Laboratorijska dijagnostika Mycobacterium tuberculosis

je uzrocnik tuberkuloze,bolesti koja moze zahvatati sva tkiva i organe tako da u mikrobioloskoj laboratoriji moze doci raznovrstan materijal.Pripadnici roda mycobacterium su vitki (tanki) bacili.Poneki je savijen na kraju,poseduju omotac koji su gradjeni od lipida.To su intracelularni paraziti koji izazivaju hronicna granulomatozna oboljenja koja lecimo primenom tuberkulostatika.Prevencija je BSZ vakcina.Bakterioloska dijagnoza traje 2 meseca,uzimamo veci broj uzoraka,3-5 odnosno vise puta (jer ne dolazi do stalnog izlucivanja m.tuberculosis).Za plucnu lokalizaciju uzimamo sputum,laringealni bris,bronhoalveolarni lavat (ispirak) i zeludacni ispirak.

Extrapulmonalna lokalizacija m.tuberculosis,cesto se za m.tuberculosis upotrebljava naziv BK (bacil Koha).Uzimamo sl.uzorke:krv,likvor,urin,razlicite eksudate (pleuralni,peritonealni).Urin se nekada za tuberkulozu skupljao u toku citavog dana,a danas se uzima prvi jutarnji urin sa tim da pacijent odbaci prvi mlaz (kolicina od 15 ml)

1)MIKROSKOPSKI PREPARAT moze da bude direktan ili sa kulture.Pre nego sto pristupimo pravljenju preparata vrsimo homogenizaciju koja obuhvata digestiju i dekontaminaciju.Digestija (razgradnja) se vrsi uz pomoc N-acetil L-cisteina,i na ovaj nacin dolazi do kidanja disulfidnih veza mukoproteina koji su lokalizovani u ispljuvku.Dekontaminacija se vrsi uz pomoc NaOH I H2SO4,i na ovaj nacin se uklanjaju bakterije koje pripadaju saprofitnoj flori ili uslovno patogenim bakterijama.Oni se muckaju 30 min sa ispitivanim materijalom i onda je materijal spreman za zasejavanje ili inokulaciju eksperimentalnoj zivotinji.

Bojenje po Cil-Nilsenu (Ziehl-Neelsenu) se koristi zato sto se radi o acido-alkoholno rezitentnim bakterijama.Na preparatu uocavamo bakterije koje nisu acido-alkoholno rezistentne,boje se plavo,gde vidimo koke,bacile koji su osetljivi naalkohole i kiseline,crvene vitke stapice (m.tuberculosis) koji su acido-alkoholno rezistentne bakterije,crvene boje (bacili),leukocite (ucestvuju u imunom odgovoru),epitelne celije koje su deskvamirane (oljuscene).

2)KULTURELNE KARAKTERISTIKE Za kultivisanje m.tuberculosis koristi se specijalna hranljiva podloga,Levenstajnova (Lowenstein) koja sadrzi malahitno zelenilo,a + rast se manifestuje pojavom formacija u vidu karfiola ili bradavica.RAST JE SPOR,2-8 nedelja.

3)BIOHEMIJSKE KARAKTERISTIKEM.tuberculosis produkuje supstancu niacin.Gasno-tecna hromatografija ispituje prisutnost alkohola i masnih kiselina u omotacu bakterija.

4)BIOLOSKI OGLEDKoristi se zamorac i u lingvinalni predeo ubrizgavamo sumnjiv materijal dovodeci do odredjenih promena kao sto je pojava otoka ili edem,regionalnih limfnih zlezda uz formiranje apscesa i ulkusa.Zivotinja moze da ugine ukoliko dodje do generalizovanog procesa za 8 nedelja.

5)SEROLOSKE REAKCIJEimaju znacaj za tuberkuloznin meningitis gde pratimo pojavu titra At (dinamiku titra)

Tuberkulinske probe sluze za ispitivanje kasne preosetljivosti (celularni imuni odgovor).Najcesce se rade PPD probe,proteinski precisceni derivati.Kod tuberkulinske probe aplikujemo odredjeni broj tuberkulinskih jedinica.Rezultat citamo nakon 48h i merimo precnik eritema i induracije (tvrdine).Na osnovu + ili – tuberkulinske probe,vrsimo ili ne vrsimo vakcinaciju.

Identifikacija m.tuberculosis se ne moze izvrsiti na osnovu nalaza acido-alkoholno rezistentnih bacila,zato sto ne mozemo odrediti rod.Sledeca ispitivanja se odnose na radiometrijske metode,koje se koriste za identifikaciju Kohovog bacila metabolisanjem radioaktivne palmitinske kiseline.Ova kiselina je obelezena radioaktivnim ugljenikom i predstavlja sastavni deo podloge.Bakterija metabolise ovu sredinu uz produkciju CO2.Gasna hromatografija nije specificna ali se koristi za detekciju tuberkulostearinske kiseline.Najsavremenija metoda je PCR koja nam omogucava da rezultate dobijemo za 1-2 dana,vrlo je specificna ali rezultati mogu biti lazno + ili – i vrlo su skupe tehnike.