BTG 2013

FISH 在多发性骨髓瘤中的应用

Edmond S K Ma 博士香港养和医院病理科

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议 程

• 回顾 HKS&H 的经验• CG 异常：东西方结合• 诊断应用

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在多发性骨髓瘤中的 CG 异常

• 常规细胞遗传学 30%• 间期 FISH ~ 90%

– Drach J et al Cancer Res 1995; 55: 3854 – 9• 原因 :

– 骨髓血浆细胞比例低– 浆细胞增殖指数低– 易位可能是形态的隐藏如 t （ 4 ； 14 ）（ P16 ；

q32 ）

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预后意义

预后意义

黑 : No 13q-, t(4;14)和 17p- 和 低 B2M

蓝 : 阳性的 13q-, No t(4;14) 和 17p- 和 低 B2M

绿 : No 13q-, t(4;14) 和 17p- 和 高 B2M

红 : 阳性的 13q-, No t(4;14) 和 17p- 和高 B2M

灰 : 任何一个 t(4;14) of 17p-, 和低 B2M

粉 : 任何一个 t(4;14) of 17p-, 和高 B2M

Avet-Loiseau et al, Blood 2007; 109: 3489 - 95

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国际骨髓瘤工作组共识

• 危险分层（ panel2 ）

Blood 2011; 117: 4696 – 4700

– 细胞遗传学检测染色体 13 和 13q 缺失 , t(4;14) 和del(17p), 通过 FISH 检测的 t(4;14), t(14;16) 和 del(17p)

– 重复复发

• 标准的研究工作 (panel 3)

Blood 2011; 117: 4701 – 5

– 标准的中期细胞遗传学和 FISH 检测： t(4;14), t(14;16) 和 del(17p)

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议程

• 回顾 HKS&H 经验• CG 异常：东西方结合• 诊断应用

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多发性骨髓瘤中 FISH

• 以同一天处理为目标• 骨髓涂片检查• 如浆细胞＜ 5% 则排除• 通过 CD138 免疫磁珠分选细胞 (Miltenyi Biotec)

– 样品浆细胞＜ 50% – 针对 > 90% 纯度

• 预分析变量：样本充足，新鲜度，浆细胞百分比

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CD138 免疫磁珠分类

前 后

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CD138 免疫磁珠分选

前 后

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FISH 探针

• 13q, t(4;14), 17p, CEP 5/9/15

• t(4;14), t(14;16), 17p, CEP 5/9/15

• 最近的分类

– t(4;14)(p16;q32) (IGH/FGFR3 DF 探头 )

– t(14;16)(q32;q23) (IGH/MAF DF 探头 )

– TP53/CEP17

– CKS1B / CDKN2C （ P18 ）放大 / 缺失

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1q 的增加：多发性骨髓瘤新的高危 CG 标记

来源 cytocell 网站 红 (1q) = CKS1B

绿 (1p) = CDKN2C (p18)

Avet-Loiseau H et al, J Clin Oncol 30: 1949 – 52, 2012

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FISH 分析• 分析至少 100 细胞• 两名观察员• 实验室临界值

– 平均值 + 3SD 正常骨髓为参照• 阳性阈值水平

Ross FM et al 2012; Avet-Loiseau H et al 2012

– 10% ：融合或分裂探针– 20% ：数值异常– 30% ：染色体 1q 增加– 40% ： del （ 17p ） / p53

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HKS&H 数据摘要• n = 105 例

– 从 2011 年 4 月 – 2012 年 12 月• 男性 : 女性 = 73 : 32

• 中位年龄 = 62 岁 ( 范围 : 42 – 88)

• 中位浆细胞百分比 = 53%

– 范围 5 – 95%

• 细胞分类工作在 44/105 (42%)

– i.e. < 50% 浆细胞

HKS&H 数据摘要CG 异常 频率 (%) 计数 +ve 细胞的范围

13q- 24% 5/21 60 – 90%

t(4;14) 16% 17/105 10 – 90%

t(14;16) 3% 2/80 50 – 80%

17p- 6% 6/105 20 – 80%

1q 增加 42% 5/12 40 – 90%

多染色体 5/9/15 36% 31/87 20 – 95%

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HKS&H 数据摘要

• 次要 FISH 异常

– 6/17 t(4;14)+ve 表现出非典型的（ 1y1o1g ）信号模式

– 多染色体 / 放大 4, 14 或 16

• 常见

– 单体性染色体 / 缺失 17, 4, 14 or 16

• 偶尔

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议 程

• 回顾 HKS&H 经验• CG 异常：东西方结合• 诊断应用

各研究中 FISH 异常的频率参 考 t(4;14

)t(14;16)

t(11;14)

del(17p)

del(13q)

超二倍体 MYC

1q 增加

Fonseca 2003 (ECOG)

12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA NA NA

Avet-Loiseau 2007 (IFM)

14% NA 21% 11% 48% 39% 13% NA

Huang S-Y 2005 (Taiwan)

NA NA NA 6.8% 34.1% ~20% NA NA

Tan 2010 (Singapore)

14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% NA NA NA

Lai Y-Y 2012 (China)

IgH 基因易位 57.6% 34.7% 60.4% NA NA 49%

Yu H 2011 (China)

NA NA NA 22.2% ~50% NA NA 45.8%

HKS&H 经验 16% 3% NA 6% 24% 36% NA 42%

各研究中 FISH 异常的频率参 考 t(4;14

)t(14;16)

t(11;14)

del(17p)

del(13q)

超二倍体 MYC

1q 增加

Fonseca 2003 (ECOG)

12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA NA NA

Avet-Loiseau 2007 (IFM)

14% NA 21% 11% 48% 39% 13% NA

Huang S-Y 2005 (Taiwan)

NA NA NA 6.8% 34.1% ~20% NA NA

Tan 2010 (Singapore)

14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% NA NA NA

Lai Y-Y 2012 (China)

IgH 基因易位 57.6% 34.7% 60.4% NA NA 49%

Yu H 2011 (China)

NA NA NA 22.2% ~50% NA NA 45.8%

HKS&H 经验 16% 3% NA 6% 24% 36% NA 42%

各研究中 FISH 异常的频率参考 t(4;14

)t(14;16)

t(11;14)

del(17p)

del(13q)

超二倍体 MYC

1q 增加

Fonseca 2003 (ECOG)

12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA NA NA

Avet-Loiseau 2007 (IFM)

14% NA 21% 11% 48% 39% 13% NA

Huang S-Y 2005 (Taiwan)

NA NA NA 6.8% 34.1% ~20% NA NA

Tan 2010 (Singapore)

14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% NA NA NA

Lai Y-Y 2012 (China)

IgH 基因易位 57.6% 34.7% 60.4% NA NA 49%

Yu H 2011 (China)

NA NA NA 22.2% ~50% NA NA 45.8%

HKS&H 经验 16% 3% NA 6% 24% 36% NA 42%

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Agenda

• 回顾 HKS&H 经验• CG 异常：东西方结合• 诊断应用

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤 ?

• 女 /57 白种人• 骨病变• Hb 11.3 g/dL

• WBC 6.7 x 109/L

• 血小板 285 x 109/L

• RFT 正常• 副蛋白

– IgM-κ 10.4 g/L

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IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤 ?

CD20 CD138

Kappa PAX-5

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IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤 ?

• t(11;14) 阳性

• MYD88 L256P 阴性

• 结论

CD20+ IgM 多发性骨髓瘤

细胞周期蛋白 D1

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IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤 ?

• 女 /68 中国人

• 肾病综合症 ,

肾脏损伤

• IgG-κ

副蛋白增加趋势

• 2010 年首次 BM: 不是多发性骨髓瘤

外周血

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浆细胞骨髓瘤伴 t(11;14)(q13;q32)

• 约占 20% 多发性骨髓瘤

• 细胞周期蛋白 D1 过表达

• 淋巴浆细胞形态（ 40–50% ）

• CD138+ 19+ 20+ PAX5+ 细胞周期蛋白 D1+

• 主要是 IgG 型 , IgA 型 和轻链型骨髓瘤

• 80% IgM 型多发性骨髓瘤伴 t （ 11 ； 14 ）但 CD20-ve 相比之下 t （ 11 ； 14 ）非 IgM 型浆细胞骨髓瘤

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IgG 副蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症 ?

BM

BM

Trephine x 100

Trephine x 600

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IgG 型异常蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症

CD20 CD138

Kappa ISH

Lambda ISH

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• t(11;14) -ve

• MYD88 L256P +ve

• 结论 : IgG WM

T C

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤 ?

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疾病进展

• 男 /72 中国人

• 轻链型多发性骨髓瘤

• 达到 CR

• 10 个月后浆细胞白血病突然复发

• 获得 del(17p) 诊断为阴性

诊断

复发

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致 谢

• Prof. C S Chim

• Mr. Anthony Wong

• Ms. Candy Wang

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