisan lipid bilayer tersebut terdapat molekul besar protein globular.

Sedangkan struktur dasar dari lapisan lipid bilayer sendiri terdiri atas

molekul-molekul fosfolipid (Guyton dan Hall, 2007). Komponen

terpenting membran sel adalah fosfolipid, glikolipid, dan kolesterol.

Dua komponen pertama mengandung asam lemak tak jenuh yang

sangat rawan terhadap serangan-serangan radikal terutama radikal

hidroksil dan menimbulkan reaksi rantai yang dikenal dengan nama

peroksidasi lipid. Akibat akhir dari rantai reaksi ini adalah terputusnya

rantai asam lemak menjadi berbagai senyawa yang bersifat toksik

terhadap sel. Dapat pula terjadi ikatan silang (cross-linking) antara dua

rantai asam lemak dan rantai peptide (protein) yang timbul karena

reaksi dua radikal. Semuanya itu menyebabkan kerusakan parah

membrane sel sehingga membahayakan kehidupan sel (Suryohudoyo,

2000).

Kerusakan membran sel menyebabkan membran sel menjadi

lebih permeabel terhadap beberapa substansi dan memungkinkan

substansi tersebut melewati membran secara bebas. Jika substansi

tersebut adalah radikal bebas seperti H2O2 maka akan terjadi reaksi

Fenton (Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH0 + OH-) yang diperantarai oleh

logam transisi, seperti tembaga (Cu) dan zat besi (Fe). Reaksi Fenton


commit to user

17

tersebut akan menghasilkan radikal hidroksil (OH0) yang akan lebih

merusak membran sel (Robbins et al., 2004).

Perubahan permeabilitas membran yang disebabkan peroksida

lipid juga mengakibatkan pengaturan ion, nutrisi sel, dan volume intra-

ekstrasel menjadi terganggu dan pada akhirnya proses metabolisme sel

secara keseluruhan menjadi terganggu. Peroksida lipid juga menekan

pompa Ca2+ mikrosom hati sehingga terjadi gangguan homeostasis sel

hati. Peningkatan Ca2+ intrasel akan mengaktivasi fosfolipase

(mencetuskan kerusakan membran), protease (mengatabolisasi protein

membran dan struktural), ATPase (mempercepat deplesi ATP), dan

endonuklease (memecah material genetik). Semua keadaan tersebut

akan merusak sel hati. Ketika suatu sel tidak dapat kembali normal lagi

(point of no return) atau tidak dapat beregenerasi lagi setelah mendapat

jejas berulang kali dan dengan durasi yang panjang maka sel tersebut

akan mengalami kematian (nekrosis) (Robbins et al., 2004).

Perusakan DNA oleh radikal bebas juga dapat terjadi karena

reaksi dengan radikal hidroksil (OH0) yang terbentuk di dalam inti sel.

Stres oksidatif dapat memicu pelepasan ion logam di dalam sel, yang

akan berikatan dengan DNA. Ion logam tersebut dapat mengkatalis

terbentuknya OH- dari H2O2 melalui reaksi donor elektron dari ion

logam kepada H2O2. OH0 yang terbentuk kemudian akan segera

bereaksi dengan molekul terdekat, yang tidak lain adalah DNA itu


commit to user

18

sendiri, menyebabkan terjadinya kerusakan DNA (Halliwell dan

Gutteridge, 2001).

Bila kerusakan tidak terlalu parah, maka masih bisa diperbaiki

oleh sistem perbaikan DNA (DNA repair system). Namun apabila

kerusakan terlalu parah, misalnya DNA terputus-putus di berbagai

tempat, maka kerusakan tersebut tak dapat diperbaiki dan replikasi sel

akan terganggu. DNA yang tidak dapat diperbaiki ini sering justru

menimbulkan mutasi, karena dalam memperbaiki DNA cenderung

membuat kesalahan (Suryohudono, 2000).

Radikal bebas juga akan mencetuskan ikatan silang protein yang

diperantarai sulfhidril, menyebabkan peningkatan kecepatan degradasi

atau hilangnya aktivitas enzimatik. Reaksi radikal bebas juga bisa

secara langsung menyebabkan fragmentasi polipeptida (Robbins et

al.,2004).

Radikal bebas memang tidak stabil, dan umumnya rusak secara

spontan. Sel juga membentuk beberapa sistem enzimatik dan

nonenzimatik untuk menonaktifkan radikal bebas yaitu melalui kerja

superoksida dismutase (SOD), glutation (GSH) peroksidase, katalase,

dan antioksidan (Robbins et al., 2004).

SOD terdapat dalam sitosol dan mitokondria. Enzim ini dapat

mengkonversi 2 molekul superoksida menjadi hidrogen peroksida dan

oksigen. Dismutasi anion superoksida menjadi hidrogen peroksida dan

oksigen ini sering disebut sebagai pertahanan pertama terhadap stres


commit to user

19

oksidatif karena superoksida merupakan inisiator kuat berbagai reaksi

berantai. Glutation (GSH) peroksidase akan melindungi sel supaya

tidak mengalami jejas dengan mengkatalisis perusakan radikal bebas

(2OH- + 2GSH → 2H2O + GSSG [glutation homodimer]). Katalase

terdapat dalam peroksisom dan akan mendegradasi hydrogen peroksida

(2H2O2 → O2 + 2H2O). Antioksidan endogen atau eksogen (misal,

vitamin E, A, C, serta β-karoten) juga dapat menghambat pembentukan

radikal bebas atau memulung radikal bebas ketika selesai dibentuk

(Robbins et al., 2004).

5. Antioksidan

Terdapat dua bentuk reaksi kimia, oksiodasi dan reduksi.

Oksidasi adalah pelepasan elektron sedangkan pada reduksi terjadi

penambahan jumlah elektron. Oksidasi dan reduksi selalu berpasangan,

ketika salah satu atom atau molekul teroksidasi maka yang lain akan

tereduksi. Molekul yang sangat reaktif seperti radikal bebas, dapat

mengoksidasi molekul yang stabil dan merubahnya menjadi bagian

yang tidak stabil (McDermott, 2000).

Cara kerja senyawa antioksidan adalah bereaksi dengan radikal

bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif yang relatif stabil.

Antioksidan menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi

kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas, dan menghambat

terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas (McDermott,

2000).


commit to user

20

Tubuh manusia menghasilkan senyawa antioksidan, tetapi

jumlahnya sering kali tidak cukup untuk menetralkan radikal bebas

yang masuk ke dalam. Glutation adalah salah satu antioksidan alami

yang dibentuk oleh tubuh. Glutation memiliki peran penting dalam

fungsi biologis, termasuk transport membrane, detoksifikasi, dan

perlindungan sel dari radikal bebas (Adams, 2009).

Berdasarkan cara kerjanya dapat digolongkan menjadi 3

kelompok yaitu: antioksidan primer, sekunder, dan tersier. Antioksidan

primer ialah golongan antioksidan yang berfungsi untuk mencegah

pembentukan radikal bebas, misalnya transferin, feritin, dan albumin.

Antioksidan sekunder ialah golongan antioksidan yang berfungsi

menangkap radikal bebas dan menghentikan pembentukan radikal

bebas, misalnya Superoxide Dismutase (SOD), Glutation, Vitamin C,

Vitamin E, β-karotene. Antioksidan tersier adalah golongan antioksidan

yang berfungsi memperbaiki jaringan tubuh yang rusak oleh radikal

bebas (Winarno, 1995).

Secara alami beberapa jenis tumbuhan merupakan sumber

antioksidan, hal ini dapat ditemukan pada beberapa jenis sayuran, buah-

buahan segar, beberapa jenis tumbuhan dan rempah-rempah (Praptiwi

et al., 2006). Jenis antioksidan yang dapat ditemukan pada tumbuhan

antara lain adalah asam lemak omega-3, beta karoten, alfa tokoferol,

asam askorbat dan glutation (Simopoulos, 2004).


commit to user

21

6. Daun Katuk sebagai Antioksidan

Kandungan daun katuk yang dapat digunakan sebagai

antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid termasuk metabolit sekunder

tumbuhan yang merupakan golongan terbesar senyawa fenol alam.

Flavonoid merupakan antioksidan yang memberikan perlindungan

terhadap agen oksidatif dan radikal bebas. Sebagai antioksidan,

flavonoid akan menangkap radikal bebas dengan melepaskan atom

hydrogen dari gugus hidroksilnya. Pemberian atom hydrogen ini

menyebabkan radikal bebas menjadi stabil dan berhenti melakukan

gerakan radikal, sehingga tidak merusak lipida, protein dan DNA

(Nurwati, 2007). Flavonoid juga akan melindungi sel melalui

mekanisme yang lain, yaitu dengan meningkatkan kadar glutation

(WHFoods, 2011).

Gambar 2. Struktur Flavonoid (WHFoods, 2011).

Vitamin C dalam daun katuk mampu berperan sebagai

antioksidan pemecah rantai yang hidrofilik. Vitamin C juga merupakan

prooksidan yaitu zat yang selain berfungsi sebagai antioksidan juga

sebagai oksidan yang kurang reaktif. Asam askorbatnya sendiri setelah

teroksidasi akan menjadi radikal dehidroaskorbat dan kemudian akan

menjadi asam askorbat kembali setelah mendapat ion hidrogen dari


commit to user

22

NADH atau pembawa hydrogen lainnya. Vitamin C sangat efektif

sebagai antioksidan pada konsentrasi tinggi. Pemberian dosis tinggi

vitamin C akan mengurangi lipid peroksida sebab vitamin C akan

mereduksi ion ferro menjadi ion ferri, sedangkan rasio ion ferro/ion

ferri berpengaruh pada proses terjadinya lipid peroksidasi (Nurwati,

2007).

Gambar 3. Struktur Vitamin C (Sulistyowati, 2006).

Vitamin A berfungsi untuk penjagaan integritas sel epithelial

membran mukosa gastrointestinal, kornea, pernapasan, saluran

genitourinaria, dan juga integritas kulit. Kandungan vitamin A yang

tinggi dalam daun katuk ini dapat mempertahankan integritas seluler

dan mengurangi kerusakan sel (Kee, 2007).


commit to user

23

B. Kerangka Pemikiran

Ikatan kovalen NAPQI dengan

makromolekul hepar

Ekstrak Daun Katuk

Parasetamol dosis berlebih

Mengandung antioksidan : 1. Flavonoid 2. Vitamin C 3. Vitamin A

Meningkatkan

NAPQI (elektrofilik)

Deplesi glutation

Keterangan:

: memacu

: menghambat

Bioaktivasi sitokrom P450

Kerusakan makromolekul

Lipid peroxide

Reactive Oxygen Species (ROS)

Stres oksidatif

Kerusakan sel hepar Nekrosis sel hepar

Peningkatan Total Antioxidant Status

(TAS)

Variabel lain yang tidak dapat dikendalikan: a. Obat-obatan b. Infeksi mikroorganisme c. Virus


commit to user

24

C. Hipotesis

1. Pemberian ekstrak daun katuk dapat digunakan sebagai hepatoprotektor

terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar

parasetamol.

2. Peningkatan dosis ekstrak daun katuk dapat meningkatkan efek


dipapar parasetamol.


commit to user

25

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorik. Penelitian

ini merupakan langkah awal dalam penelitian sebelum hasilnya diterapkan

pada manusia (trial clinic). Peneliti memberikan perlakuan terhadap sampel

yang berupa hewan coba di laboratorium. (Taufiqqurohman, 2003).

B. Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas

Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

C. Subjek Penelitian

Subjek penelitian adalah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur

Wistar berumur 2 - 3 bulan dengan berat ± 200 gr. Tikus putih akan dibagi ke

dalam empat kelompok percobaan. Jumlah subjek tiap kelompok dihitung

dengan rumus Federer:

(k-1) (n-1) > 15

(4-1) (n-1) > 15

3 (n-1) > 15

3n > 15 + 3

n > 6


commit to user

26

Keterangan:

k : jumlah kelompok

n : jumlah sampel tiap kelompok (Purawisastra, 2001)

Dari hasil perhitungan didapat jumlah subjek untuk masing-masing

kelompok adalah 7 ekor tikus putih.

D. Teknik Sampling

Pengambilan sampel hewan uji dilakukan dengan non probability

incidental sampling, sedangkan pembagian subjek ke dalam kelompok

menggunakan randomisasi.

E. Desain Penelitian

Rancangan penelitian ini adalah the posttest only control group design

(Taufiqqurohman, 2003).

KK : (-) O0

KP 1: (X 1) O1

KP 2: (X 2) O2

KP 3 : (X 3) O3

Keterangan :

KK : (-) = Kelompok kontrol tanpa diberi ekstrak daun katuk maupun

parasetamol.

KP 1:(X1) = Kelompok perlakuan 1 yang diberi parasetamol tanpa diberi

ekstrak daun katuk.

Tikus Putih 28

ekor

Bandingkan dengan uji

statistik


commit to user

27

KP 2:(X2) = Kelompok perlakuan 2 yang diberi parasetamol dan ekstrak

daun katuk dosis I.

KP 3:(X3) = Kelompok perlakuan 3 yang diberi parasetamol dan ekstrak

daun katuk dosis II.

O0 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok kontrol yang mengalami

kerusakan.

O1 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok perlakuan 1 yang

mengalami kerusakan.





F. Identifikasi Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas: pemberian ekstrak daun katuk

2. Variabel Terikat: kerusakan histologis sel hepar tikus putih

3. Variabel Luar:

a. Dapat dikendalikan

1) Variasi genetik

2) Jenis kelamin

3) Usia

4) Suhu udara

5) Berat badan


commit to user

28

6) Jenis makanan dan minuman

b. Tidak dapat dikendalikan

1) Keadaan awal hepar

2) Kondisi psikologis

G. Definisi Operasional Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas: Pemberian ekstrak daun katuk.

Pada penelitian ini yang menjadi variabel bebas yaitu pemberian

ekstrak daun katuk. Ekstrak daun katuk yang dipakai dalam penelitian ini

diperoleh dari LPPT UGM. Pembuatan ekstrak menggunakan metode

perkolasi dengan pelarut ethanol. Ekstrak daun katuk ini diberikan

peroral sekali dalam sehari menggunakan sonde lambung. Dalam

penelitian ini digunakan dua dosis ekstrak daun katuk, yakni 16,2 mg/200

gram BB tikus putih dan 32,4 mg/200 gram BB tikus putih dalam 1 hari.

Ekstrak daun katuk ini diberikan selama 13 hari. Skala variabel ekstrak

daun katuk merupakan skala ordinal.

2. Variabel Terikat: kerusakan histologis sel hepar tikus putih.

Pada penelitian ini yang menjadi variabel terikat yaitu kerusakan

histologis sel hepar. Yang dimaksud dengan kerusakan histologis sel

hepar pada penelitian ini adalah hasil dari kerusakan yang ditimbulkan

oleh radikal bebas parasetamol. Kerusakan histologis sel hepar dapat

dilihat dari perubahan inti sel hepar dengan ciri-ciri piknotik, karioreksis,

dan kariolisis.


commit to user

29

Jumlah inti sel yang mengalami kerusakan dihitung dari 100 sel

hepar. Pengamatan dilakukan pada dua daerah sentrilobuler kemudian

diambil reratanya. Skala pengukuran adalah skala rasio.

3. Variabel Luar

a. Variabel luar yang dapat dikendalikan. Variabel ini dapat

dikendalikan dengan homogenisasi.

1) Variasi genetik.

Jenis hewan coba yang digunakan adalah tikus putih (Rattus

norvegicus).

2) Jenis kelamin.

Jenis kelamin tikus putih yang digunakan adalah jantan.

3) Umur.

Umur tikus putih yang digunakan adalah 3 bulan

4) Suhu udara.

Hewan percobaan diletakkan dalam ruangan dengan suhu udara

berkisar antara 25°C - 28°C

5) Berat badan.

Berat badan hewan percobaan ± 200 gram.

6) Jenis makanan dan minuman.

Makanan yang diberikan berupa pelet dan minuman dari air.


commit to user

30

b. Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan.

1) Keadaan awal hepar tikus putih tidak diperiksa sebelumnya

sehingga ada kemungkinan terdapat tikus putih yang sudah

mengalami kerusakan hepar.

2) Kondisi psikologis tikus putih dipengaruhi oleh lingkungan

sekitar. Lingkungan yang terlalu gaduh, pemberian perlakuan

yang berulang-ulang, dan perkelahian antar tikus putih dapat

mempengaruhi kondisi psikologis tikus putih.

H. Instrumentasi dan Bahan Penelitian

1. Instrumentasi penelitian

a. Kandang hewan percobaan 4 buah, masing-masing untuk 7 ekor

tikus putih.

b. Timbangan duduk.

c. Sonde lambung dengan ketelitian 0,1 ml.

d. Alat bedah hewan percobaan (gunting, pinset, jarum, dan meja lilin).

e. Alat untuk membuat preparat histologi (mikrotom, water bath).

f. Mikroskop cahaya.

g. Object glass.

h. Gelas beker.

i. Kamera digital.


commit to user

31

2. Bahan penelitian

a. Daun katuk (Sauropus androgynus) sebanyak 1000 gram didapatkan

dari LPPT UGM.

b. Parasetamol tablet, sediaan 500 mg didapat dari apotek.

c. Makanan hewan percobaan (pelet) didapatkan dari Laboratorium

Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret dan air

keran dari PDAM.

d. CMC 0,5%.

e. Bahan pembuat preparat histologis (alkohol, xylol, pengecatan

Haematoxylin Eosin/HE) didapatkan dari Laboratorium Histologi

Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.

f. Minyak imersi.

I. Cara Kerja

1. Langkah I: Persiapan Hewan Uji.

Sampel tikus putih dibagi menjadi 4 kelompok masing-masing 7

ekor secara acak (random sederhana). Sampel diadaptasikan di

Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret

selama 7 hari dengan diberi makan pelet dan minum air.

2. Langkah II: Pemberian Ekstrak Daun Katuk.

Pada penelitian yang pernah dilakukan dengan menggunakan

daun katuk sebagai pelancar ASI, disebutkan bahwa konsumsi daun

katuk yang dipakai adalah 900 mg (Sa’roni, 2004). Dosis ini lalu


commit to user

32

dikonversikan pada tikus putih. Berdasarkan tabel konversi manusia

dengan berat badan 70 kg, faktor konversi untuk tikus putih sebesar

0,018. Dosis yang akan diberikan pada tikus putih sebanyak 0,018 x 900

mg = 16,2 mg/200 gram BB. Ekstrak daun katuk ini diberikan dalam 1

ml larutan ekstrak. Ekstrak daun katuk didapat dari LPPT UGM

sebanyak 30 gram dan dilarutkan dalam pelarut Carboxymethyl Cellulose

(CMC) 0,5 %. Jumlah pelarut yang digunakan agar didapatkan 16,2 mg

ekstrak daun katuk per 1 ml adalah:邸3333ⱈ箸囊淖,㾘ⱈ箸 ꢸ 1桂癸实1851,85桂癸史1852桂癸. Dosis yang dipakai dalam penelitian ini ada dua, dengan dosis

kedua adalah dua kali dosis pertama. Dosis II : 2 x 16,2 mg/200 gram BB

= 32,4 mg/200 gram BB tikus putih/hari. Tikus putih yang akan diberi

perlakuan dipuasakan dulu selama 5 jam untuk mengosongkan lambung.

3. Langkah III: Pemberian Parasetamol.

Parasetamol adalah obat yang dapat mengakibatkan

hepatotoksisitas. Dosis toksik parasetamol pada manusia adalah 10 - 15

gram (Wilmana, 2007). Dosis toksik yang akan dipakai pada penelitian

ini adalah 15 gram, maka dosis parasetamol untuk tikus putih

berdasarkan tabel konversi manusia dengan berat badan 70 kg dan faktor

konversi tikus putih 0,018 adalah 0,018 x 15 gram = 0,27 gram/200 gram

BB tikus putih (Azizi, 2009).

Suspensi parasetamol dibuat dengan cara melarutkan parasetamol

ke dalam CMC 0,5 %. Suspensi parasetamol yang dibutuhkan sebanyak


commit to user

33

50 ml, maka parasetamol yang dibutuhkan sebanyak: 闹3ⱈ评ꢸ3,㾘呢箸破频ⱈ囊ⱈ评实1h,5龟辊逛桂. Jadi dalam tiap 1 ml suspensi terdapat 0,27 gram

parasetamol.

4. Langkah IV: Perlakuan Hewan Uji

Hewan uji dibagi dalam empat kelompok dan diberi perlakuan

berbeda dengan langkah sebagai berikut:

a. Kelompok kontrol (KK), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang diberi

diet standar, yaitu pelet dan air selama 13 hari

b. Kelompok perlakuan 1 (KP 1), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang

diberi diet standar, yaitu pelet dan air selama 13 hari. Pada hari ke 11

– 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200

gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 %.

c. Kelompok perlakuan 2 (KP 2), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang

diberi diet standar, yaitu pelet dan air serta ekstrak daun katuk per

oral dengan dosis 16,2 mg/200 gram BB selama 13 hari. Pada hari ke

11 – 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200

gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 % satu jam setelah

pemberian ekstrak daun katuk.

d. Kelompok perlakuan 3 (KP 3), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang

diberi diet standar, yaitu pellet dan air serta ekstrak daun katuk per

oral dengan dosis 32,4 mg/200 gram BB selama 13 hari. Pada hari ke

11 – 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200


commit to user

34

gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 % satu jam setelah

pemberian ekstrak daun katuk.

5. Langkah V: Pembuatan Preparat Histologis

Pada hari ke 14 setelah semua perlakuan selesai diberikan, semua

hewan percobaan dikorbankan dengan metode cervical dislocation. Dari

28 hewan coba dibuat 4 irisan untuk masing-masing hewan coba. Organ

hepar bagian dextra diambil untuk selanjutnya dibuat preparat

histopatologi dengan metode block paraffin dengan pengecatan

Haematoxilin Eosin. Pengambilan hepar bagian dextra ini ditujukan

untuk homogenitas sampel. Bagian dextra memiliki penampang yang

lebih luas dibanding bagian sinistra sehingga diharapkan dalam

pengambilan sampel lebih mudah dan lebih representatif. Tebal tiap

irisan ± 3 - 8 µm dengan jarak irisan satu dengan yang lain ± 7 irisan. Hal

ini dilakukan pada hari ke 14 agar efek perlakuan tampak nyata.

6. Langkah VI: Pengamatan Sediaan Histologis Preparat Hepar

Empat irisan dari masing-masing hepar diambil dua secara acak

untuk diamati. Pengamatan preparat jaringan hepar dilakukan dengan

perbesaran 100 kali untuk mengamati seluruh lapang pandang. Daerah

yang akan diamati yaitu daerah sentrilobuler. Kerusakan yang

ditimbulkan parasetamol banyak terjadi di daerah tersebut karena banyak

terdapat sitokrom P450 di sekitarnya. Pemilihan daerah sentrilobuler

pada lobulus hepar dilakukan secara acak. Kemudian perbesaran

mikroskop ditingkatkan menjadi pembesaran 1000 kali sehingga inti sel


commit to user

35

hepar yang akan diamati tampak dengan jelas. Kemudian dihitung jumlah

inti sel yang mengalami kerusakan (piknosis, karioreksis,dan kariolisis)

dari 100 sel hepar. Pada satu irisan dihitung satu daerah sentrilobuler.

Penghitungan dilanjutkan untuk irisan yang kedua dengan cara yang

sama.


commit to user

36

Skema Rancangan Penelitian

Sampel : 28 ekor tikus putih

Kelompok Kontrol

Kelompok Perlakuan 2



Dipuasakan selama ± 5 jam setiap hari selama 13 hari berturut-turut

CMC 0,5% sebanyak 2 ml Ekstrak daun katuk 16,2

mg/200 gr BB

Ekstrak daun katuk 32,4

mg/200 gr BB

Parasetamol dosis toksik 0,27 gr/200 gr BB

Adaptasi sampel selama 7 hari, kemudian dibagi secara random menjadi 4 kelompok

Pada hari ke-14 dibuat preparat hepar semua sampel untuk diamati

Uji statistik hasil pengamatan dengan ANOVA dilanjutkan Post Hoc Test

CMC 0,5 %

1 jam setelah perlakuan pada hari ke 11, 12, dan 13


commit to user

37

J. Teknik Analisis Data Statistik

Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan Uji One Way

Analysis of Variant (ANOVA). Jika terdapat perbedaan yang bermakna maka

dilanjutkan dengan Post Hoc Test. Derajat kemaknaan yang digunakan adalah

α = 0,05 (Riwidikdo, 2007).


commit to user

38

BAB IV

HASIL PENELITIAN

A. Data Hasil Penelitian

Penelitian ini menggunakan 28 ekor tikus putih (Rattus norvegicus),

galur Wistar, jenis kelamin jantan, usia 6 - 8 minggu, berat badan ± 150

gram, dan sehat. Tikus-tikus tersebut dibagi menjadi empat kelompok.

Kelompok I adalah kelompok kontrol, kelompok II adalah kelompok

perlakuan 1 yang diberi parasetamol, kelompok III adalah kelompok

perlakuan 2 yang diberi ekstrak daun katuk dosis 16,2 mg/200 gram BB dan

parasetamol, dan kelompok IV adalah kelompok perlakuan 3 yang diberi

ekstrak daun katuk dosis 32,4 mg/200 gram BB dan parasetamol. Jumlah

tikus masing-masing kelompok adalah 7 ekor.

Sebelum dilakukan pemberian perlakuan, keempat kelompok tikus

diadaptasikan selama 1 minggu dan diukur berat badannya. Rerata berat

badan tikus adalah 150 gram dan tidak didapatkan perbedaan rerata berat

badan secara bermakna sehingga berat badan dari hewan coba homogen dan

layak diberikan perlakuan. Pada hari ke-14, keempat kelompok tikus

diambil heparnya dan dibuat preparat.

Hasil pengamatan inti sel hepar normal dan yang mengalami

nekrosis (piknotik, karioreksis, dan kariolisis) untuk masing-masing

kelompok perlakuan dapat dilihat pada tabel 1.


commit to user

39

Tabel 1. Hasil Pengamatan Inti Sel Hepar Tikus Putih Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan

Kelompok Inti nekrosis

Rerata Standar Deviasi

Kelompok Kontrol

Kelompok Perlakuan I

Kelompok Perlakuan II

Kelompok Perlakuan III

22,64

52,57

35,29

12,86

6,721

5,110

4,762

4,655

Sumber: Data primer, 2011

Data pada tabel 1 menunjukkan bahwa pada kelompok kontrol,

rerata jumlah inti sel hepar yang nekrosis adalah 22,64 ± 6,721. Kelompok

perlakuan 1 yang hanya diberikan parasetamol dengan dosis toksik memiliki

jumlah rerata inti sel nekrosis yang paling besar. Sedangkan pada KP2 dan

KP3, selain diberikan parasetamol juga diberikan ekstrak daun katuk dengan

dosis bertingkat, sehingga jumlah rerata inti sel nekrosis pun berkurang.

Dari hasil yang didapat maka dapat dibuat grafik yang

menggambarkan rerata kerusakan sel hepar tikus putih sebagai berikut:

Sumber: Data Primer 2011

Gambar 4. Diagram Batang Rerata Jumlah Sel Hepar Tikus Putih yang Mengalami Nekrosis.

0

10

20

30

40

50

60

KelompokKontrol

KelompokPerlakuan 1

KelompokPerlakuan 2

KelompokPerlakuan 3

Jumlah sel hepar yang mengalami nekrosis


commit to user

40

B. Analisis Data

Analisis data hasil penelitian ini dilakukan dengan menggunakan

bantuan program SPSS for Windows versi 17.0.

1. Uji normalitas

Uji normalitas terhadap data primer hasil penelitian

dilakukan untuk mengetahui sebaran data penelitian. Persyaratan uji

One Way ANOVA adalah adanya distribusi data yang normal. Uji

normalitas dilakukan dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk karena

jumlah sampel pada penelitian ini kurang dari 50. Hasil uji Shapiro-

Wilk dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Rangkuman Hasil Analisis Uji Shapiro-Wilk Jumlah Sel Hepar yang Nekrosis pada Empat Kelompok Sampel

Statistik df p

Kelompok kontrol

Kelompok perlakuan 1



0,968

0,909

0,963

0,909

14

14

14

14

0,853

0,152

0,778

0,152

Sumber: Hasil uji distribusi normal data penelitian, 2011 (Lampiran 4)

Dari masing-masing kelompok sampel didapatkan nilai

kemaknaan p > 0,05 yang berarti setiap kelompok sampel memiliki

distribusi data normal.

2. Uji One Way ANOVA

Dari keempat data primer di atas dilakukan uji One Way

ANOVA untuk mengetahui adanya perbedaan jumlah sel hepar yang


commit to user

41

nekrosis yang bermakna pada keempat kelompok. Hasil perhitungan

statistik uji One Way ANOVA disajikan dalam tabel 3.

Tabel 3. Rangkuman Hasil Analisis Uji One Way ANOVA Jumlah Sel Hepar yang Nekrosis pada Keempat Kelompok Sampel

Df F p

Antar kelompok

Dalam satu kelompok

Total

3

52

55

142,479 0,000

Sumber: Hasil analisis uji One Way ANOVA, 2011 (Lampiran 4)

Hasil analisis uji One Way ANOVA didapatkan hasil nilai

kemaknaan p < 0,05 (p = 0,000) sehingga dapat disimpulkan terdapat

perbedaan yang bermakna di antara jumlah sel hepar yang nekrosis

pada empat kelompok tikus putih.

Pada perangkat statistik One Way ANOVA dengan

menggunakan program SPSS, di dalamnya terdapat Uji Homogenitas

Varian yang menunjukkan nilai p > 0,05 (lampiran 4). Hasil ini

menunjukkan bahwa varian data homogen, sehingga uji Post Hoc

Test yang dipilih untuk mengetahui letak perbedaan antara empat

kelompok tikus putih adalah uji Least Significant Difference (LSD).

3. Uji LSD

Perhitungan statistik dengan uji LSD dengan derajat

kemaknaan α = 0,05 diperoleh hasil nilai p < 0,05 untuk semua

perbandingan dua kelompok tikus putih. Dengan demikian Ho

ditolak (ada perbedaan bermakna antara dua kelompok sampel yang

dibandingkan).


commit to user

42

Tabel 4. Rangkuman Hasil Uji LSD Jumlah Sel Hepar yang Mengalami Nekrosis dari Keempat Kelompok Sampel

Kelompok pembanding Kelompok yang

dibandingkan

Nilai p

Kelompok kontrol

Kelompok kontrol

Kelompok kontrol










0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

0,000

Sumber: Hasil uji LSD data penelitian, 2011 (Lampiran 4)


commit to user

43

BAB V

PEMBAHASAN

Sebuah sel, sekelompok sel, atau jaringan disebut nekrotik bila pada

pejamu yang hidup sel atau jaringan tersebut diketahui mati. Nekrosis merupakan

kematian sel lokal (Price dan Wilson, 2006). Nekrosis juga dapat diartikan

sebagai perubahan morfologi sebagai akibat tindakan degenerasi progresif oleh

enzim-enzim pada sel yang berjejas lethal (Robbins, 2004).

Umumnya walaupun perubahan lisis yang terjadi dalam jaringan nekrotik

dapat melibatkan sitoplasma sel, namun perubahan-perubahan paling jelas

bermanifestasi pada inti menunjukkan kematian sel. Biasanya inti sel yang mati

akan menyusut, memiliki batas yang tidak teratur dan berwarna gelap dengan zat

warna yang biasanya digunakan oleh para ahli patologi. Proses ini dinamakan

piknosis, dan intinya disebut piknotik. Kemungkinan lain, inti dapat hancur, dan

meninggalkan fragmen-fragmen zat kromatin yang tersebar di dalam sel. Proses

ini disebut karioreksis. Akhirnya pada keadaan tertentu, inti sel yang mati

kehilangan kemampuan untuk menyerap zat warna lagi dan benar-benar hilang,

proses ini disebut kariolisis (Price dan Wilson, 2006).

Penelitian tentang pengaruh ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor

dilakukan untuk menilai sejauh mana efek perlindungan daun katuk terhadap

kematian sel hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. Penelitian ini

menggunakan 28 ekor tikus putih jantan yang dibagi dalam empat kelompok yaitu

kelompok kontrol, kelompok perlakuan 1, kelompok perlakuan 2, dan kelompok


commit to user

44

perlakuan 3. Kelompok kontrol merupakan kelompok yang diberi diet standar.

Kelompok perlakuan 1 merupakan kelompok yang diberi diet standar dan

parasetamol 0,27 gram/200 gram BB tikus putih pada hari ke-11, 12, dan 13.

Kelompok perlakuan 2 merupakan kelompok yang diberi ekstrak daun katuk dosis

16,2 mg/200 gram BB selama 13 hari dan parasetamol 0,27 gram/200 gram BB

pada hari ke-11, 12, dan 13 dengan interval waktu 1 jam. Kelompok perlakuan 3

merupakan kelompok yang diberi ekstrak daun katuk dosis 32,4 gram/200 gram

BB selama 13 hari dan parasetamol dengan dosis dan waktu pemberian yang sama

dengan kelompok perlakuan 2.

Hasil penelitian menunjukkan data jumlah kematian sel hepar. Data

keempat kelompok sampel diuji distribusi normalnya dengan menggunakan uji

Shapiro-Wilk. Masing-masing kelompok sel menghasilkan nilai kemaknaan p >

0,05 yang berarti distribusi data normal. Data yang terdistribusi normal

merupakan syarat bagi suatu data yang akan diolah dengan uji One Way ANOVA,

selain skala ukur interval atau rasio.

Data hasil penghitungan dianalisis dengan menggunakan uji One Way

ANOVA. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang

bermakna dalam empat kelompok perlakuan (p < 0,05). Data selanjutnya diuji

dengan uji Post Hoc untuk mengetahui letak perbedaan di antara masing-masing

kelompok. Uji homogenitas varians diperoleh hasil nilai p > 0,05 atau data varian

homogen, maka jenis uji Post Hoc yang dipilih adalah uji LSD dengan derajat

kemaknaan α = 0,05. Dari keenam perbandingan kelompok sampel, diperoleh


commit to user

45

nilai kemaknaan p < 0,05 yang berarti masing-masing dari keenam perbandingan

kelompok sampel memiliki perbedaan yang bermakna.

Perbedaan yang bermakna dari kelompok kontrol dan kelompok perlakuan

1 menunjukkan adanya kerusakan sel hepar akibat pemberian parasetamol.

Kerusakan inti sel hepar pada kelompok perlakuan 1 merupakan proses nekrosis

yang disebabkan oleh paparan parasetamol dengan dosis toksik. Pada dosis toksis

terjadi pembentukan NAPQI yang berlebihan, sementara konsentrasi glutation di

sel sentrilobular sangatlah rendah, sehingga glutation peroksidase terhambat dan

terbentuknya superoksida, suatu Radical Oxygen Species (ROS) yang dapat

menyebabkan nekrosisnya sel hepar (James et al., 2003).

Hasil uji LSD antara kelompok perlakuan 1 dan kelompok perlakuan 2

terdapat perbedaan yang bermakna. Perbedaan ini disebabkan karena pemberian

ekstrak daun katuk dengan dosis 16,2 mg/200 gram BB tikus putih selama 13 hari

berturut-turut dapat mengurangi kerusakan hepar akibat pemberian parasetamol.

Daun katuk mengandung flavonoid yang cukup tinggi, 831,70 mg/100 gram

(Zuhra, 2008). Antioksidan flavonoid yang terkandung dalam ekstrak daun katuk

terbukti dapat mengurangi jumlah kerusakan sel hepar. Menurut penelitian Eti

Yerizel (1998), terdapat efek hepatoprotektor yang nyata dari senyawa flavonoid.

Beberapa ekstrak yang mengandung senyawa flavonoid dan terbukti dapat

digunakan sebagai hepatoprotektor antara lain madu (Wiryawan, 2008), wortel

(Nanik, 2008), dan jinten hitam (Purnomo, 2008)

Hasil uji LSD yang bermakna antara kelompok perlakuan 2 dan 3

menunjukkan adanya perbaikan gambaran histologis di mana kerusakan yang


commit to user

46

terjadi pada kelompok perlakuan 3 lebih sedikit jika dibandingkan dengan

kelompok perlakuan 2. Hal ini menunjukkan pemberian besar dosis ekstrak daun

katuk berbanding lurus dengan efek hepatoprotektornya.

Hasil pengamatan sel hepar pada kelompok perlakuan 3 memperlihatkan

hasil yang lebih baik dari kelompok kontrol. Ada dua kemungkinan dari hasil

pengamatan ini, yaitu adanya efek perbaikan dari ekstrak daun katuk pada sel

hepar atau adanya kerusakan inti sel pada kelompok kontrol pada saat dilakukan

penelitian. Kerusakan inti sel pada kelompok kontrol dapat disebabkan oleh

proses apoptosis dan variabel luar yang tidak dapat dikendalikan. Keadaan awal

hati dari tikus putih sebelum dilakukan perlakuan tidak dapat diketahui

kondisinya. Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan antara lain keadaan hepar

tikus putih sudah mengalami kerusakan sebelum dilakukan perlakuan, adanya

kerusakan sel hepar selama dilakukan penelitian, atau faktor psikologis yang juga

dapat mempengaruhi kesehatan hepar tikus putih tersebut.

Dari hasil analisis data yang dilakukan pada penelitian ini dapat

disimpulkan bahwa pemberian ekstrak daun katuk dapat mencegah kerusakan sel

hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. Pemberian ekstrak daun katuk dengan

dosis bertingkat juga terbukti mampu mengurangi kerusakan sel hepar tikus putih.

Penelitian selanjutnya diharapkan mampu menunjukkan dosis efektif ekstrak daun

katuk yang dapat mencegah kerusakan sel hepar.


commit to user

47

BAB VI

SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

1. Pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) dengan dosis

16,2 mg/200 gram BB tikus putih dan dosis 32,4 mg/200 gram BB

tikus putih selama 13 hari berturut-turut mempunyai efek proteksi

terhadap kerusakan sel hepar tikus putih akibat paparan parasetamol

dosis 0,27 gram/200 gram BB tikus putih yang diberikan 3 hari

berturut-turut.

2. Peningkatan dosis ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) dari

dosis I sebesar 16,2 mg/200 gram BB tikus putih menjadi dosis II

sebesar 32,4 mg/200 gram BB tikus putih dapat meningkatkan efek

proteksi terhadap kerusakan sel hepar tikus putih yang dipapar

parasetamol.

B. Saran

1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan dosis dan lama

pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) yang lebih

bervariasi sehingga dapat diketahui dosis efektif dan lama pemberian

yang optimal untuk mencegah atau mengurangi kerusakan sel hepar

tikus putih yang dipapar parasetamol.


commit to user

48

2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui apakah ada

efek perbaikan hepar oleh ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus).

3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efek samping

ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) pada penggunaan jangka

panjang.

Documents

SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar .../Pengaruh...Hasil Penelitian: Pada penelitian ini diperoleh jumlah rerata inti sel nekrosis pada KK sebesar 22,64 ± 6,721, KP