ANFAR VALIDASI.docx

5/26/2018 ANFAR VALIDASI.docx

1/28

Validasi metode analisis penetapan kadar senyawa x dalam minuman

Ria Novianti Zainal Abidin,S.farm.,Apt

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Kimia analisis merupakan ilmu teoritis dan terapan yang telah

dipraktekkan di hampir semua laboratorium. Metode-metode analisis

secara rutin dikembangkan ,divalidasi,dikaji secara bersama-sama dan

diaplikasikan. Komplikasi metode-metode analisis muncul di sejumlah

kompedia seperti Farmakope Indonesia,USP dan AOAC.

Penggunaan bahan sintetik semakin diminati di berbagai lapisan

masyarakat, termasuk kalangan industri. Tingkat kemanisan serta harga

yang ekonomis menjadi penyebab berbagai kalangan lebih tertarik

menggunakan pemanis sintetik tersebut dibandingkan pemanis alami

yang cenderung lebih mahal.

Siklamat merupakan pemanis sintetis non-kalori yang paling besar

jumlahnya dikonsumsi di Indonesia. Menurut Departemen Kesehatan

Republik Indonesia, penggunaannya hanya diperbolehkan untuk pasien

diabetes ataupun orang yang membutuhkan makanan berkalori rendah.

Metode analisis siklamat secara KCKT dilakukan untuk menjamin

keabsahan hasil analisis maka metode tersebut harus divalidasi terlebih

dahulu. Validasi merupakan konfirmasi bahwa metode dapat memenuhi

persyaratan tujuan penggunaannya melalui pengujian metode dan

mengumpulkan bukti-bukti yang objektif


2/28



B. Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah pada percobaan ini adalah :

1. Bagaimana cara menganalisis penetapan kadar suatu senyawa x

dalam minuman?

2. Bagaimana cara memvalidasi metode analisis kadar suatu senyawa x

dalam minuman?

3. apakah metode analisis kadar senyawa x dalam minuman yang

divalidasi sesuai dengan persyaratan penggunaannya ?

C. Maksud praktikum

Adapun maksud dari praktikum ini adalah untuk memvalidasi

metode analisis kadar senyawa x dalam minuman dengan metode

Kromatografi cair tingkat tinggi (KCKT).

D. Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui cara

memvalidasi metode analisis kadar senyawa x dalam minuman dengan

metode Kromatografi cair tingkat tinggi (KCKT).

E. Manfaat Praktikum

Adapun manfaat dari praktikum ini adalah mahasiswa dapat

mengetahui dan memahami bagaimana cara untuk memvalidasi metode

analisis kadar senyawa x dalam minuman dengan metode Kromatografi

cair tingkat tinggi (KCKT) kemudian membandingkan kesesuaian

persyaratannya dengan beberapa parameter validasi.


3/28



BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Teori Umum

Penggunaan bahan sintetik semakin diminati di berbagai lapisan

masyarakat, termasuk kalangan industri. Tingkat kemanisan serta harga

yang ekonomis menjadi penyebab berbagai kalangan lebih tertarik

menggunakan pemanis sintetik tersebut dibandingkan pemanis alami

yang cenderung lebih mahal. Siklamat merupakan pemanis sintetis non-

kalori yang paling besar jumlahnya dikonsumsi di Indonesia. Menurut

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, penggunaannya hanya

diperbolehkan untuk pasien diabetes ataupun orang yang membutuhkan

makanan berkalori rendah. Tetapi pada kenyataannya penggunaan

siklamat semakin meluas pada berbagai kalangan dan beragam

produk(Farida, 1989).

Penggunaan siklamat sempat dilarang dibeberapa Negara di dunia

seperti Amerika Serikat, Kanada, Inggris pada tahun 1970an. Alasan

pelarangan didasarkan atas dugaan adanya sifat karsinogenik yang

disebabkan oleh hasil uraiannya berupa sikloheksamin. Namun demikian

penelitian yang mendasari timbulnya larangan penggunaan siklamat

tersebut mendapat banyak kritikan. Jumlah (konsentrasi) siklamat yang

digunakan untuk uji toksisitas, karsinogen maupun mutagen dilakukan

dengan menggunakan dosis yang sangat tinggi dan tidak mungkin terjadi


4/28



pada praktek sehari-hari. Selain itu data-data pengujian siklamat pada

Beberapa hewan percobaan tidak menunjukkan efek yang merugikan

dalam dosis kecil setiap harinya (Mitchel, 2006). Oleh karena itu WHO

masih memasukkan siklamat sebagai bahan tambahan pangan (BTP)

yang diperbolehkan selama penggunaannya sesuai dengan ketentuan

acceptable daily intake (ADI). (Albiner S, 2002)

Di Indonesia penggunaan siklamat untuk dikonsumsi telah diatur

oleh Badan POM dalam Peraturan Teknis Penggunaan bahan tambahan

pangan pemanis buatan dalam Produk Pangan (BPOM, 2004).

Aturan ini membahas batas penggunaan maksimum siklamat

untuk tiap katagori pangan dengan mendasarkan perhitungannya pada

Acceptable Daily Intake (ADI). Sebagai lembaga yang berwenang dalam

hal pengawasan obat dan makanan yang beredar dipasaran Indonesia,

serta memperhatikan aspek keamanan terhadap penggunaan bahan

pemanis sintetis, Badan POM menegaskan pada setiap industri yang

akan menggunakan siklamat sebagai pemanis harus mencantumkan

laporan hasil uji siklamat yang dilakukan oleh lembaga (Laboratorium

pengujian) terakreditasi. Sampai saat ini analisis siklamat masih

dilakukan menggunakan metode konvensional secara gravimetri. Akan

tetapi teknik tersebut memerlukan waktu yang cukup lama dengan resiko

analisis yang cukup tinggi, sehingga dilakukan teknik analisis yang lebih

praktis dan mudah serta dalam waktu relative singkat dengan

menggunakan teknik kromatografi cair. Metode analisis siklamat secara


5/28



KCKT telah dilakukan oleh Inggris dan dibakukan dalam British Standard

versi EN 1379 : 1996. Di Indonesia sendiri belum banyak industri maupun

laboratorium uji yang menggunakan metode ini dalam menganalisis

siklamat secara kualitatif maupun kuantitatif. Oleh sebab itu untuk

menjamin keabsahan hasil analisis maka metode tersebut harus

divalidasi terlebih dahulu. Validasi merupakan konfirmasi bahwa metode

dapat memenuhi persyaratan tujuan penggunaannya melalui pengujian

metode dan mengumpulkan bukti-bukti yang objektif (Harmita, 2004).

VALIDASI METODE ANALISIS

Validasi metoda analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap

parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk

membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk

penggunaannya(Harmita, 2004).

PARAMETER PENAMPILAN ANALISIS

Beberapa parameter analisis yang harus dipertimbangkan dalam

validasi metode analisis diuraikan dan didefinisikan sebagaimana cara

penentuannya(Harmita, 2004).

1. Kecermatan (accuracy)

Kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan

hasil sebenarnya. Kecermatan dinyatakan sebagai persen perolehan

kembali (recovery) analit yang ditambahkan. Kecermatan hasil analis

sangat tergantung kepada sebaran galat sistematik di dalam

keseluruhan tahapan analisis. Oleh karena itu untuk mencapai


6/28



kecermatan yang tinggi hanya dapat dilakukan dengan cara

mengurangi galat sistematik tersebut seperti menggunakan peralatan

yang telah dikalibrasi, menggunakan pereaksi dan pelarut yang baik,

pengontrolan suhu, dan pelaksanaannya yang cermat, taat asas sesuai

prosedur.

Kriteria kecermatan sangat tergantung kepada konsentrasi analit

dalam matriks sampel dan pada keseksamaan metode (RSD).

Vanderwielen, dkk menyatakan bahwa selisih kadar pada berbagai

penentuan (Xd) harus 5% atau kurang pada setiap konsentrasi analit

pada mana prosedur dilakukan. Harga rata-rata selisih secara statistik

harus 1,5% atau kurang.

Rumus :

Xi = hasil analisisX0 = hasil yang sebenarnyaI = nilai t pada tabel t student pada atas 95%S = simpangan baku relatif dari semua pengujianN = jumlah sampel yang dianalisis

2. Keseksamaan (precision)

Keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat

kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil


7/28



individual dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada

sampel-sampel yang diambil dari campuran yang homogen.

Kriteria seksama diberikan jika metode memberikan simpangan

baku relatif atau koefisien variasi 2% atau kurang. Akan tetapi kriteria

ini sangat fleksibel tergantung pada konsentrasi analit yang diperiksa,

jumlah sampel, dan kondisi laboratorium. Pada kadar 1% atau lebih,

standar deviasi relatif antara laboratorium adalah sekitar 2,5% ada

pada satu per seribu adalah 5%. Pada kadar satu per sejuta (ppm)

RSDnya adalah 16%, dan kadar satu per bilion (ppb) adalah 32%.

Pada metode yang sangat kritis, secara umum diterima bahwa RSD

harus lebih dari 2%.

Rumus :

a. Simpangan baku(SD)

b. Simpangan baku relative atau koefisien variasi (KV)

3. Selektivitas (Spesifisitas)

Selektivitas atau spesifisitas suatu metode adalah

kemampuannya yang hanya mengukur zat tertentu saja secara cermat

dan seksama dengan adanya komponen lain yang mungkin ada dalam

matriks sampel. Selektivitas seringkali dapat dinyatakan sebagai


8/28



derajat penyimpangan (degree of bias) metode yang dilakukan

terhadap sampel yang mengandung bahan yang ditambahkan berupa

cemaran, hasil urai, senyawa sejenis, senyawa asing lainnya, dan

dibandingkan terhadap hasil analisis sampel yang tidak mengandung

bahan lain yang ditambahkan.

Penyimpangan hasil jika ada merupakan selisih dari hasil uji

keduanya. Jika cemaran dan hasil urai tidak dapat diidentifikasi atau

tidak dapat diperoleh, maka selektivitas dapat ditunjukkan dengan cara

menganalisis sampel yang mengandung cemaran atau hasil uji urai

dengan metode yang hendak diuji lalu dibandingkan dengan metode

lain untuk pengujian kemurnian seperti kromatografi, analisis kelarutan

fase, dan Differential Scanning Calorimetry. Derajat kesesuaian kedua

hasil analisis tersebut merupakan ukuran selektivitas. Pada metode

analisis yang melibatkan kromatografi, selektivitas ditentukan melalui

perhitungan daya resolusinya (Rs).

4. Linearitas dan Rentang

Linearitas adalah kemampuan metode analisis yang

memberikan respon yang secara langsung atau dengan bantuan

transformasi matematik yang baik, proporsional terhadap konsentrasi

analit dalam sampel.

Rentang metode adalah pernyataan batas terendah dan

tertinggi analit yang sudah ditunjukkan dapat ditetapkan dengan

kecermatan, keseksamaan, dan linearitas yang dapat diterima.


9/28



Dalam praktek, digunakan satu seri larutan yang berbeda

konsentrasinya antara 50150% kadar analit dalam sampel. Di dalam

pustaka, sering ditemukan rentang konsentrasi yang digunakan antara

0200%. Jumlah sampel yang dianalisis sekurang-kurangnya delapan

buah sampel blanko. Sebagai parameter adanya hubungan linier

digunakan koefisien korelasi r pada analisis regresi linier Y = a + bX.

Hubungan linier yang ideal dicapai jika nilai b = 0 dan r = +1 atau 1

bergantung pada arah garis. Sedangkan nilai a menunjukkan kepekaan

analisis terutama instrumen yang digunakan. Parameter lain yang

harus dihitung adalah simpangan baku residual (Sy).

Rumus :

5. Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang

dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan

dibandingkan dengan blangko. Batas deteksi merupakan parameter uji

batas. Batas kuantitasi merupakan parameter pada analisis renik dan


10/28



diartikan sebagai kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih

dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama.

Rumus :

Dimana : Q = LOD(batas deteksi) atau LOQ(batas kuantitas)

k = 3 untuk batas deteksi atau 10 untuk batas kuantitas

Sb = simpangan baku respon analitik dari blangko.

SI = arah garis linier(kepekaan arah)kurva antara respon

terhadap konsentrasi = slope(b pada persamaan garis

y = a + bx).

6. Ketangguhan metode (ruggedness)

Ketangguhan metode adalah derajat ketertiruan hasil uji yang

diperoleh dari analisis sampel yang sama dalam berbagai kondisi uji

normal, seperti laboratorium, analisis, instrumen, bahan pereaksi,

suhu, hari yang berbeda, dll. Ketangguhan biasanya dinyatakan


11/28



sebagai tidak adanya pengaruh perbedaan operasi atau lingkungan

kerja pada hasil uji. Ketangguhan metode merupakan ukuran

ketertiruan pada kondisi operasi normal antara lab dan antar analis.

Derajat ketertiruan hasil uji kemudian ditentukan sebagai fungsi

dari variabel penentuan. Ketertiruan dapat dibandingkan terhadap

keseksamaan penentuan di bawah kondisi normal untuk mendapatkan

ukuran ketangguhan metode. Perhitungannya dilakukan secara

statistic menggunakan ANOVA pada kajian kolaboratif yang disusun

oleh Youden dan Stainer.

7. Kekuatan (Robustness)

Untuk memvalidasi kekuatan suatu metode perlu dibuat

perubahan metodologi yang kecil dan terus menerus dan

mengevaluasi respon analitik dan efek presisi dan akurasi. Sebagai

contoh, perubahan yang dibutuhkan untuk menunjukkan kekuatan

prosedur HPLC dapat mencakup (tapi tidak dibatasi) perubahan

komposisi organik fase gerak (1%), pH fase gerak ( 0,2 unit), dan

perubahan temperatur kolom ( 2 - 3 C). Perubahan lainnya dapat

dilakukan bila sesuai dengan laboratorium.


12/28



B. Prosedur Kerja(Brit ish Standard versi EN 1379 tahun 1996)

a. Kondisi HPLC

Kolom : 12 cm x 4.6 mm Nucleosil

Detektor : UV set pada panjang gelombang 200 nm

Vol. injeksi : 20 uL

Mobile phase : methanol-kalium dihidrogen fosfat 0.0125 mg/L

(KH2PO4) (3:7).

b. Preparasi standar

Larutan baku diperoleh dengan menimbang sebanyak 100 mg

standar Na siklamat, dimasukkan ke dalam labu 100 mL dan dilarutkan

dengan fase gerak sampai tanda tera, dihomogenkan (larutan

mengandung 1000 ppm). Persiapan standar yang akan digunakan

dengan membuat deret standar yang memiliki konsentrasi 10, 25, 50,

100, 200, 300, 400, 500, 600, 700,800, 900 dan 1000 ppm.

Konsentrasi tersebut diperoleh dengan memipet 0.1, 0.25, 0.5, 1, 2, 3,

4, 5, 6, 7, 8, 9, dan 10 mL larutan baku standar siklamat 1000 ppm

masing-masing dilarutkan dengan menggunakan fasa gerak hingga

batas tera dan dihomogenkan.

c. Preparasi Sample

Timbang kurang lebih 0.5 gram sample kemudian tambahkan

larutan fase gerak hingga tanda batas, dihomogenkan dan disaring.


13/28



Filtrat yang dihasilkan kemudian dimasukkan ke dalam vial. Larutan

siap untuk diinjeksikan.

d. Validasi Metode

1. Uji selektivitas dilakukan dengan membandingkan kromatogram

standar yang dihasilkan dengan blanko.

2. Uji linieritas diperoleh dari data pengukuran larutan deret standar

yang telah dibuat sehingga diperoleh kurva kalibrasi dan

persamaan regresinya.

3. Uji presisi dilakukan dengan cara pengulangan (repeatability) 7 kali

larutan contoh yang di buat sesuai prosedur yang diinjekkan pada

hari yang sama sehingga diperoleh data yang akan dinyatakan

nilai presisinya sebagai simpangan baku relative (% SBR).

4. Uji akurasi (uji perolehan kembali) dilakukan dengan membuat

larutan sample sesuai prosedur diulangi sebanyak 7 kali dan

masing-masing diinjekkan ke dalam alat KCKT. Nilai akurasi

dinyatakan sebagai % recovery.

5. Pengukuran limit deteksi dilakukan dengan mengolah data yang

diperoleh dari hasil pengukuran linieritas standar sehingga

diperoleh nilai Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation

(LOQ). Nilai tersebut dijadikan dasar dalam menentukan limit

deteksi metode (LDM).


14/28



6. Kemudian dilakukan uji ketegaran yang dilakukan dengan

memvariasikan komposisi fasa gerak yang digunakan yaitu 70:30

sebagai control, 60:40 dan 80 :20.


15/28



BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat yang Dipakai

Adapun peralatan yang digunakan adalah KCKT UV, kolom C18,

neraca analitik, peralatan gelas (labu ukur, gelas ukur, corong, pipet

mohr, pipet volumetrik, pipet tetes, dan tabung reaksi), penyaring

Millipore, kertas saring, vakum penyaring, bulp dan sudip.

B. .Bahan yang Digunakan

Adapun Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah standar

natrium siklamat, methanol HPLC grade, kalium dihidrogen fosfat

(KH2PO4), akuades, akuabides, sample minuman ringan.

C. Cara Kerja

a. Kondisi HPLC

Kolom : 12 cm x 4.6 mm Nucleosil

Detektor : UV set pada panjang gelombang 200 nm

Vol. injeksi : 20 uL

Mobile phase : methanol-kalium dihidrogen fosfat 0.0125 mg/L

(KH2PO4) (3:7).

b. Preparasi standar

Ditimbang sebanyak 100 mg standar Na siklamat, dimasukkan

ke dalam labu 100 mL dan dilarutkan dengan fase gerak sampai tanda


16/28



tera, dihomogenkan (larutan mengandung 1000 ppm). Persiapan

standar yang akan digunakan dengan membuat deret standar yang

memiliki konsentrasi 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700,800,

900 dan 1000 ppm. Konsentrasi tersebut diperoleh dengan memipet

0.1, 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, dan 10 mL larutan baku standar

siklamat 1000 ppm masing-masing dilarutkan dengan menggunakan

fasa gerak hingga batas tera dan dihomogenkan.

c. Preparasi Sample

Ditimbang kurang lebih 0.5 gram sample kemudian tambahkan

larutan fase gerak hingga tanda batas, dihomogenkan dan disaring.

Filtrat yang dihasilkan kemudian dimasukkan ke dalam vial. Larutan

siap untuk diinjeksikan.

d. Validasi Metode

1. Uji selektivitas

Dilakukan dengan membandingkan kromatogram standar yang

dihasilkan dengan blanko.

2. Uji linieritas

Diperoleh dari data pengukuran larutan deret standar yang telah

dibuat sehingga diperoleh kurva kalibrasi dan persamaan

regresinya.

3. Uji presisi

Dilakukan dengan cara pengulangan (repeatability) 7 kali larutan

contoh yang di buat sesuai prosedur yang diinjekkan pada hari


17/28



yang sama sehingga diperoleh data yang akan dinyatakan nilai

presisinya sebagai simpangan baku relative (% SBR).

4. Uji akurasi (uji perolehan kembali)

Dilakukan dengan membuat larutan sample sesuai prosedur

diulangi sebanyak 7 kali dan masing-masing diinjekkan ke dalam

alat KCKT. Nilai akurasi dinyatakan sebagai % recovery.

5. Pengukuran limit deteksi

Dilakukan dengan mengolah data yang diperoleh dari hasil

pengukuran linieritas standar sehingga diperoleh nilai Limit of

Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ). Nilai tersebut

dijadikan dasar dalam menentukan limit deteksi metode (LDM).

6. Uji ketegaran

Dilakukan dengan memvariasikan komposisi fasa gerak yang

digunakan yaitu 70:30 sebagai control, 60:40 dan 80 :20.


18/28



BAB IV

KAJIAN HASIL PRAKTIKUM

A. Hasil Praktikum

1. Selektivitas

Gambar 1 Kromatogram Uji Selektivitas Standar Siklamat

2. Linieritas

Gambar 2 Kurva Deret Standar Siklamat


19/28



3. Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Dari perhitungan diperoleh nilai limit of detection(LOD) sebesar

24,8 mg/L dan limit of quantitation(LOQ) sebesar 82,5 mg/L.

4. Presisi


20/28



5. Akurasi

6. Limit deteksi metode


21/28



Perhitungan :

1. Uji Limit Deteksi Metode (LDM)

(x-x)2 = 12,25 + 0,2961 + 14,8225 + 0,0064 + 0,0324 + 2,2201 +

1,2544 + 7,3984

= 38,2799

SD = 38,27998-1

= 5,46856

= 2,34

2. Uji Presisi

(x-x)2 = 4762,3801+ 44,89 + 0,4225 + 85,3776 + 5536,8481 +

486,2025 + 794,1124

= 11710,2332

SD = 11710,2332

7-1

= 1951,7060

= 32,70


22/28



3. Limit Deteksi (LOD)

4. Limit Kuantitasi (LOQ)


23/28



B. Pembahasan

Pengujian zat aditif di dalam suatu produk, terutama pangan

bersifat amat krusial, guna menjamin keamanan penggunaan produk.

Anaisiss ini harus menghasilkan data yang benar mengenai kandungan

analit dalam produk. Selain itu metode yang digunakan dalam pengujian

harus dapat diandalkan sehingga dapat menjamin kebenaran data yang

diperoleh.

Metode uji yang diadopsi berprinsipkan pada serapan molekuler

siklamat terhadap cahaya UV pada daerah panjang gelombang 200 nm,

pemisahan analitik melalui kolom C18 menggunakan fasa gerak (mobile

phase) KH2PO4 0.0125 mg/L dan methanol HPLC grade dengan

perbandingan (70:30) dengan laju alir 1 mL/menit. Dan alat yang

digunakan adalah KCKT dengan detektor UV.

Validasi metode merupakan kehandalan suatu metode yang digunakan

dapat ditentukan dari Beberapa factor antara lain, akurasi, presisi dan

limit deteksi. Dalam penelitian ini dilakukan parameter-parameter yang

meliputi, selektivitas, linieritas, limit deteksi metode presisi, akurasi dan uji

ketegaran.

1.Selektivitas


24/28



Selektivitas dilakukan dengan membandingkan kromatogram

standar dengan blanko. Hasil praktikum menunjukkan dari hasil

penginjekkan standar muncul peak area pada retention time (RT)/waktu

retensi 4 menit. Sedangkan pada larutan blanko tidak terdapat peak yang

dihasilkan. Sehingga dapat disimpulkan bahwa peak yang diperoleh pada

waktu retensi 4 menit tersebut merupakan senyawa siklamat.

2. Linieritas Standar

Nilai koefisien korelasi (R) merupakan indikator kualitas dari

parameter linieritas yang menggambarkan proposionalitas respon analitik

(luas area) terhadap konsentrasi yang diukur.

Berdasarkan data evaluasi kalibrasi deret standar siklamat pada

level konsentrasi antara 10.8 mg/L sampai 1018 mg/L diperoleh

persamaan regresi linier y = 150.59x 913.2 dengan nilai koefisien

korelasi sebesar 0.9997. Nilai koefisien yang diperoleh menunjukkan hasil

yang baik karena mendekati nilai 1. Hal ini menginformasikan bahwa

terdapat hubungan yang proporsional antara respon analitik dengan

konsentrasi yang diukur.

3. Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Pembahasan limit deteksi dan limit kuantitasi tidak dapat

dipisahkan karena diantara keduanya terdapat hubungan yang sangat

kuat. Secara praktis cara evaluasi keduanya dapat dikatakan tidak ada

perbedaan yang signifikan. Perbedaan diantara keduanya hanya pada

sifat kuantitatif data yang diperoleh. Jika pada limit deteksi didefinisikan


25/28



sebagai konsentrasi terkecil yang dapat dideteksi namun tidak perlu

secara kuantitatif, sedangkan pada definisi limit kuantitasi dikatakan

konsentrasi terkecil analit yang dapat diukur secara kuantitatif.

Secara statistic perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi

diperoleh melalui garis regresi linier dari kurva kalibrasi standar siklamat.

Dari hasil perhitungan diperoleh nilai limit of detection (LOD) sebesar 24.8

mg/L dan limit of quantitation sebesar 82.5 mg/L.

4. Presisi (Keterulangan)

Uji presisi dilakukan untuk melihat kedekatan antara hasil uji yang

dilakukan secara berulang pada sample. Pengujian dilakukan dengan

metode ripitabilitas (pengulangan) sehingga diperoleh ketepatan system

dalam memberikan respon terhadap analit yang dideteksi. Sebagai syarat

keberterimaan digunakan persamaan koefisien variasi Horwitz sesuai

AOAC (Association of Official Analytical Chemist, 2005) yang menjadi

acuan dalam praktikum ini. Presisi suatu metode dikatakan memenuhi

syarat keberterimaan jika nilai %RSD lebih kecil dari 2/3CVHorwitz.

5. Akurasi

Akurasi merujuk pada pengertian ketepatan (kecermatan). Hasil

evaluasi menunjukkan bahwa metode terpilih memiliki kisaran %

perolehan kembali (% recovery) yang menyatakan tingkat akurasi yang

memenuhi syarat keberterimaan. Nilai recovery yang mendekati 100%

menunjukkan bahwa metode tersebut memiliki ketepatan yang baik


26/28



dalam menunjukkan tingkat kesesuaian dari rata-rata suatu pengukuran

yang sebanding dengan nilai sebenarnya (true value).

Pada Tabel 2 diperoleh % recovery berada pada rentang 86 109%

dengan rata-rata % recovery 101%. Nilai recovery hasil pengujian

menunjukkan kecenderungan terjadinya kesalahan acak, dimana nilai %

recovery yang dihasilkan berada dibawah dan diatas 100%. Sumber

kesalahan acak yang terjadi pada praktek disebabkan adanya senyawa

lain yang ada pada matriks yang masih terbawa meskipun telah dilakukan

penyaringan. Senyawa ini menyebabkan analisis terganggu, sehingga

konsentrasi yang terukur oleh alat sebagian lebih tinggi dan sebagian

lebih rendah dari 100%. Kesalahan acak tersebut dapat diminimalisasi

dengan melakukan sonikasi terhadap larutan uji pada rentang waktu

tertentu.

6. Limit deteksi metode

Limit deteksi metode (LDM) adalah konsentrasi terendah yang

terbaca dari pengukuran suatu sample dengan mengasplikasikan secara

lengkap metode pengukuran sample tersebut, sehingga nilai yang

diperoleh memenuhi criteria cermat dan seksama. Nilai LDM diperoleh

dari hasil percobaan dengan melakukan secara langsung konsentrasi

analit terendah yang diperkirakan sebagai limit kuantitasi.

Setelah dilakukan pengujian diperoleh hasil konsentrasi terendah

yang terdeteksi oleh alat sebesar 154 ppm. Nilai konsentrasi praktis

menyatakan nilai terendah yang dapat terkuantitasi serta memenuhi


27/28



criteria cermat dan seksama oleh metode yang digunakan, dengan nilai

presisi (cermat) sebesar 1.52% dan nilai recovery sebagai indicator

kualitas akurasi (seksama) berkisar antara 94.16% - 98.68%.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Metode HPLC dapat digunakan untuk penetapan siklamat sebagai

metode standar.

2. Limit deteksi pada metode ini adalah 24.8 mg/L, sedangkan limit

kuantitasi adalah 154 mg/L.

3. Untuk mengantisipasi maksimum limit siklamat dalam produk pangan,

dan mempermudah dalam analisis maka metode ini perlu terdaftar

dalam Standar Nasional Indonesia.

4. Metode standar yang digunakan dalam penelitian ini perlu

disosialisasikan kepada laboratorium lain.

B. .Saran

Sebaiknya sampel yang akan dipraktikumkan telah tersedian di

Laboratorium dan alat-alat dilengkapi seperti Kromatografi cair tingkat

tinggi agar di kalibrasi terlebih dahulu.


28/28



DAFTAR PUSTAKA

Badan POM. 2004. Peraturan Teknis Penggunaan Bahan TambahanPangan Pemanis Buatan dalam Produk Pangan. Direktorat

Standarisasi Produk Pangan, Deputi Bidang PengawasanKeaman Pangan dan Bahan Berbahaya. Hal : 34-36.

British Standard International. Foodstuffs-Determination of cyclamateand saccaharin in liquid table top sweetener preparations-Methodby high performance liquid chromatography EN. 1379 : 1996.Europian comitte for standardization

Farida, I. 1989. Status Siklamat Dewasa Ini. Warta AKAB, Vol I (2).Akademi Kimia Analisis. Bogor. p : 49-50

Harmita. 2004. Majalah Ilmu Kefarmasian UI.FMIPA UI. Jakarta

Mitchell, 2006. Sweeteners and Sugar Alternative in Food Technology.Victoria, Autralia. Blackwell Publishing. p : 32; 118; 122-123

Prosiding. 1997. Seminar Nasional Kimia II Peran Kimia Organik dalamEra Industri Kimia Indonesia. FMIPA UGM. YogyakartaProsiding PPI Standardisasi 2009 - Jakarta, 19 November 2009

Siagian, Albiner. 2002. Bahan Tambahan Makanan. USU Digital Library

Medan. Hal 79.

Documents

ANFAR VALIDASI.docx