Enzimas de restricción y electroforesis Enzimas de restricción Son endonucleasas específicas capaces de reconocer secuencias palindrómicas de DNA y cortar

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  • Enzimas de restriccin y electroforesis
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  • Enzimas de restriccin Son endonucleasas especficas capaces de reconocer secuencias palindrmicas de DNA y cortar los enlaces fosfodister del material gentico en un punto especfico. Palindrmicas quiere decir que leen en direcciones opuestas el mismo orden de nucletidos. 5 G T T A A C 3 3 C A A T T G 5
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  • Tipos de endonucleasas Endonucleasa Tipo I corta lejos de la sucuencia que reconoce, ya sea ro arriba o ro abajo. Endonucleasa Tipo II cortan dentro de la secuencia que reconocen. Endonucleasa Tipo III cortan de 5-8 bases antes o despus de la secuencia que reconocen.
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  • Enzimas de restriccin Son suceptibles a cambios en temperatura, pH, etc. Estas enzimas se obtienen de clulas bacterianas. El nombre de estas est dado segn el gnero y la especie de la bacteria de dnde se aisl por primera vez esta enzima. La primera letra representa el gnero de la bacteria, las prximas dos indican la especie, la cuarta letra indica la cepa y el nmero al final indica el nmero de enzima que se ha aislado de esa cepa.
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  • Enzimas de restriccin Por ejemplo: EcoRI Otros ejemplos: BamHI la primera que se aisl de la cepa H de Bacillus amyloliquefaciens SmaI la primera que se aisl de Serratia marcesens HindIII la tercera que se aisl de la cepa d de Haemophilus influenzae Escherichia (gnero) coli (especie) cepa R Primera enzima aislada de ese organismo.
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  • Tipos de corte Sticky o pegajosos es ms fcil para volver a ligarse los extremos. Ejms. EcoRI Bam HI HindIII Blunt o abruptos Ejm. SmaI
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  • Enzimas de restriccin Las endonucleasas son de gran importancia para la ingeniera gentica, ya que permiten desarrollar tcnicas de clonacin. Adems, te permite realizar mapas de restriccin y determinar si existe homologa entre otras molculas de DNA.
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  • Electroforesis Se define como el movimiento de partculas de carga bajo la influencia de un campo elctrico a travs de un medio semislido. Este medio puede ser de agarosa o de poliacrilamida.
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  • Electroforesis El DNA es de carga negativa, por lo que las partculas migran del electrodo negativo (ctodo) al electrodo positivo (nodo). Esta migracin es inversamente proporcional al peso molecular de las muestras.
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  • Electroforesis Materiales necesarios para llevar a cabo una electroforesis: Gel de agarosa generalmente se utiliza de 1% - 2% de agarosa. Cmara de electroforesis contiene los electrodos Power supply genera el campo elctrico
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  • Electroforesis Amortiguador de electroforesis - usualmente TBE 1X; facilita la migracin de DNA y mantiene una estabilidad Bromuro de etidio compuesto carcingeno que se entrecruza entre las molculas de DNA y cuando se irradia con luz ultravioleta emite fluorescencia.
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  • Electroforesis Loading dye compuesto que se aade a las muestras de DNA; contiene glicerol, que le da peso a la muestra y no permite que se salgan de la fosa, y bromofenol azul que tie la muestra de color azul y sirve como indicador de migracin Lmpara de UV permite ver las bandas generadas Cmara para tomar una foto de la gel
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  • Electroforesis