PembahasanPada praktikum kali ini telah dilakukan percobaan
mengenai uji ketelitian pipetasi yang bertujuan untuk mengetahui
cara menggunakan pipet piston (clinipette), kemudian membandingkan
ketelitiannya dengan pipet gelas serta mengetahui cara mengukur
konsentrasi sampel dengan menggunakan alat spektrofotometer. Pada
prinsipnya uji ketelitian pipetasi merujuk kepada Hukum
Lambert-Beer, dimana konsentrasi suatu zat berbanding lurus dengan
jumlah cahaya yang diabsopsi atau berbanding terbalik dengan
logaritma cahaya yang ditransmisikan. Selain itu, suatu senyawa
bila dikenai energi Radiasi Elektro Magnetik (REM) pada gelombang
tertentu akan mengalami eksitasi ke keadaan yang lebih tinggi. Pada
saat terjadi eksitasi molekul menyerap energi yang disebut sebagai
nilai absorbansi.Pipet digunakan untuk memindahkan sejumlah larutan
secara akurat dari suatu wadah ke wadah lain. Jenis-jenis pipet
beragam dimana setiap masing-masing memiliki ketelitian yang
berbeda. Ketelitian dalam menggunakan pipet sangat penting dalam
bidang kimia klinik karena perbedaan volume yang sedikit saja dapat
memberikan hasil yang berbeda sehingga akan salah dalam
menginterpretasikan hasil yang diperoleh. Oleh karana itu,
dilakukan percobaan untuk membandingkan ketelitian dari pipet gelas
dan pipet piston. Dalam percobaan ini alat-alat yang digunakan
adalah pipet gelas, pipet piston dan spektrofotometer. Pipet gelas
merupakan suatu pipet yang memiliki skala lebih besar di bandingkan
pipet piston. Spektrofotometer digunakan untuk membandingkan
ketelitian dari pipet gelas dan pipet piston. Keuntungan pengukuran
dengan menggunakaan spektrofotometer adalah: mempunyai senditivitas
relatif tinggi, pengerjaannya mudah sehingga pengukuran yang
dilakukan cepat dan mempunyai spesifisitas yang relatif tinggi.
Spesifisitas diperoleh dengan mereaksikan sampel yang diperiksa
dengan pereaksi yang sesuai, kemudian membentuk warna yang berbeda
atau dengan pemisahan analitis menjadi reaksi pembentukan warna.
Bahan yang digunakan adalah Kalium Permanganat (KMnO4). .
Penggunaan larutan KMnO4 tidaklah mutlak digunakan pada percobaan
kali ini, bahan lain dapat digunakan pada percobaan kali ini,
asalkan memenuhi persyaratan dapat diserap/diukur oleh alat
spektrofotometri Uv-Vis. Seperti diketahui bahwa alat
spektrofotometri dapat menyerap pada panjang gelombang
Ultraviolet/Uv untuk zat-zat kromofor dan Sinar tampak/Visibel
untuk zat-zat bewarna. Penggunaan KMnO4 mungkin dimaksudkan karena
bahannya termasuk mudah larut dalam air, sebagai bahan pelarutnya,
air mudah didapat, murahdan tidak toksik. KMnO4 juga relatif lebih
murah, dan stabil pada kondisi larutan. Larutan baku induk kalium
permanganat dibuat dengan konsentrasi tertentu sehingga memiliki
absorbansi pada range 0,8-1,0 nm. Kemudian dibuat variasi dari
larutan baku tersebut dengan pengenceran 1 (100L), pengenceran 2
(200L), pengenceran 3 (300L), pengenceran 4 (400L) dan pengenceran
5 (500L). Pengenceran ini dibuat dengan tujuan untuk membandingkan
pengukuruan absorbansi untuk setiap cara pemipetan pipet gelas dan
pipet piston sehingga dapat dibandingkan pula ketelitian dari pipet
gelas dan pipet piston tersebut. Pengenceran dilakukan dengan
menambahkan aquadest sebagai pelarutnya. Ada beberapa syarat
pelarut dalam menggunakan Spektrofotometri Uv-Vis ini, yaitu dapat
melarutkan cuplikan, inert (tidak memberikan serapan atau radiasi),
meneruskan radiasi dalam daerah panjang gelombang yang diukur,
serta harus memiliki tingkat kepolaran yang hampir sama dengan
sampelPengenceran ini dilakukan dengan menggunakan 2 pipet yaitu
pipet gelas dan pipet piston. Pengenceran dilakukan langsung dalam
kuvet, masing-masing pengenceran menggunakan 2 kuvet sehingga akan
didapat 2 absorbansi untuk setiap pengenceran. Penggunaan kuvet
yang berbeda untuk setiap pengujian dilakukan agar tidak terjadi
kontaminasi dari larutan KMnO4 dengan konsentrasi yang berbeda yang
akan mempengaruhi nilai absorbansinya.Dilakukan 2 kali pengukuran
absorbansi agar hasil yang didapatkan lebih akurat. Larutan pada
tiap pengenceran diukur pada panjang gelombang maksimum 546nm.
Panjang gelombang yang digunakan dalam percobaan ini berdasarkan
atas larutan induk yang digunakan. Dalam percobaan ini digunakan
larutan induk yang memiliki sifat fisik berwarna ungu. Oleh karena
itu, pengukuran dilakukan pada panjang gelombang visible tepat pada
546nm. Salah satuhal yang penting diingatadalahuntukmenganalisis
secara spektrofotometri UV-VIS
diperlukanpanjanggelombangmaksimal.Alasan panjang gelombang harus
maksimal,yaitu
:1.Padapanjanggelombangmaksimaltersebutperubahanabsorbansiuntuksetiapkonsentrasiadalah
yang paling besar.2.Di
sekitarpanjanggelombangmaksimal,bentukkurvaabsorbansi datardan
padakondisitersebut hukum Lambert beer akanterpenuhi.Setelah
mendapatkan nilai absorbansi dari setiap pengenceran dan setiap
pipet, lalu menghitung nilai rata-rata, nilai standar deviasi dan
nilai koefisien variasi. Nilai rata-rata diperoleh dari penjumlahan
seluruh data setiap pengenceran dan setiap masing-masing pipet.
Nilai standar deviasi (SD) didapat dari perhitungan setiap
pengenceran dan setiap pipet dengan menggunakan rumus: Nilai
koefisien variasi (KV) didapat dari perhitungan setiap data
pengenceran dan setiap pipet dengan menggunakan rumus: Nilai
standar deviasi digunakan untuk mengetahui presisi dan akurasi yang
didapatkan. Akurasi adalah ukuran seberapa dekat suatu angka hasil
pengukuran terhadap angka sebenarnya (true value atau reference
value). Presisi adalah ukuran seberapa dekat suatu hasil pengukuran
satu dengan yang lainnya. Makin kecil nilai SD dan KV yang
didapatkan, maka ketelitian makin baik.Setelah menghitung nilai
Standar Deviasi (SD) dan Koefisien Variasi (KV), praktikan
menghitung nilai batas peringatan dengan menggunakan rumus: X + 2SD
dan menghitung nilai batas kontrolnya dengan menggunakan rumus X +
3SD untuk menentukan apakah alat yang digunakan masih baik
digunakan dalam praktikum biokimia analitik yang lain.
Dari kelima pengenceran dapat diketahui bahwa hasil pengukuran
keseluruhan dapat diterima karena tidak ada nilai absorbansi
pengenceran yang berada pada rentang X+3SD ( batas kontrol ).
Seluruh hasil juga tidak melebihi batas peringatan sehingga data
yang didapatkan cukup baik.Semakin kecil standar deviasi maka akan
semakin kecil pula koefisien variasinya yang dimana semakin kecil
koefisien variasi maka akan semakin baik pengukurannya karena
memiliki ketelitian tinggi. Berdasarkan hasil pengamatan,
ketelitian pipet gelas lebih baik dibandingkan dengan pipet piston
untuk setiap pengenceran. Hal ini dapat terlihat dari nilai SD dan
KV. Nilai SD dan KV yang didapatkan untuk pipet gelas, lebih kecil
dibandingkan nilai SD dan KV untuk pipet piston. Hasil pengamatan
ini menunjukkan beberapa hal yang tidak sesuai dengan teori
mengenai pipet piston dan pipet gelas. Pada pipet piston sudah
terdapat pengaturan volume yang akan diambil sehingga sudah
terkalibrasi dengan baik, sehingga seharusnya pada pipet piston
ketelitiannya lebih akurat dibandingkan dengan pipet gelas karena
pipet piston memiliki ketelitian L. Pipet gelas memiliki ketelitian
mL dan pengambilan volume dengan pipet gelas tergantung pada
pembacaan skala, sehingga ketelitian pipet gelas kurang akurat bila
dibandingkan dengan pipet piston karena kemungkinan kesalahan lebih
mudah terjadi pada pembacaan pipet gelas.Berdasarkan hasil
pengamatan menunjukkan bahwa ketelitian pipet piston kurang akurat
dibandingkan dengan pipet gelas dimana seharusnya pipet piston lah
yang lebih teliti dibandingkan dengan pipet gelas, hal ini
disebabkan oleh beberapa hal diantaranya praktikan lebih terbiasa
menggunakan pipet gelas dibandingkan dengan menggunakan pipet
piston yang asing bagi praktikan sehingga penggunaan pipet gelas
lebih optimum. Dalam penggunaan pipet piston ada beberapa hal yang
perlu diperhatikan agar penggunaan pipet piston ini lebih optimal,
yaitu: Konsisten speed dan kelancaran saatmenekan dan melepaskan
tombolnya Konsisten tekanan pada plunger pada pertama Konsisten dan
cukup saat memasukkan tip ke dalam cairan Posisi tip pada cairan
Posisinya Hampir Vertikal dari pipet Menghindari semua gelembung
udara
