FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICA

Efecto de la concentración del aceite esencial de las

hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial

de Colletotrichum gloeosporioides in vitro.

TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE BIÓLOGO

Autora: Br. MOSTACERO AHÓN GLORIA MARIA

ASESOR: Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO

TRUJILLO – PERÚ

2017

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ii

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLLO

QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO

RECTOR

Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves

SECRETARIO GENERAL

Dr. Esteban Ilich Zerpa.

VICE-RECTOR ACADÉMICO

Dr. Rubén Vera Véliz

VICE – RECTOR DE INVESTIGACÍON

Dr. Weider Portocarrero Cárdenas



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

iii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Dr. Freddy Roger Mejía Coico

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

CIENCIAS BIOLÓGICAS:

Dr. Freddy Peláez Peláez



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

iv

PRESENTACIÓN

Señores miembros del Jurado:

En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la

Escuela Académico profesional de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional

de Trujillo, me es honroso someter a vuestra consideración y elevado criterio, el

informe de Tesis titulado: Efecto de la concentración del aceite esencial de las

hojas de Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum

gloeosporioides in vitro.

Con el cual cumplo con uno de los requisitos indispensables para obtener el título de

Biólogo.

Trujillo, Abril del 2017

__________________________________

Br. Mostacero Ahón Gloria Maria



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

v

MIEMBROS DEL JURADO

Dr. Julio Roger Chico Ruíz

PRESIDENTE

Dra. Marlene Rene Rodríguez Espejo

SECRETARIA

Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo

VOCAL



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

vi

DEL ASESOR

El que suscribe, profesor asesor de tesis titulada “Efecto de la concentración

del aceite esencial de las hojas de Schinus molle sobre el crecimiento

micelial de Colletotrichum gloeosporioides in Vitro deja constancia que esta

ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos propuestos en su perfil

académico y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y

sugerencia alcanzada por los miembros del jurado.

Por lo tanto, autorizo al Br. Mostacero Ahón Gloria Maria a continuar con los

trámites correspondientes.

Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo

ASESOR



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

vii

A: Dios, por darnos la oportunidad de vivir y por estar

con nosotras en cada paso que damos, por fortalecer

nuestro corazón e iluminar nuestra mente y por haber

puesto en el camino a aquellas personas que han sido

soporte y compañía durante todo el periodo de estudio.

A: Mis padres Bernardo y Emelda por ser el pilar

fundamental en lo que soy, en la educación, tanto

académica, como de la vida, por su incondicional apoyo

perfectamente mantenido a través del tiempo.

A: Mis hermanos: José Antonio, Maria Susana y Maria

Angélica, porque me han brindado su apoyo

incondicional y por compartir conmigo buenos y malos

momento.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

viii

AGRADECIMIENTO:

Agradezco en primer lugar a Dios, por permitirme culminar mi carrera como

también a mis Padres, Hermanos, familiares y amigos quienes me han brindado su

apoyo incondicional.

Agradezco el apoyo brindado que, en este andar por la vida, influyo con sus

lecciones y experiencias en formarnos como personas de bien y preparada para los

retos que pone la vida.

Agradezco de forma muy especial a todos mis queridos maestros quienes con

responsabilidad y alegría me ilustraron en las aulas de esta universidad y de

manera muy especial quiero agradecer a mi asesor Dr. Marco Leoncio Salazar

Castillo y co asesor el Dr. Julio Roger Chico Ruíz, que sin ningún interés me

brindaron sus conocimientos científicos que fueron muy importantes para

culminar con éxito esta investigación. De igual forma dejo constancia de mis

agradecimientos a todos los miembros del laboratorio de Tecnología enzimática y

Productos Naturales, Departamento Académico de Química Biológica y Fisiología

Animal, de la Facultad de Ciencias Biológicas - UNT, a las Sras. Ms. Melchora

Veneros C. y Ms. Doris Asmat P. por bridarme su apoyo y amistad.

Agradezco el apoyo brindado a mi profesor Blgo. Carlos Heli Quijano Jara por

compartir sus conocimientos para poder plasmarlo en su realización.

A las personas que me orientaron en la redacción del proyecto y nos compartieron

sus conocimientos para poder plasmarlo en su realización.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ix

ÍNDICE

Pág.

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS iii

PRESENTACIÓN iv

MIEMBROS DEL JURADO v

DEL ASESOR vi

DEDICATORIA vii

AGRADECIMIENTO viii

ÍNDICE ix

LISTA DE FIGURAS Y TABLAS x

RESUMEN xi

ABSTRACT xii

I. INTRODUCCION 1

II. MATERIAL Y MÉTODOS 5

III. RESULTADOS 9

IV. DISCUSIÓN 12

V. CONCLUSIONES 14

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 15

VII. ANEXOS



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

x

LISTA DE FIGURAS Y TABLAS

Figura 1. Velocidad de crecimiento de diámetro micelial de C. gloeosporioides

cuando se enfrentan a diferentes concentraciones de aceite esencial de hojas de S.

molle. 10

Tabla 1. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) del aceite

esencial de las hojas de S. molle, sobre el crecimiento micelial de C.

gloeosporioides en condiciones in vitro. 9

Tabla 2. Análisis de varianza (ANOVA) de crecimiento micelial de C.

gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración de aceite esencial de hojas de

S. molle. 11

Tabla 3. Pruebas de Múltiple Rangos para crecimiento micelial de C.


S. molle. 11



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

xi

RESUMEN

Se evaluó el efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de Schinus

molle, sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides, in vitro. Para

ello, se utilizó el medio de cultivo Agar Base Sabouraud más antibiótico, y por

destilación por arrastre de vapor se obtuvo el aceite esencial de S. molle. Se

prepararon concentraciones crecientes de aceite esencial (1, 2, 5, 10 µL/mL)

respectivamente; teniendo como controles el crecimiento micelial positivo al medio

de cultivo con solo agar Sabouraud, y al negativo al medio de cultivo conteniendo

carbendazim (0,2 µL/mL). Se sembraron por puntura fragmentos homogéneos de

micelio C. gloeosporioides. En todos los tratamientos y controles, se incubaron por

8 días a temperatura ambiente observando y midiendo (mm con vernier), el

crecimiento micelial después del cuarto día de incubación. Se encontró que

concentraciones mayores de 2 µL /mL del aceite esencial de S. molle inhiben el

crecimiento micelial de C. gloeosporioides más del 65%, siendo la inhibición más

alta (90.8%), la concentración de 10 µL/mL. Se concluye que el aceite esencial de S.

molle si inhibe el crecimiento micelial de C. gloeosporioides en relación directa a la

concentración y este aceite puede ser utilizado en el control biológico de este

patógeno.

Palabras clave: Aceite Esencial - Schinus molle - Crecimiento micelial -

Colletotrichum gloeosporioides.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

xii

ABSTRACT

The effect of the essential oil concentration of the leaves of Schinus molle on the

mycelial growth of Colletotrichum gloeosporioides was evaluated. For this, the

Sabouraud Base Agar culture medium was used more antibiotically, and the

essential oil of S. molle was obtained. Increasing concentrations of essential oil (1,

2, 5, 10 μL / mL) respectively were prepared; Having as controls the positive

mycelial growth to the culture medium with only Sabouraud agar and negative to

the culture medium containing carbendazim (0.2 μL / mL). Homogeneous

fragments of C. gloeosporioides mycelium were seeded by puncturing. In all

treatments and controls, they were incubated for 8 days at room temperature

observing and measuring (mm with vernier), the mycelial growth after the fourth

day of incubation. It was found that concentrations greater than 2 μL / mL of the

essential oil of S. molle inhibited the mycelial growth of C. gloeosporioides over

65%, with the highest inhibition (90.8%) being the concentration of 10 μL / mL. It

is concluded that the essential oil of S. molle does inhibit the mycelial growth of C.

gloeosporioides in direct relation to the concentration and this oil can be used in the

biological control of this pathogen.

Palabras clave: Essential oil - Schinus molle - mycelial growth - Colletotrichum

gloeosporioides.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

1

I. INTRODUCCION

Schinus molle es una especie vegetal muy difundida en el Perú, siendo su

desarrollo óptimo en los climas de los valles interandinos, esta especie pertenece a

la familia Anacardiaceae1. Es una planta con actividad antifúngica y antibacteriana

principalmente en las hojas2. Además, tiene importancia etnobotánica, pues se la ha

utilizado en el control de plagas agrícolas en varias localidades del Perú3.

Se han evaluado los efectos antibacterianos y antifúngicos de los aceites

esenciales obtenidos de hojas frescas de S. molle, aislados por hidrodestilación

obteniendo actividad contra especies bacterianas totales como: Klebsiella

pneumoniae, Alcaligenes faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Leuconostroc

cremoris, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Echerichia coli y Bacillus

subtilis, entre otras y contra especies fúngicas Aspergillus ochraceus, A.

parasiticus, Fusarium culmorum y Alternaria alternata, mostrando una

sensibilidad significativa a los aceites volátiles4.

Los aceites esenciales surgen como una alternativa al control de plagas y

enfermedades pues su aplicación a nivel de laboratorio ha demostrado eficiencia en

el control de agentes fitopatógenos, creando la posibilidad de contar con productos

que garanticen inocuidad en el medio ambiente y garantizando producciones sanas

y libres de residuos contaminantes5.

Generalmente, los aceites esenciales son mezclas complejas de hasta más de

100 componentes (metabolitos secundarios) que pueden ser compuestos alifáticos

de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y ácidos),

monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos. Estos metabolitos secundarios

cubren un amplio espectro de efectos farmacológicos mostrando diversas

propiedades biológicas, como propiedades antiinflamatorias, antioxidantes, y

anticancerígenos5. Otras actividades biológicas también se reportan como biocidas



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

2

en contra de una amplia gama de microorganismos como bacterias, hongos, virus,

protozoarios insectos y plantas6.

En años recientes, se han desarrollado estudios orientados a la búsqueda de

agentes biocontroladores efectivos en la lucha contra plagas agrícolas. Los agentes

de control biológico incluyen hongos e insectos, extractos vegetales y aceites

esenciales. Actualmente existe un renovado interés en el estudio de aceites

esenciales ya que se buscan alternativas de origen natural para la preservación de

alimentos, lucha contra plagas agrícolas y por los problemas que implica la

resistencia de microorganismos a controles químicos y por el creciente rechazo de

la sociedad al uso de compuestos químicos como aditivos de alimentos y

pesticidas7.

Es necesario investigar sobre las concentraciones mínimas que inhiban el

crecimiento de microorganismos, usando métodos sensibles y robustos que nos

permitan reportar estos datos y valorar la capacidad antimicrobiana de los aceites

esenciales. Estos aceites esenciales, son una buena alternativa como

antimicrobianos ya que en la actualidad alrededor del mundo estamos buscando

formas de cuidar y controlar nuestros cultivos de plagas y enfermedades, sin

destruir más el medio ambiente, tratando de obtener tendencia hacia los productos

naturales y dejar a un lado los productos químicos que tanto daño causan.

El género Colletotrichum es causante de enfermedades prácticamente en

todas las cosechas agrícolas del mundo8. Y produce la “antracnosis” que se

caracterizan por el hundimiento necrosado del tejido donde se producen masas de

conidias dentro de un acérvulo9. La antracnosis se presenta en tejidos de plantas en

desarrollo y maduros, afecta frutos durante su desarrollo en el campo, así como

frutos maduros durante su almacenaje10, prevalece durante temporadas de lluvias y

humedad relativa alta (>80%)11, e infecta con temperaturas de 20 a 28 °C 9. Las

etapas de desarrollo de las especies de Colletotrichum pueden separarse en:

deposición en la superficie del hospedante, fijación de la conidia en la superficie,

germinación de la conidia, producción del apresorio, penetración de la epidermis



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

3

de la planta, crecimiento y colonización del tejido del hospedante y producción de

acérvulos y esporulación12.

El cultivo de Persea americana Mill “palta” es una fuente económica muy

importante, es de consumo creciente debido a su incorporación en la dieta y genera

fuentes de empleos directos e indirectos en su cadena productiva. Para el Perú, la

palta ya es uno de los rubros de exportación más importantes y de crecimiento

espectacular, que se ha constituido en una de las estrellas de la agro exportación La

creciente demanda del fruto de palto en el mundo ha sido factor importante para

que se incremente la superficie cultivada.

El palto es afectado por varias enfermedades producidas por bacterias y

hongos principalmente, entre las que destacan por su prevalencia y por los daños

ocasionados al cultivo, C. gloeosporioides “antracnosis” 13, enfermedad con

prevalencia en temporadas lluviosas o con humedad relativa alta. Es un patógeno

de postcosecha del palto que infecta principalmente frutos pequeños durante su

crecimiento en los huertos. Los cambios fisiológicos en el fruto permiten la

activación del patógeno quiescente, ocasionando pérdidas sustanciales por

decaimiento de frutos durante el almacenaje y comercialización9. Es una de las

enfermedades principales que afecta la calidad del fruto y llega a causar pérdidas

cercanas al 20%, por ello, se hace necesario conocer la interacción planta–patógeno

en sus aspectos moleculares y bioquímicos que sirvan como punto de partida para

plantear investigaciones básicas y aplicadas que provean nuevas perspectivas para

el control de la enfermedad.

Los cultivos industriales y de exportación como el cacao, el palto, el mango,

son en algún momento atacados por C. gloeosporioides, el efecto del hongo en

algunos lugares ha sido contrarrestado tratándolo mediante el control químico y

medidas culturales, sin embargo, el uso del aceite esencial de hojas de S. molle,

resulta novedoso para reemplazar a los químicos debido a que no inducen a

resistencia, no contaminan el ambiente y resultan menos costosos.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

4

El propósito de la presente tesis fue evaluar el efecto de la concentración del aceite

esencial de las hojas de S. molle sobre el crecimiento micelial de C. gloeosporioides

in vitro.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

5

II. MATERIAL Y MÉTODOS

El presente trabajo se llevó a cabo en el laboratorio de Tecnología Enzimática y

Productos Naturales, departamento Académico de Química Biológica y Fisiología

Animal, Facultad de Ciencias Biológicas - Universidad Nacional de Trujillo.

Material biológico

Colletotrichum gloeosporioides fue proporcionado por el laboratorio de

fitopatología, del departamento Académico de Ciencias Biológicas, Facultad de

Ciencias Biológicas, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo el cual fue aislado de

frutos de palto.

S. molle “molle” fue colectado en el distrito de Otuzco, tanto para los ensayos

biológicos y su identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT) de

la Universidad Nacional de Trujillo.

Del material recolectado se seleccionaron las hojas sanas (sin signos o síntomas de

enfermedad o ataque de plagas).

Preparación de medio de cultivo

Se realizó la preparación del medio de cultivo Agar Sabouraud Difco14, se esterilizó

a 121°C/15lb/15min y se adicionó el antibiótico (500 g de Doxiciclina), en cada

medio de cultivo preparado15.

Reactivación del hongo

Se realizó a partir de la placa Petri que contuvo el cultivo madre, donado por el

laboratorio de fitopatología, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo, realizando los



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

6

repiques sucesivos que garantizó la pureza y viabilidad del patógeno hasta su

aplicación, el cultivo se incubó por siete días16.

Obtención del aceite esencial de las hojas de S. molle.

El aceite esencial se obtuvo a partir del material vegetal fresco de las especies S.

molle. Después de seleccionar y preparar el material, eliminando tallos y hojas

dañadas, se sometió a una extracción por el método destilación por arrastre de

vapor de agua. Luego se colocó en frascos pequeños de color ambar y con tapa

rosca, se recomienda refrigerar (5°C).

Aproximadamente 25 kilos de material vegetal, en un destilador (mL) a escala de

laboratorio se empleó 500 g de muestra por cada extracción, las que se colocarón

en el equipo de arrastre de vapor de agua17. El tiempo medio de extracción fue de

15 minutos, luego de alcanzar la temperatura de ebullición del agua (92°C).

Los hidrolatos que contuvo los aceites esenciales fueron colectados y almacenados

en frascos de vidrio color ámbar de 10 mL de capacidad, hasta la destilación de los

25 kilos del material vegetal colectado.

Se concentraron los aceites esenciales partiendo, en peras de separación, los

hidrolatos con cloroformo y luego se destiló el cloroformo17.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

7

Diseño experimental

Se utilizó el diseño completamente al azar de estímulo creciente. El diseño

experimental contó con 4 grupos experimentales, un grupo control positivo, un

grupo control negativo (con carbendazim 0,5 cc/L), a cada grupo se le realizó 3

repeticiones. La evaluación de los resultados culminó cuando el micelio del hongo

(control positivo), ocupe toda la extensión (9cm) de la placa Petri18.

Fuente: Autor, C = Agar Sabouraud +Antibiótico(Doxiciclina), C (1,2,3 y 4) = Agar Sabouraud + aceite esencial

+ Antibiótico(Doxiciclina), C + = Agar Sabouraud + Antifungico (Carbendazim).

% ICM= porcentaje de inhibición del crecimiento micelial.

Evaluación del aceite esencial sobre el crecimiento del hongo

El aceite esencial de S. molle “molle”, se mezcló con el medio agar Sabourand

estéril, en las concentraciones de 1, 2, 5 y 10 µL (v/v) y se dispensó en placas Petri.

Luego de la solidificación del medio, se colocó en el centro de cada placa un disco

de micelio de 5 mm de diámetro, extraído del cultivo puro de C. gloeosporioides

incubado a temperatura ambiente 27±2ºC 25 16. Se registraron las medidas del

diámetro de la colonia del hongo estudiado a partir del cuarto día de

experimentación, cada 48 horas, hasta que el crecimiento del tratamiento testigo (0

% de inhibición) complete el diámetro de la placa (9 cm)16. Con los promedios de

los datos obtenidos, se determinó la velocidad de crecimiento de diámetro micelial.

Así mismo se calculó el porcentaje de inhibición mediante la siguiente formula:

Grupos experimentales Crecimiento micelial (mm)

Promedio

crecimiento

micelial

(mm)

% ICM

4 días 6 días 8 días

1 C (AS + A)

2 C1 (AS + A +AE, S. molle) 1 µL/mL

3 C2 (AS + A + AE, S. molle) 2 µL/mL



6 C+ (AS + A Carbendazim) 2 µL/mL



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

8

𝑰𝑪𝑴 =(𝒅𝟎 − 𝒅𝒄 )

𝒅𝟎 ×𝟏𝟎𝟎

Dónde:

% ICM = Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial,

do = Diámetro de la colonia del testigo (0 %),

dc = Diámetro de la colonia con la concentración prueba.

Análisis estadístico

Se evaluó la presencia (y dimensión en mm) o ausencia del halo de inhibición del

crecimiento del hongo. Los datos se sometieron a un análisis de varianza

(ANOVA), al haber obtenido una razón F significativa se utilizó el análisis de

comparaciones múltiples de Tukey (p≤0,05), para determinar entre qué tratamientos

se encontrarón las diferencias significativas. Se Utilizó el paquete estadístico IBM

SPSS Statistics vers. 20, para todos los tratamientos18.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

9

III. RESULTADOS

Según los resultados obtenidos, las concentraciones del aceite esencial de las hojas

de S. molle “molle”, 1, 2, 5 y 10 µL/mL (Tabla 1, Figs. 1)., y según análisis

estadísticos existen diferencias significativas en los tratamientos, causando

inhibición conforme aumenta las concentraciones del aceite esencial.

Tabla 1. Crecimiento micelial y Porcentaje de inhibición micelial (ICM), del

crecimiento de C. gloeosporioides sobre del aceite esencial de las hojas de Schinus

molle en condiciones in vitro.

Fuente: Autor, C = Agar Sabouraud +Antibiótico(Doxiciclina), C (1,2,3 y 4) = Agar Sabouraud + aceite esencial

+ Antibiótico(Doxiciclina), C + = Agar Sabouraud + Antifungico (Carbendazim).

% ICM= porcentaje de inhibición del crecimiento micelial.

Los resultados obtenidos en el trabajo de enfrentamiento de C. gloeosporioides con

las concentraciones al 1, 2, 5 y 10 µL/mL aceite esencial de Schinus molle

permitieron observar halos de control de crecimiento desde 70.6 mm hasta el 6.4

mm respectivamente

Grupos experimentales

Crecimiento micelial

(mm)

Promedio

crecimiento

micelial

(mm)

% ICM

4 días 6 días 8 días

1 C 68.6 70.6 70.0 69.7 0.000

2 C1 (1 µL/mL) 28.6 26.6 27.6 27.6 60.419

3 C2 (2 µL/mL) 25.4 23.4 24.4 24.4 65.008

4 C3 (5 µL/mL) 23.8 21.8 22.8 22.8 67.302

5 C4 (10 µL/mL) 7.4 5.4 6.4 6.4 90.822

6 C+ 0 0 0 0 100.000



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

10

Fig 1. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides bajo la acción de diferentes

concentraciones de aceite esencial de hojas de S. molle.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

D I A 0 D I A 4 D I A 6 D I A 8

DIA

MET

RO

(M

M)

CRECIMIENTO DE DIAMETRO MICELIAL

C (0 µL/ml) C ( 1 µL/ml) C (2µL/ml)

C ( 5 µL/ml ) C (10µL/ml) C+



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

11

Tabla 2. Análisis de varianza (ANOVA) de crecimiento micelial de C.


S. molle.

Existe suficiente base estadísticas con una P < 0.05, para afirmar que existe diferencia significativa entre la

media de crecimiento micelial 8 días entre un nivel de tratamiento y otro.

Tabla 3. Pruebas de Múltiple Rangos para crecimiento micelial de C.


S. molle.

Contraste Sig. Diferencia +/- Límites

C - C+ * 69.7333 2.51725

C - C1 * 42.1333 2.51725

C - C2 * 45.3333 2.51725

C - C3 * 46.9333 2.51725

C - C4 * 63.3333 2.51725

C+ - C1 * -27.6 2.51725

C+ - C2 * -24.4 2.51725

C+ - C3 * -22.8 2.51725

C+ - C4 * -6.4 2.51725

C1 - C2 * 3.2 2.51725

C1 - C3 * 4.8 2.51725

C1 - C4 * 21.2 2.51725

C2 - C3 1.6 2.51725

C2 - C4 * 18.0 2.51725

C3 - C4 * 16.4 2.51725 * indica una diferencia significativa.

Fuente Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razón-F Valor-P

Entre grupos 8951.54 5 1790.31 2125.69 0.0000

Intra grupos 10.1067 12 0.842222

Total

(Corregido.)

8961.64 17

Tratamientos Casos Media Grupos Homogéneos

C+ 3 0.0 X

C4 3 6.4 X

C3 3 22.8 X

C2 3 24.4 X

C1 3 27.6 X

C 3 69.7333 X



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

12

IV. DISCUSION

Los resultados obtenidos en el trabajo de enfrentamiento de C. gloeosporioides con

las concentraciones al 1, 2, 5 y 10 µL/mL aceite esencial de Schinus molle

permitieron observar halos de control de crecimiento desde 70.6 mm hasta el 6.4

mm respectivamente.

Los valores obtenidos en la Tabla 1, muestran la capacidad del aceite esencial de

Schinus molle para inhibir o detener el crecimiento de C. gloeosporioides,

comportándose como efectivo controlador biológico: el “molle” presenta propiedad

antibacteriana y antifúngica y al menos en condiciones experimentales, logra la

inhibición micelial.19

Es necesario mencionar que las concentraciones del aceite esencial de las hojas de

S. molle empleadas en la experimentación: 1, 2, 5 y 10 µL/mL, presenta diferencias

significativas (Tabla 2), lo cual indica que al usar cualquiera de estas

concentraciones se obtendría una inhibición de 60.4, 65.0, 67.3 y 90.8 %

respectivamente.

En la Tabla 3 nos muestra el análisis estadístico de pruebas de Múltiple Rangos

para crecimiento micelial de C. gloeosporioides a los 8 días, por cada concentración

de aceite esencial de hojas de S. molle. Indicando que el crecimiento micelial de C.

gloeosporioides a los 8 días tiene diferencias significativas.

Muchas especies vegetales producen aceites esenciales los cuales juegan un papel

importante en los mecanismos de defensa contra el hongo Colletotrichum. Se ha

demostrado que los aceites esenciales y sus compuestos tienen un efecto fungicida.

Son inocuos para el medio ambiente, para los consumidores y para el control de

enfermedades postcosecha. La necesidad de reducir el uso de químicos sintéticos

en la agricultura ha incrementado el interés por la posible aplicación de aceites

esenciales para el control biológico patógeno20, 21. En otras investigaciones de aceite



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

13

esencial de Schinus molle contra Candida albicans se reporta acción inhibitoria

mayor a 18 mm20, 21. Cabe señalar, que las diferencias observadas en la curva de

crecimiento (Fig. 1) velocidad de crecimiento micelial de podría verse afectadas

también por factores ambientales, cantidad de inóculo, y la susceptibilidad del

hongo22,18.

Es necesario mencionar que las concentraciones del aceite esencial empleadas en la

experimentación: 1, 2, 5 y 10 µL/mL presenta diferencias significativas (Tabla 2),

lo cual indica que al usar cualquiera de estas concentraciones se obtendría una

inhibición alta de 60.4, 65.0, 67.3 y 90.8 % respectivamente. S. molle, tiene una alta

capacidad de acción.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

14

V. CONCLUSIONES

En relaciones a las concentraciones realizadas se concluye lo siguiente.

El aceite esencial de las hojas Shinus molle “molle” inhibe el crecimiento micelial

de C. gloeosporioides.

La inhibición del crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides está en

relación directa a la concentración del aceite esencial de Shinus molle.

El porcentaje de inhibición micelial de Colletotrichum gloeosporioides en la

concentración de 10 µL/mL fue de 90.8%.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

15

VI. RECOMENDACIONES

Se recomienda profundizar respecto a la utilización del aceite esencial de las hojas

de S molle con concentraciones más altas por ejemplo entre 10 y 20 µL/mL.

Aplicar, en situ, el aceite esencial de S. molle en un cultivo sensible al

Colletotrichum gloeosporioides.

Determinar la actividad fungicida y fungistática.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

16

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Alba A, Bonilla P, Arroyo J. Actividad cicatrizante de una pomada con Aceite

Esencial de Schinus molle l. “molle” en ganado vacuno con heridas infectadas

y en ratones. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Tesis para optar el

título de Quimico Farmaceutico. Lima – Perú; 2009.

2. Gundidza M. La actividad antimicrobial del aceite esencial de Schinus molle

linn. Revista Médica Africian. Brasil.1993; 39(11): 231-234.

3. Rodríguez A, Egúsquiza R. Efecto del molle (Schinus molle) y sus extractos en

el control de Phthorimaea operculella en almacenes de papa. Resúmenes y

programa de la 38ª Convención Nacional de Entomología, Chincha, Perú.

Sociedad Entomológica del Perú.1996. pp. 23.

4. Yelasco A. Medicinal Plants from Pampallakta: an Andean Community in

Cuzco (Perú). Fitoterapia.1995;66 (5): 447-462.

5. Garcia R. Especies y subspecies de Erwinia en Actividad Biocontroladora de

hongos de suelo sobre microorganismos fitopatógenos. Tesis para optar al

grado de Biólogo. Universidad del Azuay, Cuenca, Ecuador.2000.

6. Kalemba D. Kunicka A. Antibacterial and antifungical properties of essential

oils. Current Medicinal Chemistry. 2003; 10:813-829.

7. SuhrK, Nielsen P. Antifungal activity of essential oils evaluated by two

different application techniques against rye bread spoilage fungi. Journal of

Applied Microbiology. 2003; 94, pp. 665 – 674.

8. Whitelaw W, Curtis S, Huang R, Steel C, Blandchard C, Roffey P.

Phylogenetic relationships and pathogenicity of Colletotrichum acutatum

isolates from grape in subtropical Australia. Plant Pathology.2007; 56(3): 448-

463.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

17

9. Freeman S, Minz D, Jurkevitch E, Maymon M, Shabi E. Molecular analyses of

Colletotrichum species from almond and other fruits. Phytopathology.

2000;90(6):608-614.

10. Prusky D, Freeman S, Dickman M. Colletotrichum. Host specificity,

pathology, and host-pathogen interaction. St. Paul: America Phytopathological

Society Press.2000. pp.393.

11. Talhinhas P, Sreeniva Saprasad S, Neves J, Olivera H. Molecular and

phenotypic analyses reveal association of diverse Colletotrichum acutatum

groups and a low level of C. gloeosporioides with olive anthracnose. Applied

and Enviromental Microbiology. 2005; 71(.6): 2.987-2.998.

12. Rodríguez L, González Prieto J, Mayek N. La Infección de Colletotrichum

gloeosporioides (Penz.) Penz.Y Sacc. En Aguacatero (Persea americana

Mill.): Aspectos Bioquímicos y Genéticos. Revista Mexicana de Fitopatología,

2009; 27(1): 53-63.

13. Podila GK, Rogers LM, Kolatukudy PE. Chemical signal from avocado surface

wax trigger germination and appresorium formation in Colletotrichum

gloeosporioides. Plant Physiology 1993;103: 267-272.

14. Merck. Microbiology Manual. 12thedition. Merck KgaA. Darmstadt, Germany;

2005.

15. Cano J, Guarro J, Gené J. Molecular and morphological identification of

Colletotrichum species of clinical interest. Journal of Clinical Microbiology,

2008; 42 (6): 2.450-2.454.

16. Montes R, Cruz V, Martínez G, Sandoval G, García R. Propiedades

Antifúngicas en Plantas Superiores. Análisis Retrospectivo de Investigaciones.

Rev Mexicana Fitopatol, 2000;18(2): 125-131



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

18

17. Vargas A, Bottia E. Estudio de la composición química de los aceites

esenciales de seis especies vegetales cultivadas en los Municipios de Bolívar y

el Peñón. Santander, Colombia. Proyecto de grado de Ingeniero Quimico.,

Universidad Industrial de Santander Facultad de Ciencias, Escuela de Química;

2008. P. 201.

18. Rodríguez M, Chico J. Efecto antifúngico in vitro del extracto etanólico de

chamico, Datura stramonium, sobre Fusarium oxysporum asparagi y

Stemphylium vesicarium aislados del cultivo de espárrago, Asparagus

officinalis, de Moche, Trujillo (Perú). REBIOL, 2012; 32(1): 96-103.

19. Ramos de León N, Sanabria M, Rodríguez D, Ulacio D. Efecto del extracto

etanólico de albahaca genovesa (Ocimum basilicum var. Genovese) sobre

Cercospora apii Fressen y el tizón temprano del celery (Apium graveolens).

Científica UDO Agrícola, 2012; 12(2): 472-478

20. Díaz C, Quesada S, Brenes O, Aguilar G, Cicció, J. Chemical composition of

Schinus molle essential oil and its cytotoxic activity on tumour cell lines,

Natural Product Research. 2008; 22(17): 1521-1534.

21. Morales R. Estudio de la extracción del aceite esencial de la semilla del

Schinus molle Linneo a escala banco. [Tesis, para optar el título de ingeniero

químico]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2000

22. García GRM, Palou GE. Mecanismos de acción antimicrobiana de timol y

carvacrol sobre microorganismos de interés en alimentos. Temas selectos de

ingeniería de alimentos Universidad de las Américas-Puebla. México, 2008;

2(2): 41-51.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXOS



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 1. Medidas del diámetro de la colonia del hongo Colletotrichun

gloeosporioides a partir del cuarto día. 1° lectura. Con tres repeticiones.

Concentración /

tiempo MEDIDAD DE DIAMETROS (mm)

PROMEDIO

(mm)

C (0 µL/mL)

40 40 38 40 40 39.6

42 42 40 42 42 41.6

41 41 39 41 41 40.6

C1 (1 µL/mL)

11 18 20 19 20 17.6

9 16 18 17 18 15.6

10 17 17 18 17 15.8

C2 (2 µL/mL)

13 12 14 13 13 13

11 10 12 11 11 11

12 11 13 12 12 12

C3 (5 µL/mL)

12 11 12 10 11 11.2

10 9 10 8 9 9.2

11 10 9 9 10 9.8

C4 (10 µL/mL)

5 5 5 6 5 5.2

3 3 3 4 3 3.2

4 4 4 5 4 4.2

C+

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0


gloeosporioides, sexto día 2° lecturas. Con tres repeticiones.

Concentración medidas de diametro (mm) PROMEDIO (mm)

C (0 µL/mL)

49 41 45 43 43 44.2

51 43 47 45 45 46.2

50 42 46 44 44 45.2

C1 (1 µL/mL)

21 23 22 24 22 22.4

19 21 20 22 20 20.4

20 22 21 23 21 21.4

C2 (2 µL/mL)

18 18 17 18 18 17.8

16 16 15 16 16 15.8

17 17 16 17 17 16.8

C3 (5 µL/mL)

14 14 13 13 15 13.8

12 12 11 12 13 12

13 13 10 11 14 12.2

C4 (10 µL/mL)

6 7 5 6 6 6

4 5 3 4 4 4

5 6 4 5 5 5

C+

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS


gloeosporioides, octavo día. 3° lecturas. Con tres repeticiones.

ANEXO 4. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial de la colonia del hongo

Colletotrichun gloeosporioides, cuarto día 1° lecturas.


Colletotrichun gloeosporioides, sexto día. 2° lecturas.

Concentración / tiempo Medidas de diámetro micelial (mm) Promedios (mm)

C (0 µL/mL)

68 69 68 71 67 68.6

70 71 70 73 69 70.6

71 70 69 72 68 70

C1 (1 µL/mL)

28 29 28 30 28 28.6

26 27 26 28 26 26.6

27 28 27 29 27 27.6

C2 (2 µL/mL)

27 25 26 24 25 25.4

25 23 24 22 23 23.4

26 24 25 23 24 24.4

C3 (5 µL/mL)

25 23 23 24 24 23.8

23 21 21 22 22 21.8

24 22 22 23 23 22.8

C4 (10 µL/mL)

8 8 7 7 7 7.4

6 6 5 5 5 5.4

7 7 6 6 6 6.4

C+

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0

Tratamientos

Repetiones

Crecimiento Micelial ( 4 dias)

C

(0 µL/mL)

C1

(1µL/mL)

C2

(2 µL/mL)

C3

(5µL/mL)

C4

(10µL/mL) C +

1 39.6 17.6 13 11.2 5.2 0

2 41.6 15.6 11 9.2 3.2 0

3 40.6 15.8 12 9.8 4.2 0

X 1 40.6 16.3 12 10.1 4.2 0

Tratamientos

Repetiones

Crecimiento Micelial (6 días)

C

(0 µL/mL)

C1

(1µL/mL)

C2

(2 µL/mL)

C3

(5µL/mL)

C4

(10µL/mL) C +

1 44.2 22.4 17.8 13.8 6.0 0

2 46.2 20.4 15.8 12.0 4.0 0

3 45.2 21.4 16.8 12.2 5.0 0

X 2 45.2 21.4 16.8 12.7 5.0 0



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS


Colletotrichun gloeosporioides, octavo día. 3° lecturas.

ANEXO 7. Velocidad del crecimiento de diámetro micelial promedio con las tres

repeticiones.

ANEXO 8. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) del aceite esencial

de las hojas de Schinus molle, sobre el crecimiento micelial de C. gloeosporioides en

condiciones in vitro.

Tratamientos

Repetiones

crecimiento micelial (mm) 8 días C

(0 µL/mL)

C1

(1 µL/mL)

C2

(2µL/mL)

C3

(5µL/mL)

C4

(10µL/mL) C +

1 68.6 28.6 25.4 23.8 7.4 0

2 70.6 26.6 23.4 21.8 5.4 0

3 70.0 27.6 24.4 22.8 6.4 0

X 3 69.7 27.6 24.4 22.8 6.4 0

C

(0 µL/mL)

C1

(1 µL/mL)

C2

(2µL/mL)

C3

(5µL/mL)

C4

(10µL/mL) C +

X 1 40.6 16.3 12 10.1 4.2 0

X2 45.2 21.4 16.8 12.7 5 0

X3 69.7 27.6 24.4 22.8 6.4 0

% Inhibición del Crecimiento Micelial (ICM)

4 DIAS 6 DIAS 8 DIAS C (0 µL/mL)

C1 (1 µL/mL) 59.8 52.7 60.4 C2 (2µL/mL) 70.4 62.8 65.0 C3 (5µL/mL) 75.1 71.9 67.3

C4 (10µL/mL) 89.7 88.9 90.8 C + 100 100 100



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

DISEÑO EXPERIMENTAL: ANOVA Simple - Crecimiento Micelial 8 Días

por Tratamientos

Variable dependiente: Crecimiento Micelial 4 Días

Factor: Tratamientos: grupo control positivo (C), 4 grupos experimentales 1, 2, 5,

10µL/ml (C1, C2, C3 y C4) y un grupo control negativo con carbendazim (C+).

Número de observaciones: 18

Número de niveles: 6

ANEXO 9. Comparación de medias para el crecimiento micelial de C.

gloeosporioides en condiciones invitro en 8 días para los diferentes

tratamientos con aceite esencial de las hojas de S molle.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 10. Identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT)



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

MATERIAL Y METODOS

Obtención de C. gloeosporioidesPoporcionado por el laboratorio deFitopatología: 15-09-16.

Preparación del medio de cultivo

Agar Sabouraud, (6,5g/100mL)esterilizar 121°C/15lb/15min,adicionar doxiciclina (0,1mg/mL),servir en placas esteriles.

Reactivar el hongo

Del cultivo madre, repicar porpuntura en OGA (pureza yviabilidad del patógeno).

Diseño experimental

4 grupos experimentales,1 grupo control positivo,1 grupo control negativo

grupo control positivo

Sin AE, ni Carbendazin

Grupos experimentales:

AE

0,1 µL/mL0,2 µL/mL0,4 µL/mL0,8 µL/mL

grupo control negativo

(con carbendazim (0,2 µL/mL).

Colección S. molle “molle”Distrito de Otuzco: 14-08-16

Identificación taxonómica en el Herbarium Truxillensis (HUT)

seleccion hojas S. molle

sanas (sin signos o síntomas deenfermedad o ataque de plagas).

Obtención del aceite esencial

Según método de arrastre de vaporde agua.

Destilación por arrastre de vapor

Destilar del material vegetal,(500g) los AE por 15 minutos.

Recoger en frascos ambar yconservar en refrigeración.

MATERIALBIOLOGICO

ANEXO 11. Flujograma: Efecto de la concentración del aceite esencial de las hojas de

Schinus molle sobre el crecimiento micelial de Colletotrichum gloeosporioides in

vitro.

Incubación

4, 6 y 8 días / T°ambiente

Medición del crecimiento/24h

RESULTADOS

Registrar datos de medición de crecimiento micelial del hongo.

Realizar Tablas y figuras e interpretar dichos resultados



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 12. El aceite esencial se obtuvo a partir del material vegetal fresco

de las especies S. molle. se sometió a una extracción por el

método destilación por arrastre de vapor de agua.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 13. Colletotrichum gloeosporioides fue proporcionado por el laboratorio de

fitopatología, del departamento Académico de Ciencias Biológicas,

Facultad de Ciencias Biológicas, de la Universidad Pedro Ruiz Gallo.

ANEXO 14. Preparación del medio de cultivo Agar Sabouraud Difco.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 15. Dispensando el medio de cultivo en las placas y tubos para repicar el

cultivo madre de C. gloeosporioides.

ANEXO 16. Reactivación del hongo C. gloeosporioides del cultivo madre



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 17. Reactivación del hongo C. gloeosporioides del cultivo madre para

sembrar en las diferentes concentraciones del aceite esencial de hojas S.

molle.

ANEXO 18. Se dispensó el medio de Agar Sabouraud Difco esterilizado a 121

°C/15lb/15 min, en placas Petri.



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 19. Aceite esencial de las hojas de S.

molle, agregado al medio.

ANEXO 20. Medición del diámetro de la colonia del hongo C. gloeosporioides (vista

base placa).



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

ANEXO 21. Crecimiento micelial de C. gloeosporioides cuando se enfrenta a las

diferentes concentraciones de aceite esencial de S. molle. Después de 4

días; vista frontal: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2

µL/mL), D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico.

A B

C D

E F



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS



días; vista frontal: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2 µL/mL),

D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico C+.

B A

C D

E F



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS



días; vista base placa: A. placa control C, B. C1 (1 µL/mL), C. C2 (2

µL/mL), D. C3 (5 µL/mL), E. C4 (10 µL/mL), F. placa con anti fúngico

C+.

B A

C D

E F



BIBLIO

TECA D

E CIE

NCIAS B

IOLO

GICAS

Documents

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO