Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In

8/10/2019 Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In

1/6

V o l .

5 4 ,

N o . 1 2P P L I E D AND ENVIRONMENTAL

M I C R O B I O L O G Y ,

D e c .

1 9 8 8 , p . 2 9 0 2 - 2 9 0 7

0 0 9 9 - 2 2 4 0 / 8 8 / 1 2 2 9 0 2 - 0 6 0 2 . 0 0 / 0

C o p y r i g h t

1 9 8 8 ,

A m e r i c a n

S o c i e t y

f o r

M i c r o b i o l o g y

S u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a

c o l i

a n d

S a l m o n e l l a

s p p .

i n

E s t u a r i n e

E n v i r o n m e n t s t

MARTHA W. RHODES* AND HOWARD

K A T O R

D e p a r t m e n t of

B i o l o g i c a l

a n d F i s h e r i e s

S c i e n c e s ,

V i r g i n i a

I n s t i t u t e

o f

M a r i n e

S c i e n c e ,

S c h o o l

o f

M a r i n e

S c i e n c e ,

C o l l e g e

o f

W i l l i a m a n d

M a r y ,

G l o u c e s t e r

P o i n t ,

V i r g i n i a

2 3 0 6 2

R e c e i v e d 1 2

May

1 9 8 8 / A c c e p t e d

3 1

A u g u s t 1 9 8 8

S u rv i v a l o f

E s c h e r i c h i a

c o l i

a n d S a l m o n e l l a

s p p .

i n

e s t u a r i n e

w a t e r s

wa s

c o m p a r e d

o ve r a

v a r i e t y

o f

s e a s o n a l

t e m p e r a t u r e s

d u r i n g

i n

s i t u

exposure

i n

d i f f u s i o n

c h a m b e r s .

S u b l e t h a l s t r e s s

was

m e a s u r e d

b y

b o t h

s e l e c t i v e - v e r s u s - r e s u s c i t a t i v e e n u m e r a t i o n

p r o c e d u r e s

a n d

an

e l e c t r o c h e m i c a l

d e t e c t i o n

m e t h o d . E . c o l i

a n d

S a l m o n e l l a

spp.

t e s t

s u s p e n s i o n s , p r e p a r e d

t o

m i n i m i z e

s u b l e t h a l

i n j u r y ,

were

e x p o s e d

i n

a

s h a l l o w t i d a l

c r e e k

a n d a t a s i t e 7 . 1 km f u r t h e r d o w n r i v e r .

B a c t e r i a l d i e - o f f a n d s u b l e t h a l

s t r e s s

i n

f i l t e r e d e s t u a r i n e

w a t e r

were

i n v e r s e l y r e l a t e d t o w a t e r

t e m p e r a t u r e .

S a l m o n e l l a

s p p . p o p u l a t i o n s

e x h i b i t e d

s i g n i f i c a n t l y

l e s s

d i e - o f f a n d

s t r e s s t h a n d i d E .

c o l i

a t w a t e r


o f

< 1 0 C .

A l t h o u g h

t h e

m o s t

p r o n o u n c e d

r e d u c t i o n s

( c a .

3

l o g

u n i t s )

i n

t e s t b a c t e r i a

o c c u r r e d

d u r i n g

s e a s o n a l l y

warm


i n

t h e

presence

o f

t h e

a u t o c h t h o n o u s

m i c r o b i o t a ,

1 0 2 t o

1 0 4

t e s t c e l l s

pe r

m l r e m a i n e d

a f t e r

2

w e e k s

o f

exposure

t o


o f

> 1 5 C .

R e d u c t i o n s

i n t e s t b a c t e r i a

were a s s o c i a t e d w i t h

i n c r e a s e s

i n

t h e

d e n s i t i e s

o f

m i c r o f l a g e l l a t e s

a n d

plaque-

f o r m i n g

m i c r o o r g a n i s m s . T h e s e

s t u d i e s

d e m o n s t r a t e d

t h e

s u r v i v a l

p o t e n t i a l

o f

e n t e r i c

b a c t e r i a

i n

e s t u a r i n e

w a t e r s

a n d

s h o w e d

t h a t

s u r v i v a l was a f u nc t i o n o f

i n t e r a c t i n g

b i o l o g i c a l

a n d

p h y s i c a l

f a c t o r s .

F e c a l

c o l i f o r m s a r e a n

o p e r a t i o n a l l y

d e f i n e d

g r o u p i n g

o f

e n t e r i c b a c t e r i a w h o s e

p r e s e n c e

i n n a t u r a l

w a t e r s

i s u s e d a s

a n

i n d i c a t o r

o f

f e c a l

c o n t a m i n a t i o n

a n d

t h e r e f o r e t h e

p o s s i -

b l e

p r e s e n c e

o f

p a t h o g e n i c m i c r o o r g a n i s m s .

An

a s s u m p t i o n

f u n d a m e n t a l t o t h e

i n d i c a t o r

c o n c e p t

i s t h a t

o f

p a r i t y

i n t h e

s u r v i v a l

o f

t h e

i n d i c a t o r

a n d

e n t e r i c

p a t h o g e n s

( 6 )

o v e r a

r a n g e

o f

a q u e o u s

e n v i r o n m e n t s

a n d

v a r i e d

p h y s i c o c h e m i c a l

c o n d i t i o n s . T h i s

r e p o r t

c o ns i de r s a n

a s p e c t

o f

t h i s

p a r i t y

p a r a d i g m a s i t

a p p l i e s t o e s t u a r i n e

w a t e r s .

S t u d i e s

c o m p a r i n g

s u r v i v a l o f

f e c a l c o l i f o r m s

a n d

p a t h o -

g e n i c

b a c t e r i a i n

e s t u a r i n e a n d c o a s t a l

s e a w a t e r s

h a v e f r e -

q u e n t l y

y i e l d e d

c o n f l i c t i n g

r e s u l t s .

B e a r d

a n d

M e a d o w c r a f t

( 3 )

o b s e r v e d t h a t

E s c h e r i c h i a c o l i s u r v i v e d

l o n g e r

t h a n d i d

S a l m o n e l l a

t y p h o s a

i n s t e r i l e s e a w a t e r .

I n

c o n t r a s t ,

o t h e r

o b s e r v a t i o n s f o r s t e r i l e

s e a w a t e r h a v e

r a n g e d

f r o m

s l i g h t l y

s l o w e r

d i e - o f f o f

S a l m o n e l l a

s p p .

t h a n o f

E . c o l i

( 3 8 )

t o

p r o l o n g e d

s u r v i v a l

o f

S a l m o n e l l a e n t e r i t i d i s

c o m p a r e d w i t h

E .

c o l i ( 4 1 ) . R e c e n t

i n

v i t r o

s t u d i e s

( 9 , 3 7 )

u s i n g s t e r i l e

e s t u a r i n e

w a t e r h a v e

r e p o r t e d

g r o s s l y d i s s i m i l a r s u r v i v a l

( a n d

c u l t u r a b i l i t y )

b e t w e e n

S .

e n t e r i t i d i s a n d

E . c o l i . I n

o p p o s i t i o n ,

M c C a m b r i d g e

a n d

M c M e e k i n

( 2 5 ) o b s e r v e d t h a t

p o p u l a t i o n s

o f

E . c o l i

a n d

S a l m o n e l l a

t y p h i m u r i u m

r e m a i n e d

v i r t u a l l y u n a l t e r e d

a f t e r 1 0 d a y s o f

e x p o s u r e t o s t e r i l e

e s t u a r i n e w a t e r i n

v i t r o .

To

s o m e

d e g r e e , t h e

d i s p a r i t i e s

i n t h e s e r e p o r t s

may

b e

a t t r i b u t e d

t o

d i f f e r e n c e s i n

e x p e r i m e n t a l

m e t h o d s a n d

r e l a t e d

f a c t o r s w h i c h

c a n i n f l u e n c e

b a c t e r i a l

s u r v i v a l a n d

r e c o v e r y .

T h e r e

i s

e v i d e n c e

t h a t

l a b o r a t o r y

m a n i p u l a t i o n s

( 3 4 )

a n d

i s o l a t e

h i s t o r y

( 1 ,

1 6 ,

3 9 )

a f f e c t c e l l v i a b i l i t y

a n d

c a n

y i e l d

t e s t

s u s p e n s i o n s

o f s u b l e t h a l l y

s t r e s s e d c e l l s

w h o s e

p h y s i o -

l o g i c a l

s t a t u s

may

b e u n d e t e c t e d b y

common

s e l e c t i v e

e n u m e r a t i o n

p r o c e d u r e s

( 5 ,

1 9 ,

2 1 , 3 3 , 3 4 ) .

S i m i l a r l y , f a i l u r e

t o

r e c o v e r

s t r e s s e d c e l l s

a f t e r e x p o s u r e t o e s t u a r i n e

e n v i r o n -

m e n t s

c a n

l e a d

t o m i s i n t e r p r e t a t i o n o f t h e f a t e o f

t h e

c e l l s

a n d

u n d e r e s t i m a t i o n

o f t h e

a s s o c i a t e d h e a l t h

r i s k .

O f

p o s s i b l e g r e a t e r

c o n c e r n

t h a n

t h e

i n f l u e n c e o f

t h e s e

*

C o r r e s p o n d i n g

a u t h o r .

t

C o n t r i b u t i o n

1 4 8 4 f r o m

t h e

V i r g i n i a

I n s t i t u t e o f

M a r i n e S c i e n c e .

f a c t o r s

i n

c o m p a r a t i v e s u r v i v a l

e x p e r i m e n t s i s t h e

q u e s t i o n -

a b l e v a l i d i t y o f a n

a p p r o a c h

w h e r e b y

e n t e r i c

c e l l s

a r e

e x p o s e d , e i t h e r

i n

v i t r o o r i n

s i t u , t o s t e r i l e

e s t u a r i n e o r

c o a s t a l s e a w a t e r i n

o r d e r t o a s s e s s t h e i r

s u r v i v a b i l i t y .

S u r -

v i v a l

o f

a l l o c h t h o n o u s b a c t e r i a

u n d e r

e s t u a r i n e

c o n d i t i o n s i s

k n o w n

t o

b e a f f e c t e d

b y p h y s i c a l f a c t o r s

a s

w e l l

a s

b y a

v a r i e t y o f

i n t e r a c t i o n s

w i t h

n a t i v e m i c r o b i a l

p o p u l a t i o n s .

E n t e r i c

b a c t e r i a ma y

c o m p e t e p o o r l y w i t h


m i c r o b e s a t

l o w n a t u r a l l e v e l s

o f n u t r i e n t s

( 8 ,

2 0 ) . P r e d a t i o n

a n d

a n t a g o n i s m

h a v e

b e e n d e m o n s t r a t e d a s

p r o c e s s e s c o n -

t r i b u t i n g t o

t h e

d e m i s e

o f

e n t e r i c b a c t e r i a i n

v i t r o

( 2 3 - 2 6 ,

3 1 ,

3 5 ,

4 2 ) .

U n f o r t u n a t e l y ,

d a t a

d e s c r i b i n g

t h es e p r o c es s es

a r e

l i m i t e d

b e c a u s e

t h e r e h a v e

b e e n

f e w i n

s i t u

s t u d i e s

o f

e n t e r i c

s u r v i v a l

i n e s t u a r i n e e n v i r o n m e n t s

a n d

m o s t i n v o l v e d

t e s t

c u l t u r e s

s u s p e n d e d

i n s t e r i l i z e d

s e a w a t e r .

T h i s

r e p o r t

d e s c r i b e s

t h e r e s u l t s

o f

i n

s i t u

e x p e r i m e n t s

d e s i g n e d t o e x a m i n e

t h e

e f f e c t

o f

t h e


e s t u a -

r i n e

m i c r o b i o t a

o n

e n t e r i c

b a c t e r i a .

S p e c i f i c a l l y ,

s u r v i v a l o f

E . c o l i

a n d

S a l m o n e l l a

s p p . w a s

m e a s u r e d

i n

t h e

p r e s e n c e

a n d

i n t h e

a b s e n c e

o f

t h e

n a t u r a l

m i c r o b i o t a

a t

t w o e s t u a r i n e

s i t e s o f

c o n t r a s t i n g

p h y s i c o c h e m i c a l

c h a r a c t e r i s t i c s . I n a d

d i t i o n ,

t h e e f f e c t

o f

s u b l e t h a l s t r e s s

o n b a c t e r i a l s u r v i v a l

w a s

m e a s u r e d

b y

u s i n g p r o c e d u r e s f o r t h e

d e t e c t i o n a n d

r e c o v -

e r y

o f

s u b l e t h a l l y i n j u r e d c e l l s .

M A T E R I A LS ND

M E T H O D S

D e s c r i p t i o n

o f

s t u d y

a r e a .

T h e

W a r e

R i v e r ,

a

s u b e s t u a r y

f o r m e d

b y

t h e

c o nf l u en ce o f

t w o t i d a l

f r e s h w a t e r

s t r e a m s ,

f l o w s 9 . 4 km t o

M o b j a c k

B a y o n

t h e

s o u t h w e s t e r n s h o r e o f

C h e s a p e a k e

B a y

( F i g . 1 ) .

One o f t h e

s t r e a m s , F o x M i l l

R u n ,

r e c e i v e s

a p p r o x i m a t e l y 0 . 6

m i l l i o n l i t e r s o f

s e c o n d a r y

e f -

f l u e n t

p e r

d a y f r o m a

s e w a g e t r e a t m e n t

p l a n t l o c a t e d 4 . 3

km

u p s t r e a m

o f

t h e

F o x M i l l Run

e x p o s u r e

s i t e .

C o n c e n t r a t i o n s

o f

t o t a l

p h o s p h a t e a n d

o r g a n i c

n i t r o g e n

w e r e g e n e r a l l y

h i g h e r

a t F o x

M i l l

Run

t h a n

a t t h e

s e c o n d e x p o s u r e

s i t e ,

l o c a t e d

7 . 1

km

f u r t h e r

d o w n r i v e r o n

t h e

m a i n s t e m

o f

t h e

Ware

R i v e r . Mean

s a l i n i t i e s

d u r i n g

s u r v i v a l


r a n g e d f r o m

1 2

t o

2 2 o

a t t h e

F o x M i l l Run

s i t e

a n d

f r o m

2 1

t o

2 4 o

a t

t h e Ware

R i v e r

s i t e .

2 9 0 2


2/6

SURV I V A L OF

E .

COLI AND

SALMONELLA S P P . 2 9 0 3

F I G . 1 . L o c a t i o n o f s t u d y area

a n d

d i f f u s i o n

c h a m b e r

d e p l o y -

ment

s i t e s i n

Fox

M i l l Run

FMR)

a n d t h e Ware

R i v e r ( W R ) . S T P,

S e w a g e

t r e a t m e n t

p l a n t .

Chamber

d e s i g n

a n d c o n s t r u c t i o n .

M c F e t e r s - S t u a r t

( 2 7 )

d i f f u s i o n

c h a m b e r s

were m o d i f i e d ( 3 4 ) t o

a c c o m m o d a t e

5 0

m l

o f

t e s t

s u s p e n s i o n

a n d t o

m i n i m i z e c o n t a m i n a t i o n b y

i n d i g e n o u s m i c r o o r g a n i s m s

t h r o u g h

l e a k a g e ,

p r e s u m a b l y

b e t w e e n

m e m b r a n e - c h a m b e r

i n t e r f a c e s .

A d d i t i o n a l

c h a n g e s

were made d u r i n g

t h e p r e s e n t s t u d y

t o

f a c i l i t a t e

s a m p l i n g

a n d p r e v e n t e n t r y

o f c o n t am i na t i n g m i c r o o r g a n i s m s t h r o u g h

t h e

s a m p l i n g

p o r t s .

T h r e a d e d

p o r t s

o f T u f f a k

Rohm a n d

H a a s C o . , P h i l a d e l p h i a ,

P a . ) ,

an

a u t o c l a v a b l e

p o l y c a r b o -

n a t e ,

were a t t a c h e d

t o t h e c e n t r a l spacer

b y

f e m a l e

t h r e a d s

a n d

s e a l e d

w i t h

0

r i n g s .

P o r t s

were

s e a l e d

w i t h serum

s t o p p e r s

w i t h

s t e e l - f i l l e d

epoxy

a n d c o v e r e d

w i t h

t h r e a d e d

T u f f a k c aps t o

p r e v e n t

f o u l i n g

o f t h e

s t o p p e r .

B e f o r e

b e i n g

a u t o c l a v e d

a t

1 2 1 C

f o r 1 5

m i n ,

p o l y c a r b o -

n a t e m e m b r a n e s

( p o r e

s i z e ,

0 . 2

, L m ;

N u c l e p o r e

C o r p . ,

P l e a s a n t o n ,

C a l i f . ) were

a t t a c h e d t o

t h e

c e n t r a l spacer w i t h

a s i l i c o n e

l u b r i c a n t

vacuum

grease Dow

C o r n i n g C o r p . ,

M i d l a n d ,

M i c h . )

a n d

p o r t o p e n i n g s

were

f i t t e d

w i t h thumb

screws.

A f t e r

s t e r i l i z a t i o n ,

r e t a i n e r

p l a t e s

were s e c u r e d t o

t h e c en t ra l

spacer

w i t h s t a i n l e s s - s t e e l

w i n g

n u t s

a n d

b o l t s .

O r g a n i s m s .

E .

c o l i

was i s o l a t e d

f r o m

human f e c e s

a n d

i d e n t i f i e d

as

p r e v i o u s l y

d e s c r i b e d ( 3 4 ) .

Human s a l m o n e l l a

i s o l a t e s

were

o b t a i n e d

f r o m

e i t h e r

t h e

V i r g i n i a

D e p a r t m e n t

o f

G e n e r a l

S e r v i c e s , R i c h m o n d ,

or

t h e I nf ec t i o u s

D i s e a s e

D i v i s i o n ,

C e n t e r s f o r

D i s e a s e

C o n t r o l ,

A t l a n t a ,

G a .

S a l m o -

n e l l a

tennessee

i s o l a t e s

were

u s e d , e x c e p t

i n t h e

May

e x p e r i m e n t ,

when

S .

t y p h i m u r i u m

was u s e d . I s o l a t e s

were

m a i n t a i n e d

on

t r y p t i c soy agar

s l a n t s

a t

4 C

a n d

u s e d

w i t h i n

8

w e e k s .

P r e p a r a t i o n

o f

i n o c u l a .

I s o l a t e s

were

c u l t u r e d

i n M 9

m i n -

i m a l medium

( 3 2 )

( p H 7 . 0 )

m o d i f i e d

t o c o n t a i n

5

g l y c e r o l

i n s t e a d

o f

g l u c o s e .

C e l l s

were

i n c u b a t e d

a t

3 5 C

f o r 2 4

h ,

d i l u t e d

1 , 0 0 0 - f o l d

i n t o

f r e s h

m e d i u m ,

a n d

i n c u b a t e d f o r a n

a d d i t i o n a l

2 4

h ,

a t

w h i c h t i m e

t h e y

were

i n

s t a t i o n a r y p h a s e .

A c e l l

s u s p e n s i o n

was

p r e p a r e d

i n s t e r i l e

r i v e r water

t o

y i e l d

1 0 4 t o 1 0 5

c e l l s p e r

m l .

P o r t i o n s o f

2 0 m l w e r e

d i s p e n s e d i n t o

s t e r i l e

b o t t l e s

a n d t r a n s p o r t e d t o

t h e f i e l d

f o r

i n o c u l a t i o n

o f

d i f f u s i o n c h a m b e r s .

T o t a l e l ap s ed

t i m e f r o m p r e p a r a t i o n t o

c h a m b e r

i n o c u l a t i o n a l l o w e d

f o r o n e t o t w o

c e l l

d i v i s i o n s

( < 0 . 5

l o g i n c r e a s e

i n

d e n s i t y ) .

C h a m b e r e x p o s u r e p r o t o c o l . C e l l s w e r e

s u s p e n d e d

i n w a -

t e r

c o l l e c t e d

f r o m

e a c h

e x p o s u r e

s i t e

i m m e d i a t e l y b e f o r e

i n t r o d u c t i o n

i n t o

t h e d i f f u s i o n

c h a m b e r s .

E a c h c h a m b e r w a s

f i l l e d

w i t h 2 0

m l

o f

e i t h e r

n o n f i l t e r e d

o r d o u b l e - f i l t e r e d w a t e r

( 0 . 4 5 -

a n d

0 . 2 - , u m - p o r e - s i z e

f i l t e r s ) a n d

2 0 m l

o f a n

a p p r o p r i -

a t e

b a c t e r i a l

s u s p e n s i o n .

D u p l i c a t e

c h a m b e r s

w e r e p r e p a r e d

a t e a c h

e x p o s u r e

s i t e f o r

f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d

t r e a t m e n t s .

C h a m b e r s w e r e d e p l o y e d

0 . 5 t o 1 m b e l o w t h e

s u r f a c e i n

f l o t a t i o n

d e v i c e s

t a i l o r e d

f o r

e a c h

e x p o s u r e s i t e . A t

s e l e c t e d

e x p o s u r e

i n t e r v a l s , s a m p l e s w e r e

r e m o v e d

a s e p t i c a l l y

b y

u s e

o f s t e r i l e

h y p o d e r m i c

s y r i n g e s w i t h 2 0 - g a u g e n e e d l e s .

B e f o r e s a m p l e s

w e r e

t a k e n ,

c h a m b e r s w e r e s h a k e n ,

mem-

b r a n e s w e r e i n s p e c t e d f o r d a m a g e ,

a n d p o r t s t o p p e r s

w e r e

s w a b b e d w i t h

a l c o h o l

a n d f l a m e d .

E n u m e r a t i o n .

E . c o l i d e n s i t i e s w e r e m e a s u r e d b y

a r e p a i r

d e t e c t i o n p r o c e d u r e f o r

s t r e s s e d f e c a l c o l i f o r m s

( 1 8 ) . T h i s

p r o c e d u r e

w a s m o d i f i e d

t o

i n c l u d e

s p r e a d

p l a t i n g

o n t r y p t i c

s o y a g a r

w i t h

i n c u b a t i o n

a t

3 5 C f o r

2

h ,

f o l l o w e d

b y

o v e r l a y i n g

w i t h

1 0 m l

o f

v i o l e t

r e d

b i l e

a g a r

GIBCO

D i a g n o s t i c s ,

M a d i s o n , W i s . )

a n d

i n c u b a t i o n

a t 4 4 . 5

0 . 5 C

f o r

2 2

2 h . W e

a d a p t e d

t h e

r e p a i r

d e t e c t i o n p r o c e d u r e

f o r

S a l m o n e l l a

s p p . e n u m e r a t i o n

b y o v e r l a y i n g

t h e

p l a t e s

w i t h

1 0

m l

o f

b r i l l i a n t

g r e e n

s u l f a

a g a r ( D i f c o

L a b o r a t o r i e s ,

D e t r o i t , M i c h . ) a n d i n c u b a t i n g

t h e s a m p l e s

a t 4 2

0 . 5 C .

T e s t

b a c t e r i a

w e r e

a l s o

e nu m e r a t e d b y

n o n r e s u s c i t a t i v e

p r o c e d u r e s .

E . c o l i w a s r e c o v e r e d b y b e i n g

s p r e a d

p l a t e d

d i r e c t l y o n t o

v i o l e t

r e d

b i l e a g a r

a n d

i n c u b a t i o n

a t 4 4 . 5 C f o r

2 2

2

h .

S a l m o n e l l a

s p p .

w e r e e n u m e r a t e d b y

b e i n g

s p r e a d

p l a t e d

o n t o

b r i l l i a n t

g r e e n

s u l f a

a g a r

a n d

i n c u b a t e d a t 4 2 . 5 C

f o r

2 2

2 h .

H e t e r o t r o p h i c

b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s

w e r e e n u m e r a t ed b y

b e i n g

s p r e a d

p l a t e d o n

a

h e t e r o t r o p h

m e d i u m 2 ) . C o l o n i e s

w e r e c o u n t e d

a f t e r 2 w e e k s o f i n cu b a t i o n

a t

r o o m t e m p e r a -

t u r e

a n d

c o r r e c t e d

f o r

g r o w t h

o f

e n t e r i c

t e s t

c e l l s

b y

s u b -

t r a c t i o n . B a c t e r i o v o r o u s

a n d

l y t i c m i c r o o r g a n i s m s

w e r e

c o u n t e d

b y p l a q u e

a s s a y ( 1 2 ) .

T o t a l h e t e r o t r o p h i c

a n d a u t o -

t r o p h i c


w e r e

e n u m e r a t e d b y e p i f l u o r e s c e n c e

m i c r o s c o p y 2 ) .

C h a m b e r s c o n t a i n i n g

e n t e r i c b a c t e r i a

i n

f i l t e r - s t e r i l i z e d s i t e w a t e r w e r e r o u t i n e l y e x a m i n e d

f o r c o n -

t a m i n a t i o n

b y

a u t o c h t h o n o u s m i cr o o r g a n i s m s , u s i n g

m e t h -

o d s d i s c u s s e d

a b o v e .

D e t e r m i n a t i o n

o f s u b l e t h a l

s t r e s s .

q u a n t i t a t i v e

i nd e x o f


w a s

o b t a i n e d

b y

c o m p a r i n g

d e n s i t i e s o f

o r g a n i s m s

r e c o v e r e d

b y

t h e

r e p a i r p r o c e d u r e s

d e s c r i b e d

a b o v e

w i t h

t h o s e o b t a i n e d

when s e l e c t i v e m e d i a

a n d

t e m -

p e r a t u r e s

w e r e

a p p l i e d .

A

s e c o n d

m e t h o d ,

b a s e d o n e l e c t r o -

c h e m i c a l

d e t e c t i o n

1 ) ,

w a s

u s e d t o

q u a n t i f y

s t r e s s

i n

E . c o l i .

S t r e s s

w a s d e f i n e d a s

t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n

a

p r e d i c t e d


d e t e c t i o n

t i m e

( E D T )

i n

E C

medium

( D i f c o )

a t

4 4 . 5 C

f o r

n o n e x p o s e d

c e l l s

a n d

t h e o b s e r v e d

E DT

f o r

c e l l s

e x p o s e d

t o a

s e l e c t e d t r e a t m e n t .

RESULTS

C h a n g e s

i n d e n s i t i e s

o f E .

c o l i a n d

S a l m o n e l l a

s p p .

w e r e

o b s e r v e d i n f i l t e r e d

a n d


d i f f u s i o n c h a m b e r s

a t

e a c h

e x p o s u r e

s i t e .

T h e s e

c h a n g e s

a r e

i l l u s t r a t e d w i t h s u r -

v i v a l c u r v e s

f r o m t h e F o x

M i l l Run s i t e

( F i g .

2 a n d

3 ) ,

w h i c h

w e r e

g e n e r a l l y

n o n l i n e a r ;

t h e

c u r v e s

o f t e n

m a n i f e s t e d a

m u l t i p l i c a t i o n p h a s e

d u r i n g

t h e

f i r s t

3

d a y s ,

f o l l o w e d

b y

a

s e c o n d

p e r i o d

c h a r a c t e r i z e d

b y

s t a b l e o r

d e c l i n i n g

d e n s i t i e s .

V O L .

5 4 ,

1 9 8 8


3/6

2 9 0 4

RHODES AND KATOR

6 -

4

2 -

6 -

4

4 (

2 -

E .

c o l i

2 4 6 8

1 0

1 2 1 4

1 6

Time ( d a y s )

F I G .

2 .

S u r v i v a l

o f

E .

c o l i

i n

d i f f u s i o n

c h a m b e r s

c o n t a i n i n g


F o x

M i l l

Run

w a t e r a f t e r i n s i t u e x p o s u r e

a t

F o x M i l l

Run d u r i n g v a r i o u s

m o n t h s . S y m b o l s : 0 , F e b r u a r y ;

0 ,

M a r c h ; A , A p r i l ;

A ,

M a y ;

0 , J u l y ; * , N o v e m b e r .

To

c l e a r l y

f o c u s t h i s p a t t e r n ,

t h e

e x p o n e n t i a l d i e - o f f

c o e f f i -

c i e n t ,

k

( 1 1 , 2 2 ) ( T a b l e

1 ) ,

w a s c a l c u l a t e d f o r

t h e f i r s t 3

d a y s

o f e x p o s u r e a s

w e l l a s t h e r e ma i n i n g e x p o s u r e

p e r i o d

a t e a c h

s i t e .

E f f e c t o f

f i l t r a t i o n a n d

s e a s o n a l

w a t e r t e mp e r at u r e .

When

w a t e r t e m p e r a t u r e s

w e r e

1 8 C o r h i g h e r ,

l a r g e

n e g a t i v e

v a l u e s

o f k , r e f l e c t i n g

m u l t i p l i c a t i o n ,

o c c u r r e d

d u r i n g t h e

i n i t i a l

e x p o s u r e

p h a s e

i n

b o t h


w a t e r .

S u b s e q u e n t l y ,

r e d u c t i o n s

i n

d e n s i t i e s o f E .

c o l i a n d S a l m o -

S a l m o n e l l a

s p p .

6

-

4

2 -

F i l t e r e d

z : - _ _ _

= f f i _ - -

:

I *

___-

=

0

O

2

4 6 8

1 1 1

0

2

4i681

12 14

1

6

A

6 -

4

2

N o n f i l t e r e d

E - 0 -

~ ~

O_~~~

P

A t - . ~ 0

,

6 8

1 0 1 2

14

16

Time ( d a y s )

F I G .

3 . S u r v i v a l o f S a l m o n e l l a

spp. i n

d i f f u s i o n c h a m b e r s

con-

t a i n i n g f i l t e r e d a n d


Fox M i l l Run

water a f t e r i n

s i t u

exposure

a t Fox M i l l Run

d u r i n g

v a r i o u s m o n t h s .

S y m b o l s : 0,

F e b r u a r y ; 0,

M ar c h ; A ,

A p r i l ; A, M a y ; O ,

J u l y ;

* ,

N o v e m b e r .

n e l l a s p p . w e r e s i g n i f i c a n t l y

g r e a t e r i n n o n f i l t e r e d

t h a n i n

f i l t e r e d w a t e r

( W i l c o x o n

s i g n e d - r a n k s t e s t ,

P

c

0 . 0 0 2 ) .

B e l o w 1 0 C , s u r v i v a l

d i f f e r e d b e t w e e n

E .

c o l i

a n d S a l m o -

n e l l a

s p p . E .

c o l i

s u r v i v a l d u r i n g

t h e

f i r s t

3

d a y s

w a s

v a r i a b l e ,

w i t h s m a l l

d i f f e r e n c e s

b e t w e e n

f i l t e r e d

a n d

n o n f i l -

t e r e d

w a t e r

c o n d i t i o n s .

D u r i n g t h e

r e m a i n i n g p e r i o d ,

E .

c o l i

m o r t a l i t y

r a t e s w e r e i n v e r s e l y

c o r r e l a t e d

w i t h

t e m p e r a t u r e

( K e n d a l l ' s

t a u ,

P

c

0 . 0 2 )

i n

b o t h

f i l t e r e d

a n d


t r e a t m e n t s . I n

c o n t r a s t , a t

l o w t e m p e r a t u r e s s m a l l

a b s o l u t e

v a l u e s

o f k f o r

S a l m o n e l l a s p p .

r e f l e c t e d l o w r a t e s

o f

a f t e r g r o w t h o r

d i e - o f f d u r i n g

t h e

i n i t i a l

e x p o s u r e p e r i o d .

A f t e r

3 d a y s , S a l m o n e l l a s p p .

d i e - o f f w a s

g r e a t e r

i n

n o n f i l -

t e r e d t h a n

i n f i l t e r e d

w a t e r . T h e r e

w a s n o s i g n i f i c a n t

c o r r e -

l a t i o n b e t w e e n

m o r t a l i t y

o f

S a l m o n e l l a

s p p .

a n d t e m p e r a t u r e

( K e n d a l l ' s t a u , P

2

0 . 0 5 ) i n

e i t h e r

f i l t e r e d o r


w a t e r .

M i c r o f l a g e l l a t e

d e n s i t i e s

r e a c h e d

m e a n maximum v a l u e s

d u r i n g

t h e i n i t i a l

3 - d a y

e x p o s u r e

p e r i o d

( F i g . 4 ) i n

A p r i l ,

M a y , a n d

J u l y . T h e s e t i m e s

c o r r e s p o n d e d

w i t h i n i t i a t i o n

o f

t h e s p r i n g

b l o o m

a n d i n c r e a s i n g

s e a s o n a l w a t e r

t e m p e r a -

t u r e s . A f t e r

3

d a y s ,

d e n s i t i e s

d e c l i n e d

o v e r t h e

r e m a i n d e r

o f

t h e

e x p o s u r e p e r i o d .

I n c o n t r a s t ,

a t s e a s o n a l t e m p e r a t u r e s

o f

c a .

1 0 C

o r

l e s s , m i c r o f l a g e l l a t e

n u m b e r s d e c r e a s e d a n d

t h e n

i n c r e a s e d ,

r e a c h i n g

maximum

v a l u e s

a t

8

d a y s

( N o v e m b e r )

o r l a t e r

( F e b r u a r y a n d

M ar c h ) . P l a q u e d e n s i t i e s

r e a c h e d

maximum

v a l u e s a t t h e w a r m e s t


a n d

d e c l i n e d

a t t e m p e r a t u r e s

b e l o w

1 0 C . Maximum

d e c r e a s e s i n e n t e r i c

b a c t e r i a l d e n s i t i e s

( 3

t o 8 d a y s )

g e n e r a l l y c o r r e s p o n d e d

w i t h

t h e t i m e s

a t w h i c h

c o m p o n e n t s

o f

t h e


m i c r o -

b i o t a

w e r e

i n c r e a s i n g o r h a d r e a c h e d

maximum

d e n s i t i e s .

H e t e r o t r o p h i c

b a c t e r i a a l s o

r e a c h e d maximum

d e n s i t i e s

w i t h i n 3 t o 8 d a y s

o f e x p o s u r e ( d a t a

n o t s h o w n ) .

E f f e c t o f

e x p o s u r e s i t e .


s u r v i v a l

i n f i l t e r e d

w a t e r

w a s

f a v o r e d

a t

t h e

F o x

M i l l

Run s i t e ( W i l c o x o n


P

=

0 . 0 3 ) r e l a t i v e

t o

t h a t a t t h e

W a r e R i v e r

l o c a t i o n . D i f f e r e n c e s

i n

d i e - o f f

c o e f f i c i e n t s b e t w e e n

s i t e s

w e r e g r e a t e s t

d u r i n g F e b r u a r y

a n d M a r c h .

T h e r e

w a s

n o

s i g n i f i c a n t

d i f f e r e n c e b e t w e e n

s i t e s

i n E .

c o l i

s u r v i v a l

i n

f i l t e r e d

w a t e r

o r

u n d e r


c o n d i t i o n s

f o r e i t h e r

t y p e

o f

e n t e r i c

b a c t e r i a

( W i l c o x o n

s i g n e d - r a n k s

t e s t ,

P > 0 . 0 5 ) .

S u r v i v a l

o f E . c o l i

v e r s u s S a l m o n e l l a

s p p .

S u r v i v a l

o f


w a s

s i g n i f i c a n t l y

g r e a t e r

t h a n

t h a t

o f E .

c o l i

( W i l c o x o n


P

=

0 . 0 2 5 ) i n

f i l t e r e d w a t e r a t

F o x M i l l

R u n . I f

t h e e n t i r e d a t a

s e t i s

c o n s i d e r e d ,

t h e r e w a s

n o

s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e

( W i l c o x o n

s i g n e d - r a n k s

t e s t ,

P >

0 . 0 5 )

i n

s u r v i v a l

b e t w e e n

s p e c i e s o f

t e s t b a c t e r i a

i n f i l t e r e d

w a t e r

a t t h e W a r e

R i v e r s i t e .

H o w e v e r , a t

l o w w a t e r

t e m p e r a t u r e s ,

s u r v i v a l o f

S a l m o n e l l a

s p p .

w a s f a v o r e d a t

b o t h s i t e s ;

1 0 0 a n d 83

o f s a l m o n el l a e

s u r v i v e d

a f t e r

1 w e e k

o f

e x p o s u r e

i n F o x M i l l

Run

a n d

t h e W a r e R i v e r

s i t e ,

r e s p e c t i v e l y ,

c o m p a r e d

w i t h .6

o f

E .

c o l i

d u r i n g

t h e s a m e

p e r i o d .

S i m i l a r

d i f f e r e n c e s w e r e

n o t o b s e r v e d

i n n o n f i l t e r e d

w a t e r .

S u b l e t h a l s t r e s s .

S u b l e t h a l s t r e s s

i n E .

c o l i

w a s

i n v e r s e l y

r e l a t e d

t o

w a t e r t e m p e r a t u r e ,

a s


b y

r e p r e -

s e n t a t i v e


s h o w n i n F i g . 5 . P r o n o u n c e d

E DT

d e l a y s

o b s e r v e d

i n F e b r u a r y

a n d M a r c h

i n c r e a s e d

p r o g r e s -

s i v e l y

w i t h e x p o s u r e .

D u r i n g

N o v e m b e r a n d

A p r i l ,

t h e

m i n i m u m s t r e s s

e v i d e n t a t 3

d a y s d i d

n o t p r o g r e s s i v e l y

i n t e n s i f y . E DT

d e l a y s w e r e o b s e r v e d

o n l y a f t e r

1 5

d a y s

i n

May a n d

J u l y ,

p e r i o d s o f e l e v a t e d


E n u m e r a t i o n

o f

E .

c o l i

a n d

S a l m o n e l l a s p p . b y r e s u s c i -

t a t i v e a n d

n o n r e s u s c i t a t i v e

m e t h o d s

s h o w e d t h e d e v e l o p -

m e n t o f

s u b l e t h a l s t r e s s i n

t h e F e b r u a r y

a n d M a r c h

e x p e r i -

m e n t s

( T a b l e 2 ) .

I n c o n t r a s t ,


i n r e c o v e r y a s

d e t e r m i n e d

b y r e s u s c i t a t i v e

a n d

n o n r e s u s c i t a t i v e m e t h o d s

F i l t e r e d

7

. . _

,

)--O

- - - *

0

0

. 0

E

1 - j

Q

=

CP

0

2 4 6

8

1 0

1 2

1 4

N o n f i l t e r e d

- ~ ~ ~ ~ ~ ~

A~

\

-

El

0

I - - ,

a

,

)

0

-

A P P L .

E N V I R O N . M I C R O B I O L .


4/6

SURV I V A L

O F E . COLI

AND

SALMONELLA S P P . 2 9 0 5

T A B L E

1 .

S u r v i v a l o f E .

c o l i

a n d S a l m o n e l l a s p p . i n f i l t e r e d a n d n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e

w a t e r d u r i n g

t w o e x p o s u r e

i n t e r v a l s a t

e a c h s i t e

D i e - o f f

c o e f f i c i e n t ( k

[ d a y - l ] ) a

E . c o l i S a l m o n e l l a s p p .

Mo o f Mean w a t e r Mean

s a l i n i t y

E x p o s u r e

i n t e r v a l

( d a y s ) E x p o s u r e

i n t e r v a l

( d a y s )

exposure

temp

( C )

( s ) E x p o s u r e interval_ day)_Exposure_iterval_ days

0 - 3 3 - 1 5

0 - 3 3 - 1 5

F N F

F

N F

F

N F

F

N F

F o x

M i l l

Run

F e b .

6 . 7 1 1 . 7 - 0 . 1 5 0 . 0 3 0 . 6 8 0 . 9 2 - 0 . 0 3 - 0 . 1 6 0 . 0 4 0 . 8 7

M a r c h

8 . 8 1 8 . 2 0 . 3 6 0 . 2 3 0 . 5 8 0 . 7 2 0 . 0 2 0 . 0 1 0 . 0 7 0 . 7 4

A p r i l 1 7 . 8 1 4 . 3 - 0 . 8 4 - 0 . 3 0

0 . 0 1

0 . 5 8 - 0 . 4 4 0 . 3 6

0 . 0 3 0 . 4 9

May 2 5 . 1 1 8 . 2 - 0 . 6 5 - 0 . 4 8 0 . 0 3 0 . 8 0 - 0 . 9 9 0 . 3 2 0 . 0 7 0 . 4 5

J u l y

2 8 . 2 1 9 . 9 - 0 . 8 6 - 0 . 5 6 0 . 0 7 0 . 5 7 - 1 . 0 6 - 0 . 9 6 0 . 0 6 0 . 6 8

N o v . 1 0 . 3 2 2 . 1

- 0 . 1 7 - 0 . 0 8 0 . 0 9

0 . 5 1

0 . 0 4 0 . 4 7 0 . 0 7 0 . 3 7

W a r e R i v e r

F e b .

5 . 9

2 1 . 1 0 . 0 5

0 . 0 7 0 . 9 2 0 . 8 3 - 0 . 0 9 - 0 . 2 0 0 . 2 5 0 . 5 1

M a r c h 7 . 7 2 3 . 6

0 . 7 2 0 . 7 7

0 . 6 4 0 . 6 2 0 . 1 8 0 . 1 6

0 . 6 1 0 . 7 5

J u l y

2 7 . 9

2 1 . 7

- 0 . 5 1

- 0 . 3 8 0 . 0 7 0 . 4 3 - 0 . 7 8 0 . 6 7

0 . 1 0

0 . 5 5

N o v .

1 1 . 7

2 4 . 4 - 0 . 5 0

0 . 3 3

0 . 0 8

0 . 5 3

0 . 2 2 0 . 1 1 0 . 1 0

0 . 4 8

a

-k

=

l n

C 2 1 C 1 ) / T 2

T 1 ) ,

w h e r e

C 2

a n d

C 1 a r e t h e b a c t e r i a l d e n s i t i e s a t

f i n a l

( T 2 )

a n d i n i t i a l

T 1

t i m e s

o f e x p o s ur e . F , F i l t e r e d

e s t u a r i n e w a t e r ;

NF, n o n f i l t e r e d

e s t u a r i n e w a t e r .

were g e n e r a l l y

l e s s

t h a n

0 . 1 l o g u n i t f o r

b o t h o r g a n i s m s

d u r i n g

J u l y

a n d N o v e m b e r .

DISCUSSION

D i e - o f f o f e n t e r i c b a c t e r i a i n e s t u a r i n e

e n v i r o n m e n t s h a s

b e e n

b r o a d l y

a t t r i b u t e d t o a

v a r i e t y

o f

i n t e r a c t i n g

p h y s i c a l ,

c h e m i c a l , a n d

b i o l o g i c a l

f a c t o r s a n d

processes. A l t h o u g h

u n d e r s t a n d i n g t h e s e

f a c t o r s a n d t h e i r r e l a t i v e

i m p o r t a n c e

i s

j u s t i f i a b l e p u r e l y on

an

e c o l o g i c a l

b a s i s ,

i n

p r a c t i c a l t e r m s

s u c h

s t u d i e s

ar e necessary t o

assess

t h e

v a l i d i t y

a n d

s u i t -

a b i l i t y

o f

t h e f e c a l

c o l i f o r m group or o t h e r m i c r o b i a l

i n d i c a -

E

Q )

0 '

Ol

0

Q)

: 3

0~

0)

0

2

4

6 8 1 0

1 2 14 1 6

Time

( d a y s )

F I G . 4 .

C h a n g e s

i n d e n s i t i e s

o f


a n d

p l a q u e -

p r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s ms d u r i n g

v a r i o u s

months i n d i f f u s i o n cham-

b e r s

c o n t a i n i n g

n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e w a t e r i n o c u l a t e d

w i t h

e n t e r i c

b a c t e r i a .

S y m b o l s : 0,

F e b r u a r y ;

0,

M a r c h ; A ,

A p r i l ; A,

M a y ;

[

J u l y ;

* ,

November.

t o r s

w h i c h

may

b e

u s e d

as q u a n t i t a t i v e measures

o f

f e c a l

p o l l u t i o n

i n

s h e l l f i s h - g r o w i n g

w a t e r s .

R e s u l t s o f t h i s s t u d y d e m o n s t r a t e d

t h e p r o l o n g e d s u r v i v a l

p o t e n t i a l

o f E .

c o l i

a n d

s a l m o n e l l a e i n

t h e e s t u a r i n e e n v i r o n -

m e n t .

A t

warm t e m p e r a t u r e s , p r o n o u n c e d m u l t i p l i c a t i o n

o f

t h e

e n t e r i c

b a c t e r i a e x a m i n e d o c c u r r e d

i n i t i a l l y

i n

b o t h

f i l t e r e d

a n d

n o n f i l t e r e d e s t u a r i n e w a t e r .

O u r

e x p e r i m e n t s d i d

n o t

d e t e r m i n e w h e t h e r t h i s

m u l t i p l i c a t i o n o c c u r r e d

a t t h e

expense

o f

a m b i e n t

n u t r i e n t s or was

d u e t o u t i l i z a t i o n o f

e n d o g e n o u s

reserves.

P h y s i o l o g i c a l i n d i c e s

o f

s t r e s s d e m o n -

s t r a t e d t h a t

E .

c o l i a n d

s a l m o n e l l a e were

a l s o

m i n i m a l l y

s t r e s s e d

a t warm

w a t e r

t e m p e r a t u r e s .

T h e s e

o b s e r v a t i o n s

s u p p o r t p r e v i o u s

f i n d i n g s

i n

a n o t h e r

e s t u a r y

t h a t

E . c o l i

d i e - o f f ( 2 )

a n d

s u b l e t h a l

s t r e s s

( 3 4 )

i n f i l t e r e d

w a t e r

ar e

i n v e r s e l y

r e l a t e d t o t e m p e r a t u r e .

I - -

F-

~ 0

a )

C )

o

0

U )

: 3

E

0

U)

0

1 0 - U

8 -

March

6 -

4 -

2 -

0 2 4

6

8

1 0 1 2

1 4

1 6

Time

( d a y s )

F I G .

5 .

I n c i d e n c e

o f s u b l e t h a l s t r e s s

i n

E .

c o l i

e x p o s e d

i n d if fu -

s i o n c h a m b e r s a t

Fox

M i l l

Run

( 0 ,

[ r e p l i c a t e s ] )

an d Ware

R i v e r

( I , * [ r e p l i c a t e s ] )

as measured

b y

a n


d e t e c t i o n

m e t h o d .

V a l u e s o f

1 0

i n d i c a t e

no


r e s p o n s e

a f t e r a t

l e a s t 1 8 h

o f

i n c u b a t i o n .

- - - , U p p e r

95 c o n f i d e n c e

l i m i t f o r t h e

p r e d i c t e d

EDT.

5 B a c t e r i o v o r e s

a n d

L y t i c

M i c r o o r g a n i s m s

2 ~~ 0 - - - - = - Z g

--

- 2

o

A

S- n ^ m

A

~ ~ ~ ~ ~ ~

.. .. ..

0

-

/

r

V O L .

5 4 ,

1 9 8 8

I


5/6

2 9 0 6 RHODES A N D

KATOR

T A B L E

2 .

S u b l e t h a l

s t r e s s

a s m e a s u r e d

b y p e r c e n t

c u l t u r a b i l i t y ,

u s i n g

n o n r e s u s c i t a t i v e a n d r e s u s c i t a t i v e


m e t h o d s

M o o f

R e c o v e r y a f t e r 1 wk o f

e x p o s u r e

e x p o s u r e

E .

c o l i

S a l m o n e l l a

s p p .

F o x

M i l l

Run

F e b .

N G b 5 8

M a r c h

6 5

6 2

A p r i l

1 0 7

9 6

May

1 0 5

9 4

J u l y 1 0 6

9 5

N o v .

9 8 1 1 9

W a r e

R i v e r

F e b .

N G

6 5

M a r c h 3 7

5 3

J u l y 1 0 2

1 2 0

N o v .

1 0 7 8 1

a

P e r c e n t

r e c o v e r y

c a l c u l a t e d

a s

( b a c t e r i a l

d e n s i t y

a s

n o n r e s u s c i t a t e d

c e l l s / b a c t e r i a l

d e n s i t y

a s

r e s u s c i t a t e d

c e l l s )

x

1 0 0 .

b

N G ,

No

g r o w t h

on n o n r e s u s c i t a t i v e

m e d i u m .

I n

c o n t r a s t ,

a

c o n c l u s i o n

o f o t h e r i n

s i t u

s u r v i v a l s t u d i e s

( 1 3 ,

4 1 ) w a s

t h a t E . c o l i d i e - o f f

w a s

d i r e c t l y

r e l a t e d t o


W e b e l i e v e

t h a t u n d e t e c t e d

c o n t a m i n a t i o n

b y

i n d i g e n o u s

m i cr o o r g a n i s m s a n d

t h e

e x p e r i m e n t a l

m e t h o d o l -

o g y

u s e d

may

h a v e c o n t r i b u t e d t o t h i s

c o n c l u s i o n .

I t

h a s

b e e n o b s e r v e d b y

u s ( 2 )

a n d o t h e r s

( 3 6 )

t h a t

c o m m o n l y

u s e d

m e m b r a n e - d i f f u s i o n

c h a m b e r s b e c o m e

c o n t a m i n a t e d

b y

b a c -

t e r i a

a n d

e u c a r y o t e s i n

t h e e n v i r o n m e n t . H a r s h

l a b o r a t o r y

m a n i p u l a t i o n s

o f t e s t

b a c t e r i a l

i n o c u l a

( e . g . , c e n t r i f u g a t i o n ,

w a s h i n g , a n d

r e s t i n g

a t

c o l d t e m p e r a t u r e s ) s t r e s s

t h e

c e l l s

b e f o r e

e x p o s u r e

t o

e n v i r o n m e n t a l

s t r e s s o r s ,

a n d

r e c o v e r y

o f

d e b i l i t a t e d

c e l l s b y s e l e c t i v e


t e c h n i q u e s

w i l l

u n d e r e s t i m a t e t h e

s u r v i v i n g p o p u l a t i o n ( 3 4 ) .

D i f f e r e n c e s

i n

s u r v i v a l

a s a

f u n c t i o n

o f

s e a s o n w e r e a l s o

r e l a t e d t o t h e a u t o c h t h o n o u s e s t u a r i n e

m i c r o b i o t a . P r o -

n o u n c e d


i n

m o r t a l i t i e s u n d e r

f i l t e r e d

v e r s u s


c o n d i t i o n s

d u r i n g

t h e

w a r m e s t


w e r e a s s o c i a t e d w i t h t h e

p r e s e n ce o f

maximum d e n s i t i e s o f

i n d i g e n o u s

m i c r o o r g a n i s m s . B a c t e r i a l

d e n s i t i e s a t e l e v a t e d


w e r e

t h e

n e t

r e s u l t

o f

m u l t i p l i c a t i o n

( d u r i n g

t h e

i n i t i a l

3

d a y s a n d

p r e d a t i o n - a n t a g o n i s m

a n d

d e a t h .

B e c a u s e

o f

g r e a t e r

m u l t i p l i c a t i o n

a t warm


d i e - o f f i n


w a t e r w a s l e s s

a p p a r e n t

t h a n

a t

c o l d

t e m p e r a -

t u r e s .

A l t h o u g h e n t e r i c

a t t r i t i o n

w a s

s i g n i f i c a n t

i n


w a t e r , s u b s t a n t i a l

n u m b e r s o f t e s t

o r g a n i s m s

p e r s i s t e d ( e . g . ,

1 0 2 t o 1 0 4 b a c t e r i a

p e r m l ) a f t e r 2

w e e k s

o f

e x p o s u r e .

I n v i t r o

s t u d i e s

u s i n g


s e a w a t e r

h a v e s h o w n

m o r e

d r a -

m a t i c r e d u c t i o n s

i n E . c o l i

( 2 5 , 3 1 ) . I t

i s p o s s i b l e

t h a t

b e l o w

c r i t i c a l

p r e y

d e n s i t i e s o f

1 0 6 t o

1 0 7

b a c t e r i a

p e r

m l

( 4 , 1 0 , 1 4 ,

1 5 ,

1 7 , 4 0 ) , p r e d a t o r s a n d

p r e y

may c o e x i s t . T h e c o n t i n u e d

d e c l i n e

o f

b a c t e r i a

b e y o n d

t h e

l e v e l

c r i t i c a l

t o

s u p p o r t

p r e d a t i o n

i n

v i t r o ma y b e d u e

t o u n s u c c e s s f u l

c o m p e t i t i o n

w i t h

i n d i g e n o u s

m i c r o o r g a n i s m s f o r

n u t r i e n t s . I n

d i f f u s i o n

c h a m b e r s , n u t r i e n t s

may

c o n t i n u e

t o

b e

r e p l e n i s h e d b y

d i f f u s i o n

a t

t h e m e m b r a n e

i n t e r f a c e .

C o m p a r a t i v e

i n s i t u

s u r v i v a l s t u d i e s

o f

E .

c o l i

a n d S a l m o -

n e l l a

s p p .

a r e

f e w a n d

h a v e n e i t h e r

a d d r e s s e d t h e

s i g n i f i -

c a n c e o f


n o r

b e e n

c o n d u c t e d a t


b e l o w

1 0 C . A l t h o u g h c o m p a r a b l e

i n i t i a l d e a t h

r a t e s o f E .

c o l i a n d

s a l m o n e l l a e ,

f o l l o w e d b y p r o l o n g e d

s u r v i v a l o f t h e

f o r m e r , w e r e r e p o r t e d

3 ) , o t h e r s

( 3 0 ,

4 1 )

n o t e d

t h a t S a l m o -

n e l l a

s p p . e x h i b i t e d s o m e w h a t

g r e a t e r

v i a b i l i t y t h a n d i d

E .

c o l i .

O u r

r e s u l t s


t h a t

a l t h o u g h E .

c o l i

a n d

s a l m o n e l l a e s h o w e d

s i m i l a r

s u r v i v a l b o t h

i n t h e

a b s e n c e a n d

i n t h e

p r e s e n c e

o f n a t u r a l m i c r o b i o t a

a t

warm


d i e - o f f r e s u l t s f o r t h e

i n d i c a t o r a n d

p a t h o g e n

i n

f i l t e r e d

w a t e r

a t


b e l o w

1 0 C w e r e

q u i t e

d i f f e r e n t .

T h e s e

r e s u l t s

ma y e x p l a i n

t h e

f i n d i n g s

o f

B r e z e n s k i a n d

R u s s o -

manno

7 ) ,

who

r e p o r t e d

t h e

i s o l a t i o n o f

s a l m o n e l l a e

f r o m

i n d i v i d u a l c l a m s

w i t h f e c a l

c o l i f o r m

m o s t - p r o b a b l e - n u m b e r

v a l u e s o f

< 2 0 / 1 0 0

g .

T h e

a u t h o r s

n o t e d

t h a t t h e

w a t e r


was 5 C

a n d

s p e c u l a t e d

t h a t s a l m o n e l l a e

ma y

e x h i b i t

g r e a t e r

s u r v i v a l

t h a n

d o f e c a l

c o l i f o r m s i n t h e c l a m

s p e c i e s

s t u d i e d .

F i n a l l y ,

i t i s o f

p a r t i c u l a r

i n t e r e s t

t h a t e v e n

a t

e n v i r o n m e n t a l


b e l o w

1 0 C ,

t h e

p r e s e n ce o f

t h e

m i c r o b i o t a

w a s a s s o c i a t e d w i t h

r e d u c e d s u r v i v a l

o f

s a l m o n e l l a e .

R e c e n t i n

v i t r o s t u d i e s o f s u r v i v a l o f

E . c o l i a n d

S a l m o -

n e l l a e

s p p .

i n s t e r i l e

e s t u a r i n e

w a t e r h a v e

d e m o n s t r a t e d b o t h

v i r t u a l l y u n a l t e r e d b a c t e r i a l

d e n s i t i e s

o v e r

a 1 0 - d a y

p e r i o d

( 2 4 , 2 5 )

a n d

a n i m m e d i a t e d e c l i n e

i n c u l t u r a b l e b a c t e r i a

9 ,

3 7 , 4 3 ) . I t

i s

p o s s i b l e t h a t t h e

s u r v i v a l o f

e n t e r i c b a c t e r i a

o b s e r v e d i n t h i s

s t u d y may h a v e b e e n

e n h a n c e d n o t o n l y

b y

n u t r i e n t

e n r i c h m e n t

a c r o s s t h e

m e m b r a n e

i n t e r f a c e s b u t

a l s o

b y a b e n e f i c i a l a s s o c i a t i o n

w i t h

f o u l i n g

o r g a n i s m s .

M c F e t e r s

e t

a l .

( 2 8 , 2 9 ) d e m o n s t r a t e d t h e

p o t e n t i a l

o f

a s y m b i o t i c

r e l a t i o n s h i p b e t w e e n

i n d i c a t o r a n d p a t h o g e n i c

b a c t e r i a

a n d

a l g a l

m a t c o m m u n i t i e s i n

o l i g o t r o p h i c f r e s h

w a t e r .

I n t h e p r e s e n c e

o f t h e i n d i g e n o u s

m i c r o b i o t a ,

t h e r e

w e r e

n o

d i s c e r n i b l e d i f f e r e n c e s i n b a c t e r i a l

s u r v i v a l b e t w e e n

t h e

s t u d y

s i t e s .

T h i s

i n v e s t i g a t i o n

h a s

d e m o n s t r a t e d t h a t E . c o l i

a n d

S a l m o n e l l a

s p p .

c a n

m u l t i p l y a n d

s u r v i v e i n t h e e s t u a r i n e

e n v i r o n m e n t .

T h e i r d e m i s e

w a s a t t r i b u t e d

p r i m a r i l y

t o

e i t h e r

l o w

w a t e r


o r

p r e d a t i o n - a n t a g o n i s m

b y t h e

n a t u r a l

m i c r o b i o t a

a t w a r m e r

t e m p e r a t u r e s .

A l t h o u g h r e s u l t s

o b t a i n e d

w i t h i n t h e

m i c r o c o s m o f

m e m b r a n e - d i f f u s i o n c h a m -

b e r s ma y b e

s u b j e c t

t o b o t t l e

e f f e c t s ,

t h e s e

f i n d i n g s p o t e n -

t i a l l y p a r a l l e l

n a t u r a l e v e n t s o n

s u s p e n d e d p a r t i c l e s

o r w i t h i n

s e d i m e n t s .

T h e

m o s t

i m p o r t a n t

f i n d i n g s

o f t h i s

s t u d y

w e r e

i )

t h e

p e r s i s t e n c e o f S a l m o n e l l a

s p p . c o m p a r e d w i t h

E .

c o l i i n

f i l t e r e d

w a t e r

b e l o w

1 0 C

a n d

i i )

t h e p o t e n t i a l

o f

t h e s e

o r g a n i s m s f o r

a f t e r g r o w t h a n d s u r v i v a l

d u r i n g

warm

t e m p e r -

a t u r e

c o n d i t i o n s . T h e

f o r m e r

s u g g e s t s t h e n e e d f o r s t u d i e s

t o

e x a m i n e t h e r o l e

o f t h e i n d i g e n o u s

m i c r o b i o t a

i n

e n t e r i c

s u r v i v a l

a t

l o w w a t e r

t e m p e r a t u r e s . T h e

l a t t e r

q u e s t i o n s

t h e

u n i v e r s a l

v a l i d i t y o f f e c a l

c o l i f o r m s a s a

n u m e r i c a l s t a n d a r d

i n s h e l l f i s h - g r o w i n g

a r e a s .

A C K N O W L E D G M E N T S

W e

t h a n k

J a n e W i n g r o v e ,

J o s e p h

B o y e r ,

a n d

K e n n e t h

W o r r e l l

f o r

t h e i r v a l u a b l e t e c h n i c a l

a n d

f i e l d

a s s i s t a n c e .

A p p r e c i a t i o n i s e x -

p r e s s e d

t o

S a l l y

H e n d e r s o n , V i r g i n i a D e p a r t m e n t

o f G e n e r a l

S e r v -

i c e s ,

a n d

A l m a

M u r l i n ,

C e n t e r s

f o r

D i s e a s e C o n t r o l , f o r

s u p p l y i n g

b a c t e r i a l

c u l t u r e s a n d

t o

t h e

Ware R i v e r

Y a c h t C l u b f o r

u s e o f t h e i r

f a c i l i t i e s . W e a l s o

t h a n k

E r i c

T .

K o e p f l e r

a n d

M i c h a e l

E .

S i e r a c k i

f o r

c r i t i c a l

r e v i e w

o f

t h e

m a n u s c r i p t .

T h i s

w o r k

w a s

s u p p o r t e d

i n

p a r t

b y f u n d s

p r o v i d e d b y

t h e

V i r g i n i a

W a t e r

R e s o u r c e s

R e s e a r c h C e n t e r

( g r a n t A - 0 9 3 - V A ) .

LITERATURE

CITED

1 .

A n d e r s o n ,

I .

C . , M.

R h o d e s ,

a n d

H .

K a t o r . 1 9 7 9 .

S u b l e t h a l

s t r e s s

i n E s c h e r i c h i a c o l i : a f u n c t i o n

o f

s a l i n i t y . A p p l .

E n v i r o n .

M i c r o b i o l .

3 8 : 1 1 4 7 - 1 1 5 2 .

2 .

A n d e r s o n ,

I .

C . , M. W.

R h o d e s , a n d H . I .

K a t o r . 1 9 8 3 .

S e a s o n a l

v a r i a t i o n

i n s u r v i v a l

o f

E s c h e r i c h i a c o l i e x p o s e d

i n

s i t u i n

m e m b r a n e

d i f f u s i o n

c h a m b e r s

c o n t a i n i n g f i l t e r e d

a n d

n o n f i l -

t e r e d

e s t u a r i n e

w a t e r . A p p l .

E n v i r o n . M i c r o b i o l .

4 5 : 1 8 7 7 - 1 8 8 3 .

3 .

B e a r d ,

P .

J . , a n d N . F .

M e a d o w c r a f t . 1 9 3 5 . S u r v i v a l a n d

r a t e o f

d e a t h

o f i n t e s t i n a l

b a c t e r i a i n

s e a w at e r .

Am. J .

P u b l i c H e a l t h

A P P L .

E N V I R O N . M I C R O B I O L .


6/6

SURVIVAL O F E .

COLI AND

S AL M O N E L L A

S P P .

2 9 0 7

2 5 : 1 0 2 3 - 1 0 2 6 .

4 .

B e r k ,

S .

G . , R . R . C o l w e l l , a n d

N .

E . B .

S m a l l .

1 9 7 6 .

A

s t u dy o f

f e e d i n g r e s p o n s e s t o b a c t e r i a l

p r e y b y e s t u a r i n e c i l i a t e s . T r a n s .

Am.

M i c r o s c . S o c . 9 5 : 5 1 4 - 5 2 0 .

5 .

B i s s o n n e t t e ,

G .

K . , J . J . J e z e s k i , G .

A . M c F e t e r s , a n d

D .

G .

S t u a r t . 1 9 7 5 .

I n f l u e n c e

o f e n v i r o n m e n t a l s t r e s s o n e n u m e r a t i o n

o f i n d i c a t o r

b a c t e r i a f r o m n a t u r a l

w a t e r s . A p p l . M i c r o b i o l . 2 9 :

1 8 6 - 1 9 4 .

6 .

B o n d e , G . J . 1 9 6 6 .

B a c t e r i o l o g i c a l

m e t h o d s

f o r

e s t i m a t i o n

o f

w a t e r

p o l l u t i o n . H ea l t h L ab .

S c i .

3 : 1 2 4 - 1 2 8 .

7 .

B r e z e n s k i ,

F . T . ,

a n d R . R u s s o m a n n o .

1 9 6 9 .

T h e

d e t e c t i o n a n d

u s e o f

s a l m o n e l l a e

i n

s t u d y i n g

p o l l u t e d

t i d a l e s t u a r i e s . J .

W a t e r

P o l l u t . C o n t r o l

F e d . 4 1 : 7 2 5 - 7 3 7 .

8 . C a r l u c c i ,

A . F . , a n d D . P r am e r . 1 9 6 0 .

An e v a l u a t i o n

o f

f a c t o r s

a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l

o f E s c h e r i c h i a

c o l i

i n s e a w a t e r .

I I .

S a l i n i t y , p H ,

a n d n u t r i e n t s .

A p p l . M i c r o b i o l . 8 : 2 4 7 - 2 5 0 .

9 . C o l w e l l , R . R . , P . R .

B r a y t o n ,

D . J .

G r i m e s , D . B . R o z a k , S . A .

H u q , a n d L . M.

P a l m e r .

1 9 8 5 .

V i a b l e

b u t n o n - c u l t u r a b l e

V i b r i o

c h o l e r a e a n d

r e l a t e d p a t h o g e n s i n t h e

e n v i r o n m e n t : i m p l i c a t i o n s

f o r

r e l e a s e o f

g e n e t i c a l l y e n g i n e er e d m i c r o o r g a n i s m s .

B i o / T e c h -

n o l o g y

3 : 8 1 7 - 8 2 0 .

1 0 .

D a n s o , S .

K .

A . ,

a n d

M. A l e x a n d e r . 1 9 7 5 .

R e g u l a t i o n o f p r e d a -

t i o n b y

p r e y d e n s i t y : t h e

p r o t o z o a n - R h i z o b i u m r e l a t i o n s h i p .

A p p l . M i c r o b i o l .

2 9 : 5 1 5 - 5 2 1 .

1 1 .

E l - S h a a r a w i ,

A .

A . ,

a n d

W.

0 .

P i p e s .

1 9 8 2 . E n u m e r a t i o n a n d

s t a t i s t i c a l

i n t e r f e r e n c e ,

p .

4 3 - 6 6 . I n

W.

0 .

P i p e s

( e d . ) ,

B a c t e r i a l

i n d i c a t o r s

o f

p o l l u t i o n .

CR C

P r e s s , I n c . , B o c a

R a t o n ,

F l a .

1 2 .

E n z i n g e r ,

R .

M . ,

a n d

R . C . C o o p e r .

1 9 7 6 . R o l e

o f b a c t e r i a a n d

p r o t o z o a i n t h e r e m o v a l o f E s c h e r i c h i a

c o l i

f r o m

e s t u a r i n e

w a t e r s . A p p l . E n v i r o n .

M i c r o b i o l . 3 7 : 7 5 8 - 7 6 3 .

1 3 .

F a u s t , A . ,

A . E .

A o t a k y ,

a n d

M. L .

H a r g a d o n .

1 9 7 5 . E f f e c t

o f

p h y s i c a l

p a r a m e t e r s o n t h e i n

s i t u

s u r v i v a l

o f E s c h e r i c h i a c o l i

MC-6

i n

a n e s t u a r i n e

e n v i r o n m e n t . A p p l .

M i c r o b i o l .

3 0 : 8 0 0 -

8 0 6 .

1 4 .

F e n c h e l ,

T .

1 9 8 2 .

E c o l o g y

o f

h e t e r o t r o p h i c

m i c r o f l a g e l l a t e s .

I I .

B i o e n e r g e t i c s

a n d

g r o w t h .

M a r . E c o l .

P r o g .

S e r .

8 : 2 2 5 - 2 3 1 .

1 5 .

F r y , J . C . ,

a n d

D .

G .

S t a p l e s .

1 9 7 4 .

T h e

o c c u r r e n c e a n d

r o l e

o f

B d e l l o v i b r i o

b a c t e r i o v o r u s

i n a

p o l l u t e d

r i v e r .

W a t e r

R e s .

8 :

1 0 2 9 - 1 0 3 5 .

1 6 .

G r a n a i , C . ,

I I I . ,

a n d

R . E .

S j o g r e n .

1 9 8 1 . I n s i t u a n d

l a b o r a t o r y

s t u d i e s o f

b a c t e r i a l

s u r v i v a l

u s i n g

a

m i c r o p o r o u s

m e m b r a n e

s a n d w i c h .

A p p l .

E n v i r o n .

M i c r o b i o l .

4 1 : 1 9 0 - 1 9 5 .

1 7 .

H a b t e ,

M . ,

a n d M.

A l e x a n d e r .

1 9 7 8 .

P r o t o z o a n

d e n s i t y

a n d

t h e

c o ex i s t en ce o f

p r o t o z o a n

p r e d a t o r s

a n d b a c t e r i a l

p r e y .

E c o l o g y

5 9 : 1 4 0 - 1 4 6 .

1 8 . H a c k n e y , C .

R . ,

B .

R a y ,

a n d

M.

L .

S p e c k .

1 9 7 9 .

R e p a i r

d e t e c t i o n

p r o c e d u r e

f o r e n u m e r a t i o n o f f e c a l c o l i f o r m s

a n d

e n t e r o c o c c i

f r o m s e a f o o d

a n d m a r i ne e nv i r o nm en t s.

A p p l .

E n v i r o n .

M i c r o b i o l . 3 7 : 9 4 7 - 9 5 3 .

1 9 .

H a r t m a n ,

P .

A .

1 9 7 9 . M o d i f i c a t i o n o f c o n v e n t i o n a l

m e t h o d s

f o r

r e c o v e r y

o f

i n j u r e d

c o l i f o r m s

a n d s a l m o n e l l a e .

J .

F o o d

P r o t . 4 2 :

3 5 6 - 3 6 1 .

2 0 .

J a n n a s c h ,

H .

W.

1 9 6 8 .

C o m p e t i t i v e

e l i m i n a t i o n o f E nt e r o ba c-

t e r i a c e a e

f r o m s e a w a t e r .

A p p l .

M i c r o b i o l .

1 6 : 1 6 1 6 - 1 6 1 8 .

2 1 .

K a p e r ,

J . B . ,

G .

S .

S a y l e r ,

M.

M.

B a l d i n i ,

a n d

R . R .

C o l w e l l .

1 9 7 7 .

A m b i e n t - t e m p e r a t u r e

p r i m a r y

n o n s e l e c t i v e e n r i c h m e n t

f o r

i s o l a t i o n

o f

S a l m o n e l l a

s p p .

f r o m a n

e s t u a r i n e e n v i r o n m e n t .

A p p l .


3 3 : 8 2 9 - 8 3 5 .

2 2 .

K e t c h u m ,

B .

H . , J .

C .

A y e r s ,

a n d R .

F .

V a c c a r o . 1 9 5 2 . P r o c e s s e s

c o n t r i b u t i n g

t o

t h e

d e cr ea se o f

c o l i f o r m

b a c t e r i a

i n

a

t i d a l

e s t u a r y .

E c o l o g y

3 3 : 2 4 7 - 2 5 8 .

2 3 .

M c C a m b r i d g e , J . ,

a n d T .

A . M c M e e k i n . 1 9 7 9 .

P r o t o z o a n

p r e -

d a t i o n o f

E s c h e r i c h i a c o l i i n e s t u a r i n e w a t e r s .

W a t e r R e s .

1 3 :

6 5 9 - 6 6 3 .

2 4 .

M c C a m b r i d g e ,

J . ,

a n d T . A .

M c M e e k i n . 1 9 8 0 . R e l a t i v e e f f e c t s

o f

b a c t e r i a l

a n d p r o t o z o a n

p r e d a t o r s

o n

s u r v i v a l o f


c o l i

i n

e s t u a r i n e

w a t e r

s a m p l e s .

A p p l .

E n v i r o n . M i c r o b i o l . 4 0 :

9 0 7 - 9 1 1 .

2 5 .


J . ,

a n d T . A .

M c M e e k i n .

1 9 8 0 .

E f f e c t

o f t e m p e r -

a t u r e

o n

a c t i v i t y

o f p r e d a t o r s o f S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m

a n d


c o l i i n

e s t u a r i n e

w a t e r .

A u s t .

J .

M a r .

F r e s h w a t e r

R e s . 3 1 : 8 5 1 - 8 5 5 .

2 6 .


J . ,

a n d T . A .

M c M e e k i n . 1 9 8 1 . E f f e c t

o f

s o l a r

r a d i a t i o n a n d

p r e d a c i o u s m i c r o o r g a n i s m s

o n s u r v i v a l o f f e c a l

a n d

o t h e r

b a c t e r i a .

A p p l .


4 1 : 1 0 8 3 - 1 0 8 7 .

2 7 .

M c F e t e r s ,

G . A . ,

a n d D .

G .

S t u a r t .

1 9 7 2 .

S u r v i v a l o f c o l i f o r m

b a c t e r i a

i n

n a t u r a l

w a t e r s : f i e l d

l a b o r a t o r y s t u d i e s

w i t h mem-

b r a n e - f i l t e r c h a m b e r s .

A p p l . M i c r o b i o l .

2 4 : 8 0 5 - 8 1 1 .

2 8 . M c F e t e r s , G . A . ,

S . A .

S t u a r t , a n d

S . B .

O l s o n .

1 9 7 8 .

G r o w t h

o f

h e t e r o t r o p h i c b a c t e r i a

a n d

a l g a l

e x t r a c e l l u l a r p r o d u c t s

i n

o l i g o -

t r o p h i c w a t e r s .

A p p l . E nv i r o n. M i c r o b i o l . 3 5 : 3 8 3 - 3 9 1 .

2 9 . M c F e t e r s , G . A . ,

S . A . S t u a r t , a n d S . B .

O l s o n . 1 9 7 8 .

I n t e r a c -

t i o n s

o f a l g a e a n d

h e t e r o t r o p h i c

b a c t e r i a i n

a n o l i g o t r o p h i c

s t r e a m ,

p .

5 6 - 6 1 .

I n M. W. L o u t i t a n d J . A .

R . M i l e s

( e d . ) ,

M i c r o b i a l

e c o l o g y .

S p r i n g e r - V e r l a g ,

New Y o r k .

3 0 .

M e t c a l f ,

T .

G . ,

L . W.

S l a n e t z , a n d

C . H .

B a r t l e y .

1 9 7 3 .

E n t e r i c

p a t h o g e n s

i n

e s t u a r y w a t e r s

a n d

s h e l l f i s h , p .

2 1 5 - 2 3 4 . I n C . 0 .

C h i c h e s t e r a n d H .

D . G r a h a m ( e d . ) ,

M i c r o b i a l

s a f e t y

o f f i s h e r y

p r o d u c t s .

A c a d e m i c

P r e s s ,

I n c . , N ew

Y o r k .

3 1 .

M i t c h e l l ,

R . ,

S .

Y a n k a f s k y , a n d H . W.

J a n n a s c h .

1 9 6 7 .

L y s i s o f

E s c h e r i c h i a c o l i b y

m a r i n e

m i c r o - o r g a n i s m s .

N a t u r e

( L o n d o n )

2 1 5 : 8 9 1 - 8 9 2 .

3 2 .

N a k a d a , D . , a n d B . M a g a s a n i k .

1 9 6 4 .

T h e r o l e o f i n du c er

a n d

c a t a b o l i t e

r e p r e s s o r

i n t h e

s y n t h e s i s

o f

b e t a - g a l a c t o s i d a s e

b y


c o l i . J .

M o l . B i o l .

8 : 1 0 5 1 2 7 .

3 3 . R a y , B . 1 9 7 9 . M e t h o d s t o

d e t e c t s t r e s s e d

m i c r o o r g a n i s m s . J .

F o o d P r o t . 4 2 : 3 4 6 - 3 5 5 .

3 4 .

R h o d e s ,

M.

W . ,

I .

C .

A n d e r s o n ,

a n d

H . I .

K a t o r . 1 9 8 3 . I n s i t u

d e v e l o p m e n t

o f


i n E s c h e r i c h i a

c o l i :

e f f e c t s

o n

e n u m e r a t i o n .

A p p l .

E n v i r o n .

M i c r o b i o l . 4 5 : 1 8 7 0 - 1 8 7 6 .

3 5 .

R o p e r ,

M.

M . ,

a n d K .

C . M a r s h a l l .

1 9 7 8 .

B i o l o g i c a l

c o n t r o l

a g e n t s

o f

s e w a g e b a c t e r i a

i n

m a r i n e

h a b i t a t s .

A u s t . J . M a r .

F r e s h w a t e r

R e s . 2 9 : 3 3 5 - 3 4 3 .

3 6 .

R o p e r ,

M.

M . ,

a n d

K . C .

M a r s h a l l .

1 9 7 9 . E f f e c t s

o f

s a l i n i t y

o n

s e d i m e n t a t i o n

a n d

o f

p a r t i c u l a t e s

o n

s u r v i v a l

o f

b a c t e r i a i n

e s t u a r i n e

h a b i t a t s .

G e o m i c r o b i o l .

J .

1 : 1 0 3 - 1 1 6 .

3 7 .

R o s z a k ,

D .

B . ,

D .

J . G r i m e s ,

a n d R .

R . C o l w e l l . 1 9 8 4 . V i a b l e b u t

u n r e c o v e r a b l e

s t a g e

o f S a l m o n e l l a e n t e r i t i d i s i n

a q u a t i c s y s -

t e m s .

C a n .

J . M i c r o b i o l .

3 0 : 3 3 4 - 3 3 8 .

3 8 .

S l a n e t z ,

L .

W . ,

a n d C .

H .

B a r t l e y .

1 9 6 5 . S u r v i v a l

o f f e c a l

s t r e p t o c o c c i

i n

s e a w a t e r . H e a l t h L a b . S c i . 2 : 1 4 2 - 1 4 8 .

3 9 .

S t r a n g e ,

R .

E .

1 9 7 6 .

M i c r o b i a l

r e s p o n s e

t o m i l d

s t r e s s . M e a -

d o w f i e l d

P r e s s

L t d . , D u r h a m , E n g l a n d .

4 0 .

V a r o n , M . ,

a n d B . P .

Z e i g l e r .

1 9 7 8 .

B a c t e r i a l

p r e d a t o r - p r e y

i n t e r a c t i o n a t

l o w

p r e y

d e n s i t y .

A p p l .


3 6 :

1 1 - 1 7 .

4 1 .

V a s c o n c e l o s ,

G .

J . ,

a n d R .

G .

S w a r t z .

1 9 7 6 .

S u r v i v a l

o f

b a c t e r i a

i n

s e a w a t e r

u s i n g

a d i f f u s i o n c h a m b e r

a p p a r a t u s

i n

s i t u .

A p p l .

E n v i r o n . M i c r o b i o l . 3 1 : 9 1 3 - 9 2 0 .

4 2 .

V e r s t r a e t e , W . ,

a n d

J .

P .

V o e t s . 1 9 7 6 .

C o m p a r a t i v e s t u d y

o f

E .

c o l i s u r v i v a l

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a q u a t i c

e c o s y s t e m s .

W a t e r R e s .

1 0 : 1 2 9 - 1 3 6 .

4 3 .

X u ,

H .

S . ,

N .

R o b e r t s ,

F .

L .

S i n g l e t o n ,

R . W.

A t t w e l l ,

D .

J .

G r i m e s ,

a n d

R . R .

C o l w e l l .

1 9 8 2 .

S u r v i v a l

a n d

v i a b i l i t y

o f

n o n c u l t u r a b l e

E s c h e r i c h i a c o l i

a n d

V i b r i o

c h o l e r a e

i n

t h e

e s t u -

a r i n e

a n d

m a r i n e e nv i r o n m en t . M i c r o b .

E c o l . 8 : 3 1 3 - 3 2 3 .

VOL.

5 4 ,

1 9 8 8

Documents

Survival of Escherichia Coli and Salmonella Spp. In