-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
1/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
2/18
Scurt istoric
Enzimele sunt compusi organici,proteine coloidal solubile,
elaborate decelulele vii, capabile sa mareasca vitezareactiilor
care se desfasoara in sistemelebiologice, fara sa se consume in
cursul lor.Se mai numesc biocatalizatori sau
fermenti .
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
3/18
In 1878, in urmacercetarilor, au fostextrase primeleenzime din
drojdia debere. Denumirea lor afost data de Kuhne siprovine de la
cuvantulen zime care in
limba greaca setraduce prin indrojdie.
Figura 1. Drojdia de bere
Scurt istoric
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
4/18
Peroxidaza
Sunt enzime care catalizeaza urmatoarea reactie tipica:
Toate plantele sunt bogate in peroxidaza; surse excelente sunt
hreanulsi ridichea neagra. In schimb, peroxidazele sunt rar
intalnite in tesuturileanimale; in ficat si rinichi s-a evidentiat
o slaba de activitateperoxidazica .
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
5/18
Peroxidaza
Peroxidazele din tesuturi vegetalelezate sau sectionate oxideaza
polifenolii,pe care-i transforma in chinone de culoareinchisa,
afectand culoarea fructelor silegumelor in timpul prelucrarii lor.
Pentruinactivarea acestor enzime, este necesar
un tratament termic mai intens deoareceresunt termostabile.
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
6/18
Solanum tuberosum (cartoful)
Cartoful ( Solanumtuberosum ) este o plantaerbacee din
familiasolanaceelor, cu flori albesau violete i tulpinisubterane
terminate cutuberculi de formrotund, oval sau
alungit , fiind originari din America de Sud dinregiunea
muntilor Anzi.
Figura 2. Flori de cartof
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
7/18
Determinarea activitatii
peroxidazei
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
8/18
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
9/18
Determinarea activitatii peroxidazei
Peroxidaza catalizeaza reactia dintre apa oxigenata si oamina
aromata (p-fenilendiamina) cu formarea unui compuscolorat violet,
spectrofotometrabil la 420 nm.
Reactia care sta la baza metodei este:
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
10/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Pentru determinarea activitatii peroxidazei s-au utilizat
4soiuri de cartofi, unul strain si celelalte 3 romanesti :
DESIREE,
RUXANDRA, CHRISTIAN si RUSTIC.
Figura 3. Soiurile de cartof folosite
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
11/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
5g de produs vegetal se mojareaza fin cu 25 ml solutie de
NaCl.
Figura 4. Obtinerea materiei pentru mojarare
Figura 5. Mojararea cartofilor
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
12/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Se trece cantitativ continutul mojarat, prin spalari repetate
intr-unvas Erlenmeyer.
Figura 6. Spalarea mojarului Figura 7. Amestecul de cartof
mojarat si NaClse trece intr-un vas Erlenmeyer
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
13/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Se agita pentru omogenizare si se lasa 30 de minute in
repaus.
Figura 8. Solutia omogenizata de cartof si NaCl
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
14/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Apoi, solutia se filtreaza printr-un filtru,intr-un vas
Erlenmeyer uscat.
Figura 9. Amestecurile omogenizate ale
soiurilor de cartofi
Figura 10. Fiecare amestec este
filtrat intr-un pahar Erlenmeyer
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
15/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Amestecurile filtrare contin extract de peroxidaza.
Figura 11.De la stanga la dreapta: extracte de peroxidaza din
soiurile Desire, Christian, Ruxandra si Rustic
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
16/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Se lasa 30 minute la temperatura camerei. Apoi, se
masoaraextinctia solutiei la 420 nm in cuva de 1 cm, fata de apa
distilata.
Figura 12. Masurarea extinctieiextractului de peroxidaza,
folosindspectofotometru
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
17/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Activitatea peroxidazei= E d/mE= extinctia determinatam= masa de
produs luata in analiza, ingramed = 5 factor corespunzator
dilutieirealizate
-
8/11/2019 Determinarea Activitatii Peroxidazei
18/18
Determinarea activitatiiperoxidazei
Soi de cartof Activitatea enzimatica a peroxidazei
Desire 0.366 Christian
0.287
Ruxandra 0.434
Rustic 0.727
Spectofotometrarea produsului final de reactie enzimatica
permite determinareaactivitatii enzimatice, prin citirea extinctiei
solutiei de chinon-diamina.
De asemenea, s-a demonstrat ca soiurile de cartof cu activitatea
enzimatica aperoxidazei redusa, soiul Desire (0.366), respectiv
soiul Christian (0.287), au dezvoltat oculoare usor rozalie pe
coaja.
In urma spectofotometrarii, s-a dezvaluit ca soiul de cartof cu
activitateaenzimatica a peroxidazei cea mai redusa, este soiul
Christian (0.287), fiind cel mai potrivitpentru fabricarea fulgilor
de cartof.
