Efekt IL-12 a IL-15 na buněčné funkce

NK buněkpupečníkové krve

čet. Martin BortlíkCentrum Pokročilých Studií

3. ročník18.9. 2012

NK efektorová funkce sklon NK k apoptóze

Bostik et al, J Immunol 2009 US National Library of Medicine Health News , Sat, 02/06/2010

náchylnost novorozenců k infekci

Pupečníková krev (UCB) - alternativa ke kostní dřeni pro transplantace HKB

• snazší přístup• trvalé přijetí štěpu• méně závažná graft versus host reakce Cave! Naivita UCB LY

Úkol: in vitro „manipulace“ UCB a stimulace „dozrávání“ NK bb (IL-2-like cytokines)

Cíl: urychlit uzdravení pacientů přijímajících transplantát KB zvýšením resistence proti virální infekci a potlačením GVHD + (potenciální GVL)

Figure 1 Figure 2 Figure 3

J Immunol. 2009 Mar 15;182(6):3638-49. Nat Rev Immunol. 2005 Nov;5(11):835-43.

“MISSING SELF” HYPOTÉZA

Defekty novorozeneckých NK bb

Dopad na imunitu

exprese CD57 lytické funkce

binding 2 target

ADCC

NK aktivity virové replikace

produkce cytokinů (IFNg, TNFa)

maturace denritických bb

Figure 5

Figure 4

+ h

ep

arin

20

U/m

l

+ IL-12

+ IL-15

+ IL-12; + IL-15

control

Plas

ma

ERY

Ficoll -Hypaque

MNC

Bor

tlik

2012

density gradient centrifugace

Ficoll -Hypaque

Bu

ně

čn

á

su

spe

nse

Bor

tlik

2012

NK BB KULTURA

Bortlik

2012

1*106/ml in RPMI-1640

Figure 6

A)

Bortlík 2012

Bortlík 2012

Figure 10

B)

0

50

100

150

200

250

300

27,9

0

123,3

0

274,7

0

TNF - alpha

pg/ml0

100200300400500600700800900

1000

344,9

0

478,3

0

911,7

0pg/ml

INF - gamma

Výsledky

IL-12 & IL-15 FLOW CYTOMETRY VÝSLEDKY

CD69

1,2%

MFI: 15,4

84,1%

MFI: 33,0

99,6%MFI: 86,2

99,8%MFI: 301,9

70,6%

MFI: 19,7

90,7%

MFI: 46,0

+ IL-12; + IL-15control

Granzym A

Perforin

control IL-12 IL-15 IL-12+IL-15

1.2%

27.1%

46.3%

84.1%98.6% 98.6% 99.1% 99.8%

70.6%79.6% 84.2%

90.7%

CD69+PerforinGranzym A

% exp

rese param

etrů

control IL-12 IL-15 IL-12+IL-15

14.9 15.6 21.3

53.166.2

102.8141.1

321.9

14.7 18.8 24.2

66.7

CD69+PerforinGranzym A

Mean

fluo

rescence in

tensity

Klinická studie

• Císařský řez - konec 39 týdne – bez kontrakcí

• Spontánní porod

• Spontánní porod ukončený císařským řezem

• X preeklampsie, hypertenze, DM, gestační diabetes

3 skupiny vzorků (homogenní kohorta)

Sbíraná data

• Množství zkoumané UCB

• Počet NK bb/ml

• Věk matky

• Kuřačka?

• BMI

• Parita

• Gestační stáří

• Hmotnost plodu

• pH UCB

• Apgar score

(1) IL-12 i IL-15 významně zvyšují sekreci TNF-α i INF-γ v UCB NK bb

(2) IL-12 a IL-15 mají schopnost aktivovat NK bb a zvyšovat produkci perforinu a granzymu A

(3) Kombinace IL-12 & IL-15 vyústila v mohutnější míru odpovědi u UCB NK bb, než za použití cytokinů jednotlivě prokázán synergický efekt

(4) Vyhodnocení statistických dat proběhne po ukončení testovací fáze (5/13)

Naše nálezy mohou mít terapeutické uplatnění při návrhu cytokinové terapie u pacientů přijímajících pupečníkovou

krev jako alternativu ke kostní dřeni.

Výsledky

FUTURE WORK

Test úrovně skutečné schopnosti zabíjet IL-12 a IL-15 stimulovaných NK bb proti K562

Měření úrovně apoptózy u IL-12 a IL-15 stimulovaných NK bb

Nalezení potenciálních korelací, jež by nám mohly naznačit vzájemné vztahy mezi průběhem porodu a následným vlivem na fetální NK bb

Bortlik 2012

Děkuji za pozornost.

Bort

lik 2

012