IDENTIFIKASI MIKROBA

Evi Umayah Ulfa

Metode Identifikasi Mikroba

Fenotip Identifikasi/ karakterisasi mikrobaberdasarkan informasi hasil ekspresi gen (morfologi,pewarnaan,biokimia)

Genotip Identifikasi/karakterisasi mikrobaberdasarkan informasi materi genetik (16 sRNA)

Morfologi

1. Bentuk, Rangkaian2. Pewarnaan gram3. Flagela, kapsul4. Bentuk koloni5. Motilitas

Morfologi Bakteri (Bentuk danrangkaian)

Bentuk

Bulat/oval

Batang

Spiral

Spirosetes

Rangkaian

Diplokokus

Sarkina

streptokokkus

Morfologi bakteri (PewarnaanMikroba)

Pewarnaan sederhana Pewarnaan positif

Pewarnaan negatif

Pewarnaan Differensial Pewarnaan Gram

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan Khusus Pewarnaan kapsul

Pewarnaan Flagela

Pewarnaan spora

Pewarnaan positif

Pewarnaan dengan menggunakan satu zat warnayang diwarnai sel bakteri metilen blue

gentian violet,

Safranin

hijau malakhit,

karbol fuchsin

Zat warna basa berinteraksi dengan muatannegatif dari dinding sel bakteri

Melihat bentuk dan rangkaian

Pewarnaan negatif

Pewarnaan dengan satu zat warna yang diwarnaibukan sel bakteri tetapi latar belakannya

Bakteri nampak putih

Untuk bakteri yang susah diwarnai

Zat warna negrosin (asam)

Melihat bentuk dan rangkaian

Pewarnaan Gram

B. anthracis Gram stainshowing spores

Pewarnaan Ziehl Neelsen

Pewarnaan tahan asam

Untuk membedakan bakteri yang tahan asamdan tidak

Bakteri tahan asam (mengandung lipid >>>)

Tahan asam Tidak tahan asam

Karbol Fuchsin merah Merah

Larutan pemucat merah Tidak berwarna

Biru metilen Merah Biru

Pewarnaan Kapsul

Pewarnan negatif

Bakteri diwarnai basa

Kapsul tidak menyerap warna lapisan terangtembus dengan latar belakang yang berwarna

Ex formol gentian violet raebinger

Pewarnaan Flagela

Ditambahkan larutan mordan untukmembengkakan flagela sehingga sel-sel mikrobasemakin terwarnai

Mordan : asam tanin ( mordan asam bereaksidengan zat warna basa)

Pewarnaan Spora

Endospora danEksospora

Struktur bakteri tahanpanas dan bahan kimia

Dipanaskan zatwarna bisa masukkarena lap sporamengembang

Pewarna : hijaumalakhit, safranin

Motility

B. anthracisis non-motile.

Other Bacillusspecies are

motile.

Karakteristik Fisiologi dan Biokimia

1. Aerob/anaerob2. Fotosintesis3. Pertumbuhan dalam media tertentu4. Uji Biokimia

Fisiologi (Aerob, Anaerob)

Depending on the species, bacteria can be aerobic which means they require

oxygen to live

or

anaerobic which means oxygen is deadly to them.

Bacteria can be autotrophs or hetertrophs.

Those that are classified as autotrophs are either photosynthetic, obtaining energy from sunlight or chemosynthetic, breaking down inorganic substances for energy .

Pertumbuhan pada media tertentu

Bile Esculin Agar

CAMPY-BAP

Chocolate Agar

Eosin Methylene Blue (EMB) Agar

Hektoen Enteric (HE) Agar

MacConkey Agar

Mannitol Salts Agar

Chopped Meat Glucose Medium

Triple Sugar-Iron Agar

S.aureus Vs P. mirabilis

Enterobacter aerogenes vsSalmonella arizonae

Uji Biokimia

Uji Hidrolisis Karbohidrat Uji Hidrolisis lemak Uji Proteolisis Uji Indol Uji Deamidase Asam Amino Uji Pembentukan H2S Uji Katalase Uji Sitrat Uji Koagulase Uji Oksidase

Hidrolisis Karbohidrat

Melihat kemampuan mikroba untukmemfermentasi karbohidrat (dekstrosa, laktosa, sukrosa, hidrolisis pati)

Produk fermentasi :

Asammedia MERAH KUNING (adanya fenolred, metil red)

Gas MUNCUL DI TABUNG

2,4 butanadiol (Uji Vogeus proskeur)

Hidrolisa Lemak

Kemampuan bakteri menghidrolisa lemakmenjadi gliserol dan asamasam lemak

Uji positif : Adanya bercak-bercak kuningdisekeliling koloni

Uji negatif ditandai oleh bercak-bercak yang tetap berwarna merah

Proteolisis

Melihat kemampuan mikroba mnghasilkanenzim protease hidrolisis kasein

Uji positif : terbentuknya zona bening disekitar daerah pertumbuhan bakteri, yang menunjukkan protein telah terhidrolisis

Pembentukan Indol

Melihat mikroba yang menghasilkan enzimtriftopanase

Triptofan Indol

Reagen kovaks dalam media : cincin merah

Uji deaminase asam amino

Deaminasi adalah prosesmengkatalisasi pemindahangugus amino (NH2) dari asamamino dan molekul lainnyayang mengandung NH ditambahkan. Hilangnya asamamino dapat dilakukanpemeriksaan pH

Reagen Nessler (brx denganNH4 menghasilkan warnakuning), untuk identifikasiamonia

Pembentukan H2S

Melihat kemampuan mikroorganisme mengubahasam amino sistein mjd alanin dan H2S

Pengujian ini menggunakan medium TSIA (Triple Sugar Iron Agar)

H2S diproduksi oleh beberapa jenismikroorganisme melalui pemecahan asam amino yang mengandung unsur belerang (S) seperti lisindan metionin

Uji katalase

Identifikasi bakteri yang mampu menguraikanhydrogen peroksida (H2O2) menjadi air dan O2

Media NA (Pepton, Ekstrat meat, Agar )

Uji positif : terbentuknya gelembung oksigen di sekitar koloni bakteri, yang menunjukkan bakteri mampu menghasilkan enzim katalase yang dapat mengkatalisis reaksi penguraian : 2H2O22H2O + O2

Uji Sitrat

Tujuan: melihat kemampuan mikroorganismemenggunakan sitrat sebagai satu-satunyasumber karbon dan energi