CITOGENETICA 3 W.ppt

8/17/2019 CITOGENETICA 3 W.ppt

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El CICLOEl CICLOCELULARCELULAR

Lic. T.M. Héctor HerreraLic. T.M. Héctor Herrera

ReynosoReynosoEsp. Citogenética ClínicaEsp. Citogenética Clínica


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El Ciclo Celular El Ciclo Celular El CC es un proceso ordenado y

repetitivo en el tiempo en elque la célula proliferante crecey se divide en dos células hijas.

Los acontecimientos másimportantes dentro del CC son

aquellos que tienen que ver con

la replicación del genoma y la

segregación de los genomas

replicados en las dos células

hijas formadas en la división,

las cuales reciben idénticainformación cromosómica .

.


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¿Qué es ciclo celular?¿Qué es ciclo celular?

Conjunto de evento que culmina con el

crecimiento de la célula y la división en dos

células hijas.

Este ciclo está compuesto por cuatro fases

!, ", # y $.

"in embargo algunas células están en el

estado %


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Interfase Mitosis

! " # $

& horas ' horas ( horas ! hora

Mitosis

)rofase $etafase *nafase +elofase

( min. ( min. ( min. !- min.

Duración del Ciclo Celular


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El Ciclo Celular El Ciclo Celular

PROCESOS

MOLECULARES

DURANTE ELCICLO CELULAR

Detención de lasíntesis de ARN.

Reducción de los nieles de

AMPc .Dis!inución de la síntesis"roteica #$%&'

(osforilación de las

)istonas#en es"ecial *+' durante la

condensación de

cro!atina


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¿Por qué se da el ciclo celular?¿Por qué se da el ciclo celular?

Eistencia de un /reloj molecular0 en las célulaseucariotas. Este determina cuando debe dividirse.

"u activación depende de se1ales etracelulares y por crecimiento de la célula.

El CC comien2a cuando los factores de crecimientose unen a la membrana de la célula.

3ormado por un conjunto de prote4nas nucleares,

que integra los mensajes estimuladores einhibidores5 si prevalece la cascada estimuladora, pone en marcha el programa de división celular. .


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,ENES RE,ULADORES DEL CICLO CELULAR ,ENES RE,ULADORES DEL CICLO CELULAR

Los -enes ue controlan el ciclo celular/ "ueden diidirse en dos

-randes -ru"os0

+.1 PROTONCO,ENES0

,enes ue codifican "roteínas ue re-ulan "ositia!ente el CC.

Actian la "roliferación celular/ "ara ue las c2lulas uiescentes"asen a la fase S 3 entren en diisión. ,enes ue codifican las"roteínas del SISTEMA DE CICLINAS 4 5UINASASDEPENDIENTES DE CICLINAS

6.1 ,ENES TUMORES SUPRESORES

.


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RE,ULACI7N DEL CICLO CELULAR

La progresión del CC esta regulada por la formación secuencial

y la activación e inactivación de un conjunto de moléculas. Estas

moléculas implican a las ciclinas y las quinasas dependientes de

ciclina 6C78s9.

Las ciclinas 6prote4nas que sólo se epresan en el ciclo celular9

activan a las C78s uniéndose a ellas. Las C78s, una ve2activadas, fosforilan a prote4nas implicadas en procesos del CC

celular 6s4ntesis de *7: y la mitosis9.

*demás de esta serie de reguladores positivos del CC 6C78s y

ciclinas9, eiste una familia de reguladores negativos denominados

inhibidores de las C78s 6C78;s9 que bloquean la actividad de

uno o varios complejos C78


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CICLINAS 4 5UINASAS DEPENDIENTES DE CICLINAS #CD8'CICLINAS 4 5UINASAS DEPENDIENTES DE CICLINAS #CD8'CICLINAS 4 5UINASAS DEPENDIENTES DE CICLINAS #CD8'CICLINAS 4 5UINASAS DEPENDIENTES DE CICLINAS #CD8'

= Las ciclinas 3 las uinasas de"endientes deciclinas #cd9' son el "roducto de "roto1

onco-enes 3 tra:a;an en asociación en lare-ulación "ositia del ciclo. Las cd9s actúanfosforilando serinas 3 treoninas "aradesencadenar "rocesos celulares. A ellas seunen las ciclinas "ara re-ular el "roceso coninterención de otros factores actiadores.

http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Cyclin-Cdk.JPGhttp://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:Cyclin-Cdk.JPG


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CICLINASCICLINAS

Son un -ru"o de "roteínas/ de $ 9Da. Tienen en co!?nuna secuencia de unos cien a!ino@cidos ue interaccionan conlas Cd9.

De acuerdo al !o!ento en ue act?an0

o Ciclinas ,+. >epresentadas principalmente por la Ciclina D. *ctúan alfinal del periodo ! y promueven el paso de ! a " 6 punto de restricción9.

o Ciclinas G 1 /S . "e activan al final de ! y comien2os de ". >epresentadas por la Ciclina E .

o Ciclinas S . *ctúan durante la fase " y son necesarias para iniciar lareplicación del 7:*. "e conoce la Ciclina A.

o Ciclinas !itóticas #M'. )romueven la mitosis. "e conoce la Ciclina .

Las ciclinas son "roteí nas de ida !u3 corta 3 se destru3en acontinuación de su unión a las Cd9.

CICLINASCICLINAS


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Ciclinas "on prote4nas sinteti2adas durante la interfase y destruidas al final de lamitosis de cada ciclo. *ct?an como reguladoras de la actividad en2imática

de las C78s y su concentración var4a a lo largo de las diferentes fases delCC.

"e han descrito diversos tipos de ciclinas@ *, A!BA(, C, 7!B7(, E, 3, ,, ;, 8, L!BL# y +!B+#.+odas ellas contienen un dominio relativamente

conservado responsable de su unión a las C78s.

http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Ciclinas_y_ciclo_celular.png


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Act?an cuando son actiadas "or las ciclinasfosforilando !ol2culas cruciales "ara la diisión celular.

La "ri!era identificada se deno!inó factor "ro!otor dela !itosis # MPF '

Las cuatro cd9 ue actian las ciclinas en los seres)u!anos son0

Cd9+/ que interact?a con las ciclinas $

Cd96, que interact?a con las ciclinas !


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5uinasas de"endientes de ciclina #CD8s'

Las CD8s son !ol2culas )eterodi!2ricas cu3a función esfosforilar residuos de serina 3 treonina de "roteínasre-uladoras es"ecíficas. Estos "rocesos se llean a ca:o cuandolas CD8s est@n actiadas "or las corres"ondientes ciclinas.

asta el momento hay descritas doce quinasas dependientes deciclina@ C78!, C78#, C78(,C78D, C78&, C78, C78',

C78-, C78, C78!%, C78!! y C78!# .

C78D y C78 forman complejos con las ciclinas 7 y

funcionan durante la transición %b9 y activando as4 la epresión de genes

necesarios para la entrada en la fase ".


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C78 #

C78 D


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Re-ulación ne-atia del ciclo celularIn)i:idores de las uinasas de"endientes de ciclina

#CD8Is'0 Estas prote4nas inhibidoras de las C78s están implicadas en la parada del CC en respuesta a varias se1ales antiproliferativas,

como pueden ser la privación de factores de crecimiento,

citoquinas, da1o en el *7:, etc.

"e dividen en dos familias@ la CIP8IP 3 la IN8B, que difierenen estructura, mecanismo de acción y especificidad.

La fa!ilia CIP8IP inclu3e tres "roteínas0 "6+/ "6$ 3 "%$, y presenta una especificidad más amplia que la familia ;:8D, ya que

sus miembros interact?an e inhiben la actividad quinasa de los

complejos C78#


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La fa!ilia IN8B inclu3e cinco "roteínas0 "+B/ "+%/ "+=/

"+> 3 "+F. * diferencia de las prote4nas de la familiaC;)


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Las 5UINASAS son polipéptidos de D( 8da, de estructura bilobulada,con su etremo aminoBterminal formando el lóbulo menor.

En la hendidura entre ambos lóbulos se encuentra su dominio

catal4tico.

Esquema mostrando la estructura básica de la CDK, como monómero inactivo. Se muestran, a la izquierda, los sitios que son

susceptibles de cambiar su actividad por fosforilación. Mientras que la fosforilación de la treonina 1! en el llamado lazo " se

requiere para la activación de la quinasa, la fosforilación de la treonina 1# $ tirosina 1% la mantienen inactiva. El sitio

catal&tico se encuentra dentro de la 'endidura catal&tica. (a secuencia )S"*+E permite a la CDK ensamblarse con una ciclina para as& transformarse en activa.


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ACTIGACION DE CD8S )or acoplamiento a una ciclina

C*8s 6C78 *ctivating 8inases9 las quinasas activadoras deC78s

Esquema de los ras-os distintivos del preM)/ o 'eterod&mero CDKciclina mitótica, previo a su activación. (a ciclina se 'a

asociado con la quinasa a trav0s de la llamada caa de la ciclina. (a ciclina tambi0n posee una zona, llamada caa de destrucción,

que ase-ura su proteolisis, previa su marcado con una cola de poliubicuitina a car-o de la li-asa E2 conocida como ciclosoma.

El 'eterod&mero mostrado en esta fi-ura $a está parcialmente activado por la fosforilación 3a car-o de la C*K o quinasa que

activa otras CDKs4, que abre la 'endidura catal&tica de forma que el *") puede $a penetrar en el bolso situado al final, pró5ima

al sitio catal&tico. (a quinasa 6ee1 mantiene fosforilados los residuos "1#781%, cu$a defosforilación activará de forma inmediatadic'a quinasa, transformando a este d&mero en M)/ si la ciclina es una de las mitóticas.


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El M)/ o inductor de condensación cromosómica mitótica. Si comparamos a este d&mero con el de la /i-. anterior,

vemos cómo se 'a producido la defosforilación de los residuos "1#781% mediada por la fosfatasa

Cdc9%, lo que 'a permitido el acople de la mol0cula de *") en el bolso e5istente al final de la 'endidura catal&tica,

permitiendo su plena activación como quinasa.


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ACTIGACI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9 ACTIGACI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9

c d 9 $

T ) r + $ I

c i c l i n a *M A T

C o ! " l e ; o C A 8 d e s a c t i a d o

T ) r + $ I 1 P

C o ! " l e ; o C A 8 a c t i a d o

( o s f o r i l a c i ó n T ) r + $ I# J " o r c d 9 6 K c i c l i n a A L '

( o s f o r i l a c i ó n T ) r + = +

" o r C A 8

T ) r + = + 1 P

C o ! " l e ; o c i c l i n a 1 c d 9 a c t i a d o

( o s f a t a s a

P P 6 a

D e s f o s f o r i l a c i ó nT ) r + = +

C o ! " l e ; o c i c l i n a 1 c d 9 d e s a c t i a d o

T ) r + = +

T ) r + BT 3 r + %

T ) r + = +

T ) r + BT 3 r + %

C o ! " l e ; o c i c l i n a 1 c d 9 d e s a c t i a d o


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•Los complejos ciclinas-Cdk pueden ser inhibidos por complejos

inhibidores (Cki), como la p27 y p21, ue ac!úan sobre las uinasas

ue con!rolan "1 y #$ %s!os Cki se unen a la &e' a la ciclina y a la Cdk,

bloueando el si!io ac!i&o y de unión al * de la Cdk$

IN*IICI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9 IN*IICI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9

T hr16 1 - P

C om plejo ciclina -C dk a ctiva do

Thr14Tyr15

T h r161 - P

C om plejo ciclina-C dk inhibido

Thr14Tyr15

P 21 o P 2 7


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DESTRUCCI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9 DESTRUCCI7N DE LOS COMPLEHOS CICLINA1Cd9

C iclina E

C d k 2

P

S C F activad o

U b iquitinaA

C iclina B

C d k 1U b iqu itina

A P C inactivo

A P C activado

C d c 2 0

B

ACCI7N DE LAS CICLINAS ,+ 4 ,+S

ACCI7N DE LAS CICLINAS ,+ 4 ,+S


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ACCI7N DE LAS CICLINAS ,+ 4 ,+SACCI7N DE LAS CICLINAS ,+ 4 ,+S

C d k4 oC d k6

T hr16 1 - P T hr14

T yr15

C om plejo a ctivad o

C IC LIN A S G 1

C iclina DE 2F in activa

R b activad a

E 2F activada

R b inactiva da

PP

T ra nscripción d e genespara la fase S

C d k2

T hr16 1 - P T hr14

T yr15

C om plejo a ctivad o

C IC LIN A S G 1/S

C iclina E

R eplicación de l D N A

C d k2

T hr16 1 - P T hr14

T yr15

C om plejo activad o

C IC L IN A S S

C iclina A

C d k2

C IC LIN A S G 1/S

C iclina E

C IC L IN A S S

C iclina A

C d k2

G 1

S

7 S

ACCI7N DE LAS CICLINAS S


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ACCI7N DE LAS CICLINAS SACCI7N DE LAS CICLINAS S

O rigen d ereplicación

O C R (com plejo dereconocim iento delo rigen de replicación)

C d c6

M cm

C om plejopre-replicativo

C d k2

C iclina A

C IC L IN A S SS C F activad o

U biquitina

P

P

S

G 1

G 2

M


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ACCI7N DE LAS CICLINAS MACCI7N DE LAS CICLINAS M

T hr161 - P T hr14

T yr15

C om plejo C iclina B -C dk1activado

T hr161 - P T hr14 - P

T yr15 - P

C om plejo C iclina B -C dk1

desactivado

C iclina B

C dk1

C IC LIN A S M

T hr161 T hr14

T yr15

T hr170 - P

C om plejo C A K activado

Q uinasaW ee1

T hr161 - P T hr14

T yr15

C om plejo C iclina B -C dk1activado

F osfatasaC dc25

G 1

S

G 2

M

El co!"le;o ciclinas M1Cd9

fosforila las si-uientes"roteinas durante la !itósis0 L@!inas nucleares al final

de la "rofase "ara ladisolución de la enoltura

nuclear La "roteína condensina

ue condensa loscro!oso!as

Proteínas re-uladoras del

)uso !itótico/ El co!"le;o APC ue

se"ara las cro!@tidas)er!anas.


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La re+ulación del crecimien!o y di&isión celular es muy compleja$

Existen puntos de restricción que ipiden la continuación del CC!si lacélula no cuple con las condiciones para pasar a la si"uiente etapa! de

tal odo que! si no se cuplen esas condiciones! el ciclo se detiene# Los

pun!os de res!ricción son

•*un!o de res!ricción $curre en la %ase &'! aqu( la célula coprue)a

que *a "enerado la asa necesaria para se"uir adelante + coen,ar las(ntesis de A-N + que las condiciones a)ientales son %a.ora)les$

•*un!o de res!ricción "2-. que ocurre al %inal de la %ase &/! en el que

la célula de)e copro)ar dos condiciones antes de di.idirse0 que *a

duplicado la asa de odo que puede dar lu"ar a dos células *i1as! +

que *a copletado la replicación del A-N! + sólo lo *a *ec*o una .e,#

•*un!o de res!ricción . que ocurre en itosis + que sólo perite

continuar con la di.isión celular si todos los croosoas est2n alineados

so)re el *uso itótico#

RE,ULACI7N DEL CICLO CELULAR RE,ULACI7N DEL CICLO CELULAR


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Puntos de Control de Ciclo Celular Puntos de Control de Ciclo Celular

Punto de restricción R.

Punto ,61M.

Punto M.


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Punto de restricción 345Punto de restricción 345

En este punto, se decide si la célula entra en

división, se da entre !B"

Ciclinas 6aumentan de nivel9 y se conbinancon la cdG.

+ransferencia de fosfatos de *+) a p>b.

La p>b fosforilado libera a factores de

transcripción 6E#39.


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34/78

Punto &/67Punto &/67

;ntervienen complejos formados por dos

tipos de ciclinas A y las quinasa Cdc#.

Los complejos se acumulan durante lainterfase y son activados y translocados al

nucleo al comien2o de la mitosis.

Estas moleculas controlan el estado del*7: celular,duplicado en la fase ".

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/c/c3/Mitotic_cycle.png


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http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/c/c3/Mitotic_cycle.png


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Sucesos de la %ase 7Sucesos de la %ase 7

Es el periodo más llamativo del ciclo

celular.

+radicionalmente la mitosis se divide en Detapas@ )rofase, $etafase, *nafase y

+elofase.

)ara que se inicie la fase $, juega un papelimportante la acción de 3)$.


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-ianas del 7P8-ianas del 7P8


38/78

Pro%asePro%ase

Condensación de

cromosomas, por las

condensinas."on fosforiladas

directamente por las

quinasas Cdc#.

"e producen cambios

en el citoplasma.


39/78

Condensación de croosoasCondensación de croosoas

*lteraciónmolecular

3osforilación dehistona !.

3osforilación dehistona (.


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Proeta%aseProeta%ase

)eriodo de transición

entre la profase y la

metafase.Los microt?bulos del

del huso mitótico se

anclan a los

cinetocoros de loscromosomas

condensados.


41/78

7eta%ase7eta%ase

$ovimiento de los

cromosomas hasta

alinearse en placasmetafásicas en medio

del huso.

;nicio de la regulación

del punto $.


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4e"ulación del punto 74e"ulación del punto 7

)unto de control durante la transición demetafase a anafase.

"e asegura de que no haya erores en laformación del huso, alineamiento decromosomas y se produsca un repartoigualitario entre las dos celulas hijas.

Esta mediado por la acción de lasubiquitinas.


43/78

Ana%ase Ana%ase

La accion de la

ubiquitina ligasa

6complejo promotor dela anafase9.

*ctivacion del

C)*,degrada los

reguladores claves@"cc! cohesinas y

ciclina A


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$)3

Complejo promotor de la anafase

7egradación de)ds!

7egradaciónde la ciclina A

Esp! ;nactivación del

$)3

7egradación dela cohesina

"cc! "alida de lamitosis.

"eparación de lacromátidas hermanas.)uesta en marcha de

la anafase.


45/78

APC

Anafase

Ini:idorAnafase

Profase Metafase,6

Ciclina

Cdc6

Telofase ,+

Ciclina

Cdc6

APC


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47/78

9elo%ase9elo%ase

Los nucleos se

regeneran y los

cromosomas se

descondensan.

Durante este proceso los

poros nucleares se

reensamblan y las laminas

desfosforiladas se asocian

para reconstituir la lámina

nuclear


48/78

CitocinesisCitocinesis

Es el paso siguientetras la conclusión de lamitosis.

"uele comen2ar en laanafase tardia,coordina la divisiónnuclear y

citosplasmatica."e desencadena por la

inactivación del $)3.


49/78

Interacciones 7olecularesInteracciones 7oleculares


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4e"ulación del CC + el Cancer 4e"ulación del CC + el Cancer

Cuando la celula se empie2a a proliferardescontroladamente y escapan a los controles de ladivisión y muerte celular.

Eistencia de genes /sanos0 relacionados al controlde crecimiento y supervivencia celular, la alteraciónde estos induce a la aparición de células cancerosas.

)rotooncogen 6normal9B Hncogen 6alterado9

en supresor de tumoresB ;nhibe producciónanormal de células. 67efecto I cdo. Cancerosos9.


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* t * t* t


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= A-entes carcino-en2ticos

= Iniciadores

= Pro!otores

,enes

M u

t a c i ó

n

= Onco-enes= ,enes su"ressores= ,enes de re"aracion = a $ eentos en 6 a B aos

"rocesode

!?lti"les "asos

*gentes

f4sicos

*gentes

biológicos

*gentes

qu4micos

C2lula nor!al C2lula transfor!ada

)redisposición

genética


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Secuencia Adenoma-CarcinomaSecuencia Adenoma-Carcinoma

E"itelio

nor!al

E"itelio

)i"er"roliferatio

Adeno!a

"recoQ

Adeno!a

tardio

Adeno1

carcino!a

.u!ación

de APC APC

5q

#upere/presión

de COX-2 COX-2

.u!ación

de K-rasK-ras

12p

L0 17q17q.u!ación

de p53 p53

L0 18qCCCC

*i"o!etilaciónde DNA

Otrasalteraciones

Met@stasis

Adeno!a

inter!ed.

J ' B - a1osJ &' a1os =% aos


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Cada uno de estos ca!:ios en la fisiolo-ía celular/ aduiridos durante el desarrollo de los tu!ores/ re"resenta una

enta;a en la luc)a contra los co!"le;os siste!as de defensa con ue cuentan las c2lulas "ara !antener esta:le laar!onía funcional de los te;idos.


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ESTUDIO CITO,ENTICO 0 I. Cultio Celular

II. An@lisis Cro!osó!ico

Lic.TM. *2ctor *errera Re3noso Es"0 Cito-en2tica 3 iolo-ía Molecular


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C3L450 C%L3LC3L450 C%L3L

Los cultivos celulares son un procedimiento

tecnológico de mantenimiento y estudio de células

vivas en un medio artificial que permite reproducir,

de manera bastante fiable, las condiciones biológicasque las células tienen en su lugar de origen.

)otencialmente todas las células son cultivables, pero

cada una de ellas presenta peculiaridades y

requerimientos espec4ficos.

C l!i C l lC l!i C l l


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Cul!i&o Celular Cul!i&o Celular Eisten varios modelos diferenciados de cultivo celular@

A.1 Se-?n su estructura0 +.1 Cultio de ór-ano

6.1 Cultio de te;ido


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Cul!i&o Celular Cul!i&o Celular

Princi"ales !odelos de CC

C2lulas !esenui!atosas . C2lulas )e!ato"o32ticas (i:ro:lastos M2dula Osea Condrocitos C2lulas linfoides C2lulas !usculares C2lulas !ieloides Adi"ocitos C2lulas eritroides Osteo:lastos . C2lulas -onadales C2lulas endoteliales . *i:rido!as

. C2lulas Neuroe"iteliales 3 Parenui!atosas C2lulas e"ider!icas/ ueratinocitos 3 !elanocitos Neuronas corticales 3 !edulares C2lulas de la -lia C2lulas endocrinas

*e"atocitos C2lulas renales C2lulas :ronuiales 3 "ul!onares

. C2lulas tu!orales

Cul!i&o CelularCul!i&o Celular


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Cul!i&o Celular Cul!i&o Celular .1 Se-?n la fuente de o:tención de c2lulas0+.1 Cultios Pri!arios0 cuando las células o tejidos procedentes de un ser

vivo crecen sin haber pasado previamente por una fase de crecimiento in

vitro.

6 Cultios secundarios0 cuando se obtiene de la resiembra de otro cultivo


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6. Cultios secundarios0 cuando se obtiene de la resiembra de otro cultivo.* partir de este punto se puede hablar de l4neas celulares estables 6célulasque mantienen sus caracter4sticas de una forma constante y homogénea a lolargo del tiempo9.


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%l .edio de Cul!i&o%l .edio de Cul!i&o


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%l .edio de Cul!i&o%l .edio de Cul!i&o

+. El Sustrato

. Materiales

. Reci"ientes

6. La fase -aseosa Oí-eno

Dióido de car:ono


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:otellas + Placas de Culti.o:otellas + Placas de Culti.o


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Cul!i&o Celular Cul!i&o Celular

. Condiciones (isico1uí!icas 3 fisioló-icas del !edio de cultio

.B Condiciones fisico1uí!icas

1 "* #$. V $.6''

1 Os!olaridad0 6F1


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Cul!i&o Celular %s!udio Ci!o+en6!icoCul!i&o Celular %s!udio Ci!o+en6!ico

MEDIOS DE CULTIGO CELULAR

Son co!"uestos ue contienen 0 Todos los a!inoóacidos/ita!inas/cofactores/ coenQi!as/ enQi!as/ sales/ iones/indicadores de "*.

Eisten distintos !edios de cultio los cuales se seleccionan de"endiendo del ti"o de !uestra ó ti"o de c2lula a cultiar 3 lo-rar ue estos res"ondan adecuada!ente con un creci!iento celular.

Los !edios de cultio celular se seleccionan de"endiendo del ti"ode estudio cito-en2tico a realiQar #Cultio de alta resolución/Estudio de fra-ilidad cro!osó!ica/ etc' o del ti"o de ano!alíacro!osó!ica a de!ostrar #Estudio de W fr@-il'.


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Medios de Cultio !@s UtiliQados+. Medio McCo3Xs %A Modified

.1 Cultio San-re Perif2rica #Linfocitos' .1 Cultio M2dula Osea

6. Medio RPMI +=B0

.1 Cultio San-re Perif2rica #Linfocitos'

.1 Cultio M2dula Osea

.1 Cultio de Tu!ores #c2lulas neo"l@sicas'


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%. Medio C)an- K C

.1 Cultio "iel

.1 Cultio c2lulas fetales

.1 Cultio de ellosidades coriales

.1 Cultio de Tu!ores # c2lulas neo"l@sicas'

=. A!nio!a

.1 Cultio de c2lulas fetales .1 Cultio de ellosidades coriales

$. Medio P1Ma 8ariot3"in- Mediu!

.1 Es"ecífico Cultio de linfocitos

>. Medio Marro1 Ma 8ariot3"in- Mediu! .1 Es"ecífico "ara Cultio de M2dula Osea

Cul!i&o Celular %s!udio ci!o+en6!icoCul!i&o Celular %s!udio ci!o+en6!ico


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++

SUPLEMENTOS.1 Ade!@s del !edio de cultio :ase/ las c2lulas reuieren "ara su

creci!iento 3 diisión celular de su"le!entos/ los cuales ser@nutiliQados de"endiendo del ti"o de c2lulas ue se desea cultiar 3

del ti"o de estudio cito-en2tico reuerido.

+.1 SUERO OGINO (ETAL #S(' 0 se utiliQa a diferentes concentraciones0%& "ara el estudio de cro!oso!a W fr@-il

6& "ara el cultio de SP 3 MO


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Cul!i&o Celular %s!udio Ci!o+en6!ico+

SUPLEMENTOS0B.1 L1 ,LUTAMINA0 Es un aas ue en su for!a leó-ira !e;ora el creci!iento

celular.%.1 ESTIMULANTE MITO,ENICO0 UtiliQado "ara esti!ular el "roceso de

!itosis en el cultio de linfocitos. Co!o0

1 (ito)e!a-lutinina #P*A'

1 Concaalina A #ConA'

1 Poc9eeed Mito-en

Ade!@s se utiliQan su"le!entos o reactios es"ecíficos cuando se

reuieren realiQar estudios cito-en2ticos es"eciales co!o0

.1 Estudio Cro!oso!a W fr@-il0 Se cultia la SP #linfocitos' en !edio

TC +FF ó RPMI +=B "ero deficientes en @cido fólico/ !@s L1-luta!ina ó :ien utiliQando la (luorodeoiuridina #(UdR' ó Metotreate #MTW'

ue son in)i:idores de las enQi!as ue "artici"an en la síntesis de

noo del @cido fólico.



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Cu ! o Ce u a s!ud o C !o+e 6! co+

Medios deCultio

3 Su"le!entos

. (or!as de

"resentacióndiferentes.

. Medio Líuido 3 en

"olo

. Microcultio



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++

)reparacion de los

$edios de Cultivo . Pesar el !edio

. Diluir en a-ua destilada

. A-itar

. Aadir Su"le!entos PKS

L1,luta!ina

S(

. A;ustar el "*



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EsteriliQación de los Medios de Cultio. Siste!a de filtración al acio

. (iltros !illi"ore /66u!. o!:a de acío

. Alicuotar en frascos est2riles

. Control de esterilidad en estufa a


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++

,uardar los

!edios deCultio en

con-elación a

BC ó V6C

)asta su uso.


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Documents

CITOGENETICA 3 W.ppt