Tinciones microbiológicas

7/23/2019 Tinciones microbiolgicas

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Tincionesmicrobiolgicas


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Tincin de Gram

Tincin diferencial que permite la clasificacin de bacterias.Basada en las diferencias en la pared celular bacteriana.


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Pasos para realizar la tincin de Gram

1. Realizar frote y fijar al la llama.

2. Cubrir con cristal violeta durante 1 minuto.

3. Lavar con agua.

4. Cubrir con lugol durante 1 minuto.

5. Lavar con agua.

6. Decolorar con alcohol-acetona.

7. Lavar con agua.

8. Cubrir con safranina durante 1 minuto.

9. Lavar con agua.


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Diferenciacin de bacterias por tincide Gram


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Preparacin de colorantesSolucin A

Cristal violeta 2g

Alcohol etlico al 95% 20mL

Solucin B

Oxalato de amonio 0.8gAgua destilada 80mL

Preparacin

1. Disuelva el cristal violeta en el a

2. Disuelva el oxalato de amonio edestilada.

3. Mezcle la solucin A y B

4. Filtrar 24 horas despus.


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Preparacin de colorantesSolucin Stock

Safranina 0.5g


Solucin de trabajo

Solucin Stock 10mLAgua destilada 90mL

Preparacin

1. Disuelva la safranina en el alcoh

2. Para la solucin de trabajo realidilucin 1:10.


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Preparacin de colorantesSolucin de trabajo

Acetona 10mL


Lugol

Yodo sublimado (cristales) 1g

Yoduro de potasio 2g

Agua destilada 300mL

Preparacin

1. Mezcle los reactivo.

2. Conserve fuera del alcance de la l

Preparacin

1. Combinar el yodo y el yoduro de p

mortero2. Lavar con pequeas alcuotas de a

3. Aforar a 300mL. Agitar fuertemen

4. Almacenar en botella oscura con tvidrio.


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Tincin de Ziehl Neelsen

Permite la tincin de bacterias cido alcoholresistentes.M. tuberculosis

Estndar de oro para el diagnstico detuberculosis.

Tincin en caliente

Calor facilita la penetracin del colorante a travsde la pared celular


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Pasos para la tincin de ZiehlNeelsen

1. Realizar frote y fijar a la llama.

2. Cubrir con carbol fucsina durante 5 minutos.

3. Lavar con agua.

4. Decolorar con alcohol cido durante 1 minuto.

5. Lavar con agua.

6. Cubrir con azul de metileno durante 30 segundos.

7. Lavar con agua.


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Ziehl Neelsen modificado

Tincin de Kinyoun Tincin en fro Alta cantidad de fenol en el reactivo disuelve los lpidos de la pared celular permitiend

colorante.

Procedimiento1. Fijar al calor el frote

2. Cubrir con carbolfucsina durante 5 minutos3. Lavar con agua

4. Decolorar con alcohol cido durante 3 minutos

5. Lavar con agua

6. Cubrir con azul de metileno de 3-4 minutos

7. Lavar, secar y examinar


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Preparacin de colorantes

Alcohol cido

cido clorhdrico concentrado 3mL


Carbolfucsina (Kinyoun)

Fucsina bsica 4gAlcohol etlico al 95% 20mL

Fenol 0.8g


Preparacin

1. Mezclar los reactivos y guardar eoscuro.

Preparacin

1. Disuelva la fucsina en alcohol et

2. Disuelva el fenol en agua destila

3. Mezcle las dos soluciones

4. Guardar en frasco oscuro.


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Preparacin de colorantesAzul de metileno

Azul de metileno 0.30mg


Carbolfucsina (Ziehl Neelsen)

Solucin A

Fucsina bsica 3g


Solucin B

Fenol 3g

Agua destilada 95mL

Preparacin

1. Mezclar los reactivos.

2. Guardar en frasco de vidrio tapa

3. Filtrar a las 24 horas.

Preparacin

1. Disuelva la fucsina en alcohol podentro de un mortero.

2. Disuelva el fenol en agua destila

3. Mezclar 10mL de solucin A porde solucin B


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Tincin de cpsula

Cpsula formada por sustanciasmucilaginosas Carbohidratos

Polmeros de glucosa, galactosa, fructosa, cidournico y aminoazcares

Polipptidos

Tincin en negativo Tinta china


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Tincin de cpsulaCriptococcus neoformans


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Tincin de cpsulaProcedimiento COLORACIN CON TITNTA CHINA

1. Colocar una gota de tinta china en el extremo de un portaobjetos y mezclar con ucolonia.

2. Extender la suspensin y dejar secar al aire.

3. Fijar con calor.

4. Cubrir la preparacin con cristal violeta al 1% durante 5 minutos.

5. Lavar con agua y dejar secar al aire.


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Tincin de cpsulaProcedimiento PREPARACIN EN FRESCO

1. Colocar una gota de tinta china en un portaobjetos y agregar con uncolonia.

2. Mezclar.

3. Colocar un cubreobjetos.

4. Observar al microscopio.


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Tincin de flagelosPreparacin de portaobjetos

Portaobjetos nuevos

Lavar con agua y etanol al 95%

Pasar los portaobjetos sobre la llama del mechero

Calentar lentamente

Utilizar cultivos de 18-22 horas en medio sin carbohidratos

Colocar una gota de agua destilada en el centro delportaobjetos

Colocar una colonia en la gota de agua

Cubrir con cubreobjetos y examinar si hay movilidad


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Tincin de flagelos

Si hay movilidad, dejar reposar de 5-15minutos Permite que se adhieran las bacterias

Colocar dos gotas de colorante de RYU enun esquina y permitir que penetre porcapilaridad

Dejar reposar de 5-15 minutos

Las bacterias y flagelos se tienen de azuloscuro a negro con un fondo celeste.


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Preparacin de colorantes (RYU)Solucin I mordiente

Fenol 5% (solucin acuosa) 10mL

cido tnico 2g

Solucin saturada de sulfato de aluminio y potasio saturado con 12H2O 10mL

Solucin II colorante

Cristal violeta 12g

Etanol al 95% 100mL

Procedimiento

Mezclar una parte de solucin II con 10 partes de solucin I.

Filtrar y guardar en botella plstica a temperatura ambiente.

Si no se utiliza pronto agregar fenol al 0.2% para evitar el crecimiento de hongos.


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Preparacin de colorantes (Leifson)Colorante de Leifson

Disolucin acuosa saturada de AlK(SO4)2 *12H2O 20mL

Disolucin acuosa al 20% de cido tnico 10mL

Agua destilada 40mL


Disolucin saturada en alcohol etlico al 95% de fuscina bsica 3mL

Preparacin

1. Mezclar los reactivos en el orden citado.

2. Guardar en frascos bien tapados.


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Tincin de esporas

Esporas son estructuras de resistenciaFormadas por sales de calcio de cido dipicolnico

Esporulacin: mecanismo de resistencia

Requieren de aplicacin de calor para que el colorante penetre en la estructura.


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Tincin de esporasProcedimiento MTODO DE WIRTZ-CONKLIN

1. Preparar un frotis y fijar a la llama.

2. Cubrir con verde de malaquita y calentar hasta la emisinde vapores durante 5-10 min. EVITAR EBULLICIN. Si sedeshidrata la lmina agregar ms colorante.

3. Lavar la lmina con agua durante 30 segundos.

4. Cubrir con safranina durante 30 segundos.5. Lavar con agua.


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Tincin de esporasPreparacin BARTHOLOME Y MITTMER

1. Preparar un frote y fijar a la llama 20 veces.

2. Teir con verde de malaquita en solucin acuosasaturada al 7.6% durante 10 minutos.

3. Lavar con agua.

4. Teir por 15 segundos con solucin acuosa e

safranina al 0.25%.5. Lavar con agua.


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Preparacin de colorantesVerde de malaquita (Bartholome y Mittmer)

Verde de malaquita 7.6g


Verde de malaquita (Wirtz-Conklin)



Preparacin

1. Disolver el verde de malaquita e

2. Filtrar luego de 24 horas de repo

Preparacin

1. Disolver el verde de malaquita

2. Filtrar luego de 24 horas de rep


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Tincin de grnulos metacromticosDepsitos de materiales de reserva

Grnulos de volutina Polimetafosfato

Pronunciado en clulas adultas.


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Tincin de grnulos metacromticosProcedimiento

1. Preparar un frote y fijarlo a la llama.

2. Cubrir con azul de metileno durante 5 minutos.

3. Lavar con agua del chorro.

Procedimiento

1. Preparar un frote y fijarlo a la llama.

2. Cubrir con colorante de Albert por un minuto. NO LAVAR

3. Cubrir con lugol de Albert por 5 minutos. Lavar ligeramente.


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Preparacin de colorantesColorante de Albert

Azul de toluidina 0.15g


cido actico glacial 1.0mL

Alcohol etlico al 95% 2.0mL


Lugol de Albert

Yoduro de potasio 3.0g

Yodo sublimado 2.0g


Preparacin

1. Disolver el cido actico en

2. Disolver el azul de toluidinamalaquita en alcohol en un

3. Agregar cido actico y mez

Preparacin

1. Disolver el yoduro en 5mL dyodo y disolver por agitaci

2. Aforar a 300mL de agua y a

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