ASAM AMINO

UJI KUALITATIF DAN KUANTITATIF ASAM AMINOOLEH :KELOMPOK 6Asam amino yang merupakan monomer (satuan pembentuk) protein adalah suatu senyawa yang mempunyai dua gugus fungsi yaitu gugus amino dan gugus karboksil. Rumus struktur asam amino :

UJI KUALITATIF ASAM AMINO1. Tes millon2. Tes Ninhidrin3 ml larutan protein (albumin, alanin, asam aspartat) dimasukkan di dalam tabung reaksi yang berbeda dan masing-masing ditambahkan 5 tetes reagen Millon. Diamati perubahan yang terjadi sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan. Kemudian ditambahkan reagen Millon secara berlebih dan diamati kembali perubahan yang terjadi.3 mL larutan protein (albumin, alanin, threonin, glisin) dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berbeda, kemudian ditambahkan dengan 0,5 mL larutan ninhydrin 0, 1% dan diamati perubahan yang terjadi. Kemudian dipanaskan hingga mendidih, dan diamati perubahan yang terjadi. 3. Tes Sistein4. Tes SistinBeberapa kristal sisstein hidroklorida dilarutkan ke dalam 5 mL aquadest, diamati perubahan yang terjadi. Kemudian ditambahkan 0,5 mL natrium nitroprussida 1 %, diamati kembali, selanjutnya ditambahkan 0,5 ml larutan NH3, diamati perubahan yang terjadiSedikit Sistin dilarutkan dalam 5 mL NaOH 1 M, diamati perubahan yang terjadi. Kemudian ditambahkan beberapa kristal Pb-Asetat, diamati kembali. Setelah itu dipanaskan hingga mendidih, kemudian diamati perubahan yang terjadi.Uji Xanthoproteat menggunakan 2 ml larutan protein yang ditambahkan 1 ml HNO3pekat,lalu dicampurkan dan dipanaskan selama 5 menit. Kemudian didinginkan dan ditambahkan NaOH pekat sampai larutan menjadi basa dan terjadi perubahan warna. Uji ini dilakukan pada larutan albumin 2%,kasein 2%, gelatin 2%, pepton 2%, dan fenol 2%. Uji yang terakhir adalah Uji Biuret yang menggunakan 3 ml larutan protein lalu ditambahkan ke dalam 1 ml NaOH 10 % dan dikocok. Setelah itu ditambahkan 1 tetes larutan CuSO4dan kocok kembali jika tidak timbul warna. Uji ini dilakukan pada larutanalbumin 2%, kasein 2%, gelatin 2%, dan pepton 2%.5. Uji XanthoproteatUji belerang dilakukan untuk mengetahui apakah didalam bahan-bahan tersebut terdapat asam amino sistein atau tidak.Berdasarkan hasil pengamatan didapatkan bahan-bahan yang positif terhadap uji ini adalah senyawa albumin. Sistein merupakan asam amino yang mengandung atom S pada molekulnya. Reaksi yang positif ditandai oleh adanya endapan garam PbS berwarna abu-abu/kehitaman. Hal ini karena adanya reaksi antara Pb-asetat dengan asam-asam amino tersebut. Penambahan NaOH dalam hal ini adalah untuk mendenaturasikan protein sehingga ikatan yang menghubungkan atom S dapat terputus oleh Pb-asetat membentuk PbS.6. Uji BelerangPada uji ini positif ditunjukkan oleh albumin, gelatin, kasein, dan pepton, dengan ditunjukkan oleh adanya cincin berwarna ungu. Uji ini spesifik untuk protein yang mengandung Triptofan. Triptofan akan berkondensasi dengan aldehid bila ada asam kuat sehngga membentuk cincin berwarna ungu.Cara kerjanya: ke dalam 2 ml larutan protein tambahkan 2 ml reagen Hopkins-Cole. Tambahkan sedikit demi sedikit kira-kira 5 ml H2SO4pekat melalui sisi tabung. Amati warna yang terbentuk pada pertemuan kedua cairan. Jika perlu putar perlahan-lahan tabung tersebut, sampai terbentuk cincin berwarna.6. Uji Hopkins-ColeUJI KUANTITATIF ASAM AMINOSampel sebanyak 20 mg dilarutkan dalam 50 L larutan fase gerak (metanol-air) dimana 0,1 L metanol-air (70:30) dan 0,5 L metanol-air (60:40) dicampurkan dan di tambahkan dengan flash volumetri sampai 50 mL. 5 L dari larutan kemudian diinjeksikan ke dalam kolom dan dilakukan pengukuran.2. Metode SpektrofotometriLarutan standar (metanol) disiapkan kemudian dibuat dalam beberapa konsentrasi yaitu 20, 30, 40, 50, 60 g L kemudian kurva dikalibrasi pada panjang gelombang =262, =212, =240. Sampel sebanyak 12,5 mg dilarutkan dalam 25 mL metanol. Kemudian diambil sebanyak 1 mL larutan dan diukur absorbansinya.1. Metode HPLC3. Metode AsidimetriSampel sebanyak 0,04 gram dilarutkan dalam campuran asam asetat glacial 5 L dan 2 L asam asetat anhidrat dan dititrasi dengan 0,1 MolL dari asam perklorik yang menghasilkan krital ungu.TERIMA KASIH