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Análise da Capacidade de Multiplicação de Análise da Capacidade de Multiplicação de
Genotipos do Genotipos do M. tuberculosisM. tuberculosis em Macrófagos em Macrófagos
HumanosHumanos
Moisés Palaci
Opsonização
Th1Th1
Th1CD8Th1CD8
IFN-TNF-
Vitamina D3
MtbMtb
ETZ
Lisossomos
pH
NONO2
-
NO3-
H2O2-
OH1O2
-
NH4
GLSTLAM
Arginina
Citrulina
NO
OO22--
SODSOD
OO22--
NADPHNADPH
HemolisinaIons regulating factors
CR1/CR3/CR4RPS-AScavenger receptorCD 14MMRTLR2/TLR4
NOS2NOS2
katGrpoV
ST
noxR1ahpCnoxR3
LAM
Citoplasma
Genes IFN-VirulênciaVirulência
Célula de Langhans
Coroa de linfócitos / histiócitos
Céls. epitelióides
Necrose caseosa
Lesões nodularescaseificadas
Lesões cavitárias
TuberculoseAspectos Patológicos
D =D =n n x x V V x x H H
I in x I adI in x I ad Formula de Rich
Cepas de M. tuberculosis com Elevada Capacidade de Disseminação (Anos 90)
Estados Unidos da América
C - Strain Friedman et al, 1997
W - Strain (MDR)Frieden et al, 1996
NYNY
CDC1551Valway et al, 1998
KY/TNKY/TN
210 - StrainBarnes et al, 1997
LALA
Diversidade Genética de Mycobacterium tuberculosis por RFLP
Beijing, Beijing, EAI EAI
LAM; LAM; HaarlemHaarlem
LAM; LAM; BeijingBeijing
BeijingBeijingHaarlemHaarlem
LAMLAM
A Resistência à Drogas Interfere na Virulência do Mtb?
Estudos Epidemiológicos
. Narain et al, 1967 (India)
. Devadatta et al, 1970 (India)
. Siminel et al, 1979 (Romênia)
Estudos Experimentais
. Mitchison et al, 1953
. Magarão, 1956
. Daddi, 1994
SIM
Estudos Epidemiológicos
. Snider et al, 1985
. Teixeira et al, 2001 (Brasil)
Estudos Experimentais
Ordway et al, 1995
Não
Avaliação da Virulência
Capacidade de: infectar / causar doençaCapacidade de: infectar / causar doença / disseminar
Modelos AnimaisModelos Animais
Modelos EpidemiológicosModelos Epidemiológicos
Friedman et al, J Infect Dis, 1997
Valway et al. N Engl J Med, 1998
López et al, Clin Exp Immunol, 2003
Avaliação da Virulência
Modelos Cultura de CélulasModelos Cultura de Células
Macrófago Murino –
Macrófagos Humanos - - Zhang Zhang et alet al., 1998., 1998
4 8 16 20 244 8 16 20 24 Tempo (Dias)Tempo (Dias)
CF
U (
log)
`2
3
4
5
6
7
`2
3
4
5
6
7
H37RvH37Rv
H37RaH37Ra
Pulmão / Baço
Modelo Animal
CF
U (
log)
M Infectados
Lise. Acréscimo de RPMI-10% SHA
. Incubação 14 dias
Sonicação
. Diluição Seriada
. Inoculação (Middlebrook 7H10)
. Incubação 37 C / 21 dias
. Quantificação CFU
IMI =CFU Dia 14
CFU Dia 0
Placa - Dia 0 Placa - Dia 14
PBMC
M
7 dias
Lavagens M (24 hs) Lavagens M (24 hs)
MMETODOLOGIAETODOLOGIA
Zhang Zhang et alet al., 1998., 1998
ESTRATÉGIA EXPERIMENTAL
Estudo sobre infecção e adoecimento entre contactantes domiciliares Estudo sobre infecção e adoecimento entre contactantes domiciliares de casos de tuberculose pulmonar (Teixeirade casos de tuberculose pulmonar (Teixeira et al, et al, 1998)1998)
43 cepas Mtb43 cepas Mtb
RFLPRFLP
Informações:ClínicasEpidemiológicasLaboratoriais
Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram
doença em seus contatos(n = 5)
Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram
doença em seus contatos(n = 5)
Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram
doença em seus contatos(n = 6)
Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram
doença em seus contatos(n = 6)
XX XXXX
Prodecimentos:IdentificaçãoDet. CIMAliquotas -70 C
Grupos de cepas selecionadas
1 2 3 4 5
CI Contato
H37Ra2181022165182391914H37Rv24201172415171313
Subtipo Genético No Ensaios
666106410106612146610106101210410614
Sub Grupos ( IMI )
1 2 3 4
388186240267282322410489524
5816156448209209551070112312601361
2416383039965174
H37Ra2181022165182391914H37Rv24201172415171313
Subtipo Genético No Ensaios
666106410106612146610106101210410614
Sub Grupos ( IMI )
1 2 3 4
388186240267282322410489524
5816156448209209551070112312601361
2416383039965174
Cepas de M. tuberculosis detectadas no estudo
com perfis genéticos semelhantes
Os números indicam os subtipos 3, 4, 5 e 13 e SP indica o subtipo genético predominante no estado de São Paulo
CR 3 4 5 SP 13CR 3 4 5 SP 13
HAARLEMHAARLEM
RFLPRFLP
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
ContatoContatoCICI
Comparação entreentre os índices de multiplicação
intracelular dos 4 gruposgrupos de cepas de M.
tuberculosis
Grupos
DCBA
Índ
ice
de
Mu
ltip
lica
ção
In
tra
celu
lar
(Ma
cró
fag
os) 6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
-1000
-2000
Analise de variância - ANOVA
Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram
doença em seus contatos(n = 5)
Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram
doença em seus contatos(n = 5)
Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram
doença em seus contatos(n = 6)
Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram
doença em seus contatos(n = 6)
XXHarlem = 3LAM = 1
LAM = 2
Harlem =1LAM = 3
LAM = 2
Spoligotyping das Cepas de acordo com os
grupos
Grupos
C e DA e B
Índ
ice
de
Mu
ltip
lica
ção
In
tra
celu
lar
(Ma
cró
fag
os) 80
70
60
50
40
30
20
10
Comparação entreentre os subtipos genéticos do M. tuberculosis
sensíveis e resistentes as drogas quanto a capacidade de
multiplicação intracelular
Analise de variância - ANOVA
Correlação Entre o Índice de Multiplicação Intracelular e a Correlação Entre o Índice de Multiplicação Intracelular e a
Resistência a Drogas Anti-Tuberculose dos Subtipos Genéticos Resistência a Drogas Anti-Tuberculose dos Subtipos Genéticos
do do M. tuberculosisM. tuberculosis
Subtipo Genético
543127910118
Coeficientep- valor
322920399538308201123524239107086
IMI
44
0,2588
1684
1664
-0,1750,630
32322
1288
12812812864
128
-0,3110,381
128128
8<2<2<2<2<2<2<2
0,1050,773
CIM
INH RMP SM
codon 315codon 315codon 315codon 315codon 315codon 315codon 315codon 315Codon 315WT
KatG
NDI-UFESNDI-UFESSolange A. VinhasSolange A. VinhasTatiana R. Có Tatiana R. Có Fabíola K.C. RibeiroFabíola K.C. RibeiroRenata L. PeresRenata L. PeresLuciléia Teixeira Luciléia Teixeira Reynaldo DietzeReynaldo Dietze
Lucilaine Ferrazoli -Lucilaine Ferrazoli - IALIALTânia M.A.D. Zucchi - ICB/USPTânia M.A.D. Zucchi - ICB/USPElis R. Dalla Costa - FEPPSElis R. Dalla Costa - FEPPS