LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASIPENENTUAN POTENSI
ANTIBIOTIKARabu, 6 Mei 2015Kelompok XVRabu, Pukul 13.30 16.30
WIB
NamaNPMTugasKurnia Megawati260110130122Tujuan, Prinsip, Alat
Bahan,Prosedur, Perhitungan, PembahasanImas Laili
Lestari260110130123Editor, Teori Dasar, Hasil Data Pengamatan,
Perhitungan, Pembahasan, Simpulan
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASIFAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS
PADJADJARAN2015NilaiTTD
(Shintya Noor Amalya) (BenedictusGenta P)
I. TUJUANMenentukan besarnya potensi sampel antibiotika di
pasaran terhadap antibiotika standar.
II. PRINSIP1. Pengenceran AntibiotikaPengenceran antibiotika
dilakukan untuk memberoleh variasi konsentrasi antibiotic.
Pengenceran dilakukan dengan menggunakan pelarut berupa akuades
steril dan dilakukan secara aseptis.2. Potensi AntibiotikaUji
potensi antibiotika secara mikrobiologik adalah suatu teknik untuk
menetapkan suatu potensi antibiotika dengan mengukur efek senyawa
tersebut terhadap pertumbuhan mikroorganisme uji yang peka dan
sesuai. Efek yang ditimbulkan pada senyawa uji dapat berupa
hambatan pertumbuhan.3. Zona HambatTerbentuknya zona bening atau
zona hambat menandakan adanya potensi dari antibiotik yang
digunakan dalam menghambat dan membunuh bakteri.4. Teknik
aseptisTeknik aseptis yaitu teknik yang digunakan dalam pencegahan
kontaminasi selama membuat dan mensterilkan medium kultur. Tindakan
aseptis ini bertujuan untuk mengurangi atau menghilangkan
mikroorganisme yang terdapat pada permukaan benda hidup atau benda
mati.5. Metode lempengMetode lempeng didasarkan pada difusi
antibiotika dari silinder atau lubang yang yang dipasang tegak
lurus pada lapisan agar padat dalam cawan petri atau lempeng,
sehingga mikroba yang ditambahkan dihambat pertumbuhannya.
Penghambatan pertumbuhan mikroba ini akan tampak sebagai diameter
daerah hambat (DDH).III. TEORI DASARAntibiotika adalah zat-zat
kimia yang dihasilkan mikro-organisme hidup terutama fungi dan
bakteri tanah, yang memiliki khasiat mematikan atau menghambat
pertumbuhan banyak bakteri dan beberapa virus besar, sedangkan
toksisitasnya bagi manusia relatif kecil (Tjay, 2008). Antibiotik
adalah segolongan senyawa, baik alami maupun sintetik, yang
mempunyai efek menekan atau menghentikan suatu proses biokimia di
dalam organisme, khususnya dalam proses infeksi oleh bakteri
(Craig., 1998). Berdasarkan sifatnya antibiotik dibagi menjadi dua;
antibiotik yang bersifat bakterisidal, yaitu antibiotik yang
bersifat destruktif terhadap bakteri dan antibiotik yang bersifat
bakteriostatik, yaitu antibiotik yang bekerja menghambat
pertumbuhan atau multiplikasi bakteri (Saene, et al
2005).Berdasarkan mekanisme kerjanya dapat dibagi menjadi 5
kelompok yaitu: pengganggu metabolisme sel mikroba (sulfonamid,
trimetoprin, asam p-aminosalisilat (PAS), dan Sulfon.), penghambat
sintesis dinding mikroba (penisilin, sefalosporin, basitrasin,
vankomisin, dan sikloserin), pengganggu permeabilitas membran sel
mikroba (polimiksin, golongan polien serta berbagai antimikroba
kemoterapeutik) penghambat sintesis protein sel mikroba (golongan
aminoglikosid, makrolid, linkomisin, tetrasiklin, dan
kloramfenikol), penghambat sintesis atau merusak asam nukleat sel
mikroba (rifampisin, dan golongan kuinolon) (Jawetz et.al.
2005).Secara umum antibiotika terbagi atas (Tjay et al, 2008).:
PenisilinPenisilin-G dan turunannya bersifat bakterisid terhadap
terutama kuman Gram-positif (khususnya Cocci) dan hanya beberapa
kuman Gram-negatif. Contohnya : Benzilpenisilin,
Fenoksimetilpenisilin Kloksasilin, Asam Klavulanat, Ampisilin.
SefalosporinSpektrum kerjanya luas dan meliputi banyak kuman
Gram-positif dan Gram-negatif termasuk Escherichia coli. Berkhasiat
bakterisid dalam fase pembunuhan kuman, berdasarkan penghambatan
sintesa peptidoglikan yang diperlukan kuman untuk ketangguhan
dindingnya. Contohnya : Sefaleksin, Sefamandol, Sefouroksin,
Sefotaksim, Seftazidim, Aztreonam. AminoglikosidaAktivitasnya
bakterisid, berdasarkan dayanya untuk mempenetrasi dinding bakteri
dan mengikat diri pada ribosom di dalam sel. Proses translasi (RNA
dan DNA) diganggu sehingga biosintesa proteinnya dikacaukan. Efek
ini tidak saja terjadi pada fase pertumbuhan juga bila kuman tidak
membelah diri. Contohnya : Streptomisin, Gentamisin, Amiksin,
Neomisin Paromomisin. TetrasiklinMekanisme kerja berdasarkan
diganggunya sintesa protein kuman. Spectrum kerjanya luas dan
meliputi banyak cocci Gram-positif dan Gram-negatif serta
kebanyakan bacilli, kecuali pseudomonas dan proteus. Contohnya :
Tetrasiklin, Doksisiklin, Makrolida dan linkomisinEritromisin
bekerja bakteriostatis terhadap terutama bakteri Gram-positif, dan
spectrum kerjanya mirip penisilin-G. Mekanisme kerjanya melalui
pengikatan reversible pada ribosom kuman, sehingga sintesis
proteinnya dirintangi. Contohnya : Eritromisin, Azitromisin,
Spiramisin, Linkomisin. PolipeptidaKhasiatnya adalah bakterisid
berdasarkan aktivitas permukaannya dan kemampuannya untuk
melekatkan diri pada membran sel bakteri, sehingga permeabilitas
sel meningkat dan akhirnya sel meletus. Contohnya : Polimiksin B,
Basitrasin, Gramsidin. Antibiotika lainnyaKhasiatnya bersifat
bakteriostatis terhadap enterobacter dan Staphylococcus aureus
berdasarkan perintangan sintesa polipeptida kuman. Contohnya :
Kloramfenikol, Vankomisin, Asam fusidat, Mupirosin, Spektinomisin
(Tjay et al, 2008).Suatu zat antimikroba yang ideal, memiliki
toksisitas selektif. Istilah ini berarti bahwa suatu obat berbahaya
bagi parasit tapi tidak membahayakan bagi inang. Umumnya toksisitas
selektif lebih bersifat relatif dan bukan absolud, ini berarti
bahwa suatu obat yang pada konsentrasi tertentu dapat ditoleransi
oleh inang umum dapat merusak parasit (Tjay et al, 2008).Rifampisin
merupakan senyawa antimikroba yang sampai saat ini masih menjadi
pilihan sebagai obat anti TB (Tuberculosis). Dalam sediaan,
rifampisin sering dikombinasikan dengan INH dan etambutol untuk
mencapai efek farmakologi yang lebih baik. Bentuk sediaan yang
banyak ditemukan diperdagangan umumnya tablet, kapsul atau kaplet,
baik tunggal maupun kombinasi. Efek farmakologi rifampisin sebagai
anti tuberkulotik berlangsung melalui mekanisme kerja penghambatan
polimerase RNA yang bergantung pada DNA bakteri. Spektrum kerjanya
luas, disamping terhadap mikobakteri, juga efektif terhadap
sejumlah bakteri gram positif dan negatif (Mutschler, 1996).Dalam
larutan basa rifampisin mudah teroksidasi dengan adanya oksigen
atmosfer. Reaksi ini dapat dicegah dengan penambahan natrium
askorbat sebagai anti oksidan. Disimpan dalam wadah tidak tembus
cahaya, tertutup rapat terlindung dari panas berlebihan (Florey,
1976).Suatu antibiotika perlu ditentukan potensinya karena efek
penggunaan antimikroba yang meningkat, sehingga meningkatkan pula
efek resistensi berbagai mikroba patogen. Efektivitas daya hambat
atau daya bunuh antimikroba sangat tergantung pada jumlah dan
kekuatan zat aktifnya (Singgih, 2007).Metode umum dalam uji potensi
antibiotik antara lain :1. Metode lempeng (silinder/kertas
cakram)Metode ini didasarkan pada difusi antibiotik dari silinder
yang dipasang tegak lurus pada lapisan agar padat dalam cawan petri
atau lempeng yang berisi biakan mikroba uji pada jumlah tertentu.
Sediaan antibiotika menghambat pertumbuhan mikroba yang ada pada
lempeng agar (Singgih, 2007).2. Metode turbidimetriHambatan
pertumbuhan biakan mikroba dalam larutan serbasama antibiotik,
dalam media cair yang dapat menumbuhkan mikroba dengan cepat bila
tidak terdapat antibiotik metode turbidimetri dilakukan pada sampel
yang sulit larut dalam air, contohnya : gramisidin (Singgih,
2007).Bacillus subtilis adalah mikroorganisme tanah di mana-mana
yang memberikan kontribusi untuk hara bersepeda ketika biologis
aktif karena berbagai enzim yang dihasilkan oleh anggota spesies.
Meskipun angka yang sebenarnya yang ada di lingkungan untuk
thisspecies belum ditentukan, basil terjadi pada tingkat populasi
106-107 per gram tanah. Namun, kecuali tanah telah diubah terakhir
dengan bahan organik memberikan nutrisi mudah dapat dipakai, basil
ada di tahap endospora. Diperkirakan bahwa 60 sampai 100% dari
populasi basil tanah ada di negara spora aktif (Alexander, 1977).
Seperti kebanyakan anggota genus, B. subtilis adalah aerobik,
kecuali dengan adanya glukosa dan nitrat, beberapa pertumbuhan
anaerob dapat terjadi (Claus dan Berkeley, 1986).Bacillus merupakan
bakteri Gram positif, berbentuk batang, beberapa spesies bersifat
aerob obligat dan bersifat anaerobik fakultatif, dan memiliki
endospora sebagai struktur bertahan saat kondisi lingkungan tidak
mendukung. Menurut Fardiaz (1992) bentuk spora (endospora) Bacillus
bervariasi bergantung pada spesiesnya. Endospora ada yang lebih
kecil dan ada juga yang lebih besar dari pada diameter sel
induknya. Pada umumnya sporulasi terjadi bila keadaan medium
memburuk, zat-zat yang timbul sebagai pertukaran zat yang
terakumulasi dan faktor luar lainnya yang merugikan (Backman et
al.,1994).
Sumber gambar:
http://anabio.vn/gioi-thieu-loi-khuan-bacillus-subtilis/IV. ALAT
DAN BAHAN4.1 Alata. Cawan petri b. Inkubator c. Jangka sorong d.
Labu ukur 100 ml e. Lampu spirtus f. Mikropipet g. Mortir dan
stamfer h. Perforator i. Pinset j. Rak tabung k. Spatel l. Tabung
reaksi besar m. Volume pipet berukuran 1 ml dan 10 ml 4.2 Bahana.
Air suling steril b. Larutan desinfektanc. Media nutrien agar d.
Pelarut sediaan uji e. Sediaan antibiotika standar dan sampel
(Rifampisin)f. Suspensi bakteri Bacillus subtilis 4.3 Gambar Alat
Cawan petriJangka sorong
Labu ukur 100 ml
Lampu spirtus
Mikropipet
Mortir dan Stamper
Perforator
Pinset Rak Tabung
Spatel
Tabung reaksi besar Volume pipet 1 ml
Volume pipet 10 ml
V. PROSEDURSuspensi bakteri disiapkan dalam Nutrien broth yang
berumur 18-24 jam, bakteri ini harus homogen. Perbenihan nutrien
agar dengan cara melarutkan sejumlah tertentu nutrien agar dalam
aquades kemudian disterilkan dalam otoklaf selama 15 menit pada
121oC. Sediaan uji dimasukkan ke dalam labu ukur, dilarutkan dengan
sedikit pelarutnya. Kemudian ditambahkan air suling steril sampai
tanda batas. Jika sediaan uji berbentuk padat, gerus dahulu dalam
mortir, sebelum dimasukkan dalam labu ukur. Pengenceran larutan
sampel dan larutan standar direncanakan hingga didapat variasi dua
seri dosis yang diinginkan (dosis tinggi, dosis menengah dan dosis
rendah). Larutan inokulum dibuat dengan cara memasukkan suspensi
biakan bakteri ke dalam nutrien agar yang telah disterilisasi.
Dalam keadaan masih cair, nutrien agar yang telah mengandung
suspensi bakteri tersebut dituangkan ke dalam cawan petri secara
aseptis sebanyak 20 ml. Dibiarkan sampai membeku. Permukaan dasar
cawan menjadi enam area sama besar. Diberi label masing-masing area
tersebut tergantung variasi seri dosis yang akan digunakan. Enam
cetakan reservoir (lubang) dibuat pada masing-masing cawan petri
dengan menggunakan perforator secara aseptis. Reservoir tersebut
dibuat dengan cara membuang agar yang ada dalam cetakan reservoir
tersebut dengan menggunakan spatel. Hasil buangan tersebut
dimasukkan ke dalam larutan desinfektan yang telah disediakan.
Larutan sampel dan standar dimasukkan pada masing-masing reservoir
sesuai dosis yang ditentukan dengan menggunakan mikropipet secara
aseptis. Kemudian diinkubasikan dalam inkubator pada suhu 37oC
selama 18-24 jam. Diameter daerah bening (zone lisis) yang terjadi
di sekeliling reservoir yang telah mengandung antibiotika tersebut
diukur dengan menggunakan jangka sorong dan dicatat. Lalu potensi
antibiotic dihitung.
DAFTAR PUSTAKAAlexander, M. 1977. Introduction to Soil
Microbiology. New York : John Wiley and Sons, Inc.Backman, PA,
Brannnen PM and Mahaffe WF.1994. Plant Respon and Disease Control
Followin Seed Inoculation with Bacillus sp. Australia: Pruc Third
Int Work PGPR South Australia, March 7-11 1994.Claus, D. and R.C.W.
Berkeley. 1986. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Vol. 2.
Baltimore, MD : Williams and Wilkins Co.,. Craig, W.A. 1998.
Choosing An Antibiotic On The Basis of Pharmacodynamics. England:
J. New.Depkes RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.Dwidjoseputro, D. 2003.
Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta.Florey, K.. 1976.
Analytical Profiles of Drugs Substances Volume V. London: Academic
Press. Jawetz, et al. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba
Medika. Jakarta.Mutschler, E. 1996. Arzneimittelwirkungen, 7 Neu
Bearbeitete Auflage. Stuttgart : Wissenschaftliche
Verlagsgeselschaft mbH. Saene, Van et al. 2005. Infection Control
In The Intensive Care Unit. 2nd ed. Milan : Springer. Singgih,
Maria. 2007. Uji Potensi Antibiotik. Tersedia online di
http://digilib.si.itb.ac.id/go.php?id=jbptitbpp-gdl-s2-1990-sudding-1734
[diakses pada 10 Mei 2015].Thng Ba. 2015. Bacillus subtilis.
Tersedia online di
http://anabio.vn/gioi-thieu-loi-khuan-bacillus-subtilis/ [diakses
pada 10 Mei 2015].Tjay, Tann Hoan., Rahardja, Kirana. 2008.
Obat-Obat Penting. Jakarta : Elexmedia Komputindo.
