JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

242

UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAUN PANDAN WANGI

(Pandanus amaryllifolius roxb) TERHADAP BAKTERI

Escherichia coli dan Salmonella sp.

Inhibitory Tests of Leaf Extract Pandan Fragrant (Pandanus amaryllifolius Roxb) to Bacteria

Escherichia coli and Salmonella sp.

Indri Wahyuni

1, Erina

2, Fakhrurrazi

3

1Program Studi Pendidikan Dokter Hewan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala

2Laboratorium Patologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala

3Laboratorium Riset Terpadu Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala

E-mail: Indriwahyuni835@gmail.com

ABSTRAK Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan wangi (Pandanus

amaryllifolis roxb) terhadap Escherichia coli dan Salmonella sp. Esktrak daun pandan dibagi menjadi 3

konsentrasi yang berbeda yaitu 25%, 50%, 75%. Uji aktivitas antibakteri dilakukansesuaidengan metode Kirby-

Bauer. Hasil rata-rata zona hambat ekstrak daun pandan wangi terhadap bakteri Escherichia coli pada

konsentrasi 25% yaitu 6,6 mm, pada konsentrasi 50% yaitu 6,7 mm, dan pada konsentrasi 75% diperoleh rata-

rata 6,9 mm. Zona hambat ekstrak daun pandan wangi terhadap Salmonella sp. pada konsentrasi 25% rata-rata

6,3 mm, pada konsentrasi 50%, 6,5 mm dan pada konsentrasi 75% diperoleh rata-rata 7,3 mm. Kontrol positif

antibiotik ampicilin terhadap bakteri Escherichia coli didapatkan rata-rata 6,1 mm, sedangkan pada kontrol

positif antibiotik kloramphenikol terhadap bakteri Salmonella sp dengan rata-rata 23,3 mm. Berdasarkan

penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun pandan wangi mamiliki aktivitas yang lemah dalam

menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella sp.

Kata kunci: aktivitas antibakteri, ekstrak daun pandan wangi, Escherichia coli dan Salmonella sp.

ABSTRACT

The aims of this research is to know the antibacterial activity of pandanfragnant leaf extract

(Pandanusamary llifolis roxb) against Escherichia coli and Salmonella sp. Pandan leaf extract was divided into

3 different concentrations 25%, 50%, 75%. The antibacterial activity test was performed in accordance to

Kirby-Bauer method. The average of inhibition zone of pandanus fragrant leaves extract on Escherichia coli at

25% concentration was 6,6 mm, at concentration of 50% was 6,7 mm, and at concentration 75% obtained

average 6,9 mm. The average inhibition zone of pandanus fragrant leaf extract againts Salmonella sp. at 25%

concentration was 6.3 mm, at concentrations of 50% was 6.5 mm and at concentration of 75% obtained an

average of 7.3 mm. The averaged positive control of ampicillin antibiotics against Escherichia coli was 6.1 mm,

the positive control of cloramphenikol antibiotics against Salmonella sp was 23.3 mm. Base on this research it

can be concluded that the pandanus fragrant leaf extract had weak activity to inhibit the growth of Escherichia

coli and Salmonella sp.

Keyword : Bakterial activity, leaf extract pandan fragrant, Escherichia coli and Salmonella sp.

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Indonesia adalah suatu negara yang kaya akan sumber daya alam yang melimpah.

Seperti yang telah diketahui, Indonesia merupakan salah satu negara yang memiliki hutan

terbesar didunia. Di Indonesia juga banyak terdapat berbagai jenis tumbuhan yang dapat

dijadikan obat-obatan, rempah-rempah, dan lain sebagainya. Di Indonesia diperkirakan

terdapat 100 sampai dengan 150 famili tumbuh-tumbuhan, dan dari jumlah tersebut sebagian

besar mempunyai potensi untuk dimanfaatkan sebagai tanaman industri, tanaman buah-

buahan, tanaman rempah-rempah, dan tanaman obat-obatan (Lestari, 2016). Penggunaan

tumbuhan sebagai obat tradisional juga semakin banyak diminati oleh masyarakat karena

telah terbukti bahwa obat yang berasal dari tumbuhan lebih menyehatkan dan tanpa

menimbulkan adanya efek samping jika dibandingkan dengan obat-obatan yang berasal dari

bahan kimia (Lestari, 2016). Penelitian mengenai tanaman –tanaman herbal yang memiliki

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

243

aktivitas antibakteri telah dilakukan untuk mengurangi efek samping penggunaan bahan kimia

dalam produk hasil pertanian dan peternakan (Stevani dkk., 2016).

Saat ini para ahli mikrobiologi telah banyak meneliti dan menemukan aktivitas

antimikroba khususnya anti bakteri pada tanaman, dan rempah-rempah yang banyak

mengandung senyawa antimikroba (Murhadi dkk., 2007). Seperti halnya pandan wangi

memiliki kandungan kimia berupa minyak atsiri, alkaloid dan flavonoid sebagai anti bakteri

(Fitri dkk., 2016). Pandan wangi merupakan tanaman yang sering dimanfaatkan daunnya

sebagai bahan tambahan makanan, umumnya sebagai bahan pewarna hijau dan pemberi

aroma. Aroma khas dari pandan diduga karena adanya senyawa turunan asam amino fenil

alanin yaitu 2-acetyl-1-pyrroline, selain kegunaan tersebut pandan wangi juga dilaporkan

memiliki aktivitas antidiabetik pada ekstrak air, antioksidan pada ekstrak air dan metanol,

antikanker pada ekstrak etanol dan metanol, dan antibakteri pada ekstrak etanol dan etil asetat

(Mardyaningsih dan Aini, 2014).

Salah satu khasiat pandan wangi sebagai antimikroba dan jamur yang diduga berasal

dari kandungan kimia yang ada didalamnya seperti saponin. Dimana saponin berfungsi

sebagai antibakteri, karena hal ini didasarkan pada sifat sitotoksisk dari saponin dan

kemampuannya dalam mempengaruhi permeabilitas membran sitoplasma sehingga sel bakteri

menjadi lisis (Stevani dkk,. 2016).

Escherichia coli merupakan salah satu flora normal yang ada ditubuh, akan tetapi

bakteri ini akan menjadi patogen dengan mekanisme virulensi yang berbeda apabila

jumlahnya melebihi ambang batas tubuh (Dwidjoseputro, 1978). Penyakit yang sering

ditimbulkan oleh bakteri Escherichia coli adalah colibacillosis. Salmonella sp. merupakan

bakteri patogen saluran cerna. Bakteri ini memiliki sifat parasit yang menyebabkan reaksi

peradangan tractus intestinal, dan Salmonella sp. digolongkan dalam bakteri patogenik yang

menjadi penyebab foodborne disease, dan penyakit yang disebabkan oleh Salmonella sp.

disebut dengan salmonellosis (Karsinah, 2004). Kedua bakteri ini dapat menimbulkan

masalah saluran cerna, salah satunya adalah diare (Putri, 2016).

Tujuan dikembangkan tanaman obat ini dikarenakan memiliki sejumlah bahan aktif

yang berfungsi sebagai antimikroba (jawetz dkk., 2005). Menurut hasil penelitian yang telah

dilakukan Kayadoe dkk. (2015), hasil uji fitokimia ektrak daun pandan wangi mengandung

senyawa-senyawa metabolit sekunder, seperti flavonoid, steroid, alkaloid, antrakuinon,

polifenol dan tanin. Dimana dapat bersifat sebagai antibakteri. Dari latar belakang yang telah

diuraikan diatas maka perlu dilakukan penelitian untuk melihat kemampuan ekstrak daun

pandan wangi untuk menghambat pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella sp.

MATERIAL DAN METODE

Pembuatan bahan ekstrak daun pandan dilakukan di Laboratorium Farmakologi

Fakultas Kedokteran Hewan. pengujian fitokimia ekstrak daun pandan wangi dilakukan di

Laboratorium Biokimia FMIPA Universitas Syiah Kuala. Uji daya hambat bakteri dilakukan

di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala pada

bulan Januari-Februari tahun 2018.

Penelitian ini menggunakan daun pandan wangi yang diambil di Desa Lhong Cut

Kecamatan Bandaraya Kota Banda Aceh .bakteri Escherichia coli

dan Salmonela sp. Diambil isolat asal unggas yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi

Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala.

Alat yang digunakan adalaha timbangan digital, blender,batang pengaduk, vacum

rotary evaporator, tabung steril, autoklaf, inkubator, lemari pendingin, tabung reaksi, gelas

erlenmeyer, kawat ose, pipet tetes, cawan petri, pinset, sarung tangan, lampu spiritus, gelas

ukur, gelas kimia, kertas lebel, dan jangka sorong.

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

244

Bahan yang digunakan adalah bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp, Muller

Hinton Agar (MHA), antibiotik cloramphenikol, antibiotik ampicilin, Carboxymethyl

Cellulose (CMC ) 1%, dan ekstrak daun pandan wangi, etanol 96%, aquadest, Kloroform,

H2SO42N, Reagen mayer, reagen wagner, reagen dragendroffserbuk mg, HCl pekat, dan

larutan FeCl3.

Metode yang dilakukan yaitu metode difusition (Kirby-Bauer) dengan menggunakan

kertas cakram. Penelitian ini menggunakan 3 kali ulangan pada masing-masing bakteri,

Escherichia coli dan Salmonella sp. dengan 5 perlakuan yaitu 2 kontrol masing – masing,

kontrol negatif (K0) menggunakan cakram kosong (blank disk) yang direndam dalam

aquadest kontrol positif (k1) menggunakan kertas cakram antibiotik kloramfenikol sebagai

kontrol positif Salmonella sp dan Ampicilin sebagai kontrol positif Escherichia coli dan 3

kelompok ekstrak daun pandan terbagi atas k3, k4, k5 dengan masing - masing konsentrasi

75%, 50%, 25%. Parameter yang diukur adalah diameter zona hambat ekstrak daun pandan

terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp.

Sterilisasi Metode sterilisasi yang digunakan yaitu metode sterilasi panas basah dengan

menggunakan autoklaf. Sterilisasi dilakukan pada medium pembenihan yang akan digunakan,

medium disterilisasi didalam autoklaf pada suhu 121 ˚C selama 20 menit.

Pembuatan Ekstrak Daun pandan

Pembuatan ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi. Daun pandan wangi dikeringkan

dengan diangin – anginkan, daun pandan yang telah kering airnya dipotong kecil – kecil , dan

diblender sampai menjadi potongan yang lebih kecil hinga menjadi serbuk. Kemudian serbuk

pandan wangi ditimbang sebnyak 180 gram, dimasukkan kedalam toples kaca. Selanjutnya

serbuk pandan wangi direndam dalam etanol 96% selama tiga hari, selanjutnya disaring

menggunakan kertas saring dan corong saringan. Hasil penyaringan diuapkan dalam rotary

evaporator (rotavapor) hingga kental kemudian ditaruh dalam wadah kaca steril dan

dimasukkan kedalam lemari pendingin sampai akan digunakan.

Pengenceran

Pengenceran dilakukan untuk menghasilkan beberapa konsentrasi ekstrak daun pandan

wangi yang akan digunakan untuk melihat daya hambat ektrak daun pandan wangi terhadap

pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp. Pengenceran dilakukan dengan cara

menambahkan CMC 1% kedalam ekstrak daun pandan 100% sebanyak jumlah perbandingan

yang sesuai dengan konsentrasi yang diinginkan. Dalam penelitian ini dibuat pengenceran

untuk mendapatkan konsentrasi ekstarak daun pandan 25%, 50%, dan 75%.

Re- Identifikasi Bakteri dan Persiapan Suspensi Bakteri

Bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp yang disimpan pada NA miring diambil

dengan ose steril dan dipindahkan ke dalam media Nutrient Broth (NB) dan inkubasi selama

24 jam pada suhu 37˚C. setelah diinkubasi Masing-masing bakteri di gores pada media

Salmonella Shigella Agar (SSA) untuk bakteri Salmonella Sp. dan Eosin Methylen Blue Agar

(EMBA) untuk bakteri Escherichia coli. diinkubasi kembali selama 24 jam pada suhu 37˚C.

selanjutnya masing-masing dilakukan pewarnaan gram. Setelah dilakukan pewarnaan gram

masing-masing bakteri digores pada media NA miring untuk dilakukan uji aktivitas

antibakteri.

Persiapan Suspensi Bakteri

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

245

Biakan murni Escherichia coli dan Salmonella sp. diperoleh dari laboratorium

Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiahkuala. Isolat masing-masing

bakteri tersebut 1 ose masukkan ke media NB dan di inkubasikan pada suhu 37˚C selama 24

jam.

Uji Fitokimia Ekstrak Daun Pandan Wangi

Alkaloid diuji dengan cara menambahkan 1 ml amoniak dan 1 ml klorofom pada 3

gram ekstrak daun pandan wangi kemudian divorteks sampai homogen. Filtrat yang terbentuk

ditambahkan ditambahkan 10 ml H2SO42N lalu dikocok dan diamkan sampai larutan asam

sulfat dan kloroform terpisah. Lapisan asam sulfat yang terbentuk dipisahkan menjadi tiga

bagian, untuk mengetahui adanya alkaloid maka bagian pertama ditambahkan dengan reagen

Mayer, bila terjadi endapan putih maka positif alkaloid, bagian kedua ditambahkan dengan

reagen Wagner, bila terjadi endapan berwarna coklat maka positif alkaloid, bagian ketiga

ditambahkan dengan reagen Dragendroff, bila terjadi endapan berwarna kemerahan maka

positif alkaloid (Harborne, 1987).

Uji Triterpenoid dan Steroid dilakukan dengan cara ekstrak daun pandan wangi

dimasukkan dalam tabung reaksi, dilarutkan dalam 0,5 mL kloroform lalu dipanaskan dan

didinginkan. Diambil 1 mL dan dimasukkan kedalam tabung reaksi, lalu diteteskan pereaksi

Liberman-burchard. Jika hasil yang diperoleh berupa endapan ungu menunnjukkan adanya

triterpenoid, dan jika terbentuk warna hijau menunjukkan adanya steroid (Jazilah dkk., 2014).

Uji Saponin, dilakukan menggunakan metode forth, dengan cara memasukkan 1 mL

ekstrak daun pandan kedalam tabung reaksi, lalu tambahkan 1 mL akuades dan dikocok

selama 30 detik. Apabila terbentuk busa, tidak hilang selama 30 detik maka menunjukkan

adanya saponin (Darwis, 2000). Uji Flavonoid dilakukan dengan metode Wilstater, dilakukan

dengan cara, larutan ekstrak daun pandan wangi ditambahkan sedikit serbuk Mg dan 1 ml

HCl pekat, kemudian diocok-kocok. Terbentuknya endapan orange, mengindikasikan adanya

senyawa falvonoid (Achmad, 1986). Uji fenolik dilakukan dengan cara 1 ml ekstrak daun

pandan wangi dicampurkan 2 tetes larutan FeCl3. Hasil dinyatakan positif apabila terdapat

warna hijau kehitaman (Harborne, 1987).

Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Pandan Terhadap Pertumbuhan Escherichia Coli dan

Salmonella Sp.

Untuk uji daya hambat digunakan metode kirby-bauer dengam cara: siapkan 6 cawan

petri yang berisi Muller Hinton Agar (MHA), lalu diamkan sampai mengeras, setelah

mengeras usapkan secara merata bakteri dengan swab steril pada media MHA, 3 cawan petri

diswab dengan isolat Escherichia coli dan 3 cawan petri diswab isolat Salmonella sp. sebelum

dioleskan kepermukaan media MHA, bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp.

distandarkan dengan standar Mc Farland 0,5. Selanjutnya beri label penamaan pada setiap

cawan petri. P0 (kontrol negatif) paper disck direndam kedalam aquadest, P1 (kontrol positif)

ditempelkan paper disck antibiotik ampicilin sebagai kontrol positif Escherichia coli dan

cloramfenikol sebagai kontrol positif bakteri Salmonella sp. P2 diberi ekstrak daun pandan

dengan konsentrasi 25%. P3 diberi ekstrak daun pandan dengan konsentrasi 50%, dan untuk

P4 diberi ekstrak daun pandan dengan konsentrasi 75% danselanjutnya semua perlakuan

tersebut diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam Selanjutnya dihitung zona hambat

terbentuk yang terbentuk.Selanjutnya dihitung zona hambat yang terbentuk. selanjutnya

semua perlakuan tersebut diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Selanjutnya dihitung

zona hambat yang terbentuk.

Analisis Data

Dari hasil penelitian data dianalisis secara deskriptif.

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

246

HASIL DAN PEMBAHASAN

Re-Identifikasi Bakteri

Berdasarkan hasil Re-Identifikasi yang dilakukan penanaman pada media Eosin

Metheylen Blue Agar (EMBA) untuk Eschericha coli dan penanaman pada media Salmonella

Shigella Agar (SSA) untuk bakteri Salmonella sp. maka didapatkan hasil yang disajikan pada

gambar 1. dan gambar 2.

Gambar 1. Bakteri Escherichia coli Gambar 2. Bakteri Salmonella sp. pada media

EMBA. media SSA.

Berdasarkan hasil penanaman pada media EMBA, bakteri Escherichia coli tumbuh

pada media tersebut dengan ciri-ciri bentuknya yang bulat, cembung berdiameter 2 mm dan

bewarna hijau metalik. Hal ini sependapat dengan penelitian yang sudah dilakukan oleh

Arrizqiyani dan Nurlina. (2016). EMBA mengandung Enzimatik dari gelatin yang merupakan

sumber nitrogen. Laktosa pada EMBA membuat gram negatif tumbuh terdiferensiasi

berdasarkan sifatnya sehingga memproses laktosa. Eosin Y dan Methylene biru dari media

EMBA merupakan pewarna yang bergabung untuk membentuk kompleks pada pH asam dan

menghambat bakteri gram positif (eosin pada tingkat lebih rendah), sementara eosin berubah

menjadi ungu gelap ketika kondisi media sekitar koloni berubah menjadi asam (Juwita dkk.,

2014). Berdasarkan uji yang telah dilakukan pada media SSA maka didapatkan hasil bahwa

bakteri tersebut termasuk bakteri Salmonella sp. Bakateri Salmonella sp. pada media SSA

dapat dilihat dengan ciri koloni tak berwarna sampai merah muda, bening sampai buram

dengan bintik hitam ditengah, hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang telah dilakukan

oleh Hart dan Paul. (1997).

Maryantuti. (2007), menyatakan bahwa SSA merupakan media selektif yang hanya

menumbuhkan bakteri Salmonella-Shigella. Berdasarkan komposisinya media ini terdiri dari

peptone, lab lemcobeef extract, laktosa, ox bile dried, sodium citrate, sodium thisulfat,

ammonium iron (III) citrate, brilliant green, dan neutralred agar, media SSA disebut media

selektif karena hanya dapat menumbuhkan bakteri Salmonella dan Shigella dan menghambat

pertumbuhan bakteri lain.

Setelah dilakukan penanaman pada media EMBA dan SSA selanjutnya dilakukan uji

pewarnaan Gram. Pada pewarnaan Gram menunjukkan bahwa bakteri Escherichia coli

berbentuk batang pendek (kokobasil), dan bewarna pink yang menandakan kelompok dari

bakteri Gram negatif. Yang disajikan pada gambar 3. Hal ini sesuai dengan pendapat

Elfidasari dkk. (2011), bahwa bakteri Escherichia coli tergolong bakteri Gram negatif yang

ditandai dengan berwana pink dan berbetuk batang pendek (kokobasil, dan berdiameter ±1,1

– 1,5 x 2,0 – 6,0 µm (Pelczar dan Chan, 1988). Salmonella sp. merupakan bakteri Gram

negatif berbentuk batang panjang (basil) dengan warna pink yang dapat dilihat pada gambar

4. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Amiruddin dkk.(2017).

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

247

Escherichia coli Salmonella sp.

Gambar 3 dan 4 hasil pewarnaan gram

Escherichia coli dan Salmonella sp. merupakan bakteri Gram negatif, yang terlihat

bewarna pink ketika dilakukan pewarnaan Gram dan diamati dibawah mikroskop, bakteri

Gram negatif mengandung lipopolisakarida yang tebal pada dinding selnya, sehingga saat

dilakukan pewarnaan pada tahap decolorizing menggunakan alkohol 96% lapisan

lipopolisakarida menjadi tidak berwarna dikarenakan pewarnaan pertama dengan larutan

kristal violet melekat pada lapisan lipopolisakarida dan pada saat dilakukan pewarnaan kedua

dengan safranin menghasilkan warna merah sehingga secara mikroskopis menandakan bakteri

tersebut adalah bakteri Gram negatif (Yuswananda, 2015).

Hasil Uji Fitokimia

Setelah dilakukan identifikasi fitokimia terhadap ektrak daun pandan wangi

(Pandanus amaryllifolius roxb) di bagian Laboratorium Biokimia FMIPA Universitas Syiah

Kuala maka didapatkan hasil yang disajikan padatabel 1 dan gambar 5.

Gambar 5. Hasil Uji Fitokimia

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

248

Tabel 1. Hasil pengamatan uji fitokimia daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius roxb).

Kandungan

kimia

Reagen Ekstrak

Daun

Pandan

Wangi

Hasil pengamatan

Alkloid Mayer - Tidak terdapat endapan putih

Wagner - Tidak terdapat endapan coklat

Dragendroff - Tidak terdapat endapan merah

Steroid Liberman-Burchard + Terdapat warna hijau

Terpenoid Liberman-Burchard + Terdapat endapan ungu

Saponin Asam Klorida - Tidak terdapat busa

Flavonoid 0,5 Mg Dan HCl - Tidak terdapat endapan orange

Fenolik FeCl3 + Terdapat endapan hijau

Keterangan: (+) Terdapatnya kandungan kimia, (-) Tidak terdapatnya kandungan kimia.

Berdasarkan uji fitokimia, ekstrak daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius roxb)

didapatkan hasil bahwa pada uji alkaloid yang ditambahkan dengan reagen mayer

menghasilkan hasil yang negatif ditandai dengan tidak terbentuknya endapan putih, begitu

juga dengan penambahan reagen wagner pada uji alkaloid juga menandakan hasil yang

negatif karena tidak terbentuknya endapan coklat, serta pada pengujian alkaloid dengan

penambahan reagen dragendroff juga menampakkan hasil yang negatif yang ditandai dengan

tidak terbentuknya endaapan merah. menurut Setyowati dkk. (2014), bahwasanya pada

pengujian alkaloid akan menunjukkan hasil positif apabila terdapat endapan putih, coklat dan

merah.

Alkaloid adalah suatu golongan senyawa yang tersebar luas hampir pada semua jenis

tumbuhan. Semua alkaloid mengandung paling sedikit satu atom nitrogen yang biasanya

bersifat basa dan membentuk cincin heterosiklik (Harborne, 1984). Alkaloid dapat ditemukan

pada biji, daun, ranting dan kulit kayu daritumbuh-tumbuhan. Kadar alkaloid dari tumbuhan

dapat mencapai 10-15%. Alkaloid kebanyakan bersifat racun, tetapi ada pula yang sangat

berguna dalam pengobatan. Alkaloid merupakan senyawa tanpa warna, sering kali bersifat

optik aktif, kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya

nikotin) pada suhu kamar (Sabirindkk., 1994). Alkaloid berfungsi sebagai obat dan aktivator

kuat bagi sel imun yang dapat menghancurkan bakteri, virus, jamur, dan sel kanker (Depkes,

1987).

Uji steroid dan terpenoid ekstrak daun pandan wangi menunjukkan hasil positif.

Ketika ditambahkan reagen Liberman-Burchard maka menunjukkan adanya warna hijau yang

menandakan bahwa positif adanya steroid, dan terbentuk endapan warna ungu, yang

menandakan positif terpenoid. Sesuai dengan penelitian Setyowati dkk. (2014), bahwa

steroid akan menunjukkan hasil yang positif jika terbentuk warna hijau pada uji steroid dan

warna ungu pada pengujian terpenoid.

Steroid dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara: steroid dapat

berinteraksi dengan membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap senyawa-

senyawa lipofilik sehingga menyebabkan integritas membran menurun serta morfologi

membran sel berubah yang menyebabkan sel rapuh dan lisis (Madduluri dkk., 2013).

Terpenoid dapat menghambat bakteri melalui mekanisme kerja senyawa terpenoid yang

melibatkan kerusakan membran oleh senyawa lipofilik dimna pertumbuhan bakteri terhambat

atau mati (Cowan, 1999).

Ekstrak daun pandan yang di uji negatif mengandung saponin karena tidak

terbentuknya busa yang menunjukkan uji saponin dinyatakan negatif, sesuai dengan pendapat

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

249

Darwis. (2000), bahwa hasil positif dari dari uji saponin menghasilkan busa yang tidak hilang

selama 30 detik. Pada umumnya saponin memiliki sifat antimikroba, saponin bersifat

sitotoksik karena dapat mengubah permeabilitas sitoplasma mikroba, sehingga menyebabkan

lisisnya sel mikroba (Aini dan Mardyaningsih, 2016).

Uji falavonoid pada ekstrak daun pandan wangi memberikan hasil yang negatif

dikarenakan pada hasil uji tidak terbentukya endapan orange pada sampel ekstrak daun

pandan ketika dicampurkan dengan 0,5 Mg dan HCl. Hal ini sesuai dengan pendapat

Achmad.(1986), bahwasanya prinsip dari uji falvonoid mengindikasikan hasil yang positif

terbentukya endapan orange. Flavonoid adalah derivat senyawa fenol. Flavonoid memiliki

aktivitas antibakteri karena Flavonoid memiliki kemampuannya untuk bergabung dengan

membran sel bakteri dan protein ekstraselular (Aini dan mardyaningsih, 2016).

Uji fenolik pada ekstrak daun pandan wangi menunjukan hasil positif dikarenakan

terbentuknya endapan hijau. Hal serupa juga dinyatakan oleh (Harborne, 1987). Senyawa

fenol dalam membunuh mikroorganisme yaitu dengan mendenaturasi protein sel. Ada atau

tidaknya senyawa kimia pada tanaman sangat dipengaruhi beberapa faktor, seperti :umur

tumbuhan atau bagian tumbuhan, waktu panen, dan lingkungan tempat tumbuh (ekofisiologi)

(Depkes RI, 1985). Umur tumbuhan atau bagian tumbuhan pada waktu panen merupakan

salah satu tahapan dalam proses budidaya tanaman obat. Waktu panen yang berkaitan dengan

umur tumbuhan (tingkat maturasi) merupakan periode kritis sehingga sangat menentukan

kualitas dan kuantitas hasil panen. Setiap jenis tanaman memiliki waktu dan cara panen yang

berbeda (Depkes RI, 1985).

Waktu panen sangat erat hubungannya dengan pembentukansenyawa aktif di dalam

bagian tanaman yang akan dipanen.Waktu panen yang tepat pada saat bagian tanaman

tersebut mengandung senyawa aktif dalam jumlah yang terbesar. Waktu panendan waktu

pengangkutan harus diperhatikan. Beberapa simplisia hasil panen terfermentasi dan

metabolitnya rusak jika terkena panas yang berlebihan sehingga mutu simplisia kurang baik

(Wijesekera, 1991).

Lingkungan tempat tumbuh pengaruh ekosistem dominan pada berbagai tanaman

Kualitas dan kuantitas komponen aktif berbagai herbal dipengaruhi oleh faktor ekosistem

(Harbone, 1987). Faktor-faktor yang terdapat pada lingkungan tumbuh, diantaranya: Unsur

hara, ketinggian, suhu, kelembapan udara, intensitas cahaya, dan pH tanah (Wijesekera,

1991).

Hasil Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Pandan Wangi

Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius

roxb) dengan metode disc diffusion (Kirby-bauer) berdasarkan pengukuran diameter zona

hambat pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp. zona hambat yang

terbentuk dapat dilihat di gambar 6. untuk bakteri Escherichia coli sedangkan untuk bakteri

salmonella sp. disajikan pada gambar 7. Untuk hasil pengukuran zona hambat disajikan pada

tabel 2. Untuk bakteri Escherichia coli dan tabel 3. untuk bakteri Salmonella sp.

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

250

Gambar 6. Zona hambat ekstrak daun pandan wangi terhadap bakteri E.coli. a) 25%, b) 50%,

c) 75%, d) (-) aquadest, e) (+) Ampicilin.

Gambar 7. Zona hambat ekstrak daun pandan wangi terhadap bakteri Salmonella sp. a) 25%,

b) 50%, c) 75%, d) (-) aquadest, e) (+) Cloramphenikol.

Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun pandan wangi (Pandanus

amaryllifolius roxb) terhadap bakteri Escherichia coli.

Diameter Zona Hambat (mm)

Konsentrasi Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-Rata

25%

(EDPW) 6,5 6,8 6,6 6,6 ± 0,15

50%

(EDPW) 6,5 6,9 6,7 6,7 ± 0,20

75%

(EDPW) 6,8 7 6,9 6,9 ± 0,10

K(+)

(Ampicilin) 6,1 6,1 6,1 6,1 ± 0,00

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

251

K(-)

Aquadest 0 0 0 0 ± 0,00

Tabel 3. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak daun pandan wangi (Pandanus

amaryllifolius roxb) terhadap bakteri Salmonella sp.

Diameter Zona Hambat (mm)

Konsentrasi Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-Rata

25%

(EDPW) 6,1 6,4 6,4 6,3 ± 0,17

50%

(EDPW) 6,3 6,6 6,6 6,5 ± 0,17

75%

(EDPW) 7,7 7,1 7,3 7,3 ± 0,31

K(+)

(Cloramphenicol) 22,4 23,3 23,3 23,3 ± 0,52

K(-) Aquadest 0 0 0 0 ± 0,00

Hasil uji aktifitas antibakteri ektrak daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius

roxb) menggunakan metode Kirby-Bauer dilakukan dengan tiga konsentrasi yang

berbedayaitu: 25%, 50%, 75% terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Salmonella sp.

untuk konsentarsi 25% zona hambat yang dihasilkan terhadap bakteri Escherichia coli rata-

rata sebesar 6,6 mm, konsentrasi 50% rata-rata 6,7 mm, dan pada konsentrasi 75% zona

hambat yang dihasilkan rata-rata sebesar 6,5 mm. Begitu juga dengan zona hambat terhadap

bakteri Salmonella sp. yang diuji pada konsentrasi 25% memiliki zona hambat rata-rata 6,3

mm, konsentrasi 50% rata-rata 6,5 mm, dan pada konsentrasi 75% dengan rata- rata sebesar

7,3 mm.

Dari hasil yang didapat maka ekstrak daun pandan wangi memiliki daya hambat yang

lemah terhadap pertumbuhan Bakteri Echerichia coli dan Salmonella sp. hal ini didasarkan

oleh standar krtiteria CLSI (Clinical Laboratory Standars Institue) yang mana kriteria yang

dinyatakan adanya zona hambat dapat dilihat dari terbentuknya zona bening. Maka kriteria

yang dapat dilihat yaitu: 0 tidak ada aktivitas, 6-10 mm dinyatakan lemah, 11-20 mm

dinyatakan sedang, dan zona hambat 21-30 mm dikatagorikan kuat (Morales dkk., 2003).

Senyawa aktif yang berperan dalam menghambat pertumbuhan bakteri yang dhasilkan

oleh ekstrak daun pandan wangi yaitu terpenoid. Terpenoid memiliki mekanisme penghambat

pertumbuhan bakteri dengan cara bereaksi dengan porin (protein transmembran) pada

membran bagian luar dari dinding sel bakteri dan membentuk ikatan polimer yang kuat yang

dapat mengakibatkan rusaknya porin, dan sel bakteri akan kekurangan nutrisi sehingga

menghambat pertumbuhan bakteri terhambat (Cowan, 1999). Senyawa aktif lainnya yang

terkandung dalam ekstrak daun pandan wangi yang bersifat antibakteri ialah senyawa fenolik,

yang merupakan ikatan hidrogen yang terbentuk antara fenol dan protein mengakibatkan

struktur protein menjadi rusak dan akan mempengaruhi permeabilitas dinding sel dan

membrane sitoplasama sehingga meyebabkan ketidak seimbangan makromolekul dan ion

didalam sel yang mengakibatkan sel menjadi lisis (Palczar dan Chan, 1988). Mekanisme

steroid sebagai antibakteri berhubungan dengan membranlipid dan sensitivitas terhadap

komponen steroid yang menyebabkakebocoran pada liposom. Steroid dapat berinteraksi

dengan membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap senyawa-senyawa lipofilik

sehingga menyebabkan integritas membran menurun serta morfologi

membran sel berubah yang menyebabkan sel rapuh dan lisis (Madduluri dkk., 2013).

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

252

Faktor yang sangat berpangaruh terhadap aktifitas antibakteri ialah pemilihan pelarut

yang digunakan dalam ekstraksi komponen-komponen bioaktif dari tanaman untuk mencapai

tujuan dari sasaran ektraksi komponen (Moyler, 1995). Escherichia coli dan Salmonella sp.

mempunyai dinding sel dengan komponen utama lapisan lipopolisakarida, lipid, dan

lipoprotein. Lapisan lipid lebih mudah dilewati oleh senyawa yang relatif nonpolar

(Mardyaningsih dkk., 2014). Adapun faktor lain yang dapat mempengaruhi aktifitas daya

hambat antibakteri antara lain kepekatan inokulum, waktu pemasangan cakram, suhu

inkubasi, waktu inkubasi, dan potensi cakram antibiotik (Depkes, 1985).

Penelitian ini menggunakan aquadest sebagai kontrol negatif, sehingga tidak ada zona

hambat yang terbentuk, sedangkan kontrol positif untuk bakteri Escherichia coli digunakan

antibiotik ampicilin. Berdasarkan data hasil penelitian antibiotik ampicilin tidak dapat

menghambat pertumbuhan bakteri Escherichiacoli, yang mana antibiotik ampicilin hanya

mampu menghambat bakteri Escherichiacoli dengan rata-rata 6,1 mm, hal ini disebabkan

adanya resistensi bakteri Escherichia coli terhadap antibiotik ampicilin. sesuai dengan

pendapat Wewelangko dkk. (2015), bahwa hasil penelitian yang telah dilakukan, ampicilin

memiliki diameter zona hambatnya 7,3 mm. Hal ini menunjukkan bahwa Escherichia coli

resisten terhadap antibiotik ampicilin. Resistensi ini dapat terjadi akibat dari penggunaannya

yang meluas dan irasional (Utami, 2012).

Kontrol positif yang digunakan untuk bakteri Salmonella sp. yaitu antibiotik

cloramphenikol. Cloramphenikol menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella sp. dengan

luas zona hambat rata-rata 23,3 mm, dan termasuk katagori sensitive, sesuai dengan hasil

penelitian Estoepangesti dkk. (2014), yang mendapatkan hasil bahwa Salmonella sp. sensitiv

terhadap amtibiotik cloramphenikol dengan luas zona hambat 14,3 mm.

PENUTUP

Kesimpulan

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan diperoleh hasil, bahwa ekstrak daun pandan

wangi (Pandnus amaryllifolius roxb) berdasarkan standar CLSI memiliki daya hambat yang

lemah terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp. karena zona hambat

yang terbentuk tidak melebihi 10 mm.

DAFTAR PUSTAKA

Achmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Karnunik, Jakarta.

Aini, R. and A. Mardyaningsih. 2016. Pandan leaves extract (Pandanus amaryllifolius roxb)

as a foodpreservative. JKKI. 7(4):171.

Amiruddin, R.R., Darniati, Ismail. 2017. Isolasi dan identifikasi Salmonella sp. pada ayam

bakar di rumah makan Kecamatan Syiah Kuala Kota Banda Aceh. Jimvet. 1(3):269-

270.

Arrizqiyani, T., dan L. Nurlina. 2016. Identifikasi bakteri Escherichia coli pada cincau hitam

yang dijual di pasar Cikurubuk Tasikmalaya. Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada.

16(1):189-194.

Cowan, M.M. (1999). plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology

reviews.12(4):564–582.

Darwis, D. 2000. Teknik Dasar laboratorium daalam penelitian senyawa bahan alam

Hayati.Universitas Andalas, Padang.

[Depkes] Departemen Kesehatan. 1987. Analisis Obat Tradisional. Jilid 1.Depkes.Jakarta.

Depkes, RI. 1985. Farmakope Indonesia. Ditjen POM, Jakarta.

Dwidjoseputro, D. 1978. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan, Jakarta.

Elfidasari, D., A.M. Saraswati, G. Nufadianti, R. Samiah, V. dan Setiawati. 2011.

Perbandingan kualitas es dilingkungan Universitas Al Azhar Indonesia dengan

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

253

restoran fast food di daerah senayan dengan indikator jumlah Escherichia coli

terlarut.jurnal Al Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi. 1(1):19-21.

Estoepangestie, A.T.S., F.A. Anggita, B. Setiawan, 2014. Gambaran resistensi antibiotika

kuman salmonella sp. yang diisolasi dari daging sapi.Veteriner Medika. 7(1):68-70.

Fitri, C.R., S.P. Fitrianingsih, dan Suwender. 2016. Evaluasi potensi aktivitas antifungi

ekstrak etanol daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius roxb) terhadap candida

albicans secara invitro. Prosiding Farmasi. 2(2):732.

Harbone, J.B. 1984. Phitochemical Method. Chapman and Hall 1 Td. London.

Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara ModernMenganalisis tumbuhan.

Institut Teknologi Bandung, Bandung.

Hart, Tony dan Paul Shears, 1997, Atlas Berwarna Mikrobiologi Kedokteran. Hipokrates,

Jakarta.

Jawetz, E., L.J. Melnick, dan E.A. Adelbergs. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba

Medika, Jakarta.

Jazilah, N., A.G. Fasya, R. Ningsih dan A. Abtokhi. 2014. Uji toksisitas ekstrak daun

binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Stenis) terhadap larva udang Artemia salina

Leach dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Alchemy. 3(2):118-124.

Juwita U., Yuli H, Christine J. 2014. Jumlah bakteri coliform dan deteksi Escherichia

colipada daging ayam di Pekanbaru. JOM FMIPA. 1(2):48-55.

Karsinah.2004. Deteksi Salmonella.Universitas Airlangga, Surabaya.

Kayadoe, V., M. Fadli, R. Hasim, dan M. Tamasoa. 2015. Ekstrak daun pandan wangi

(Pandanus amaryllifolius roxb) sebagai inhibitor korosi baja ss-304 dalam larutan

H2SO4.Molekul. 10(2):89-93.

Lestari.P. 2016.Studi tanaman khas sumatera utara yang berkhasiat Obat.Jurnal

farmanesia. 9(11):11–12.

Madduluri, S.R.A.O., K. Babu, Sitaram, B. 2013. In vitro evaluation of antibacterial activity

of five indegenous plants extract against five bacterial pathogens of human.

International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 5(4): 679-684.

Mardiyaningsih, A., dan R. Aini. 2014. Penegembangan Potensi Ekstrak Daun Pandan

(Pandanus amaryllifolius roxb) Sebagai Agen Antibakteri. Pharamaciana.

4(2):186-189.

Maryantuti. 2007. Bakteri patogen yang disebabkan oleh lalat rumah (Musca domestica, L) di

rumah sakit kota pekan baru. Skripsi. Fakultas Ilmu Pendidikan Universitas Riau,

Pekan baru.

Morales. G.P., Siera, A. Manalla, A. Paredes, L.A. Layola, O. Gallardo, dan J. Borquez. 2003.

secondary metabolites from four medicinal plants from northern chile antimicrobial

activity and biotoxicity against aritemiasalina. J. Chil.Chem. 49(1):44-45.

Moyler, D.A. 1995. Oleoresins Tinctures and Exstracts. Blackie Academic dan

Profesional:New York.

Murhadi., S.A.S., dan Susiawati. 2007. Aktifitas antibakteri ekstrak daun salam (Syzigium

polyanta) daun pandan (Pandanun amaaryllifolius roxb). Jurnal Teknol dan Industri

Pangan. 18(1):17-21.

Pelczar, M.J., dan E.C.S. Chan. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI-Press, Jakarta.

Putri, R. W. A..2016. Identifikasi Bakteri Escherichia Coli Dan Salmonella Sp. pada jajanan

batagor disekolah dasar negeri dikelurahan pisangan, cirendu, dan cempaka putih

kecamatan cipitural timur. Skripsi. Programstudi kedokteran dan profesi dokter

fakultas kedokteran dan ilmu kesehatan UIN syarif hidayatullah, Jakarta.

Sabirin,M., Hardjono, dan Respati. 1994. Pengantar Praktikum Kimia Organik II. UGM,

Yogyakarta.

Utami, E.R. 2012. Antibiotika, resistensi, dan rasionalitas terapi. Sainstis. 1(1):125-133.

JIMVET E-ISSN : 2540-9492 Mei 2018, 2(3):242-254

254

Setyowati, W.A.E., S.R.D. Ariani, Ashadi, B. Mulyani, dan C.P. Rahmawati. 2014. Skrining

fitokimia dan identifikasi komponen utama ekstrak metanol kulit durian (Durio

zibethinus murr.) varietes petruk. Seminar Nasional Kimia dan pendidikan kimia.

Program Studi Pendidikan Kimia Jurusan PMIPA FKIP UNS, Surakarta.

Stevani. H., Irmawati., dan A. Kadir. 2016. Uji daya hambat perasan daun

panda wangi (Pandanus amaryllifolius roxb) terhadap bakteri Staphylococcus

Aureus.Media farmasi. 12(2):145.

Wewelangko, G. U. C., W. Bodhi, B. J. Kepel. 2015. Uji resistensi bakteri escherichia coli

yang di isolasi dari plak gigi menggunakan merkuri dan ampisilin.Jurnal e-Biomedik.

3(1):120-122.

Wijesekera, R.O.B. 1991. The Medicinal Plant Industry.CRC Press, Washington.

Yuswananda, N.P. 2015. Identifikasi bakteri Salmonella sp pada makanan jajanan di

masjidFathullah Ciputat tahun 2015.Laporan Penelitian. Fakultas Kedokteran Dan

IlmuKesehatan, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.