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LAURA ARANGO BEDOYALAURA BERMEO
TERCER SEMESTREMEDICINA
UPB2012
SEMINARIO BIOLOGIA MOLECULAR
Characterization of a Vancomycin-resistant Enterococcus faecium Outbreak Caused by 2
Genetically Different Clones at a Neonatal Intensive Care Unit .
INTRODUCTION.
ENTEROCOCCUS:
Enterococcus are facultative anaerobic organisms and Gram positives.
They are organized in chains or pairs.
Catalase –
Subdivided into groups by antibodies that recognize surface antigens.
The most important groups are A, B, and D
The hemolysis reaction is important for the classification.
INTRODUCTION.
GENDER FAECIUM:
It can be commensal (innocuous) in the human intestine.
It may also be pathogenic, causing diseases such as:
• neonatal meningitis.•urinary tract infection•bacteremia •endocarditis •diverticulitis
INTRODUCTION.
Vancomycin is used to treat colitis (inflammation of the intestine).
Is in a class of medications called glycopeptide antibiotics
It works by killling bacteria in the intestines. (will not function in any other part of the)
.
VANCOMYCIN
INTRODUCTION.
Vancomycin-resistant Enterococcus
Vancomycin-sensitive enterococci typically obtain new DNA in the form of plasmids or transposons which encode genes that confer vancomycin resistance.
High-level vancomycin-resistant E. faecalis and E. faecium
Six different types of vancomycin resistance are shown by enterococcus : Van-A, Van-B, Van-C, Van-D, Van-E and Van-F. Of these, only Van-A, Van-B and Van-C have been seen in general clinical practice.
The mechanism of resistance to vancomycin found in enterococcus involves the alteration to the terminal amino acid residues of the NAM/NAG-peptide subunits, under normal conditions, D-alanyl-D-alanine, to which vancomycin binds.
This loss of just one point of interaction results in a 1000-fold decrease in affinity
GENERAL OBJETIVE
The main aim of the study was determined from two cases, the ways in which the streptococcus can become resistant to vancomycin, the risk factors to suffer the infection, the main causes of transmission and
measures for controlling the spread of VRE.
MATERIALES Y METODOSDATOS GENERALES
Este estudio se llevó a cabo en un hospital universitario de 1.000 camas
La sala NICU tiene 2 habitaciones con 26 camas.
Compuesto por un pediatra, 5 residentes y 29 enfermeras que prestan atención a los pacientes críticamente enfermos de edad inferior o igual a 6 meses.
Todos los trabajadores de la salud práctican las precauciones estándar.
En julio de 2010, VRE fue aislado de una muestra de esputo de un recién nacido prematuro (caso índice 1). Posteriormente, el ERV se aisló de un cultivo de orina de otro neonato (caso índice 2).
CASE 1Un bebé de 780 g (primero en nacer de una pareja de gemelos).
Parto normal vaginal espontáneo (NSVD), madre de 21 años de edad, semana 25 de gestación.
Puntuaciones de Apgar fueron de 2 y 3 a los 1 y 5 minutos, respectivamente.
Recibió tratamiento con surfactante (complicaciones de la prematuridad):
• Dificultad respiratoria que requería ventilación mecánica y la oxigenoterapia (ampicilina-sulbactam ).
El día 5 en la UCIN, íleon mostraba signos enterocolitis necrotizante (NEC). (rayos x)
En el día 8, se sometió a una resección del intestino delgado.
CASE 1
Día 15, desarrolló hemorragia pulmonar y hemorragia intraventricular.
En el dia 31: esputo (VRE +). (Ampicillina-sulbactam ceftriaxona y linezolid. )
En el dia 36: en el cultivo de esputo se detuvo el crecimiento de VRE : VRE + muestras de rectales.
En el dia 77: Empieza entrenamiento alimienticio •Se observa regurgitación•Pequeña reseccion del intestino.
En el dia 135::• Estudio por imagenes muestra que NEC empeoro.• Acidosis metabolica y neumonia.
En el dia 142: muere (fallo multisistemico y sepsis).
.CASE 2
2300 gr.
G1P0 de 27 años de edad, a las 36 semanas de gestación por NSVD..
La Puntuación de Apgar fue 8 y 9 a 1 y 5 minutos, respectivamente. .
Su condicion de salud durante la primera semana no tuvo complicaciones
En el 7 º día: letargo, ingesta oral deficiente (meningitis aséptica, coagulación intravascular diseminada, e ictericia neonatal)
Fue admitido en la UCIN: vancomicina y ceftriaxona (7 días).
En el dia 6(interno): bradicardia y aumento de los niveles de las enzimas cardiacas= 19% (miocarditis)
CASE 2
Dia18 Dia 23
La paciente recibió inicialmente vancomicina y ceftriaxona ampicillina-sulbactam.
Los hemocultivos y cultivos de orina fueron negativos después de 1 semana de tratamiento y durante 1 semana después de la interrupción
Condición clínica del paciente mejoró, y no se observaron complicaciones.
Dia 28: El paciente fue dado de alta, y la ecocardiografía a los 2 meses reveló una fracción de eyección normal (61%).
Muestras de orina y rectales (VRE +)
MATERIALES Y METODO
INTERVENCIÓN.
Equipo especial creado para coordinar la gestión de la crisis.
Vigilancia activa de las muestras de los 26 pacientes de NICU, 42 trabajadores de la salud y sus entornos.
Todos los pacientes que fueron identificados con VRE se pusieron en cohortes estrictas.
Medidas de control de infecciones reforzadas y áreas de los pacientes se limpiaron a fondo.
La selección se repite cada semana hasta que se presenten pacientes VRE+.
MATERIALES Y METODO
Termociclador
1. PCR: Reacción en cadena de la polimerasa
Objetivo: obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo. (ampliar)
Utilidad: amplificación resulta mucho más fácil identificar : • virus• Bacterias• cadáveres• Hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.
Fundamento: la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN:
• Ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación.
• Dejar que vuelvan a unirse las polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.
MATERIALES Y METODO
2. PFGE
Electroforesis en gel de campo pulsado.
Separación de las moléculas de ADN la aplicación de un campo eléctrico que cambia periódicamente la dirección de una matriz de gel.
UTILIDAD: • huella genética.• Estudios epidemiológicos de los organismos patógenos.•Vincular el medioambiente o alimentos con infecciones clínicas
FUNDAMENTO: •Los trozos más grandes de ADN serán más lentos para alinear su carga cuando la dirección del campo cambia, mientras que piezas más pequeñas serán más rápidas. •En el transcurso del tiempo con el cambio constante de direcciones, cada banda se empieza a separar más y más .
MATERIALES Y METODO
3. MLST
Multilocus sequence typing
Es una técnica para la tipificación de múltiples loci.
El procedimiento caracteriza aislamientos de especies bacterianas usando las secuencias de ADN de fragmentos internos de múltiples genes de limpieza
FUNDAMENTO: amplificación de PCR seguida de la secuenciación del ADN .
Results
Pulsed-field gel electrophoresis of vancomycin-resistant
Discussion
Discussion
Personal conclusions
Laura arango
Laura Bermeo
