DIAGNÓSTICO INMUNOLOGICO

Dra Ma Elena Tosello

El diagnóstico inmunomicológico :

diagnóstico presuntivo de la infección: va a

depender de la especificidad de la técnica usada

seguimiento de terapia antifúngica: si responde

al tratamiento pueden llegar a dar negativo

en las micosis oportunistas ayuda a dar

significado clínico del hallazgo del agente en

Ex. directo y Cultivos

Depende del estado inmunológico

del hospedador

TECNICAS INMUNOLÓGICAS

Hongos patógenos u oportunistas

Histoplasma capsulatum

Paracoccidioides brasiliensis

Coccidioides posadasii

Coccidioides immitis

Complejo C. neoformans/

C. gattii

Aspergillus fumigatus y

otras especies

Candida albicans y otras

especies

Otros hongos emergentes

Ac

Ag

Detección de

TECNICAS INMUNOLÓGICAS

Con un hospedador inmunocompetente

Inmunodifusión (ID): técnica gold standard, se

debe titular el suero del paciente al momento

del diagnóstico para poder hacer seguimiento

Contrainmunoelectroforesis (CIE):

TECNICAS

MAS

USADAS

Con un hospedador inmunocomprometido

Ac

Se han desarrollado distintas técnicas específicas de

especies, aunque son pocas las que se han

comercializado

Ag

TIPOS DE ANTIGENOS USADOS

EXOMETABOLITOS

Cultivos en medio líquido en reposo

CITOPLASMATICOS

Histoplasma capsulatum

Paracoccidioides brasiliensis

Coccidioides posadasii / C. immitis

Aspergillus fumigatus / A. flavus /

A. niger / A. terreus

Antígenos que pueden ser proteínas o glicoproteínas que son excretadas en el medio de cultivo

Antígenos que son obtenidos por ruptura de la pared celular fúngica

Candida albicans

INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIÓN

IDENTIDAD

NO IDENTIDAD

IDENTIDAD

PARCIALS: Suero del paciente

SC: antisuero control

S

S

SC

Ag

S SC

S SC

Ag

SS SC

S SC

Ag

S SC

INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIÓN

En ese suero Ac específicos del hongo testeado.

La banda de identidad va a ser continua cuando titulamos el suero y va

a ir desapareciendo a medida que mejore el paciente con el tratamiento

IDENTIDAD

NO IDENTIDADEn ese suero no hay Ac específicos del hongo testeado, pueden ser

reacciones cruzadas ya que los Ag pueden compartir la porción

glicoproteica. Repetir la reacción con nuevo suero.

IDENTIDAD PARCIALEn ese suero hay Ac hacia algunos componentes antigénicas

pero existen otras que no están presentes en el suero. Repetir la

reacción con otro suero y realizar seguimiento

SE HACE SEGUIMIENTO CON LA CLÍNICA Y

ANÁLISIS MICOLÓGICO

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Paracoccidioidomicosis (PCM)

Detección de anticuerpos

Inmunodifusión Ag de cada especie de Paracoccidioides

Los títulos son altos en formas graves de

PCM

Suero

En LBA y LCR (neuro PCM) pueden dar

falsos (-)

S: 65-100%

CIEF

S: 96%

Más rápida

Ag de cada especie de Paracoccidioides

Mejor en suero,

Puede realizarse en BAL y LCR

Paracoccidioidomicosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Detecta Ag de gp43

con Ac

monoclonales

S: 96%, 100% y 100% (*)

Detecta Ac de gp43

S: 80-100%

S: 98%, 65% y 86% (*)

Técnicas artesanales de detección de Ac y Ag de pared

de glicoproteína de 43kDa (gp43) de P. brasiliensis

Todas las técnicas se pueden realizar en suero, LBA y LCR (*)

Ag Detecta Ag de gp43 con

partículas sensibilizadas

con Ac monoclonales

S: 97%, 84% y 86% (*)

Ac Detecta Ac de gp43 con

partículas sensibilizadas con

Ag de la misma glicoproteína

ELISA de inhibición Aglutinación partículas látex

(*) orden de %

HistoplasmosisDetección de anticuerpos

TECNICAS INMUNOLOGICAS

INMUNIDIFUSION Banda H

Banda M

•En formas crónicas

•Raro la influencia por

Intradermoreacción (IDR)

•Mas cerca pocillo del suero

•En fase temprana o de

recuperación

•Afectada por IDR

•Mas cerca pocillo del Ag

Muy usada en pacientes inmunocompetentes

Se puede hacer seguimiento de los pacientes

CIEF Es mas rápida que la ID

Histoplasmosis

Detección de componentes antigénicos de pared

TECNICAS INMUNOLOGICAS

ELISA IMMY para detectar Ag en ORINA con Ac policlonal

S: 61% y E: 79% Moderada sensibilidad y especificidad

ELISA IMMY para detectar galactomanano en ORINA con Ac

monoclonal

S: 90% y E: 96% Mayor poder de discriminación

Inmunocromatografía que detecta Ag galactomanano en

SUERO con Ac policlonal

No está disponible

Coccidioidomicosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Inmunodifusión

Detección de anticuerpos

Muy útil en pacientes inmunocompetentes

Alta especificidad y sensibilidad

Prueba diagnóstico y para pronostico.

Los Ac duran 6 meses luego del

tratamiento

Si reaparecen Ac significa reactivación de

micosis

CIE

Fijación del complemento

Más rápida

Técnica en desuso

Inmunocromatografía de flujo lateral, detecta Ac de Coccidioides spp

Reacciones cruzadas con Histoplasmosis,

tener en cuenta síntomas y residenciaE: 93,8%

Detección de componentes antigénicos de pared

ELISA

Coccidioidomicosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Detecta IgM contra el Ag TP (tube precipitin)

120 kDa, que es de aparición temprana

Detecta Enfermedad Aguda

Marca

MERIDIAN

Marca

IMMY

Detecta IgG contra el Ag CF ( complement

fixation) proteína de shock lábil, que es

aparición tardía

Detecta Enfermedad Crónica

Detección de anticuerpos

ELISA para detectar Ag galactomanano en suero, orina y LCR

No disponible en el país

El inmunodiagnóstico es un método económico y fácil

de implementar.

La detección de Ac depende de la respuesta inmune del

paciente y del tiempo de evolución de la micosis

Las técnicas de detección de Ag son prometedoras por

su detección en muestras de fácil obtención,

especialmente en pacientes inmunocomprometidos.

Los resultados de estas técnicas debe interpretarse en

el contexto clínico de cada paciente.

Resumiendo

Desde hace 30 años

Reacción de Aglutinación de partículas de látex

Partículas de látex sensibilizadas con antígenos de la

cápsula de mucopolisacáridos (GXM) del complejo

Cryptoccocus neoformans/ Cryptoccocus gattii

Títulos altos > 1/1024 mal pronóstico

Títulos < 1/1024 mejora el pronóstico

Pacientes VIH

Pacientes no HIV

< la sensibilidad (75%) en LCR y suero

Criptococosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

técnica sencilla y útil para el diagnóstico

sensibilidad del 93 al 100%

especificidad del 93 al 98%

Sobrenadante LCR

Suero

Detecta Ag en forma cualitativa o semicuantitativa

KIT

IMMY

Criptococosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Reacción de Aglutinación de partículas de látex

Criptococosis

Falsos positivos

Falsos negativos

Pacientes con septicemia

Pacientes con infección diseminada por

otros hongos

Pacientes con artritis reumatoidea

Inmunocomplejos circulantes

Fenómeno de prozona

TECNICAS INMUNOLOGICAS

LCR: se inactiva a 100ºC baño maria

Suero: tratamiento a 56ºC con Enzima pronasa

dilución

Reacción de Aglutinación de partículas de látex

sensibilidad del 96 al 100%

especificidad del 98 al 100%

Inmunocromatografia para detectar Ag capsular

de Cryptococcus spp

Criptococosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Muestras

LCR

Suero

Sangre

entera

Aspergilosis en pacientes inmunocompetentes

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Detección de anticuerpos

Inmunodifusión Diagnóstico presuntivo si se

acompaña con la clínica y

antecedentes del paciente.

Conviene titular el suero del paciente

al momento del diagnóstico.

Sirve para hacer seguimiento

terapéutico.

Antígenos y antisueros

por separado

Aspergillus fumigatus

Aspergillus flavus

Aspergillus niger

Aspergilosis invasiva

Detección de componentes antigénicos de pared

Detección de galactomananoAntígeno de pared celular del

género Aspergillus que se libera

durante la invasión de los tejidos

Platelia Aspergillus Bio-Rad Francia ELISA

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Suero

LBA

Biopsias

Orina

Líquidos de punción

Inmunocromatografia Lateral Flow Test Kit IMMY

Ambas técnicas:

Candidiasis invasiva

Ag Manano y Ac anti- Manano

(α y β-mananos, Ag de pared)

Para fines diagnóstico la detección de Ag se

combina con la de Ac

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Se combinan ambas

porque las

antigenemias son

transitorias

Ac anti-micelio o de fase micelial

Ag Enolasa y Ac anti-enolasa

48 kDa

Infecciones fúngicas invasivas (IFI)

1,3 β D glucano MARCADOR PANFUNGICO

Aspergillus

Fusarium

Scedosporium

Acremonium

Candida

UBICUAContaminación en el laboratorio

Material descartable libre de hongos y

endotoxinas de bacterias

Detección de componentes no antigénicos

TECNICAS INMUNOLOGICAS

TEST DE EXOANTIGENO

Es un test utilizado cuando en los cultivos no

desarrollan estructuras de fructificación

caracteristicas

Cultivo del

hongo

P. brasiliensis

H. capsulatum

Aspergillus spp

Coccidioides spp

Sporotrix schenckii

Se le agrega merthiolate

0,02% o

azida sódica 0,02%

incuba 24 hs en heladera

Se repica e incuba

a 28°C

por 7 a 10 días

Se extrae el

líquido que se

concentra 25 a

50 veces a 37ºC

EXOANTÍGENO

Inmunodifusión con

Ag y Ac específicos

Banda de Identidad de

ambos Ag con el Ac

control a las 72 hs

Inmunoidentificación

de especie fúngica