Top of Form
PEWARNAAN BAKTERI SECARA GRAM
BAB IIPRAKTIKUM KE IV (PEWARNAAN BAKTERI SECARA GRAM)
A.Tujuan PraktikumAdapun tujuan praktikum mengenai pewarnaan
bakteri secara gram ini antara lain untuk memahami cara
identifikasi dengan metode pewarnaan dan mikroskop.
B.Dasar TeoriPewarnaan secara gram adalah pewarnaan yang sangat
berguna dan paling banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi
dan klasifikasi bakteri, karena merupakan tahapan penting dalam
langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada tebal atau
tipisnya lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya
lapisan lemak pada membran sel bakteri. Jenis bakteri berdasarkan
pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu gram positif dan gram
negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan
membran sel selapis. Sedangkan baktri gram negatif mempunyai
dinding sel tipis yang berada di antara dua lapis membran
sel.Karena kemampuannya membedakan suatu kelompok bakteri tertentu
dari kelompok lainnya, maka pewarnaan ini juga disebut pewarnaan
diferensial.Mikroorganisme terutama bakteri sulit dilihat dengan
menggunakan mikroskop cahaya, karena tidak mengasorbsi ataupun
membiaskan cahaya.Tehnik pewarnaan merupakan cara yang banyak
dipergunakan untuk melihat struktur dan morfologi bakteri. Terdapat
beberapa tehnik pewarnaan diantaranya, pewarnaan sederhana
merupakan pewarnaan yang hanya menggunakan satu macam larutan warna
contohnya pewarnaan sederhana dan pewarnaan negative, kemudian
pewarnaan diferensial, merupakan pewarnaan yang menggunakan lebih
dari satu macam larutan warna, contohnya pewarnaan gram, pewarnaan
tahan asam, pewarnaan kapsul, dan pewarnaan spora.Sebelum melakukan
prosedur pewarnaan terhadap bakteri, terdapat beberapa hal yang
perlu diperhatikan, seperti gelas objek dibersihkan dengan
menggunakan alcohol 70% untuk menghilangkan debu atau lemak,
kemudian pewarnaan diferensial terlebih dahulu dibuat preparat, dan
fiksasi dapat dilakukan dengan melewatkan preparat ulas diatas
nyala api, adapun tujuan dilakukan fiksasi antara lain untuk
melekatkan sel bakteri pada objek glass, mematikan sel bakteri dan
lain sebagainya.
C.Alat dan Bahana.Biakan bakteriE. Coli,
Streptococus,danPseudomonasb.Mikroskopc.Larutan Kristal
violet1.Kristal violet 2 gram2.Etil alcohol 20 gram3.Ammonium
oksalat 0,8 gramd.Larutan lugol1.Iodine 1 gram2.Kl 2 gram3.Aqua
dest 300 mle.Alcohol 96 %f.Larutan safranin1.Safranin 0,25
gram2.Alcohol 95 % 10 ml3.Aqua dest 100 mlg.Alcohol 70
%h.NaCli.Aqua destj.Lampu spritusk.Jarum Osel.Objek glasm.Pinset
(Penjepit kayu)
D.Cara Kerja1.Pewarnaan sederhana.Pertama - tama membuat
preparat ulas dengan cara :1)Bersihkan kaca objek dengan
menyemprotkan alcohol 70 %, kemudian lap dengan menggunakan tisu
atau kapas.2)Pindahkan suspense bakteri dengan menggunakan jarum
ose keatas kaca objek, dekatkan dengan api spritus agar kerja
berjalan steril.3)Campur dengan NaCl hingga merata. Oleskan
campuran ini diatas kaca objek.4)Biarkan preparat mengering di
udara sebentar.5)Fiksasi diatas api spritus.Kemudian,6)Beri atau
tetesi larutan metylen blue, diamkan sebentar sekitar 20-30
detik.7)Zat warna dituang, kemudian bilas dengan aqua dest
mengalir.8)Preparat dikeringkan di udara,9)Amati dengan menggunakan
mikroskop.2.Pewarnaan gram.Pertama tama membuat preparat ulas
dengan cara :1)Bersihkan kaca objek dengan menyemprotkan alcohol 70
%, kemudian lap dengan menggunakan tisu atau kapas.2)Pindahkan
suspense bakteri dengan menggunakan jarum ose keatas kaca objek,
dekatkan dengan api spritus agar kerja berjalan steril.3)Campur
dengan NaCl hingga merata. Oleskan campuran ini diatas kaca
objek.4)Biarkan preparat mengering di udara sebentar.5)Fiksasi
diatas api spritus.Kemudian,6)Beri atau tetesi larutan Kristal
violet, diamkan sebentar lalu bilas dengan aqua dest
mengalir.7)Tetesi larutan lugol, diamkan sebentar lalu lunturkan
dengan alcohol 96 % goyangkan sampai tidak ada lagi zat warna
mengalir di preparat.8)Zat warna dibuang bilas dengan aqua dest
mengalir.9)Tetesi dengan larutan safranin diamkan sebentar.10)Zat
warna dibuang dengan membilas dengan menggunakan aqua dest
mengalir.11)Preparat dikeringkan dengan menggunakan kertas
saring.12)Amati dengan menggunakan mikroskop.F.PembahasanPewarnaan
yang dilakukan merupakan pewarnaan sederhana dan pewarnaan gram.
Dimana pewarnaan sederhana merupakan pewarnaan yang hanya
menggunakan satu macam pewarna saja, sedangkan pewarnaan gram
merupakan pewarnaan yang menggunakan pewarna lebih dari satu
macam.Pada pewarnaan sederhana menggunakan satu macam pewarna
metylen blue, sehingga ketika diamati dengan menggunakan mikroskop
maka pada bakteriE.coliakan terlihat bewarna biru keungu-unguan,
pada bakteriStreptococuskelihatan bewarna biru keungu-unguan, dan
pada bakteri ketiga yaitu bakteriPseudemonas, ketika diamati
ternyata bewarna ungu kebiru-biruan pudar.Sedangkan pada pewarnaan
gram menggunakan lebih dari satu macam pewarna seperti Kristal
violet, larutan lugol, dan larutan safranin. Pada pewarnaan gram
apabilah bakteri berakhir dengan warna merah maka bakteri tersebut
merupakan bakteri gram negative, dan sebaliknya apabilah tidak
bewarna merah berarti merupakan bakteri gram positive.Pada
pewarnaan gram ini, ditemukan bahwa bakteriE. colisetelah diamati
dengan menggunakan mikroskop, terlihat bewarna merah, kemudian
bakteristreptococcustidak bewarna, hanya ada sedikit warna merah
yang merupakan pembiasan cahaya pada mikroskop, begitu juga dengan
bakteriPseudomonasterlihat bewarna sedikit kemerah-merahan dan
kelihatan merah tambahan yang dihasilkan merupakan biasan cahaya
dari mikroskop.
G.KesimpulanBerdasarkan hasil pengamatan, maka dapat disimpulkan
bahwa :a.Bakteri E.coli merupakan bakteri gram negative , karena
berakhir dengan warna merah pada akhir pewarnaan gram.b.Bakteri
Streptococus merupakan bakteri gram positif karena tidak berakhir
dengan warna merah pada akhir pewarnaan gram dan berbentuk kokus
yang merupakan cirri daripada bakteri gram positif.c.Bakteri
Pseudomonas merupakan bakteri gram negative , karena berakhir
dengan warna kemerahan pada akhir pewarnaan gram, serta berbentuk
basil yang merupakan cirri daripada bakteri gram positif.Preparat
tetesan bergantung (Hanging Drop)Diposkan oleh. PooR pRinZa aPpLe
.di08.22.00
LAPORAN PRAKTIKUMMIKROBIOLOGI IPREPARAT TETESAN BERGANTUNG
(HANGING DROP)
Oleh:
Oleh:Nama: Dian OctarinaNIM: 08081004023Asisten: FarhanKelompok:
VIII (Delapan)
LABORATORIUM MIKROJURUSAN BIOLOGIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU
PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS SRIWIJAYA2009
LEMBAR HASIL KERJAPRAKTIKUM MIKROBIOLOGIJudul Praktikum:
Preparat tetesan bergantung (Hanging Drop)Nama / NIM: Dian
Octarina/08081004023Kelompok: VIIIAsisten: FarhanTanggal: 28
Oktober 2009I.TUJUAN PRAKTIKUMTujuan Praktikum ini adalah :Untuk
melihat pergerakan mikroorganisme.
II.LANDASAN TEORIMikroorganisme (bakteri, Cyanobacteria, jamur,
protozoa, dan ganggang) dan binatang-binatang kecil (multiseluler
parasit dan invertebrata mikroskopis) menampilkan berbagai bentuk
dan ukuran. Sistem Whittaker, yang terdiri dari lima kerajaan,
menekan perbedaan dalam cirri-ciri seluler dan gizi, sedangkan
sistem Woese, yang terdiri dari tiga domain, menekankan perbedaan
dalam ciri-ciri biokimia. Sistem tersebut tidak mencakup virus,
karena sifat, karakter yang unik dan metode replikasi (Alexander
2004).Bakteri hidup sukar untuk dilihat dengan mikroskop cahaya
biasa karena bakteri itu tampak tidak berwarna, jika diamati secara
sendiri-sendiri, walaupun biakannya secara keseluruhan mungkin
berwarna. Namun, sering diperlukan dan lebih disukai untuk melihat
bakteri hidup dibawah mikroskop, khususnya untuk menentukan apakah
bakteri-bakteri tersebut dapat bergerak (Volk 1993).Suatu cara
pengamatan bakteri hidup yang memuaskan ialah dalam sediaan tetesan
bergantung. Setetes biakan cair (atau organisme disuspensi dalam
air) diletakkan ditengah sebuah kaca penutup. Disini dipakai gelas
preparat khusus dengan cekungan ditengahnya. Cekungan dilingkari
oleh lapisan petrotalum kemudian dibalikkan diatas kaca penutup,
sehingga tetesan biakan berada ditengah cekungan. Seluruh preparat
dengan kaca penutup kemudian secara cepat dibalikkan lagi sehingga
tetesan biakan benar-benar menggantung pada kaca penutup di dalam
cekungan. Gelas preparat diletakkan pada meja mikroskop dan
organisme diamati dengan lensa objektif tinggi kering atau imersi
minyak(Volk 1993).Pada umumnya tolak ukur pertumbuhan
(multiplikasi) bakteri dan lain-lain mikroorganisme uniseluler
adalah hasil penentuan penambahan jumlah dalam hubungan dengan
waktu. Misalnya ke dalam medium yang berisi 50 ml bulyon steril
dengan suhu 35C ditanam setetes cairan yang kira-kira 10 sel
bakteri yang biasanya ditemukan dalam usus, misalnyaEsherichia
coli. Bakteri colon ini diambil dari biakan persediaan yang sudah
lama disimpan di lemari es dan tidak aktif. Bulyon yang telah
ditanam itu dieramkan pada suhu 35C. masalahnya sekarang ialah
secara berurutan menghitung jumlah bakteri yang ditemukan selang
waktu tertentu dengan cara mengambil sejumlah biakan bulyon
tersebut misalnya 1 ml (Irianto 2007).Bentuk dan struktur bakteri
dapat diamati dengan dua cara: (a). Dengan mengamati pergerakan
sel-sel hidup, tanpa pewarnaan, (b). Mengamati sel-sel yang mati
dengan pewarnaan. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan
tidak kontras dengan air, di mana sel-sel bakteri tersebut
disuspensikan. Oleh karena itu pengamatan tanpa pewarnaan menjadi
lebih sukar dan tidak dapat digunakan untuk melihat bagian-bagian
sel dengan teliti. Pewarnaan akan menyebabkan bakteri-bakteri
tersebut berwarna dengan sekelilingnya, sehingga akan terlihat
lebih jelas. Pada umumnya pergerakan mikroba dapat dibagi menjadi
dua macam, yaitu gerak pasif dan gerak aktif. Gerak pasif
disebabkan oleh adanya gerakan pertikel-pertikel disekitarnya,
misalnya gerakan dari molekul-molekul (gerakan Brown) yang menyebar
kesemua arah. Sedangkan gerakan aktif disebabkan oleh pergerakan
mikroba itu sendiri. Berdasarkan cara pergerakannya, mikroba dibagi
atas mikroba yang bersifat motil dan bersifat non-motil. Mikroba
motil ialah mikroba yang dapat bergerak karena mempunyai flagella,
sedangkan bakteri non-motil tidak dapat bergerak (Sutedjo
1991).Preparat basah atau preparat tetes bergantung memungkinkan
pemerikasaan organisme hidup yang tersuspensi dalam zat alir.
Preparat baasah diperoleh dengan menaruh setetes zat alir yang
mengandung organisme pada kaca dan menutupnya dengan kaca sangat
tipis yang dinamakan kaca tutup. Untuk mengurangi laju penguapan
dan meniadakan aliran udara, tetesan itu biasanya dilingkari dengan
jeli petroleum atau bahan serupa sehingga antara kaca objek dan
kaca terkatup rapat. Tersedia kaca objek khusus dengan daerah
cekung ke dalam untuk preparat tetes bergantung. Preparat basah
atau preparat tetes bergantung berutama berguna apabila morfologi
mikroorganisme yang ditengah diperiksa dapat rusak karena perlakuan
dengan panas atau bahan kimia ataupun bila organisme itu sukar
diwarnai. Cara itu pun merupakan metode pilihan untuk mengamati
proses-proses kehidupan tertentu, misalnya seperti motilitas dan
reproduksi.Apabila preparat basah diperiksa dengan mikroskop medan
terang, amatlah penting untuk menyesuaikan cahaya dengan benar.
Preparat basah atau preparat tetes gantung memungkinkan pemeriksaan
organisme hidup yang tersuspensi di dalam zat alir (Pelczar
1986).Bentuk dan struktur bakteri dapat diamati dengan dua cara:
(a). Dengan mengamati pergerakan sel-sel hidup, tanpa pewarnaan,
(b). Mengamati sel-sel yang mati dengan pewarnaan. Bakteri yang
hidup hampir tidak berwarna dan tidak kontras dengan air, di mana
sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Oleh karena itu pengamatan
tanpa pewarnaan menjadi lebih sukar dan tidak dapat digunakan untuk
melihat bagian-bagian sel dengan teliti. Pewarnaan akan menyebabkan
bakteri-bakteri tersebut berwarna dengan sekelilingnya, sehingga
akan terlihat lebih jelas. Pada umumnya pergerakan mikroba dapat
dibagi menjadi dua macam, yaitu gerak pasif dan gerak aktif. Gerak
pasif disebabkan oleh adanya gerakan pertikel-pertikel
disekitarnya, misalnya gerakan dari molekul-molekul (gerakan Brown)
yang menyebar kesemua arah. Sedangkan gerakan aktif disebabkan oleh
pergerakan mikroba itu sendiri. Berdasarkan cara pergerakannya,
mikroba dibagi atas mikroba yang bersifat motil dan bersifat
non-motil. Mikroba motil ialah mikroba yang dapat bergerak karena
mempunyai flagella, sedangkan bakteri non-motil tidak dapat
bergerak (Sutedjo 1991).Menurut Brown gerakan bakteri menggunakan
preparat tetesan bergantung biasanya lurus dan tak tentu arahnya.
Metode ini enggunakan tabung-tabung dengan suspense dari berbagai
derajat kekeruhan. Tiap-tiap derajat tersebut dengan tingkat
kekeruhan equivalen dengan jumlah tertentu permilimeter. Suspense
bakteri yang ingin diperiksa jumlanya dibandingkan dengan kekeruhan
dalam tabung, yaitu dengan ukuran yang sama (Irianto
2006).Menyesuaikan cahaya dengan benar pada mikroskop medan terang
dalam mengamati preparat tetes bergantung, intensitas cahaya dapat
dikurangi dengan menggunakan filter khusus. Mikroskopi medan gelap
dan mikroskopi kontras fase memberikan keuntungan khusus untuk
pemeriksaan sel-sel mikrobe yang tidak diwarnai yang tersuspensi
dalam cairan. Kedua macam mikroskopi menghasilkan kontras yang
lebih baik antara mikroorganisme (atau sebagian daripadanya) dan
bahan latar belakangnya. Teknik ini digunakan di laboratorium
diagnostic klinis, khususnya untuk pemeriksaan specimen yang diduga
mengandung protozoa didalamnya. Sel protozoa umumnya lebih besar
dari kebanyakan bakteri dan mempunyai stuktur internal yang lebih
rumit. Struktur-struktur ini, atau bagian intraseluler, penting
untuk mencirikan spesies dan dapat diamati dengan menggunakan
mikroskopi medan gelap atau kontras fase (Pelczar 1986).Dalam
sediaan preparat tetes bergantung, hanya dapat mengalami pengamatan
bakteri selama fluida masih bergantung pada kaca penutup, jika
fluida telah menetes pada kaca benda, maka pengamatan akan sulit
dilakukan. Melalui preparat tersebut dapat dilihat mikroba yang
bergerak. Pengelompokan bakteri secara natural dan reaksi kimia
terhadap bahan kimia (Burdon 1994).Tolak ukur pertumbuhan
(multiplikasi) bakteri dan lain-lain mikroorganisme uniseluler
adalah hasil penentuan penambahan jumlah dalam hubungan dengan
waktu. Misalnya ke dalam medium yang berisi 50 ml bulyon steril
dengan suhu 35C ditanam setetes cairan yang kira-kira 10 sel
bakteri yang biasanya ditemukan dalam usus, misalnyaEsherichia
coli. Bakteri colon ini diambil dari biakan persediaan yang sudah
lama disimpan di lemari es dan tidak aktif. Bulyon yang telah
ditanam itu dieramkan pada suhu 35C. masalahnya sekarang ialah
secara berurutan menghitung jumlah bakteri yang ditemukan selang
waktu tertentu dengan cara mengambil sejumlah biakan bulyon
tersebut misalnya 1 ml (Irianto 2007).
III.HASIL PENGAMATAN1.Mikroskop
Keterangan :1.Lensa okuler6.Cermin2.Revolver7.Alas
mikroskop3.Lensa objektif8.Lengan mikroskop4.Meja
preparat9.Kondensor5.Diafragma
2.Preparat Tetes BergantungAir Got (perbesaran 4 x 10)
IV.PEMBAHASANDalam studi organisme mikroskopis, mikroskop sangat
dibutuhkan. Mikroskop dapat memperjelas mata dalam mengamati
organisme berukuran sangat kecil yang tidak dapat dilihat dengan
mata telanjang. Hal ini sesuai dengan pendapat Campbell (2002)
bahwa dua nilai penting sebuah mikroskop ialah daya pembesaran dan
penguraiannya, atau resolusi. Pembesaran mencerminkan berapa kali
lebih besar objeknya terlihat dibandingkan dengan ukuran
sebenarnya. Daya urai merupakan ukuran kejelasan citra, yaitu jarak
minimum dua titik yang dapat dipisahkan dan masih dapat dibedakan
sbegai dua titik terpisah.Berdasarkan sumber penerangan sinarnya,
mikroskop dibedakan dalam beberapa jenis dengan kemampuan
perbesaran yang berbeda pula. Hal ini sesuai dengan pendapat
Alexandes (2004) bahwa mikroskop yang biasa digunakan di
laboratorium adalah mikroskop cahaya, dan ada pula mikroskop yang
mampu menggantikan cahaya tampak dan memfokuskan berkas electron
melalui specimen, yakni mikroskop electron. Mikroskop cahaya
memperbesar objek hingga 1000X dan dapat dipergunakan untuk
mempelajari ukuran sel, bentuk dan pengaturan. Terdapat dua jenis
mikroskop electron, yaitu mikroskop elektron transmisi (TEM) dan
mikroskop elektron payar (SEM). Mikroskop elektron transmisi
memungkinkan memagnifikasi hingga 100.000X, sehingga memungkinkan
dapat mempelajari detail internal sel, dan mikroskop elektron payar
(SEM) menggunakan ketelitian hingga 20.000X yang mampu menampilkan
sel dalam tiga dimensi.Komponen mikroskop dibagi menjadi dua
bagian, yaitu bagian optik dan bagian mekanik. Hal ini sesuai
dengan pendapat Sutedjo (1991) bahwa bagian-bagian mekanik pada
mikroskop terdiri dari statif, tubus, revolver, maja benda, sekrup
pengatur tubus (halus dan kasar), sekrup pengaturkondensor dan
sekrup-sekrup pengatur meja benda. Dan bagian optic mikroskop
mencangkup lensa okuler, lensa objektif, kondensor dan cermin
pengatur cahaya.Pengamatan terhadap air selokan pada preparat tetes
bergantung di bawah mikroskop, terlihat hasil pergerakan euglena.
Protozoa ini berbentuk elips/lonjong, berwarna hijau dan memiliki
pergerakan yang maju. Hal ini sesuai dengan pendapat Irianto (2002)
bahwa euglena merupakan protozoa yang memiliki flagella dan
memiliki klorofil dan kloroplas yang menyebabkan warna hijau pada
tumbuhan tingkat tinggi. Para ahli tumbuhan memasukkannya dalam
dunia tumbuhan. Sedangkan para ahli hewan memasukkannya ke dalam
dunia hewan karena bergerak secara aktif dan memiliki bintik
mata.Pada praktikum preparat tetasan bergantung ini, salah satu
bahan yang digunakan ialah vaselin. Vaselin digunakan saat
meletakkan/menutupkan kaca penutup pada kaca objek. Vaselin
berfungsi untuk mempertahankan air yang mengandung mikrobia yang
akan diamati yang telah diletakkan pada kaca objek dan ditutup
dengan kaca penutup serta merekatkan kaca penutup pada kaca objek
agar air di dalam dapat dipertahankan dan tidak menyebar
kemana-mana. Yang mempermudah terhadap pengamatan gerakan mikrobia
air tersebut. Hal ini sesuai dengan pendapat Dwidjosepoetro (1998)
bahwa gerakan pada mikroba dibagi menjadi dua macam, yaitu gerak
pasif dan gerak aktif. Gerak pasif disebabkan oleh adanya gerakan
partikel-partikel disekitarnya, misalnya gerakan dari
molekul-molekul air (gerakan Brown) yang menyebar ke semua arah.
Sedangkan gerakan aktif disebabkan oleh gerakan mikroba itu
sendiri.Dengan menggunakan preparat tetes bergantung, pergerakan
mikroba dalam objek air yang diamati di bawah mikroskop akan tampak
jelas pergerakannya. Hal ini sesuai dengan pendapat Schlejel (1994)
bahwapreparat bawah atau preparat tetes bergantung berguna terutama
apabila dalam pengamatan morfologi mikroorganisme yang tengah
diperiksa dapat rusak karena perlakuan dengan panas atau bahan
kimia ataupun bila organisme itu sukar diwarnai. Berdasarkan
geaknya, mikroba dibagi atas mikroba yang bersifat motil dan
amotil. Pada praktikum ini diperoleh gerak Brown yang termasuk
mikroba motil yaitu yang dapat bergerak.
V.KESIMPULANDari praktikum yang telah dilaksanakan dapat
disimpulkan sebagai berikut :1.Mikroskop terdiri dari dua komponen,
yiatu bagian mekanik dan bagian ortik.2.Bentuk dan struktur bakteri
dapat diamati tanpa pewarnaan, yakni bagian mengamati pergerakan
sel-sel hidup.3.Preparat tetes bergantung digunakan dalam mengamati
gerak bakteri dan gerak Brown dengan menghindari
penguapan.4.Bakteri dapat bergerak maju dan mundur karena benturan
dari moekul air menurut Brown.5.Pada preparat tetes bergantung air
got didapatkan gerak Brown yang berupagerakan-gerakan dari mikrobia
yang diamati.6.Di dalam air got terdapat protozoa, yaitu euglena
yang berwarna hijau dan paramecium yang putih transparan.
