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Citogenetica e biologia molecolare dei tumori mammari: implicazioni cliniche
V. Martin28 giugno 2011
… la storia di HER2
HER2: Human Epidermal Receptor
� alias c-erb, ERBB2, HER-2/neu
� recettore transmembrana di tipo tirosin-kinasico
� appartiene alla famiglia dei recettori EGF
� induce una cascata di segnali responsabili di crescita e proliferazione cellulare
� il gene che lo codifica mappa in 17q12
HER2 e carcinoma mammario
� HER2 è deregolato in circa il 25% dei carcinomi mammari (HER2+)
� marcatore prognostico� malattia aggressiva� recidive precoci� minore tempo di sopravvivenza
libero da malattia
� marcatore predittivo� HER2 è il bersaglio di un farmaco biologico
HER2 e trastuzumab
� alias Herceptin, Erceptina
� anticorpo ricombinante umanizzato
� agisce identificando HER2 e bloccandolo
� impedisce la dimerizzazione tra recettori
� inibisce la cascata di segnali a valle
� attiva il sistema immunitario
� si somministra per infusione in vena
� il trattamento è attuato in day hospital
(sei infusioni)
trastuzumab e carcinoma mammario
� approvato nel 2000 per l’uso in pazienti affette da carcinoma avanzato/metastaticoHER2+
� approvato nel 2006 per l’uso in pazienti affette da tumori HER2+ in stadio precoce� sia in monoterapia che in combinazione o dopo chemioterapia standard
� Vantaggi:� riduce il rischio di recidive� aumenta le percentuali di risposta� aumenta la sopravvivenza libera da malattia� migliora la sopravvivenza globale� migliora la qualità della vita
� Effetti collaterali (minori quando usato in monoterapia):� problemi cardiaci� dolori in sede malattia� astenia, anoressia� cefalea
analisi di HER2
� ANALISI DELLA PROTEINA → IHC
� ANALISI DEL GENE → FISH
HER2 IHC
clone CB11 (Biosystems, Novocastra)
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HER2 IHC
VANTAGGI
� facile da eseguire� veloce� interpretazione veloce al microscopio� correlazione con la morfologia� costa poco� buona correlazione con risposta a
Herceptin
SVANTAGGI
� numerosi anticorpi con sensibilità e specificità differenti
� risultato dipende da fattori preanalitici� interpretazione soggettiva con zona
grigia (score 2+)
HER2 FISH
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interpretazione FISH
R =numero di geni (segnali rossi)
numero di cromosomi (segnali verdi)
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HER2 FISH
VANTAGGI
� molto specifica� valutazione standardizzata� valore soglia definito� poco influenzata da fattori preanalitici� buona correlazione con risposta a
Herceptin
SVANTAGGI
� non disponibile in tutti i laboratori� tecnicamente difficile� necessita di tempo� valutazione con microscopio a
fluorescenza� cara
correlazione gene-proteina
� L’amplificazione genica di HER2 è
strettamente correlata
all’overespressione proteica
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selezione pazienti
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controllo di qualità - CQ
� standardizzazione delle procedure� standardizzazione dei criteri di lettura� accuratezza e riproducibilità
CQ esterni – UKNEQAS
� IHC- colorazione e autovalutazione
campione inviato dal NEQAS- colorazione e autovalutazione
campione ICP- invio di entrambi i campioni e delle
valutazioni al NEQAS- giudizio
� FISH- linee cellulari (non sezioni istologiche!) - Il vetrino non viene rispedito al
NEQAS x controllo metodo- viene assegnata una valutazione
(punteggio da 1 a 3) sulla base del valore di R
- es..
CQ interni - ICP
� dal 2004-2010� costruzione mensile di array di tessuto
� correlazione FISH e IHC
realizzazione TMA
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la nostra esperienza
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risultati HER2 IHC
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0 485 67%1+ 60 8%2+ 51 7%3+ 128 18%total 724 100%
total
IHC
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risultati HER2 FISH
558 77% 13 2% 153 21% 724 100%total
FISHnot amplified borderline amplified
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
non amplificato borderline amplificato
confronto IHC - FISH
0 471 97% 7 1% 7 1% 485 67%1+ 51 85% 1 2% 8 13% 60 8%2+ 33 65% 5 10% 13 25% 51 7%3+ 3 2% 0 0% 125 98% 128 18%total 558 77% 13 2% 153 21% 724 100%
total
IHC
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verifica delle discrepanze
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score 0 score 1+ score 2+ score 3+
controllo diagnosi
IHC controllo diagnosiscore 0 1% 0%score 1+ 13% 10%score 2+ 25% 25%score 3+ 98% 100%
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evidenza importante
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selezione pazienti in TICINO
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take home message
� L’uso di controlli di qualità interni per l’analisi di HER2 ha permesso di:� selezionare con accuratezza e riproducibilità le pazienti� disegnare un algoritmo ottimizzato sulla nostra realtà� individuare nuove pazienti che possono beneficiare di trattamenti con
trastuzumab