ISBC Dan Uji Biokimia

Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Teknik

LAPORAN RESMI PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI TEKNIK

PERCOBAAN ISOLASI BAKTERI DARI SUATU CAMPURAN DAN UJI BIOKIMIAHari Kelompok Praktikan : Kamis : D-12 : 1. Ari Susanti 2. Riza Afifuddin 3. Nasichah Tanggal Percobaan Tanggal Penyerahan laporan Asisten : 05 Maret 2012 : 12 April 2012 : Fajar Singgih Kurnia Putra (2310.100.069) (2310.100.113) (2310.100.120)

JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA 2012Laboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


1

LAPORAN RESMI ISOLASI BAKTERI DARI SUATU CAMPURAN DAN UJI BIOKIMIAI. Tujuan Percobaan I.1 Isolasi Bakteri dari Suatu Campuran Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mempelajari cara-cara mengisolasi bakteri dari suatu campuran dengan menggunakan teknik cawan gores dan cawan tuang. I.2 Uji Biokimia Dalam uji biokimia terdapat dua percobaan, yaitu: a) Uji Oksidasi-Fermentasi (O-F Test) Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mempelajari kemampuan mikroorganisme dalam mengkatabolisme, berlangsung secara oksidatif atau fermentatif. b) Uji Hidrolisa Kanji dan Kasein Tujuan dari percobaan ini antara lain : 1. Uji hidrolisa kanji bertujuan untuk menentukan jenis mikroorganisme yang memiliki alpha-amylase, eksoenzim yang mempunyai kemampuan menguraikan kanji menjadi glukosa. 2. Uji hidrolisa kasein bertujuan untuk menentukan jenis mikroorganisme yang memiliki caseinase, eksoenzim yang mempunyai kemampuan menghidrolisa kasein. II. Hasil Percobaan II.1 Isolasi Bakteri Dari Suatu Campuran 1. Pengamatan untuk Metode Cawan Gores

Laboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


2

A. ( 24 Jam) a. Atas Keseluruhan Sektor I Sektor II Sektor III Sektor O

b.

Atas Tepi Sektor O Sektor I Sektor II Sektor III

c.

Permukaan (samping) Sektor O Sektor I Sektor II Sektor III

Keterangan : Sektor O Warna : Putih susu Diameter : 6 mm Kepekatan : Tidak pekat B. (96 Jam) a. Sektor I Warna : Putih susu Diameter : 6 mm Kepekatan : Sangat pekat Sektor II Warna : Putih susu Diameter : 4 mm Kepekatan: Sangat pekat Sektor III Warna : Putih susu Diameter : 4 mm Kepekatan : Sangat pekat3

Atas Keseluruhan



Sektor O

Sektor I

Sektor II

Sektor III

b.


c.


Keterangan : Sektor O Warna: Putih susu Diameter: 1,1 cm Kepekatan: Tidak pekat Sektor I Warna: Putih susu Diameter: 1,2 cm Kepekatan: Sangat pekat Sektor II Warna: Putih susu Diameter: 7 mm Kepekatan: Sangat pekat Sektor III Warna: Putih susu Diameter: 1,6 cm Kepekatan: Sangat pekat4

2. a.

Pengamatan untuk Metode Cawan Tuang A. ( 24 Jam) Atas Keseluruhan Sektor O Sektor I Sektor II Sektor III



b.


c.


5

Keterangan : Sektor O Warna: Putih susu Diameter: Sektor I Warna: Putih susu Diameter: Sektor II Warna: Putih susu Diameter: Sektor III Warna: Putih susu Diameter:



5 mm Kepekatan: Tidak pekat B. ( 96 Jam) a. Atas Keseluruhan Sektor O

8 mm Kepekatan: Lebih pekat

8 mm Kepekatan: Sangat pekat

7 mm Kepekatan: Pekat

Sektor I

Sektor II

Sektor III

b. Atas Tepi Sektor O Sektor I Sektor II Sektor III

6

c. Permukaan (samping) Sektor O Sektor I Sektor II Sektor III



Keterangan : Sektor O Warna: Putih susu Diameter: 1,1 cm Kepekatan: Tidak pekat Sektor I Warna: Putih susu Diameter: 9 mm Kepekatan: Lebih pekat Sektor II Warna: Putih susu Diameter: 9 mm Kepekatan: Sangat pekat Sektor III Warna: Putih susu Diameter: 1,2 cm Kepekatan: Pekat

II.2 Uji Biokimia 1. Uji Oksidasi-Fermentasi (O-F Test) t = 24 Jam Mikroorganisme Enterobacter Nitrobacter t = 96 Jam Mikroorganisme Enterobacter Nitrobacter Keterangan: Oksidasi Oksidasi Fermentasi + + Fermentasi + -

- Reaksi Oksidatif (O) : bila terjadi perubahan warna indikator hanya terjadi pada tabung berkondisi aerob. pada tabung aerob dan anaerob. - Bukan reaksi oksidatif maupun reaksi fermentatif (mikroba tidak dapat mengkatabolisme karbohidrat) : bila kedua tabung tidak memperlihatkan perubahan warna indikator 2. Uji Hidrolisa Kanji dan Kasein Media KanjiKasein t ( Jam ) 96 24

7

- Reaksi Fermentatif : bila terjadi perubahan warna indikator tampak

Mikroorganisme Enterobacter Nitrobacter + + +


Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Teknik 96 + +

Keterangan : Kanji Kasein : Test positif (+) bila warna terang Test negatif (-) bila warna biru : Test positif (+) bila warna terang Test negatif (-) bila warna gelap III. Pembahasan III.1 Isolasi Bakteri dari Suatu Campuran Secara alamiah, mikroba terdapat dalam bentuk campuran dari berbagai jenis. Untuk bisa mempelajari karakteristik mikroba maka diperlukan kultur murni yaitu suatu biakan yang terdiri dari sel-sel satu spesies. Isolasi mikroba adalah upaya pemisahan mikroba jenis tertentu dari populasi campuran mikroba lainnya. Dalam proses isolasi itu digunakan berbagai teknik, dua diantaranya adalah seperti yang digunakan dalam percobaan isolasi bakteri dari suatu campuran yaitu metode cawan gores dan metode cawan tuang (Candra, 2006). Campuran yang digunakan dalam percobaan ini adalah campuran antara Enterobacter dan Nitrobacter. Genus Enterobacter masuk dalam family Enterobacteriaceae. Enterobacter termasuk hewan berdarah panas. Enterobacter bisa tumbuh antara suhu 30-37C. Mikroba ini memiliki cara metabolisme secara respirasi dan fermentatif. Karakteristiknya sendiri ialah bahwa Enterobacter termasuk bakteri gram negatif, fakultatif anaerob, bergerak dengan flagella, bentuknya batang lurus. Selain itu Enterobacter juga memiliki ukuran lebar 0,6-1,0 mm dan 1,2-3,0 mm sebagai ukuran panjang. Enterobacter banyak ditemukan di dalam tanah, air, dalam tubuh tanaman, dan hewan. Sifat koloninya ialah menyebar ke seluruh permukaan (Gardener, 2010). Nitrobacter merupakan anggota Purple-Bacteria. Nitrobacter merupakan mikroorganisme yang menggunakan nitrit sebagai elektron donor untuk melakukan reduksi membentuk amoniak. Bentuk Nitrobacter ada yang bulat, oval, batang. Nitrobacter merupakan


8


mikrooorganisme yang pernapasannya secara anaerob. Ukurannya lebarnya 0,5-0,8 mikrometer sedangkan panjangnya antara 1,0-2,0 mikrometer. Nitrobacter merupakan bakteri gram negatif. Selain itu Nitrobacter merupakan mikrooranisme fakultatif litoautotrof. Nitrobacter bisa tumbuh pada suhu 25-30C. Nitrobacter biasanya ditemukan di dalam tanah dan air (Starkeys, 2010). Untuk metode cawan gores, langkah pertama yang perlu dilakukan adalah menyiapkan satu buah petridish. Kemudian membagi petridish menjadi 4 sektor yakni sektor 0, I, II, dan III. Untuk sektor 0 dibuat lebih kecil dari sektor yang lain. Kemudian petridish tersebut dibungkus dengan kertas cokelat dan disterilkan menggunakan autoclave yang memiliki tekanan kurang lebih 15 lb steam pressure/inchi2 dengan suhu 121C selama 15 menit dengan tujuan agar bakteri yang berada di dalamnya dapat mati. Bakteri bisa mati karena autoclave menggunakan uap air dalam tekanan sebagai pensterilnya. Bila ada kelembapan (uap air) bakteri akan terkoagulasi dan dirusak pada temperatur yang lebih rendah dibandingkan bila tidak ada kelembapan (Sarles, 1956). Setelah dikeluarkan dari autoclave, cawan diberi media agar dan dibiarkan padat terlebih dahulu. Cawan berisi media diletakkan di dalam incase agar tidak terkontaminasi bakteri dari udara.9

Langkah selanjutnya adalah melakukan penggoresan di dalam incase juga agar tidak terjadi kontaminasi oleh bakteri yang ada di udara bebas. Dalam penggoresan ini, sektor 0 dibiarkan tanpa bakteri karena akan digunakan sebagai blanko atau pembanding. Sedangkan sektor-sektor yang lain akan ditanami bakteri. Penggoresan dilakukan mulai dari sektor I lalu ke sektor II lalu ke sektor III. Pada saat melakukan penggoresan di sektor I, penggoresan dilakukan secara zig- zag dan cukup sekali saja. Kemudian memutar petridish, mengambil titik ujung hasil akhir penggoresan pada sektor I untuk dilanjutkan digoreskan pada sektor II, lalu melakukan hal serupa ke sektor III. Untuk setiap kali melakukan inokulasi ataupun berpindah sektor maka kawat ose harus dipijarkan pada api bunsen agar kawat ose bisa tetap steril. Setelah dipanaskan di api bunsen, kawat ose didiamkan selamaLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


beberapa detik agar bakteri tidak mati. Setelah semua proses penggoresan selesai, petridish dibungkus dengan kertas cokelat lalu diinkubasikan didalam inkubator pada suhu 300C dengan tujuan menumbuhkan bakteri dan mencegahnya terkontaminasi dari luar. Petridish dibalik dengan tujuan sisa uap air akan menetes ke bawah agar tidak mengganggu proses pertumbuhan bakteri (Pelczar and Chan, 2008). Pengamatan pertama dilakukan setelah 24 jam. Pada sektor 0 terlihat adanya koloni yang tumbuh dengan warna putih susu, tidak pekat, dan berdiameter 6 mm. Pada sektor I terlihat koloni-koloni bakteri, namun jumlahnya belum banyak dengan warna putih susu, sangat pekat, dan berdiameter 6 mm. Untuk sektor II, koloni-koloni terlihat lebih sedikit daripada sektor I dengan warna putih susu, sangat pekat, dan berdiameter 4 mm. Sedangkan pada sektor III terdapat koloni-koloni dalam jumlah lebih sedikit dari sektor I dan II dengan warna putih susu, sangat pekat, dan berdiameter 4 mm. Pengamatan kedua yang dilakukan setelah 96 jam dan menunjukan adanya pertumbuhan koloni. Pada sektor I, tampak bahwa koloni semakin besar. Hal ini ditandai dengan berubahnya diameter dari 6 mm menjadi 1,2 cm. Pada sektor II dan III, koloni juga mengalami pertumbuhan dengan ditandai berubahnya diameter koloni dari 4 mm menjadi 7 mm untuk sektor II dan dari 4 mm menjadi 1,6 cm untuk sektor III. Hal ini sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa setelah diinkubasi, sel-sel individu akan tumbuh memperbanyak diri hingga membentuk koloni (Sarles, 1956). Pada sektor 0 terlihat pula bahwa koloni mengalami pertumbuhan. Hal ini mengindikasikan bahwa media yang diinokulasikan dengan bakteri tersebut telah terkontaminasi. Meskipun membukanya pada incase tapi dengan membuka terlalu lebar, media bisa terkontaminasi. Seharusnya ketika menginokulasikan bakteri, tutup cawan dibuka seminimal mungkin (Pelczar and Chan, 2008). Prinsip utama dari metode cawan tuang adalah proses pengenceran sehingga terjadi pengurangan jumlah mikroba pada suatu sampel. Sebelumnya tabung yang telah diberi nomor I, II, dan III telah disterilisasi keLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS 10


dalam autoclave yang memiliki tekanan kurang lebih 15 lb steam pressure/inchi2 dengan suhu 121C selama 15 menit dengan tujuan agar bakteri yang berada di dalamnya dapat mati. Bakteri bisa mati karena autoclave menggunakan uap air dalam tekanan sebagai pensterilnya. Bila ada kelembapan (uap air) bakteri akan terkoagulasi dan dirusak pada temperature yang lebih rendah dibandingkan bila tidak ada kelembapan (Sarles, 1956). Selanjutnya memindahkan suspensi biakan murni dengan teknik aseptic dari tabung biakan murni ke tabung I dengan kawat ose. Lalu mengocoknya dengan gerakan ke samping sehingga kekeruhannya merata. Langkah selanjutnya adalah memindahkan biakan dari tabung I ke tabung II begitu seterusnya sampai tabung III. Dari proses pengenceran ini diharapkan didapatkan biakan murni pada tabung III. Setiap akan memindahkan biakan dari satu tabung ke tabung yang lain, kawat ose dan mulut tabung reaksi harus dibakar dengan api bunsen terlebih dahulu. Hal ini bertujuan untuk mensterilkan tabung reaksi agar tidak terjadi kontaminasi oleh bakteri lain. Kemudian menuang hasil pengenceran tersebut pada petridish bernomor I,II, dan III dan media tanpa bakteri (blanko) pada petridish 0. Membiarkan agar dalam petridish menjadi padat. Petridish diletakkan dalam keadaan tertutup di dalam incase untuk menghindari kontaminasi bakteri. Selanjutnya melakukan proses inkubasi. Cawan petri dibalik dengan tujuan sisa uap air akan menetes ke bawah agar tidak mengganggu proses pertumbuhan bakteri (Pelczar and Chan, 2008) . Setelah proses inkubasi selama 24 jam, kemudian melakukan pengamatan. Untuk cawan tuang I muncul banyak koloni yang tersebar merata pada media dengan bentuk koloni kecil hingga sedang dengan warna putih susu, lebih pekat, dan berdiameter 8 mm. Sedangkan pada II, koloni yang ada mulai merapat (berkumpul) sehingga terlihat koloni-koloninya lebih besar dengan warna putih susu, sangat pekat, dan berdiameter 8 mm. Koloni paling sedikit berada pada cawan tuang III namun koloni yang terbentuk terlihat lebih rapat atau menggerombol dengan warna putih susu, pekat, dan berdiameter 7 mm. Hal ini dikarenakan semakin terakhir cawan tuang ketikaLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS 11


melakukan inokulasi, suspensi koloni campuran semakin sedikit sehingga koloni yang didapat juga semakin sedikit dan semakin murni. Pada cawan 0 yang merupakan blanko ditemukan juga koloni namun dengan jumlah paling sedikit diantara cawan lain dengan warna putih susu, tidak pekat, dan berdiameter 5 mm. Setelah inkubasi selama 96 jam, koloni yang didapat semakin terlihat, dan semakin banyak dan bertumbuh. Pada cawan I terlihat koloni semakin merata dan membesar dengan perubahan diameter dari 8 mm menjadi 9 mm dengan warna putih susu dan lebih pekat. Pada cawan II koloni semakin banyak dan membesar dengan perubahan diameter dari 8 mm menjadi 9 mm dengan warna putih susu dan sangat pekat. Pada cawan III, koloni juga semakin merata dam bertumbuh, dengan bertambah besar pula dari diameter 7 mm menjadi 1,2 cm dengan warna putih susu dan pekat. Sedangkan pada petridish 0 yang berisi blanko terjadi perubahan serupa dengan diameter yang semula 5 mm menjadi 1,1 cm. Untuk pertumbuhan yang terjadi pada cawan I, II, III sesuai dengan literatur yang menjelaskan bahwa dengan bertambahnya waktu inkubasi maka bakteri akan semakin bertumbuh sehingga bakteri akan semakin merata dan ukuran koloni juga semakin besar. Akan tetapi pada cawan 0 seharusnya tidak ditumbuhi bakteri. Adanya bakteri ini dikarenakan terkontaminasi bakteri di udara, termasuk di dalam incase karena kurangnya kehati-hatian dalam penginokulasian bakteri (Benson, 1998). Dari karakteristik koloni yang ada, diketahui bahwa campuran yang digunakan adalah Nitrobacter dan Enterobacter. Hal ini dikarenakan beberapa ciri dapat diidentifikasi, antara lain yakni bisa tumbuh di media agar nutrient, tumbuh baik pada suhu 25C - 37 C, bektuk oval, spiral maupun batang. Sedangkan koloni yang tumbuh hingga sektor III adalah Enterobacter. Karena mikroorganisme ini dapat mudah tumbuh dalam media agar biasa sedangkan pada Nitrobacter, pertumbuhannya hanya bisa terlihat jelas dalam berkoloni dengan warna putih bila setelah diinkubasi selama satu minggu. Selain itu Enterobacter pertumbuhannya juga menyebar dalam media ( Zavarzin and Legunkoya, 1959).Laboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS 12


III.2 Uji Biokimia III.2.1 Uji Oksidasi-Fermentasi (O-F Test) Pada uji Oksidasi-Fermentasi, langkah pertama yang perlu dilakukan adalah melakukan sterilisasi tabung-tabung reaksi yang sebelumnya telah diisi 10 ml media Hugh Leifson di dalam autoclave yang memiliki tekanan kurang lebih 15 lb steam pressure/inchi2 dengan suhu 121C selama 15 menit dengan tujuan agar bakteri yang berada di dalamnya dapat mati. Bakteri bisa mati karena autoclave menggunakan uap air dalam tekanan sebagai pensterilnya. Bila ada kelembapan (uap air) bakteri akan terkoagulasi dan dirusak pada temperature yang lebih rendah dibandingkan bila tidak ada kelembapan (Sarles, 1956). Menggunakan media tersebut karena media Hugh Leifson mengandung glukosa sebagai sumber karbohidrat dan indikator PH. Dengan media ini nantinya akan diketahui bahwa terjadi perubahan warna atau tidak sebagai petunjuk mikroba mengalami metabolisme atau tidak (Reynolds, 2002). Oksidatif adalah suatu kondisi dimana terjadinya metabolisme glukosa/ karbohirat di bawah kondisi aerobic yaitu memerlukan oksigen (National Standard Methode BSOP TP 16, 2010). Sedangkan fermentatif adalah proses pemecahan karbohidrat dan asam amino secara anaerobic yaitu tanpa memerlukan oksigen (Candra, 2006). Tabung reaksi yang berisi media akan dibedakan menjadi tabung anaerob (dengan ditambah paraffin) dan tabung aerob (tanpa ditambahi paraffin). Langkah selanjutnya adalah memanaskan tabung yang berisi media dalam penangas air dengan suhu 100C selama beberapa menit. Lalu didinginkan sampai 50C agar bakteri tidak mati pada saat proses inokulasi pada langkah selanjutnya. Kemudian menginokulasikan dua biakan yang berbeda ke dalam dua tabung reaksi sebagai blanko, 2 tabung reaksi masingmasing dengan satu jenis bakteri dimana yang satu ditutup paraffin dan satunya tidak. Menginokulasikan lagi pada 2 tabung reaksi dengan bakteri kedua dimana satu tabung diberi paraffin dan yang satunya tidak diberi13



paraffin. Menginokulasikan bakteri dengan menggunakan kawat ose lurus sampai dasar tabung. Selanjutnya mengikubasikan pada suhu 30C. Berdasarkan pengamatan yang dilakukan setelah 24 jam dan 96 jam, terjadi perubahan warna menjadi kuning terang pada kedua tabung reaksi Enterobacter sehingga bisa disimpulkan bahwa Enterobacter melakukan fermentatif. Hal ini sesuai dengan literatur yang menyebutkan bahwa Enterobacter yang termasuk bakteri gram negatif melakukan metabolisme secara fermentatif dengan bukti bahwa kedua tabung baik yang tertutup paraffin maupun tidak tertutup paraffin menunjukkan perubahan warna menjadi kuning terang dibandingkan tabung blanko (National Standard Methode BSOP TP 27, 2010). Sedangkan untuk tabung yang berisi Nitrobacter tidak menunjukkan perubahan apa-apa. Sehingga Nitrobacter tidak mengalami metabolisme dengan oksidatif maupun fermentatif. Hal ini tidak sesuai dengan literatur yang menyebutkan bahwa Nitrobacter melakukan metabolisme secara oksidatif dengan nitrit. Perbedaan hasil ini karena Nitrobacter memiliki sel-sel yang melakukan respirasi dimana kecenderungannya ialah menggunakan oksigen sebagai akseptor elektron terakhir. Sehingga oksigen mutlak diperlukan untuk melakukan metabolisme ini. Ada kemungkinan oksigen yang tersedia pada saat itu untuk melakukan metabolisme kurang sehingga Nitrobacter tidak melakukan metabolisme secara oksidatif (Candra, 2006).14

III.2.2 Uji Hidrolisa Kanji dan Kasein Enzim amilase berfungsi memecah pati menjadi maltosa dan glukosa. Zat pati adalah polisakarida yang terdiri dari sakarida glukosa (Candra, 2006). Kasein adalah protein utama dalam susu berupa makromolekul yang tersusun atas unit-unit asam amino dengan ikatan peptida. Enzim kaseinase dapat memecah kasein menjadi produk yang lebih mudah larut (Benson, 1998). Pada uji hidrolisa kanji dan kasein ini, digunakan 2 media dengan 2 petridish yang berbeda. Langkah pertama yang perlu dilakukan adalah pertama menyiapkan 2 buah petridish. Lalu memberi pembatas antara sektorLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


dua bakteri. Kemudian membungkus petridish dengan kertas coklat. Petridish-petridish tersebut disterilkan dalam autoclave yang memiliki tekanan kurang lebih 15 lb steam pressure/inchi2 dengan suhu 121C selama 15 menit dengan tujuan agar bakteri yang berada di dalamnya dapat mati. Bakteri bisa mati karena autoclave menggunakan uap air dalam tekanan sebagai pensterilnya. Bila ada kelembapan (uap air) bakteri akan terkoagulasi dan dirusak pada temperatur yang lebih rendah dibandingkan bila tidak ada kelembapan (Sarles, 1956). Selanjutnya menuangkan media kanji agar yang telah dipanaskan di atas penangas air dengan suhu 45C. Begitu pula pada petridish yang lain, menuangkan media kasein ke dalam petridish. Kedua petridish dibiarkan menjadi padat di dalam incase agar tidak terkontaminasi bakteri di udara. Setelah padat, melakukan inokulasi dengan Enterobacter dan Nitrobacter. Kemudian membungkus masingmasing petridish dengan kertas coklat dan menginkubasikannya pada suhu 30C. Cawan petri dibalik dengan tujuan sisa uap air akan menetes ke bawah agar tidak mengganggu proses pertumbuhan bakteri (Pelczar and Chan, 2008) . Melakukan pengamatan setelah 24 jam. Untuk pengamatan setelah 24 jam hanya dilakukan pada media kasein. Pada pengamatan media kasein setelah 24 jam, hasil pengamatan menunjukkan bahwa Enterobacter dan Nitrobacter keduanya mengandung enzim kaseinase. Hasil pengamatan ini sama dengan pengamatan setelah 96 jam. Hal ini didasarkan pada kondisi media dan inokulasi di dalam petridish yang menunjukkan warna terang pada daerah sekeliling kedua bakteri yang menandakan kasein telah dihidrolisa. Hasil pengamatan tersebut kurang sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa hanya Nitrobacter yang memiliki eksoenzim kaseinase (Zavarin and Legunkova, 1959). Pengamatan pada uji hidrolisa kanji dilakukan setelah 96 jam. Sebelum melakukan pengamatan, lugol ditambahkan pada daerah sekitar koloni. Perubahan warna yang terjadi setelah penambahan lugol akan dijadikan acuan terhadap proses hidrolisa kanji. Jika daerah sekitar koloniLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS 15


menunjukkan warna gelap/ biru maka kanji belum terhidrolisa. Tetapi jika hasil pengamatan menunjukkan warna terang di daerah sekitar koloni maka kanji telah terhidrolisa. Setelah dilakukan pengamatan, terlihat bahwa pada media kanji setelah 96 jam menunjukkan warna terang pada Entrobacter dan gelap pada Nitrobacter. Hal ini telah sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa Entrobacter adalah bakteri yang mengandung alphaamylase yang ditandai dengan warna terang pada sekelilingnya akibat terhidrolisanya kanji (National Standards Method BSOP ID 16, 2010). IV. Jawaban Pertanyaan IV.1 Isolasi Bakteri dari Suatu Campuran 1. Bagaimanakah keadaan media pembanding (blanko)? Apa kegunaannya?16

Jawab : Keadaan media pembanding (blanko) adalah steril atau tidak ditumbuhi bakteri. Kegunaannya adalah sebagai media pembanding bagaimana keadaan media sebelum dan sesudah dilakukan penanaman bakteri (inokulasi). 2. Setelah melakukan isolasi bakteri dengan metode cawan gores, pada daerah Jawab : Daerah yang terkena isolasi adalah daerah I, II, dan III. Namun daerah yang mengalami isolasi sempurna adalah pada daerah/sektor III, karena pada daerah ini merupakan penggoresan terakhir, dan merupakan kelanjutan penggoresan dari daerah II yang semakin sedikit bakterinya. Sedangkan daerah 0 atau media pembanding tetap steril atau tidak ada bakteri yang tumbuh. manakah bakteri terisolasi? Bandingkan dengan media pembanding!



3. Apakah pada permukaan agar yang tidak saudara gores tampak koloni? Jelaskan ! (jika terdapat ataupun tidak) Jawab : Pada permukaan agar yang tidak digores ada sedikit terdapat koloni, meskipun tidak ditanami bakteri, dan hal ini menunjukkan bahwa permukaan agar tersebut terkontaminasi, sehingga bakteri tidak terisolasi dengan baik. 4. Apakah keunggulan dan kekurangan dari dua metode di atas? Jawab : a. Metode Cawan Gores Keunggulan : menghemat waktu menghemat bahan menghasilkan isolasi baik pada sebagian besar percobaan yang telah dilakukan Kekurangan : teknik isolasi yang dilakukan lebih sulit karena membutuhkan keterampilan yang memadai dalam menggores. b. Metode Cawan Tuang Keunggulan : bakteri yang tumbuh dapat tersebar merata pada media agar metode ini bisa digunakan untuk menghitung bakteri tidak memerlukan kemampuan khusus dan pengalaman boros waktu boros bahan,tube, dan plate (Benson, 1998)17

Kekurangan :

IV.2 Uji Biokimia 1. Sebutkan media yang digunakan pada beberapa test berikut:Laboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


a. Produksi Butanediol b. Hidrolisa Kanji c. Hidrolisa Lemak d. Hidrolisa Kasein Jawab: a. Produksi Butanediol b. Hidrolisa Kanji c. Hidrolisa Lemak d. Hidrolisa Kasein Media MR-VP Media kanji agar Media nutrient agar dan minyak nabati Media kasein agar

2. Pilihlah nama-nama reagent yang digunakan test berikut: 1. Voges-Proskauer test 2. Catalase Test 3. Hidrolisa Kanji Jawab: 1. Voges-Proskauer test 2. Catalase Test 3. Hidrolisa Kanji Reagent barrit Hidrogen peroksida Grams iodine18

3. Enzim-enzim apa saja yang telibat pada reaksi-reaksi berikut dan sebutkan pula produk hasil hidrilisanya: a. Hidrolisa kasein b. Hidrolisa Kanji c. Hidrolisa Lemak d. Hidrolisa Gelatin Jawab: a. Hidrolisa kasein b. Hidrolisa Kanji c. Hidrolisa Lemak Enzim kaseinase, produk=polipeptida yang lebih kecil dari asam amino Enzim amilase, Produk=Maltosa Enzim lipase, Produk=Asam lemak dan GliserolLaboratorium Mikrobiologi Teknik Jurusan Teknik Kimia FTI-ITS


d. Hidrolisa Gelatin

Enzim Gelatinase, Produk=Polipeptida dan Asam amino

4. Apakah perbedaan Methyl-Red test dengan Voges-Proskauer test? Jawab: -MR Test = Menguji terbentuknya asam organik dari proses katabolisme bakteri -VP Test = Untuk mendeteksi ada tidaknya asetil metil karbinol yang terbentuk 5. Apakah manfaat enzim-enzim tersebut (soal nomor 3) pada bakteri?19

Jawab: a. Enzim kasease berfungi utuk menguraikan kasein menjadi polipeptida b. Enzim amilase berfungsi untuk mengubah amilum menjadi glukosa c. Enzim lipase berfungsi untuk menguraikan lemak menjadi asam lemak dan gliserol d. Enzim gelatinase berfungsi untuk menguraikan gelatin menjadi uraian gelatin (asam amino) (Pelczar and Chan, 2008). V. Kesimpulan V.1 Isolasi Bakteri dari Suatu Campuran Dari pengamatan percobaan dan studi literatur isolasi bakteri dengan menggunakan metode cawan tuang dan cawan gores diperoleh kesimpulan sebagai berikut: 1. Biakan akan terisolasi sempurna dari petridish sektor ketiga untuk cawan gores dan pada petridish ketiga untuk cawan tuang. 2. Bakteri yang terisolasi adalah pada koloni yang muncul pada sektor III dimana dikatakan bahwa pada sektor ini adalah biakan murni.



V.2 Uji Biokimia 1. Pada uji O-F menunjukkan bahwa Enterobacter melakukan metabolisme secara fermentatif. Sedangkan Nitrobacter tidak keduanya baik oksidatif maupun fermentatif. 2. Pada percobaan uji hidrolisa kanji, bakteri Enterobacter memiliki alpha-amylase sedangkan Nitrobacter tidak memiliki. 3. Pada percobaan uji hidrolisa kasein, baik bakteri Enterobacter maupun Nitrobacter menghasilkan enzim kaseinase.

20

DAFTAR PUSTAKA Benson, Harold J, 1998. Microbiological Applications. New York : McGraw Hill Candra, Joddi Iryadi, 2006. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Produk Bekasam Ikan Bandeng (Chanos chanos). Bogor : IPB. National Standard Method, BSOP ID 16. 2010. Identification of Enterobacteriaceae. Issue no 3. National Standard Method, BSOP TP 27. 2010. Oxidation/Fermentation of Glucose Test. Issue no 2. Pelczar, Michael dan Chan E.C.S, 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Universitas Indonesia. Reynolds, Jackie. (2002) . Biochemical Test Media for Lab Unknown Identification.Part 1. Page 1-8. Sarles, William Bowen, 1956. Microbiology. New York : Harper and Brothers. Starkeys, Larry. 2010. Nitrobacter Soil Microbilogy. http://filebox.vt.edu/users/chagedor/biol_4684/Microbes/Nitrobacter.html Zavarzin, G. & R. Legunkova, 1959. The Morphology of Nitrobacter winogradskyi . J. Gen.Microbiol. 21. Page 186-190.



Gambar 2. Hasil Pengamatan Selama 96 Jam

Metode Cawan Gores

Metode Cawan Tuang (I)

Metode Cawan Tuang (II)

Metode Cawan Uji O-F (tertutup Tuang blanko Tuang (III) paraffin)


Uji O-F pada B tidak terjadi perubahan Uji OF blanko Uji O-F tanpa Uji O-F terjadi Uji hidrolisa kanji perubahan warna Uji hidrolisa kasein warna paraffin

Documents

ISBC Dan Uji Biokimia