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Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española

Lluis Ferrer. Hospital clínico de la UAB

El diagnóstico de la leishmaniosis

Leishmanews: noticias en Leishmaniosis

Bases inmunológicas para el diagnóstico de la leishmaniosis


La respuesta inmune en la leishmaniosis

• Si el sistema inmune responde como Th1 •  Protección: formación células que protegen contra el

desarrollo de la enfermedad • Si el sistema inmune responde como Th2

•  Enfermedad: formación de anticuerpos •  La respuesta Th2 no solo no protege sino que además

es la responsable de la sintomatología: – Inmunocomplejos: glomerulonefritis, artritis, vasculitis,

uveitis, anemia, leucopenia, trombocitopenia – Procesos autoinmunes: anemia, miositis... – Inmunodepresión

Por tanto, el diagnóstico de la leishmaniosis debe tener siempre en cuenta la serología


Perro infectado: presencia del parásito (L.infantum)

Perro enfermo: su sistema inmune ha respondido inadecuadamente (Th2 y formación de AC) • Presenta síntomas, incluyendo anomalías hematológicas o bioquímicas • AC ++++

Infección vs Enfermedad


Prevalencia en perros en áreas endémicas

10% enfermos: han desarrollado la enfermedad y tienen síntomas

20% seropositivos: con anticuerpos, unos sintomáticos y otros no

60%-70% infectados: contacto con el parásito pero no necesariamente enfermos


Puntos clave en el diagnóstico de la leishmaniosis

Diferenciar enfermedad de infección Valorar el animal en su conjunto

• Historia clínica, la sintomatología, las pruebas hematológicas y clínicas, la epidemiología, etc…

Confirmar con técnicas • SEROLÓGICAS • ESPECÍFICAS • y CUANTITATIVAS

Realizar un buen DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL

Hospital clínico de la UAB


Técnicas de diagnóstico: PCR

Detecta infección, no enfermedad. Interés para estudios epidemiológicos. Poco interés clínico

• PCR cualitativa •  Alta sensibilidad pero riesgo de falsos negativos

según la calidad de la muestra •  Muestra: linfonodo o médula ósea

• RT-QPCR •  Poco estandarizada: discrepancia de resultados •  Carga parasitaria no directamente relacionada con

la gravedad de la enfermedad: poco interés clínico •  Interés para evaluar respuesta al tratamiento


Técnicas de diagnóstico: serología

• Test rápidos (ELISA o inmunocromatografía):

• Muy sensibles. Detectan cantidades muy bajas de AC • Solo para screening y primer abordaje diagnóstico

• Serología cuantitativa: IFI y ELISA cuantitativo

• IFI: Considerada “goldstandard” por Leishvet • Referencia para valorar otros métodos


• < 4 X el corte •  En zonas endémicas es habitual encontrar títulos bajos en

perros sanos •  En ausencia de síntomas → Repetir a los 3-4 m •  En presencia de síntomas → diagnóstico diferencial y pruebas

complementarias: (citología, biopsia lesiones, etc.) • > 4 X el corte

•  Con o sin síntomas: alta probabilidad de leishmaniosis. Pruebas complementarias para confirmar el diagnóstico y evaluar el estado del animal (proteinograma, función renal, etc.)

• Una variación en un título no es clínicamente significativa

IFI: interpretación


¿Qué significa “4 veces el corte”?

1 1 1 1 80 160 320 640

1 1 1 1 160 320 640 1280

1er p

ositi

vo

1er p

ositi

vo

LABORATORIO A

LABORATORIO B

4 x

4 x


Otras técnicas de diagnóstico

• Proteinograma •  Prueba no especifica

• Cultivo • Citología

•  Poco sensible pero muy específica de enfermedad

•  Útil para confirmar y para formas localizadas

• Pruebas complementarias •  Bioquímica, hematología,

función renal y hepática…

Carlos Vich. Dermovet


Seguimiento del tratamiento

• Test rápidos •  Sin utilidad

• Serología cuantitativa: •  Valorar evolución solo a largo plazo •  No usar como criterio para mantener o

repetir el tratamiento •  A medio-largo plazo un elevación brusca

indica recaída

• Proteinograma. Cociente alb/glob •  Puede tardar en normalizarse

• PCR cuantitativa • EVOLUCIÓN CLÍNICA


Diagnóstico en perros vacunados


Diagnóstico pre-vacunación

Speed Leish-K

Negativo Vacunar

Positivo IFI

ELISA (Cuantitativo)

Negativo Vacunar

Positivo

Repetir IFI a los 3 meses

Positivo bajo

NO vacunar Investigar

más

Antes de la primovacunación


Solano-Gallego, Villanueva-Saz, Carbonell, Furlanello, Natale y Trotta (2013)

Sensibilidad Speed Leish K respecto ELISA in house UAB y rt-PCR 63,6% Especificidad Speed Leish K respecto ELISA in house UAB y rt-PCR 100%

• Se compara Speed Leish K con tres metodos ELISA (ID Screen, Leiscan y Leishmania 96) y con la IFI

• En el estudio no se utiliza como método de referencia la IFI sino una combinación de ELISA in house UAB y rt-PCR

• Según este estudio, la sensibilidad de la IFI es del 86%


Publicaciones SLK

Sensibilidad 98 % Especificidad 100% Sensibilidad 96,3%

Especificidad 100%


¿Por qué esas discrepancias?

• Los estudios de SLK se han realizado utilizando como técnica de referencia la IFI

• ¿Tipo IgG detectadas? . TNF-α >>IgG2

>IgG1, IgE e IgAIL-13


Diagnóstico pre-vacunación

¿Antes de cada booster anual? •  Imprescindible en caso de sospecha • No es necesario en cada revacunación anual:

•  La vacuna es segura en perros + •  La vacuna no evita la infección ni la aparición de un + transitorio. Un

test rápido no es un buen método para detectar un fallo vacunal •  Dificultades de manejo con el propietario •  En caso de positivo asintomático vacunamos o no?

• Los controles periódicos rutinarios por motivos epidemiológicos se pueden seguir realizando


Diagnóstico en caso de sospecha

Hasta los 4-6 meses post-vacunación: • Es normal encontrar títulos elevados de anticuerpos

•  Algunos tests como Speed Leish K permiten discriminar si son AC vacunales o por infección

A partir de los 6 meses: • Los AC vacunales desaparecen • Los criterios diagnósticos son los mismos que para un perro no

vacunado

DIFERENCIAR SIEMPRE INFECCIÓN DE ENFERMEDAD


• PCR: •  No indica enfermedad, indica infección

• Test rápido: •  Siempre se debe cuantificar

• IFI: •  Un resultado positivo no significa necesariamente

que haya habido un fallo vacunal •  Valorar titulación y sintomatología •  < 4x hacer diagnóstico diferencial

Diagnóstico en perros vacunados


¿Qué hacer en caso de fallo?

1.  Confirmar el diagnóstico •  Una PCR+ o un test rápido+ no son suficiente

•  Tener en cuenta los AC vacunales

•  La vacuna no evita la infección sino el desarrollo de la enfermedad: un positivo bajo en una zona endémica puede ser normal y transitorio

2.  Reportar el caso •  A través de Virbac

•  Directamente a la Agencia

Leishmanews: noticias en leishmaniosis. Edición española Gracias por vuestra atención

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