Detecci³n del Amarillamiento Letal del Cocotero en ... vii nota de prensa los hbridos mapan:

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  • Deteccin del Amarillamiento Letal del Cocotero en hbridos resistentes en la

    plantacin de Salado Lis lis (Atlntida, Honduras), comparando sistemas de

    deteccin del fitoplasma en dos tipos de tejido y con tres primers para PCR.

    Proyecto especial presentado como requisito parcial para optar Al titulo de Ingeniero Agrnomo en el Grado

    Acadmico de Licenciatura.

    Por:

    Andrs Felipe Garca Zapata

    Zamorano, Honduras Abril, 2002

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    El autor concede a Zamorano permiso para reproducir y distribuir copias de este

    trabajo para fines educativos. Para otras personas fsicas o jurdicas se reservan los derechos del autor.

    ____________________________ Andrs Felipe Garca Zapata

    Zamorano, Honduras Abril, 2002

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    Deteccin del Amarillamiento Letal del Cocotero en hbridos resistentes en la plantacin de Salado Lis lis (Atlntida, Honduras), comparando sistemas de deteccin del fitoplasma en dos tipos de tejido y con tres

    primers para PCR.

    Presentado por:

    Andrs Felipe Garca Zapata

    Aprobada por: _________________________ ___________________________ Maria Mercedes Doyle, Ph. D. Alfredo Rueda, Ph. D. Asesor Principal Coordinador de Area Temtica _________________________ ___________________________ Mario Bustamante, MSc. Jorge Ivn Restrepo, M.B.A Asesor Coordinador de la Carrera de Ciencia y Produccin _________________________ ___________________________ Odilo Duarte, Ph. D. Antonio Flores, Ph. D Asesor Decano Acadmico _________________________ ___________________________ Pablo Paz, Ph. D Keith Andrews, Ph. D Coordinador PIA fitotecnia Director General

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    DEDICATORIA

    A mi madre, Celina, la culpable de mis xitos. A mi familia, la esencia de mi carcter y el apoyo incondicional de mis decisiones A mi Alma Mater por cambiar mi vida con sus enseanzas.

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    AGRADECIMIENTOS

    A mi madre, Celina y a mis hermanos Carolina y Juan Esteban por ser el motivo de cada hora, cada pgina y cada noche dedicada a este trabajo. A mi familia por sus oraciones y apoyo. A mis asesores, M. M. Doyle, M. Bustamante y O. Duarte por sus oportunos consejos, por su tiempo y por tomarse la libertad de orientar este trabajo con tanta entrega. Al gran equipo del laboratorio de diagnstico molecular, C. Sabio, E. Aguilar, M. Castillo, E. Bermeo por su amistad y ayuda desinteresada. A C. Rivas por su amor honesto, desinteresado; por amarme y permitirme amarle. A mis compaeros y colegas por brindarme su apoyo en los buenos momentos y sobretodo en los malos. A mis colegas Colombianos, C. Barrera, A. Muoz, J, Espinoza, M. Londoo, S. Oramas, R. Meja por compartir estos cuarto aos algo conmigo ms que el hecho de nacer en el mismo lugar. A todos mis amigos (as), por su apoyo, su lealtad, consejos y momentos gratos durante estos aos. No me atrevo a mencionar ninguno, al hacerlo s que pasare por alto otros. Les agradezco de todo corazn cada uno de ustedes, amigos mos, por estar hay siempre as llueva o haga sol, as caigan las hojas o salgan las flores, as llore de felicidad o de tristeza. A mis profesores por sentar las bases acadmicas sobre las que se construy este trabajo. A las familias Rojas, Restrepo y Agudelo por haberme hecho sentir como en casa. A C. Molina por el apoyo recibido. A los miembros de la red Wafaluma por su apoyo logstico y tcnico.

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    RESUMEN

    Garca, A. 2002. Deteccin del Amarillamiento Letal del Cocotero en hbridos resistentes en la plantacin de Salado Lis lis (Atlntida, Honduras), comparando sistemas de deteccin del fitoplasma en dos tipos de tejido y con tres primers para PCR. Proyecto especial del programa de Ingeniero Agrnomo, El Zamorano, Honduras. 86 p. Honduras es el foco de infeccin de la enfermedad del Amarillamiento Letal del Cocotero (ALC) en Centroamrica. Antes de que llegara la enfermedad se producan cerca de 29 millones de nueces en un rea de 6,000 ha que generaba 30 millones de lempiras anuales. En la actualidad la produccin, que estaba en manos de pequeos productores, ha declinado en 80-90%. El ALC ataca ms de 30 especies de palmceas, es causado por un fitoplasma y transmitido por el homptero, Myndus crudus. Los objetivos fueron continuar con las evaluaciones de la causa de la alta mortalidad de las variedades resistentes a la enfermedad del ALC, en la plantacin del Salado Lis lis (SLL) y en otras regiones afectadas por la enfermedad; y optimizar la deteccin del ADN del fitoplasma utilizando dos tipos de tejido: inflorescencia y tronco y tres primers. Aparte de SLL se tomaron muestras en otras reas afectadas por el ALC en Atlntida (Salado Barra, CADESCA y Triunfo de la Cruz) y Coln (San Antonio y Cusuna). Se hicieron seis muestreos y se tomaron 85 muestras de tronco y 57 de inflorescencia. En el laboratorio se hicieron dos tipos de extraccin de ADN: una gran escala (5 g) y otra mini extraccin (0.5 g); se utiliz la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) para detectar la presencia del ADN del agente causal, usando tres primers: el universal para los fitoplasmas (P1/P7), el especfico para el fitoplasma causante del ALC (LYR1/LYF1) y el grupo especfico (nested PCR). Se midi el porcentaje de muestras positivas, la evolucin de la severidad y las concentraciones de ADN total. Se encontr mayor concentracin de ADN total en las muestras de inflorescencia y cuando se extrajo a gran escala. Se obtuvieron ms muestras positivas usando P1/P7 y LYF1/LYR1 con tejido de inflorescencia que con el tronco. Usando nested PCR se obtuvo mayor porcentaje de deteccin debido a que nested PCR es ms sensible. Las plantas PCR positivas con nested PCR no presentaron sntomas y las PCR negativas estaban muriendo, esto indica que aunque el fitoplasma estaba presente, las plantas no estaban muriendo de ALC. Se recomienda continuar con las evaluaciones de las muestras de este trabajo y de otros hbridos replantados en Honduras. Para obtener mejores resultados se recomiendo usar los tres primers y varios tipos de tejido de la misma planta. Palabras claves: Cocos nucifera, PCR, severidad, variedades resistentes.

    Abelino Pitty, Ph. D.

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    NOTA DE PRENSA

    LOS HBRIDOS MAPAN: UNA BUENA OPCION PARA LUCHAR CONTRA LA TERRIBLE ENFERMEDAD DEL AMARILLAMIENTO

    LETAL DEL COCO(ALC).

    Actualmente Honduras es el foco de infeccin del ALC en Centroamrica. Desde que la enfermedad lleg en 1995 ha matado cerca del 70 % de los cocoteros en la costa norte. Esta enfermedad causada por un fitoplasma, es trasmitida por una chicharrita (Myndus crudus) y mata las palmas en un periodo 3-6 meses despus del primer sntoma. Para manejar la enfermedad se han importado variedades e hbridos resistentes. Uno de los hbridos ms importantes por su resistencia al ALC y su productividad, es el hbrido Mapan proveniente de Costa Rica. Al principio se crea que la alta mortalidad de estos hbridos registrada en una de las fincas productoras era debido al ALC, poniendo en duda no slo su resistencia, sino el xito de los programas de rehabilitacin del cocotero en la costa hondurea. Segn las evaluaciones realizadas la muerte de los hbridos Mapan no es causa del ALC. El estudio realizado en la costa norte revel que gran parte de las plantas tenan el agente causal de la enfermedad sin embargo na era la causa principal de la mortalidad. La investigacin fue realizada en la finca de Salado Lis-lis propiedad de la Estndar Fruit Company y en el laboratorio de diagnostico molecular del Zamorano utilizando muestras de flor y tronco y tres pruebas moleculares (PCR) de laboratorio. Se encontr que el hbrido Mapan contienen cantidades del fitoplasma a concentraciones pequeas que no afectan el normal funcionamiento de las plantas. Para el manejo del ALC se recomienda seguir con el programa de replantacin masiva con variedades resistentes en Honduras, ya que ha sido la mejor solucin hasta el momento. Tambin se recomienda seguir con la investigacin en otros vectores de la enfermedad, la variabilidad gentica del patgeno y con las evaluaciones de las variedades resistentes en Honduras.

    ____________________ Licda. Sobeyda lvarez

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    CONTENIDO

    Portadilla ......................................................................................................................i Autora.........................................................................................................................ii Pgina de firmas.........................................................................................................iii Dedicatoria..................................................................................................................iv Agradecimientos..........................................................................................................v Resumen ....................................................................................................................vi Nota de prensa...........................................................................................................vii Contenido.................................................................................................................viii ndice de cuadros.........................................................................................................x ndice de figuras........................................................................................................xii ndice de anexos.......................................................................................................xiii

    1 INTRODUCCION...................................................................................................... 1

    1.1 HONDURAS: SITUACION ACTUAL. ......................