รายงานผลการวิจัย - Maejo Universitylibrae.mju.ac.th/goverment/20111119104834_librae/File20130418125913... · Gynura auriculata Cass. ทีใช้ในการรักษาโรคเบาหวาน

รายงานผลการวจย

เร�อง

การศกษาการแยกสารและโครงสรางของสารจากพชสมนไพร

Gynura auriculata Cass. ท�ใชในการรกษาโรคเบาหวาน

Study on Isolation and Structural Elucidation of Active Compounds from

Gynura auriculata Cass. for Curing Diabetes

โดย

ธวลรตน รตนเดชานาคนทร

มหาวทยาลยแมโจ

2555

รหสโครงการวจย มจ. 1-53-014/54-003

รายงานผลการวจย

เร�อง การศกษาการแยกสารและโครงสรางของสารจากพชสมนไพร


Study on Isolation and Structural Elucidation of Active Compounds from Gynura

auriculata Cass. for Curing Diabetes

ไดรบการจดสรรงบประมาณวจย ประจาป 2554

จานวน 150,000 บาท

หวหนาโครงการ ผชวยศาสตราจารย ดร. ธวลรตน รตนเดชานาคนทร

งานวจยเสรจส�นสมบรณ

26 ธนวาคม 2555

กตตกรรมประกาศ

โครงการวจยเร�อง การศกษาการแยกสารและโครงสรางของสารจากพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. ท�ใชในการรกษาโรคเบาหวาน ไดสาเรจลลวง โดยไดรบทนอดหนนการวจยจาก

สานกวจยและสงเสรมวชาการการเกษตร มหาวทยาลยแมโจ ท� อดหนนทนวจย ประจาป

งบประมาณ 2554

ผวจยขอขอบคณ สาขาวชาเคม คณะวทยาศาสตร และสถาบนบรการตรวจสอบคณภาพ

และมาตรฐานผลตภณฑ มหาวทยาลยแมโจ ท�อนเคราะหเร�องสถานท� และอปกรณบางอยางท�ใชใน

การดาเนนการวจยใหเสรจส�นสมบรณ

ผวจยขอขอบคณ Dr. Willard E. Collier และนางสาวรตตกาล ตง ท�ใหคาแนะนาและให

ความชวยเหลอจนทาใหการวจยในคร� งน� ไดเสรจส�นสมบรณ

ทายท�สดน�ผวจยขอขอบพระคณบดาและมารดา และพ� ๆ ทกคน ท�คอยใหความชวยเหลอ

สนบสนน ใหคาแนะนา และเปนกาลงใจใหกบผวจยจนทาใหงานวจยสาเรจดวยด

ผวจย

สารบญ

หนา

สารบญตาราง ข

สารบญภาพ ง

บทคดยอ 1

Abstract 3

คานา 4

วตถประสงคของการวจย 5

ประโยชนท�คาดวาจะไดรบ 5

เอกสารเเละงานวจยท�เก�ยวของ 6

อปกรณและวธการวจย 7

ผลการวจย 19

สรปเเละวจารณผลการวจย 53

เอกสารอางอง 57

สารบญตาราง

หนา

ตารางท� 1 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Catechin 20

ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1

ตารางท� 2 ปรมาณของสาร Catechin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 21

ตารางท� 3 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Catechin 22


ตารางท� 4 ปรมาณของสาร Catechin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 23

ตารางท� 5 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Beta-carotein 24


ตารางท� 6 ปรมาณของสาร Beta-carotein ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 25

ตารางท� 7 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Beta-carotein 26


ตารางท� 8 ปรมาณของสาร Beta-carotein ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 28

ตารางท� 9 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Lutein 29


ตารางท� 10 ปรมาณของ Lutein ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 30

ตารางท� 11 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Lutein 31


ตารางท� 12 ปรมาณของ Lutein ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 32

ตารางท� 13 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin 33


ตารางท� 14 ปรมาณของสาร Zeaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 34

ตารางท� 15 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin 35


ตารางท� 16 ปรมาณของสาร Zeaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 36

ตารางท� 17 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin 37


ตารางท� 18 ปรมาณของสาร Astaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 38

ข

สารบญตาราง (ตอ)

หนา

ตารางท� 19 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin 39


ตารางท� 20 ปรมาณของสาร Astaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 40

ตารางท� 21 คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก 41


ตารางท� 22 คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง คร�งท� 1 (n=2) 42

ตารางท� 23 ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (mg GAE/g W) 43

ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)



ตารางท� 25 คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง คร�งท� 2 (n=2) 45

ตารางท� 26 ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (mg GAE/g W) 46

ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)


ท�ความเขมขนตาง ๆ และเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 1

ตารางท� 28 คาการดดกลนแสงของสารควบคม (control) และสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 48

ตารางท� 29 เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ของสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2) 49


ท�ความเขมขนตาง ๆ และเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 2

ตารางท� 31 คาการดดกลนแสงของสารควบคม (control) และสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 51

ตารางท� 32 เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ของสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2) 52

ค

สารบญภาพ

หนา

ภาพท� 1 กราฟมาตรฐาน Catechin คร� งท� 1 20

ภาพท� 2 กราฟมาตรฐาน Catechin คร� งท� 2 22

ภาพท� 3 กราฟมาตรฐาน Beta-carotein คร� งท� 1 24

ภาพท� 4 กราฟมาตรฐาน Beta-carotein คร� งท� 2 27

ภาพท� 5 กราฟมาตรฐาน Lutein คร� งท� 1 29

ภาพท� 6 กราฟมาตรฐาน Lutein คร� งท� 2 31

ภาพท� 7 กราฟมาตรฐาน Zeaxanthin คร� งท� 1 34

ภาพท� 8 กราฟมาตรฐาน Zeaxanthin คร� งท� 2 35

ภาพท� 9 กราฟมาตรฐาน Astaxanthin คร� งท� 1 37

ภาพท� 10 กราฟมาตรฐาน Astaxanthin คร� งท� 2 39

ภาพท� 11 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (GAE) คร� งท� 1 41

(วดคาการดดกลนแสง 760 นาโนเมตร)







ง

1

การศกษาการแยกสารและโครงสรางของสารจากพชสมนไพร


Study on Isolation and Structural Elucidation of Active Compounds from

Gynura auriculata Cass. for Curing Diabetes

ธวลรตน รตนเดชานาคนทร

Thawalrat Ratanadachanakin

คณะวทยาศาสตร มหาวทยาลยแมโจ จ.เชยงใหม 50290

……………………………………………….

บทคดยอ

พชสมนไพร Gynura auriculata Cass. เปนท�รจกกนอยางแพรหลาย และมสรรพคณใน

การลดน� าตาลในเลอดของผปวยเปนโรคเบาหวานไดเปนอยางด งานวจยคร� งน� เราไดทาการศกษา

สารออกฤทธ� จากตวอยางพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�งส�ชนด ตวอยางท� 1.1

ประกอบดวยใบและสวนยอดสด ตวอยางท� 1.2 คอ ใบและสวนยอดอบแหง ตวอยางท� 2.1 คอ ใบ

สดอยางเดยว และ ตวอยางท� 2.2 คอ ใบอบแหงอยางเดยว เราใชเทคนคโครมาโทกราฟของเหลว

สมรรถนะสง (HPLC) โดยใช UV-vis diode-array detector ในการแยกสารสาคญจากตวอยางท�งส�

เวลารเทนชน (retention time) ของสารมาตรฐานถกใชในการวเคราะหสารสาคญ จากผลการ

ทดลอง พบสาร Catechin ในตวอยางท� 1.1, ตวอยางท� 1.2, ตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2 เทากบ

12.59, 166.77, 12.60, และ 277.90 mg/kg ตามลาดบ พบสาร Lutein ในตวอยางท� 1.1, ตวอยางท�

1.2, ตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2 เทากบ 28.50, 9.47, 6.60, และ 3.65 mg/kg ตามลาดบ พบสาร

Beta-carotene ในตวอยางท� 1.1, ตวอยางท� 1.2, ตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2 เทากบ 2.76, 3.94,

6.09, และ 2.85 mg/kg ตามลาดบ ไมพบปรมาณสาร Zeaxanthin ในตวอยางท�งส� พบสาร

Astaxanthin ในตวอยางท� 1.1 และ ตวอยางท� 1.2 เทากบ 47.96 และ 66.86 mg/kg ตามลาดบ แตเรา

ไมพบสารดงกลาวในตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2

นอกจากน�น ในงานวจยคร� งน� ไดทาการวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดย

ใช Folin-Ciocalteu’s reagent ในตวอยางท� 1.1, ตวอยางท� 1.2, ตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2

เทากบ 2.21, 2.23, 23.98 และ 26.03 มลลกรม GAE ตอผก 1 กรม ตามลาดบ และหาเปอรเซนตการ

2

ยบย �งอนมลอสระดพพเอชของในตวอยางท� 1.1, ตวอยางท� 1.2, ตวอยางท� 2.1 และตวอยางท� 2.2 ม

คาเฉล�ยเทากบ 15.80, 16.63, 68.17, และ 59.79 ตามลาดบ

คาสาคญ: Gynura auriculata Cass., โรคเบาหวาน คาเทชน ลทน เบตาแคโรทน ซแซนทน แอสตาแซนทน

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช สารประกอบฟนอลกรวม โดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent

สารตานออกซเดชน

3

Abstract

Gynura auriculata Cass. has been shown to reduce blood sugar in patients. In this

research, we studied the active compounds in four samples of Gynura auriculata Cass. Sample

1.1 consisted of fresh leaves and stems, sample 1.2 was dry leaves and stems, sample 2.1 was

fresh leaves only, and sample 2.2 was dry leaves only. We used high performance liquid

chromatography (HPLC) with a UV-vis diode-array detector to separate the active compounds

from the four samples. Retention times of standard samples were used to identify the compounds.

Catechin was found in sample 1.1, sample 1.2, sample 2.1, and sample 2.2 with concentrations of

12.59, 166.77, 12.60, and 277.90 mg/kg, respectively. Lutein was found in sample 1.1, sample

1.2, sample 2.1, and sample 2.2 with concentrations of 28.50, 9.47, 6.60, and 3.65 mg/kg,

respectively. Beta-carotene was found in sample 1.1, sample 1.2, sample 2.1, and sample 2.2 with

concentrations of 2.76, 3.94, 6.09, and 2.85 mg/kg, respectively. We did not find Zeaxanthin in all

four samples. Astaxanthin was found in sample 1.1 and sample 1.2 with concentrations of 47.96

and 66.86 mg/kg, respectively but we did not find Astaxanthin in sample 2.1 and sample 2.2.

Furthermore, in this research, we also found total phenolic compounds using Folin-

Ciocalteu’s reagent in sample 1.1, sample 1.2, sample 2.1, and sample 2.2 with concentrations of

2.21, 2.23, 23.98, and 26.03 mg GAE /sample 1 g, respectively. We found the percent of DPPH

radical scavenging activities in sample 1.1, sample 1.2, sample 2.1, and sample 2.2 are 15.80%,

16.63%, 68.17%, and 59.79 %, respectively.

Key words: Gynura auriculata Cass., Diabetes, Catechin, Lutein, Beta-carotene, Zeaxanthin, Astaxanthin,

DPPH radical scavenging activity, Total Phenolic compounds using Folin-Ciocalteu’s Reagent,

Antioxidant

4

คานา

โรคเบาหวาน [1] เปนโรคเร� อรง และเปนโรคท�ถายทอดทางกรรมพนธ ไมเลอกเพศ ไม

เลอกวย โรคเบาหวานเกดจากตอมท�ตบออนทางานหล�งอนซลนออกมาไมปกต มผลทาใหระดบ

น� าตาลในเลอดสงมากกวาปกต ปญหาของโรคเบาหวานกคอ 1. ชาวไทยสวนใหญยงขาดความร

เก�ยวกบโรคเบาหวาน จงไมไดใหความสาคญตอโรคดงกลาว ซ�งอาจทาใหบางคนพบจดจบอยางนา

เศราใจกคอ ถงข�นตองถกแพทยตดแขนและขาออก เพราะวาเซลลผวหนงตาย ตองเสยชวตกอนวย

อนควร หรอผปวยบางคนไดสญเสยการมองเหนตลอดชวต 2. ผปวยท�มภาวะน� าตาลสงเปน

เวลานานๆ ทาใหเกดการเส�อมของอวยวะตางๆ เชน ตา หวใจ ไต เสนประสาท และเสนเลอด ฯลฯ

จากการศกษาพบวาอาการแทรกซอนทางไตประมาณ 35% เกดข�นกบผปวยท�เปนโรคเบาหวานมา

นานประมาณ 10 ป ซ�งจะตรวจพบภาวะไตวายในระยะเร�มตน และถาผปวยยงคงไมไดรบการรกษา

อยางถกวธตอไปอกประมาณ 5 ป จะพบภาวะไตวายในระยะสดทาย [2,3] นอกจากน� โรคเบาหวาน

ยงเปนสาเหตกอใหเกดอาการแทรกซอนและเร�อรงอกหลายโรค เชน หลอดเลอดหวใจตบ ความดน

โลหตสง โรคทางสมอง อมพาต และโรคเส�อมทางสมรรถภาพทางเพศ ฯลฯ

ศ.นพ.เทพ หมะทองคา คณะแพทยศาสตร มหาวทยาลยมหดล ไดรายงานวาโลกมผปวย

โรคเบาหวานชนดท�เกดจากรางกายไมตอบสนองตออนซลนอยางเหมาะสมประมาณ 190 ลานคน

สาหรบประเทศไทยจานวนของผปวยเบาหวานชนดดงกลาวมประมาณ 1 ลานคน [2]

สมนไพรท�มสรรพคณในการรกษาโรคเบาหวานตามตาหรบยาแผนโบราณน�นถกบนทกไว

มากมาย [5,6] สมนไพรท� จะทาการศกษาในโครงการฯน� ม ช� อวทยาศาสตรวา Gynura

auriculata Cass. หรอ Gynura divaricata DC. วงศ ASTERACEAE (COMPOSITAE) มช�อสามญ

คอ Purple velvel plant และ Purple passion vine [4] เปนพชสมนไพรท�มาจากประเทศจน ถกนามา

ปลกในประเทศไทย หรอมช�อท� รจกกนเรยกวา “จนฉ� เหมาเย�ย” หรอ “ยาเทวดา” เน�องมาจากม

สรรพคณทางดานการรกษาหลายโรค อาทเชน โรคเบาหวาน โรคความดนเลอดสง และโรคหวใจท�

เกดจากเสนเลอดอดตน เปนตน [7] พชสมนไพรดงกลาวขยายพนธไดรวดเรว ดวยวธการปกชาก�ง

หรอตอนก�งการปลกข�นไดในดนท�วไป ชอบแดด ไมชอบน� าทวมขง ปลกเปนท�งไมประดบและไม

สมนไพร ทาใหมแพรหลายท�วไปในหมผชอบพชสมนไพร

สมนไพรท�มศกยภาพในการลดน� าตาลในเลอดจงควรมการสงเสรมการศกษาวจยทางเคม

เพ�อนาผลจากการศกษามาสนบสนนการใชสมนไพรทดแทนยาแผนปจจบน สมนไพรจะเปน

ทางเลอกใหมในการรกษาโรคเบาหวาน และเปนการสงเสรมใหผปวยสามารถพ�งพาตนเอง

งานวจยท�นาเสนอเพ�อขอรบเงนทนสนบสนนงานวจยในคร� งน� สอดคลองกบนโยบายและ

ยทธศาสตรการวจยของชาต (พ.ศ. 2551-2553) อกท� งยงสอดคลองกบยทธศาสตรการวจย

5

มหาวทยาลยแมโจ (พ.ศ. 2551-2553) ในกลยทธการวจยท� 4 เร� องการพฒนาและการคมครองภม

ปญญาการแพทยแผนไทย การแพทยพ�นบาน การแพทยทางเลอก และสมนไพร ซ�งมแผนงานวจย

ดงน� 1. การวจยเก�ยวกบการแพทยแผนไทย การแพทยพ�นบาน และการแพทยทางเลอก เพ�อสราง

องคความรจากภมปญญาทองถ�นและการคมครองภมปญญา 2. การวจยเก�ยวกบสมนไพรเพ�อ

ประโยชนทางการแพทยและสาธารณสข

วตถประสงคของการวจย

1. เพ�อวเคราะหหาปรมาณสารสาคญ ไดแก สาร Catechin, สาร Lutein, สาร Beta-

carotene, สาร Zeaxanthin, และสาร Astaxanthin ดวยเทคนคโครมาโทกราฟของเหลว

สมรรถนะสง (HPLC) ของสารสกดจากพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�งส�

ตวอยาง ไดแก ตวอยางใบและสวนยอดสด ตวอยางใบและสวนยอดอบแหง ตวอยาง

ใบสดอยางเดยว และ ตวอยางใบอบแหงอยางเดยว

2. เพ�อเปรยบเทยบปรมาณสารสาคญ ไดแก สาร Catechin, สาร Lutein, สาร Beta-

carotene, สาร Zeaxanthin, และสาร Astaxanthin ของสารสกดจากพชสมนไพร

Gynura auriculata Cass. ท�งส�ตวอยาง

3. เพ�อศกษาหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging

activity) ของสารสกดจากพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�งส�ตวอยาง

4. เพ�อวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (Folin-

Ciocalteu’s reagent) ของสารสกดจากพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�งส�

ตวอยาง

ประโยชนท�คาดวาจะไดรบ

1. สามารถทราบวาสารสาคญท�พบในพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ประกอบดวยสารอะไรบาง และทาใหทราบปรมาณของสารสาคญดงกลาว

2. สามารถทราบฤทธ� การยบย �งอนมลอสระดพพเอช

3. สามารถทราบปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (Folin-

Ciocalteu’s reagent)

4. จากผลการวจยทาใหสามารถนามาเปนประโยชนตอวงการแพทย และสาธารณสข

ตอไปในอนาคต

6

เอกสารเเละงานวจยท�เก�ยวของ

พชสมนไพรมช�อวทยาศาสตรวา Gynura auriculata Cass. หรอ Gynura divaricata DC.

วงศ ASTERACEAE (COMPOSITAE) มช�อสามญคอ Purple velvel plant และ Purple passion vine

[4] เปนท� รจกกนอยางแพรหลาย และมสรรพคณในการลดน� าตาลในเลอดของผ ปวยเปน

โรคเบาหวานไดเปนอยางด

ในป ค.ศ. 1996 พบวา Gynura auriculata Cass. มสารอลคาลอยดท�เปนพษและกอใหเกด

โรคมะเรงอย 2 ชนด [8,9] นอกจากน�นยงมรายงานพบกรดอะมโนท�จาเปน [10] พบสารอลเคน

แอลกอฮอล กรดไขมน และ เอสเทอร ฯลฯ [11,12] อยใน Gynura auriculata Cass. นอกจากน�นยง

มการตรวจพบสารฟลาโวนอยดใน Gynura auriculata Cass. โดยใชสารรตนเปนสารมาตรฐาน แต

ไมมการรายงานเก�ยวกบโครงสรางของสารฟลาโวนอยดน�น [13] ในป ค.ศ. 2005 ไดมการรายงาน

เก�ยวกบ Gynura auriculata Cass. วามปรมาณสารไนไตรอยในระดบท�สามารถกนสมนไพรน� ได

[14] ตอมาในปเดยวกนและนกวจยกลมเดยวกนไดรายงานวาสารไนไตรท�พบใน Gynura

auriculata Cass. มปรมาณสารไนไตรอยในระดบสงซ� งไมสามารถกนสมนไพรน� ได [15]

นอกจากน�นยงมรายงานพบโลหะหนกตะก�ว อยในระดบสงกวาสารมาตรฐาน [16]

ในป ค.ศ. 2002 ไดมการศกษา Gynura auriculata Cass. โดยนาใบของ Gynura

auriculata Cass. มาสกดดวย n-butanol แลวนาสวนสกดท�ไดมาทดสอบกบหน พบวาในสวนสกด

ดงกลาวสามารถลดระดบน� าตาลในเลอดหนได และไมมผลขางเคยงอยางเปนนยสาคญกบหน

[17,18] อยางไรกตามจากการไดคนควายงไมพบรายงานเก�ยวกบองคประกอบทางเคมท�สาคญของ

สารท�พบในพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�มผลตอการลดระดบน� าตาลในเลอด

7

อปกรณและวธการวจย

ตวอยางพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. เกบมาจาก ตาบลหนองหาร อาเภอสน

ทราย จงหวดเชยงใหม เรานาพชสมนไพรดงกลาวมาเตรยมเปนตวอยางได 4 ตวอยาง คอ 1. ใบผสม

ยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. และ 2. ใบผสมยอดสดของพชสมนไพร

Gynura auriculata Cass. นามาอบแหง โดยใชตอบทาการอบตวอยางท�อณหภม 55 องศาเซลเซยส

เปนเวลานาน 24 ช�วโมง 3. ใบสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. และ 4. ใบสดของพช

สมนไพร Gynura auriculata Cass. นามาอบแหง โดยใชตอบทาการอบตวอยางท�อณหภม 55 องศา

เซลเซยส เปนเวลานาน 24 ช�วโมง

ในงานวจยคร� งน� เราใชเทคนคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง เพ�อศกษาหาปรมาณ

ของสารสาคญ ไดแก สาร Catechin สาร Lutein สาร Beta-carotene สาร Zeaxanthin และ สาร

Astaxanthin

นอกจากน�น ในงานวจยคร� งน� ไดทาการศกษา การทดสอบฤทธ� การตานอนมลอสระดพพ

เอช (DPPH radical) และ การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent

เราไดวางแผนทาการทดลองดงน� คอ เราแบงการทดลองออกเปน 2 คร� ง ซ�งในแตละคร� งใช

ตวอยางท�แตกตางกน คอ

คร�งท� 1 เปนการทดลองการหาปรมาณของสาคญ จากตวอยางพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. 2 ตวอยางคอ

ตวอยางท� 1.1 ใบผสมยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 1.2 ใบผสมยอดท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

คร�งท� 2 เปนการทดลองการหาปรมาณของสารสาคญ จากตวอยางพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. 2 ตวอยางคอ

ตวอยางท� 2.1 ใบสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 2.2 ใบท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

8

การหาปรมาณของสาร Catechin [25]

เคร�องมอและอปกรณ


1 High Performance Liquid Chromatograph (HPLC)

2 Diode array detector (DAD)

3 เคร�องกล�นสญญากาศแบบหมน

4 เคร�องช�ง 2 ตาแหนง


6 ปเปต ( Volumetric Pipette ) ขนาด 0.1, 5, 10 และ 20 mL

7 Nylon Filter Membrane ขนาด 0.45 ไมครอน

8 บกเกอรพลาสตก (Plastic Beaker) ขนาด 100 mL

9 ขวดรปชมพ (Erlenmeyer Flask) ขนาด 125 mL

10 ขวดวดปรมาตร (Volumetric Flask) ขนาด 10, 50 และ 100 mL

11 จกยาง ( Stopper ) สาหรบปดปากขวดรปชมพ

12 กระบอกฉดยา ( Syringe )

13 Dropper

สารเคม

สารเคม

1 Methanol , CH3OH , A.R. Grade

2 catechin, HPLC Grade

9

วธการวจย

วธการสกดสารตวอยาง และการวเคราะหสารประกอบคาเทชน

1. ทาการสกดสารตวอยาง โดยวธการรฟลกซ (Reflux extraction) โดยใชตวทาละลาย 100%

เมทานอล 100 มลลลตร ทาการรฟลกซตอเน�องเปนเวลานาน 2 ช�วโมง ทาการแยกตะกอน

ท�ง ดวยกระดาษกรองเบอร 1 นาสารท�สกดไดไประเหยเอาตวทาละลายออก ดวยเคร�อง

กล�นสญญากาศแบบหมน นา crude ท�ไดมาละลายดวยเมทานอง แลวปรบปรมาตรเปน 10

มลลลตร

2. นาสารละลายจากขอ 1 มาฉดเขาเคร�องโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง ทาการ

วเคราะหหาปรมาณสารประกอบคาเทชน รายงานผลเปนปรมาณสารประกอบคาเทชน

เปนมลลกรมตอผก 1 กรม

การวเคราะหสารมาตรฐาน โดยเทคนคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง

สภาวะท�ใชงานสาหรบเคร�อง HPLC เปนดงน�

ตวแปร สภาวะท�เหมาะสม

คอลมน C18 ; 5 µm, 4.6x250 mm

ประเภทของเคร�องตรวจวด UV-Visible Detector

ความยาวคล�นท�ตรวจวด 210 นาโนเมตร (nm)

อณหภมท�ทดสอบ 25 องศาเซลเซยส ± 1 องศาเซลเซยส

ปรมาตรของสารท�ฉดเขาเคร�อง 10 ไมโครลตร (µL)

อตราการไหล 1.0 มลลลตรตอนาท (mL/min)

ระยะเวลาในการฉด 10 นาท

เวลารเทนชนของ คาเทชน

สดสวนของเฟสเคล�อนท�

2.584 นาท (min)

Methanol:น� า (80:20)

10

การคานวณ

สามารถคานวณไดจากสตร ดงน�

สารคาเทชน Content in sample

A = [C×V×F]/[W]

A = catechin content (mg/ผก 1 g)

C = Amount of catechin content from standard curve (µg/mL)

V = sample volume before diluted (mL) = 10 mL

F = dilution factor = 1 จานวนเทา

W = sample weight (g)

11

การหาปรมาณของสาร Lutein, Beta-carotene, Zeaxanthin, และสาร Astaxanthin [26]



1 High Performance Liquid Chromatograph (HPLC)

2 UV-Visible Detector



5 คอลมน (Column) ขนาด 5 ไมครอน ความยาว 0.46 µm x25 cm

6 บกเกอรพลาสตก (Plastic Beaker) ขนาด 100 mL

7 ขวดรปชมพ (Erlenmeyer Flask) ขนาด 125 mL

8 ขวดวดปรมาตร (Volumetric Flask) ขนาด 50 และ 100 mL

9 กระบอกฉดยา ( Syringe ) ขนาด 5 มลลลตร

10 ปเปต ( Volumetric Pipette ) ขนาด 2 , 5 , 10 และ 20 mL

11 Nylon Filter Membrane ขนาด 0.45 ไมครอน

สารเคม

สารเคม

1 Acetone, C3H6O, A.R. Grade

2 Chloroform, CHCl3, A.R. Grade

3 Methanol, CH3OH, A.R. Grade

4 -carotene, A.R. Grade

5 Lutien, A.R. Grade

6 Zeaxanthin, A.R. Grade

7 Astazanthin, A.R. Grade

12


การหาปรมาณของสารแคโรทนอยด ไดแก สาร Lutein, Beta-carotene, Zeaxanthin, และ

สาร Astaxanthin เปนตน จากตวอยางท�งส�ชนดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. โดยม

วธการเตรยมสารละลายมาตรฐาน และการสกดตวอยาง ดงตอไปน�

1. เตรยมสารมาตรฐานท�ง 4 ชนด ไดแก สาร Lutein, Beta-carotene, Zeaxanthin, และสาร

Astaxanthin ท�ความเขมขนดงน� 0.5, 5, 10, 20, 40 พพเอม

2. บดตวอยาง และช�งน� าหนก 3.00xx กรม แลวทาการสกดสารแคโรทนอยด ดวยตวทาละลาย

อนทรย คอ อะซโตน คร� งละ 5 มลลลตร ป�นเหว�ยงเกบสวนสารสกดไว และสกดซ�าดวยอะ

ซโตน 3-4 คร� ง คร� งละ 5 มลลลตร

3. นาสารละลายขอ 2 มา ระเหยเอาอะซโตนออกไป ดวยการพนกาซไนโตรเจน นาสารสวนท�

สกดไดมาละลายดวยตวทาละลายอะซโตนและปรบปรมาตรใหได 1 มลลลตร ดวยตวทา

ละลายอะซโตน

การวเคราะหสารมาตรฐาน โดยเทคนคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง

สภาวะท�ใชงานสาหรบเคร�อง HPLC เปนดงน�

ตวแปร สภาวะท�เหมาะสม

คอลมน C18 ; 5 µm, 4.6x250 mm

สดสวนของเฟสเคล�อนท� Chloroform:Methanol (80:20)

อตราการไหล 1.0 mL/min

ปรมาตรของสารท�ฉดเขาเคร�อง 10 ไมโครลตร (µL)

ประเภทของเคร�องตรวจวด

ความยาวคล�นท�ตรวจวด

UV-Visible Detector

456 นาโนเมตร

ระยะเวลาในการวเคราะหท�งส�น

เวลารเทนชนของ Lutein

เวลารเทนชนของ Beta-carotene

เวลารเทนชนของ Zeaxanthin

เวลารเทนชนของ Astaxanthin

25 นาท

6.780 นาท

17.170 นาท

10.967นาท

7.789 นาท

13


Carotenoid content in sample

A = [C×V×F]/[W]

A = carotenoid content (mg/kg) = (µg/g)

C = amount of carotenoid content from standard curve (µg/mL)

V = sample volume before diluted (mL) = 1 มลลลตร


W = sample weight (g) = 3 กรม

14

การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent และ

การหาเปอรเซนตการยบย�งอนมลอสระดพพเอช (DPPH radical) [27]



1 UV-VIS Spectrophotometer

2 Rotary evaporator



5 ขวดวดปรมาตร (Volumetric Flask) ขนาด 50 และ 100 mL

6 volumetric flask 100, 10, 25 mL.

7 ปเปต ( Volumetric Pipette ) ขนาด 2 , 5 , 10 และ 20 mL

สารเคม

สารเคม

1 Methanol , CH3OH, AR Grade

2 Gallic acid, C7H6O5, A.R. Grade

11 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl, C18H12N5O6, (DPPH)

12 Folin-Ciocalteu´s phenol reagent, 3H2O.P2O5.13WO3.5MoO3.10H2O และ

3H2O.P2O5.13W2O5.5 Mo2O5.10H2O

13 Sodium carbonate anhydrous, Na2CO3

14 น� าอลตราเพยว, H2O

15


1. การเตรยมสารละลาย

1.1 สารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 1000 พพเอม (Stock solution)

ช�งกรดแกลลก (assay 98%) 0.1020 กรม ละลายและปรบปรมาตรดวยน� าปราศจากไอออน

ในขวดวดปรมาตรขนาด 100 มลลลตร จะไดสารละลายกรดแกลลกเขมขน 1000 พพเอม

1.2 สารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 100 พพเอม (Intermediate solution)

ปเปตสารละลายกรดแกลลกจากขอ 1.1 มา 5.00 มลลลตร และปรบปรมาตรดวย

น� าปราศจากไอออนในขวดวดปรมาตรขนาด 50 มลลลตร จะไดสารละลายกรดแกลลกเขมขน

100 พพเอม

1.3 สารละลายมาตรฐานกรดแกลลกท�ความเขมขนตาง ๆ (Working standard solution)

เตรยมสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 10, 20, 40 และ 60 พพเอม ปรมาตร 10

มลลลตร โดยปเปตสารละลายกรดแกลลก จากขอ 1.1 มา 0.1, 0.2, 0.4, และ 0.6 มลลลตร และปรบ

ปรมาตรดวยน� าปราศจากไอออนในขวดวดปรมาตรขนาด 10 มลลลตร จะไดสารละลายของกรด

แกลลกเขมขน 10, 20, 40 และ 60 พพเอม ตามลาดบ

1.4 สารละลาย DPPH• เขมขน 6.5×10-5 M

ช�ง DPPH. มา 0.0030 กรม ละลายในเมทานอล ปรบปรมาตรใหเปน 100 มลลลตร

16

2. วธการสกดสารตวอยาง

สาหรบการวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent

(Total phenolics content by Folin-Ciocalteu’s reagent) และทดสอบฤทธ� การตานอนมลอสระดพพ

เอช (DPPH radical)

2.1 ทาการสกดสารตวอยาง โดยวธการรฟลกซ (Reflux extraction) ใชตวทาละลาย 100% เมทานอล

200 มลลลตร ทาการรฟลกซตอเน�องเปนเวลานาน 2 ช�วโมง นาสารตวอยางท�สกดไดไปกรอง ดวย

กระดาษกรองเบอร 1 ทาการแยกตะกอนท�งไป นาสารละลายท�สกดไประเหยเอาตวทาละลายออก

โดยใชเคร�องกล�นสญญากาศแบบหมน นา crude ท�ไดมาละลายดวยเมทานอลและปรบปรมาตรเปน

10 มลลลตร นาสารสกด ไปวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม รายงานผลเปนปรมาณ

สารประกอบฟนอลกรวมเทยบเทาปรมาณกรดแกลลกตอน� าหนกของตวอยาง 1 กรม (milligram

gallic acid equivalent per gram dried weight, mgGAE/g DW) เพ�อหาตวสกดท�สกดสารประกอบฟ

นอลกรวม ไดปรมาณมากท�สด (พจารณาจากคา mgGAE/g DW ถาคามาก แสดงวามสารประกอบฟ

นอลกรวมปรมาณสง

3. การทดสอบฤทธ�การตานอนมลอสระ โดยการหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-

Ciocalteu’s reagent (Total phenolics content by Folin-Ciocalteu’s reagent)

3.1 การสรางกราฟมาตรฐานจากสารมาตรฐานกรดแกลลกท�เตรยมไวขอ 1.3

ก. นาสารละลายกรดแกลลก 10.00 พพเอม 1.00 มลลลตร ใสลงในหลอดทดลอง

ขนาดกลางจานวน 3 หลอด และเตมสารลงในแตละหลอดตามลาดบดงน�

1. สารละลาย Folin-Ciocalteu 10% (v/v) 2.50 มลลลตร ท�งไว 10 นาท

2. สารละลายโซเดยมคารบอเนต 0.15% (w/v) 1.00 มลลลตร

ข. นาสารละลายจากขอ ก อนท�อณหภม 50.0 องศาเซลเซยส ในอางน� าควบคมอณหภม

นาน 30 นาท

ค. ปเปตสารละลายในหลอดทดลอง หลอดละ 1.00 มลลลตร ลงในขวดวดปรมาตรขนาด

25 มลลลตร และปรบปรมาตรดวยน� าปราศจากไอออน

ง. วดคาการดดกลนแสงโดยใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรท�ความยาวคล�น

760 นาโนเมตร (A760)

จ. สารละลายกรดแกลลกความเขมขนอ�น ๆ ทาการตรวจวดการดดกลนแสงในทานอง

เดยวกน (ก-ง)

ฉ. สรางกราฟมาตรฐาน ระหวางคาการดดกลนแสงเฉล�ยและความเขมขนของสารละลาย

กรดแกลลกท�ความเขมขนตาง ๆ

17

3.2 การทดสอบสารตวอยาง

ปเปตสารละลายตวอยางจากขอ 2 มาปรมาตร 0.10 มลลลตร ใสลงในขวดวดปรมาตร 10

มลลลตร ปรบปรมาตรดวยเมทานอล (เจอจาง 100 เทา) แลวนาไปวเคราะหเชนเดยวกบ

ขอ 3.1 โดยเปล�ยนสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกในขอ ก เปนสารละลายตวอยางแตละชนด และ

หาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมในสารสกด รายงานผลเปนมลลกรม ของสารประกอบฟนอล

ลกรวมตอน� าหนกตวอยาง 1 กรม

การคานวณหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม

จากสมการ y = 0.0161x – 0.0347 แทนคา y คอ คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง ท�

ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร ท�ไดจากการทดลอง เพ�อหาคา x คอ คา C น�นเอง ตอจากน�นนาคา

ตาง ๆ ท�ไดไปแทนคาในสมการ A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL] เพ�อหาคา A

Total phenolic compounds content in sample

A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL]

A = total phenolic compounds content (mg/ ผก 1 g)

C = concentration of total phenolic compounds from standard curve (mg/L)




4. ทดสอบฤทธ�การตานอนมลอสระดพพเอช (DPPH radical)

การคานวณหาเปอรเซนตการยบย�งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging activity)

ก. นาสารละลาย DPPH• จากขอ 1.4 ใสลงในหลอดทดลองขนาดกลาง หลอดละ 3.00

มลลลตร จานวน 3 หลอด

ข. ใสสารละลายกรดแกลลก 10 พพเอม หลอดละ 0.30 มลลลตร เขยาใหเขากน แลวท�งไว 30

นาท ท�อณหภมหอง

ค. วดคาการดดกลนแสงโดยใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร

(A515) โดยท�

1. ใชเมทานอล เปนสารละลายแบงค (blank)

2. ใชเมทานอลผสมกบสารละลาย DPPH• อยางละ 3 มลลลตร เปนชดควบคม

18

ง. สารละลายกรดแกลลกความเขมขนอ�น ๆ (20, 30, 40, 60, และ 80 พพเอม) ทาการทดลอง

วธเดยวกน (ก-ค)

จ. คานวณหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging activity)

จากคาการดดกลนแสงเฉล�ย(Asample) โดยคดเทยบกบคาการดดกลนแสงของชดควบคม

(Actrl) ดงสมการขางลางน�

100A

AAactivity scavenging radical%DPPH

lctr

samplectrl

การทดสอบสารตวอยาง

ก. นาสารละลาย DPPH• จากขอ 1.4 ใสลงในหลอดทดลองขนาดกลาง หลอดละ 3.00

มลลลตร จานวน 3 หลอด

ข. ใสสารละลายสารละลายตวอยางจากขอ 2 (เจอจาง 100 เทา) หลอดละ 0.30 มลลลตร เขยา

ใหเขากน แลวท�งไว 30 นาท ท�อณหภมหอง

ค. วดคาการดดกลนแสงโดยใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร

(A515) โดยท�

1. ใชเมทานอล เปนสารละลายแบงค (blank)

2. ใชเมทานอลผสมกบสารละลาย DPPH• อยางละ 3 มลลลตร เปนชดควบคม

ง. สารละลายตวอยางชนดอ�น ๆ ทาการทดลองวธเดยวกน (ก-ค)

จ. คานวณหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging activity)

จากคาการดดกลนแสงเฉล�ย (Asample) โดยคดเทยบกบคาการดดกลนแสงของชดควบคม,

(Actrl) ดงสมการ 2.2

ระยะเวลาท�ใชในการดาเนนงานตลอดโครงการฯ 1 ป

(เปนโครงงานวจยตอเน�องเปนระยะเวลา 2 ป)

สถานท�ดาเนนงาน ภาควชาเคม คณะวทยาศาสตร มหาวทยาลยแมโจ อาเภอสนทราย

จงหวดเชยงใหม ประเทศไทย

สถาบนบรการตรวจสอบคณภาพและมาตรฐานผลตภณฑ

มหาวทยาลยแมโจ

19

ผลการวจย

งานวจยคร� งน� ไดทาการศกษาสารสาคญจากพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ซ�งเกบ

มาจาก ตาบลหนองหาร อาเภอสนทราย จงหวดเชยงใหม โดยนาพชสมนไพรดงกลาวมาเตรยม

ตวอยางได 4 ตวอยาง คอ 1. ใบและยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. และ 2. ใบ

และยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. นามาอบแหง โดยใชตอบทาการอบตวอยาง

ท�อณหภม 55 องศาเซลเซยส เปนเวลานาน 24 ช�วโมง 3. ใบสดของพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. และ 4. ใบสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. นามาอบแหง โดยใช

ตอบทาการอบตวอยางท�อณหภม 55 องศาเซลเซยส เปนเวลานาน 24 ช�วโมง

ในงานวจยคร� งน� เราใชเทคนคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง (HPLC) เพ�อศกษา

หาปรมาณของสารสาคญ ไดแก สาร Catechin สาร Lutein สาร Beta-carotene สาร Zeaxanthin และ

สาร Astaxanthin

นอกจากน�น ในงานวจยคร� งน� ไดทาการศกษา การทดสอบฤทธ� การตานอนมลอสระดพพ

เอช (DPPH radical) โดยใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอร ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร (A515)

และ การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม โดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent และใชเคร� อง

สเปกโทรโฟโตมเตอร ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร (A760)

เราไดวางแผนทาการทดลองดงน� คอ เราแบงการทดลองออกเปน 2 คร� ง ซ�งในแตละคร� งใช


เราไดวางแผนทาการทดลอง โดยแบงการทดลองออกเปน 2 คร� ง ซ�งในแตละคร� งใช


คร�งท� 1 เปนการทดลองการหาปรมาณของสาคญ จากตวอยางพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. 2 ตวอยาง คอ

ตวอยางท� 1.1 ใบผสมยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 1.2 ใบผสมยอดท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

คร�งท� 2 เปนการทดลองการหาปรมาณของสารสาคญ จากตวอยางพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. 2 ตวอยาง คอ

ตวอยางท� 2.1 ใบสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 2.2 ใบท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

20

การหาปรมาณสาร Catechin คร�งท� 1

การหาปรมาณของสาร Catechin คร�งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานสาร Catechin

ตอน� าหนกตวอยางสด 5.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 5.0000 กรม

การสรางกราฟมาตรฐาน (Callibration curves)

เตรยมสารละลายมาตรฐานสาร Catechin เขมขน 20, 40, 60, และ 80 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสารมาตรฐาน Catechin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array

Detector (DAD) วดคาการดดกลนแสงท�ความยาวคล�น 210 นาโนเมตร ดงตารางท� 1 และภาพท� 1

ตารางท� 1 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Catechin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1

คร�งท� 1

สาร Catechin

ความเขมขน (ppm) พ�นท�ใตพค

20 2218.40

40 5082.30

60 8691.00

80 12996.00

จากกราฟมาตรฐานท�ไดจากการทดลอง โดยสมการท�ไดเทากบ y = 179.71x – 1738.5

ภาพท� 1 กราฟมาตรฐานสาร Catechin คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 210 นาโนเมตร)

y = 179.7x - 1738.R² = 0.992

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

0 20 40 60 80 100

พ�นท

�ใตพค

ความเขมขน (ppm)

Catechin คร�งท� 1

21

การหาปรมาณสาร Catechin ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Catechin โดยนาคาพ�นท�ใตพค

ของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐานสาร Catechin (ภาพท� 1) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งได

จากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Catechin

รายงานผลปรมาณสาร Catechin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท� 1.1

(ใบผสมยอดสด) 5.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 5.0000 กรม ดงแสดงใน

ตารางท� 2

จากการนาตวอยางท� 1.1 ไปทาการทดลองซ�า 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร Catechin

จากตวอยางท�งสองเทากบ 2.609 นาท และ 2.613 นาท ตามลาดบ พบพ�นท�ใตพค ซ�งมคาความ

เขมขนของตวอยางท�งสอง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Catechin ท�มอย

ในตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 12.59 mg/kg



เขมขนของตวอยาง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Catechin ท�มอยใน

ตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 166.77 mg/kg

ตารางท� 2 ปรมาณของสาร Catechin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*

สารท�วเคราะห

ตวอยางท� 1.1 ตวอยางท� 1.2 หนวย

น� าหนก (g) ผลการ

วเคราะห



Catechin 5.0000 12.59 5.0000 166.77 mg/kg

* วธการคานวณ แสดงไวในวธการวจย

22

การหาปรมาณสาร Catechin คร�งท� 2

การหาปรมาณของสาร Catechin คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน Catechin ตอ

น� าหนกตวอยางสด 5.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Catechin เขมขน 20, 40, 60, และ 80 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสาร Catechin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array Detector

(DAD) วดคาการดดกลนแสงท�ความยาวคล�น 210 นาโนเมตร ดงตารางท� 3 และภาพท� 2

ตารางท� 3 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Catechin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 2


สาร Catechin


20 2118.40

40 5182.30

60 7891.00

80 11996.00


ภาพท� 2 กราฟมาตรฐาน Catechin คร� งท� 2 (วดคาการดดกลนแสง 210 นาโนเมตร)

y = 161.7x - 1288.R² = 0.992

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

0 20 40 60 80 100

พ�นท

�ใตพค


Catechin คร�งท� 2

23

การหาปรมาณสาร Catechin ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Catechin โดยนาคาพ�นท�ใตพค

ของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Catechin (ภาพท� 2) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งไดจาก

การอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Catechin รายงาน

ผลปรมาณสาร Catechin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท� 2.1 (ใบสด)

5.0000 กรม และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 4









ตารางท� 4 ปรมาณของสาร Catechin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







Catechin 5.0000 12.60 3.0000 277.90 mg/kg


24

การหาปรมาณสาร Beta-carotene คร�งท� 1

การหาปรมาณของสาร Beta-carotene คร� งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน แอลฟา-

โทโคฟรอล ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Beta-carotene เขมขน 0.5, 5, 10, 20, 40 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสาร Beta-carotene ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 5 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Beta-carotene ท�ความเขมขนตาง ๆ


สาร Beta-carotene


0.5 4.10

5 85.80

10 261.30

20 585.30

40 1252.5


ภาพท� 3 กราฟมาตรฐาน Beta-carotene คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 32.27x - 49.53R² = 0.997

-200

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Beta-Carotene คร�งท� 1

25

การหาปรมาณสาร Beta-carotene ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Beta-carotene โดยนาคาพ�นท�ใต

พคของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Beta-carotene (ภาพท� 3) ความเขมขนของสารตวอยางซ�ง

ไดจากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Beta-

carotene รายงานผลปรมาณสาร Beta-carotene ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด) 3.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 3.0000 กรม

ดงแสดงในตารางท� 6

จากการนาตวอยางท� 1.1 ไปทาการทดลองซ� า 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร Beta-

carotene จากตวอยางท�งสองเทากบ 17.115 นาท และ 17.092 นาท ตามลาดบ พบพ�นท�ใตพค ซ�งม

คาความเขมขนของตวอยางท�งสอง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Beta-

carotene ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 2.76 mg/kg



คาความเขมขนของตวอยาง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Beta-carotene

ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 3.94 mg/kg

ตารางท� 6 ปรมาณของสาร Beta-carotene ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







Beta-Carotene 3.0000 2.76 3.0000 3.94 mg/kg


26

การหาปรมาณสาร Beta-carotene คร�งท� 2

การหาปรมาณของสาร Beta-carotene คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน Beta-

carotene ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Beta-carotene เขมขน 0.5, 5, 10, 20, 40 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสาร Beta-carotene ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 7 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Beta-carotene ท�ความเขมขนตาง ๆ


สาร Beta-carotene


0.5 9.10

5 95.80

10 291.30

20 585.30

40 1352.50

27


ภาพท� 4 กราฟมาตรฐาน Beta-carotene คร� งท� 2 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

การหาปรมาณสาร Beta-carotene ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Beta-carotene โดยนาคาพ�นท�ใต

พคของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Beta-carotene (ภาพท� 4) ความเขมขนของสารตวอยางซ�ง

ไดจากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Beta-

carotene รายงานผลปรมาณสาร Beta-carotene ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) 3.0000 กรม และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท�

8









y = 34.46x - 53.68R² = 0.995

-200

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Beta-Carotene คร�งท� 2

28

ตารางท� 8 ปรมาณของสาร Beta-carotene ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*


คร� งท� 2






Beta-Carotene 3.0000 6.09 3.0000 2.85 mg/kg


29

การหาปรมาณสาร Lutein คร�งท� 1

การหาปรมาณของสาร Lutein คร� งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานสาร Lutein ตอ

น� าหนกตวอยางสด 3.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐานสาร Lutein เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสาร Lutein ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array Detector


ตารางท� 9 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Lutein ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1


สาร Lutein


0.5 107.04

5 198.83

10 567.21

20 1235.1

40 2548.3


ภาพท� 5 กราฟมาตรฐานสาร Lutein คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 63.98x - 34.92R² = 0.994

-500

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Lutien คร�งท� 1

30

การหาปรมาณสาร Lutein ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Lutein โดยนาคาพ�นท�ใตพคของ

สารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐานสาร Lutein (ภาพท� 5) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งไดจากการ

อานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Lutein รายงานผล

ปรมาณสาร Lutein ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอด

สด) 3.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 10

จากการนาตวอยางท� 1.1 ไปทาการทดลองซ� า 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร Lutein


เขมขนของตวอยางท�งสอง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Lutein ท�มอยใน




เขมขนของตวอยาง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Lutein ท�มอยใน


ตารางท� 10 ปรมาณของสาร Lutein ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







Lutein 3.0000 28.50 3.0000 9.47 mg/kg


31

การหาปรมาณสาร Lutein คร�งท� 2

การหาปรมาณของสาร Lutein คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานสาร Lutein ตอ

น� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐานสาร Lutein เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�นนาไป

วเคราะหหาปรมาณของสาร Lutein ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array Detector


ตารางท� 11 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐานสาร Lutein ท�ความเขมขนตาง ๆ


สาร Lutein


0.5 101.04

5 208.83

10 557.210

20 1132.10

40 2256.30

จากกราฟมาตรฐานท�ไดจากการทดลอง โดยสมการท�ไดเทากบ y = 56.134x + 3.4756

ภาพท� 6 กราฟมาตรฐานสาร Lutein คร� งท� 2 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 56.13x + 3.475R² = 0.996

0

500

1000

1500

2000

2500

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Lutien คร�งท� 2

32

การหาปรมาณสาร Lutein ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Lutein โดยนาคาพ�นท�ใตพคของ

สารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐานสาร Lutein (ภาพท� 6) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งไดจากการ

อานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Lutein รายงานผล

ปรมาณสาร Lutein ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท� 2.1 (ใบสด)

3.0000 กรม และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 12









ตารางท� 12 ปรมาณของสาร Lutein ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







Lutein 3.0000 6.60 3.0000 3.65 mg/kg


33

การหาปรมาณสาร Zeaxanthin คร�งท� 1

การหาปรมาณของสาร Zeaxanthin คร� งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin

ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�น

นาไปวเคราะหหาปรมาณของสาร Zeaxanthin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 13 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1


สาร Zeaxanthin


0.5 158.79

5 299.90

10 568.10

20 1037.60

40 2143.90

34


ภาพท� 7 กราฟมาตรฐาน Zeaxanthin คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

การหาปรมาณสาร Zeaxanthin ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Zeaxanthin โดยนาคาพ�นท�ใตพค

ของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Zeaxanthin (ภาพท� 7) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งไดจาก

การอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Zeaxanthin

รายงานผลปรมาณสาร Zeaxanthin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท� 1.1

(ใบผสมยอดสด) 3.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงใน


จากการนาตวอยางท� 1.1 และ 1.2 ไปทาการทดลองซ� าตวอยางละ 2 คร� ง พบวาเวลา

รเทนชนของสาร Zeaxanthin เทากบ 10.967 นาท แตไมพบพ�นท�ใตพค และคาความเขมขนของ

ตวอยางท�งสองมคาเทากบศนย (mg/kg) ดงน�น เม�อนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณ

สาร Zeaxanthin ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเทากบศนยเชนเดยวกน

ตารางท� 14 ปรมาณของสาร Zeaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







Zeaxanthin 3.0000 ไมพบสาร 3.0000 ไมพบสาร mg/kg


y = 50.97x + 71.90R² = 0.996

0

500

1000

1500

2000

2500

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Zeaxanthin คร�งท� 1

35

การหาปรมาณสาร Zeaxanthin คร�งท� 2

การหาปรมาณของสาร Zeaxanthin คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานZeaxanthin

ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐานสาร Zeaxanthin เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�น

นาไปวเคราะหหาปรมาณของสาร Zeaxanthin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งใชดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 15 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Zeaxanthin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 2


สาร Zeaxanthin


0.5 118.79

5 209.90

10 568.10

20 1137.60

40 2143.90


ภาพท� 8 กราฟมาตรฐาน Zeaxanthin คร� งท� 2 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 52.99x + 35.50R² = 0.995

0

500

1000

1500

2000

2500

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Zeaxanthin คร�งท� 2

36

การหาปรมาณสาร Zeaxanthin ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Zeaxanthin โดยนาคาพ�นท�ใต

พคของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Zeaxanthin (ภาพท� 8) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งได

จากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Zeaxanthin

รายงานผลปรมาณสาร Zeaxanthin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท�

2.1 (ใบสด) 3.0000 กรม และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 16

จากการนาตวอยางท� 2.1 และ 2.2 ไปทาการทดลองซ� าตวอยางละ 2 คร� ง พบวาเวลา

รเทนชนของสาร Zeaxanthin เทากบ 10.967 นาท แตไมพบพ�นท�ใตพค และคาความเขมขนของ

ตวอยางท�งสองมคาเทากบศนย mg/kg) ดงน�นเม�อนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณ

สาร Zeaxanthin ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเทากบศนยเชนเดยวกน

ตารางท� 16 ปรมาณของสาร Zeaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







Zeaxanthin 3.0000 ไมพบสาร 3.0000 ไมพบสาร mg/kg


37

การหาปรมาณสาร Astaxanthin คร�งท� 1

การหาปรมาณของสาร Astaxanthin คร� งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน

Astaxanthin ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�น

นาไปวเคราะหหาปรมาณของสาร Astaxanthin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งมดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 17 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1




0.5 107.16

5 201.50

10 645.90

20 1325.30

40 2654.60

จากกราฟมาตรฐานท�ไดจากการทดลอง โดยสมการท�ไดเทากบ y = 66.687x - 20.077

ภาพท� 9 กราฟมาตรฐาน Astaxanthin คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 66.68x - 20.07R² = 0.995

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Astaxanthin คร�งท� 1

38

การหาปรมาณสาร Astaxanthin ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Astaxanthin โดยนาคาพ�นท�ใต

พคของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Astaxanthin (ภาพท� 9) ความเขมขนของสารตวอยางซ�งได

จากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร Astaxanthin

รายงานผลปรมาณสาร Astaxanthin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ตวอยางท�

1.1 (ใบผสมยอดสด) 3.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงใน


จากการนาตวอยางท� 1.1 ไปทาการทดลองซ� า 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร

Astaxanthin จากตวอยางท�งสองเทากบ 7.906 นาท และ 7.856 นาท ตามลาดบ พบพ�นท�ใตพค ซ�งม

คาความเขมขนของตวอยางท�งสอง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร

Astaxanthin ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 47.96 mg/kg

จากการนาตวอยางท� 1.2 ไปทาการทดลองซ� า 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร

Astaxanthin จากตวอยางท�งสองเทากบ 7.789 นาท และ 7.798 นาท ตามลาดบ พบพ�นท�ใตพค ซ�งม

คาความเขมขนของตวอยาง และนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร พบวาปรมาณสาร Astaxanthin ท�

มอยในตวอยางท�งสองมคาเฉล�ยเทากบ 66.86 mg/kg

ตารางท� 18 ปรมาณของสาร Astaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







Astaxanthin 3.0000 47.96 3.0000 66.86 mg/kg


39

การหาปรมาณสาร Astaxanthin คร�งท� 2

การหาปรมาณของสาร Astaxanthin คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน

Astaxanthin ตอน� าหนกตวอยาง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin เขมขน 0.5, 5, 10, 20 และ 40 พพเอม จากน�น

นาไปวเคราะหหาปรมาณของสาร Astaxanthin ดวยเคร�อง HPLC ซ�งมดเทคเตอร คอ Diode Array


ตารางท� 19 คาพ�นท�ใตพคของสารละลายมาตรฐาน Astaxanthin ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 2




0.5 97.16

5 181.50

10 545.90

20 1025.30

40 2254.60


ภาพท� 10 กราฟมาตรฐาน Astaxanthin คร� งท� 2 (วดคาการดดกลนแสง 456 นาโนเมตร)

y = 55.95x - 24.04R² = 0.993

0

500

1000

1500

2000

2500

0 10 20 30 40 50

พ�นท

�ใตพค


Astaxanthin คร�งท� 2

40

การหาปรมาณสาร Astaxanthin ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณสาร Astaxanthin โดยนาคาพ�นท�ใต

พคของสารสกดเทยบกบกราฟมาตรฐาน Astaxanthin (ภาพท� 10) ความเขมขนของสารตวอยางซ�ง

ไดจากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทนคาในสตรการคานวณหาปรมาณสาร

Astaxanthin รายงานผลปรมาณสาร Astaxanthin ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) 3.0000 กรม และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท�

20

จากการนาตวอยางท� 2.1 ไปทาการทดลองซ�าตวอยางละ 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร

Astaxanthin เทากบ 7.906 นาท และ 7.856 นาท ตามลาดบ แตไมพบพ�นท�ใตพค และคาความ

เขมขนของตวอยางท�งสองมคาเทากบศนย (mg/kg) ดงน�น เม�อนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร

พบวาปรมาณสาร Astaxanthin ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเทากบศนยเชนเดยวกน

จากการนาตวอยางท� 2.2 ไปทาการทดลองซ�าตวอยางละ 2 คร� ง พบวาเวลารเทนชนของสาร

Astaxanthin เทากบ 7.789 นาท และ 7.798 นาท ตามลาดบ แตไมพบพ�นท�ใตพค และคาความ

เขมขนของตวอยางท�งสองมคาเทากบศนย (mg/kg) ดงน�นเม�อนาคาดงกลาวไปคานวณในสตร

พบวาปรมาณสาร Astaxanthin ท�มอยในตวอยางท�งสองมคาเทากบศนยเชนเดยวกน

ตารางท� 20 ปรมาณของสาร Astaxanthin ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







Astaxanthin 3.0000 ไมพบสาร 3.0000 ไมพบสาร mg/kg


41

การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) คร�งท� 1

การหาปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) คร� งท� 1

โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ตอน� าหนกตวอยาง 1 กรม หรอ mg GAE/g W


เตรยมสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 10, 20, 40 และ 60 พพเอม นาไปทาปฏกรยา

กบสารละลาย Folin-Ciocalteu (FC reagent) จากน�นใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรวดคาการ

ดดกลนแสงท�ความยาวคล�นท� 760 นาโนเมตร ดงตารางท� 21 และภาพท� 11

ตารางท� 21 คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 1

กรดแกลลก

ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร (nm)

10 0.1169

20 0.3150

40 0.4808

60 0.9456


ภาพท� 11 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (GAE) คร� งท� 1 (วดคาการดดกลนแสง 760 นาโนเมตร)

y = 0.016x - 0.034R² = 0.995

00.10.20.30.40.50.60.70.80.9

1

0 10 20 30 40 50 60 70

คากา

รดดก

ลนแส

ง


Folin คร�งท� 1

42

ตารางท� 22 คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)

ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร (คา y)

ตวอยางท� 1.1 0.1435

ตวอยางท� 1.2 0.1448



Total phenolic compounds content in sample:

A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL]


C = concentration of total phenolic compounds from standard curve (mg/L) = พพเอม




การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) ของสารสกด

ตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ

Folin-ciocalteu (FC reagent)

โดยนาสมการท�ไดจากกราฟมาตรฐาน y = 0.0161x – 0.0347 โดยการแทนคา y คอ คาการ

ดดกลนแสงของสารตวอยาง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร ท�ไดจากการทดลอง ดงแสดงใน

ตารางท� 22 เพ�อหาคา x ซ�งมคาเทากบคา C (concentration of total phenolic compounds from

standard curve (mg/L)) น�นเอง ตอจากน�นนาคาตาง ๆ ท�ไดไปแทนคาในสตรขางลางน�

A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL]

เพ�อหาคา A คอ ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (total phenolic compounds content (mg/

ผก 1 g))

ความเขมขนของสารตวอยาง (คา C) ซ�งไดจากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทน

คาในสตร เพ�อคานวณหาปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม พบวา ปรมาณของสารประกอบฟ

นอลกรวม ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด)

5.0000 กรม และในตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 5.0000 กรม แสดงในตารางท� 23

43

จากการนาตวอยางท� 1.1 ไปทาการทดลองซ�า 2 คร� ง พบวา ตวอยางท� 1.1 มคาการดดกลน

แสง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร เทากบ 0.1435 mAU ซ�งมคาความเขมขนของสารประกอบฟ

นอลกรวมจากกราฟมาตรฐานเทากบ 11.07 ppm หรอ เทากบ mg/L เม�อนาคาดงกลาวไปคานวณใน

สตร พบวาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ท�มอยในตวอยางมคาเฉล�ยเทากบ 2.21 มลลกรมตอผก

1 กรม




สตร พบวาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ท�มอยในตวอยางมคาเฉล�ยเทากบ 2.23 มลลกรมตอผก

1 กรม

ตารางท� 23 ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (mg GAE/g W) ในสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







Folin 5

2.21

5

2.23

มลลกรมตอผก

1 กรม


44

การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) คร�งท� 2

การหาปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) คร� งท� 2

โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ตอน� าหนกตวอยาง 1 กรม หรอ mgGAE/g W



กบสารละลาย Folin-Ciocalteu (FC reagent) จากน�นใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรวดคาการ

ดดกลนแสงท�ความยาวคล�นท� 760 นาโนเมตร ดงตารางท� 24 และภาพท� 12

ตารางท� 24 คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ท�ความเขมขนตาง ๆ คร� งท� 2


ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร (nm)

10 0.1248

20 0.3541

40 0.8360

60 1.2821

80 1.6707



y = 0.022x - 0.082R² = 0.998

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

0 20 40 60 80 100

พ�นท

�ใตพค


Folin คร�งท� 2

45

ตารางท� 25 คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)

ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร (คา y) หนวย nm

ตวอยางท� 2.1 2.5907

ตวอยางท� 2.2 1.6590


Total phenolic compounds content in sample :

A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL]


C = concentration of total phenolic compounds from standard curve (mg/L)




การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ Folin-ciocalteu (FC reagent) ของสารสกด

ตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม ดวยวธ

Folin-ciocalteu (FC reagent)

โดยนาสมการท�ไดจากกราฟมาตรฐาน y = 0.0223x - 0.0826 โดยการแทนคา y คอ คา

การดดกลนแสงของสารตวอยาง ท�ความยาวคล�น 760 นาโนเมตร ท�ไดจากการทดลอง ดงแสดงใน

ตารางท� 25 เพ�อหาคา x ซ�งมคาเทากบคา C (concentration of total phenolic compounds from

standard curve (mg/L)) น�นเอง ตอจากน�นนาคาตาง ๆ ท�ไดไปแทนคาในสตรขางลางน�

A = [C×V×F]/[W] x [1 L / 1000 mL]

เพ�อหาคา A คอ ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (total phenolic compounds content (mg/

ผก 1 g))

ความเขมขนของสารตวอยาง (คา C) ซ�งไดจากการอานเทยบกบกราฟมาตรฐาน นาไปแทน

คาในสตร เพ�อคานวณหาปรมาณปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม พบวา ปรมาณของ

สารประกอบฟนอลกรวม ตอน� าหนกพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ในตวอยางท� 2.1 (ใบ

ผสมยอดสด) 5.0000 กรม และในตวอยางท� 2.2 (ใบผสมยอดอบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงใน


46



นอลกรวมจากกราฟมาตรฐานเทากบ 119.88 ppm หรอ เทากบ mg/L เม�อนาคาดงกลาวไปคานวณ

ในสตร พบวาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ท�มอยในตวอยางมคาเฉล�ยเทากบ 23.98 มลลกรม

ตอผก 1 กรม




สตร พบวาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม ท�มอยในตวอยางมคาเฉล�ยเทากบ 26.03 มลลกรมตอ

ผก 1 กรม

ตารางท� 26 ปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวม (mg GAE/g W) ในสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







Folin 5

23.98

3

26.03

มลลกรมตอผก

1 กรม


47

การหาเปอรเซนตการยบย�ยอนมลอสระดพพเอช คร�งท� 1

การหาเปอรเซนตการยบย �ยอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 1 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน

กรดแกลลก ตอน� าหนกตวอยางสด 5.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 3.0000 กรม



กบสารละลาย DPPH จากน�นใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรวดคาการดดกลนแสงท�ความยาวคล�น

ท� 515 นาโนเมตร ดงตารางท� 27 และภาพท� 13

ตารางท� 27 คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ท�ความเขมขนตาง ๆ และ

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 1



ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาว

คล�น 515 นาโนเมตร (mAU)

(Acontrol –Asample )

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระ

ดพพเอช

[(Acontrol –Asample )/ (Acontrol)]100

20 0.0410 9.92

40 0.2241 54.24

60 0.3948 95.55

80 0.5139 124.37

48



ตารางท� 28 คาการดดกลนแสงของสารควบคม (control) และสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)

คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร

สารควบคม (control) 0.4132

สารตวอยางท� 1.1 0.3588


การหาเปอรเซนตการยบย�ยอนมลอสระดพพเอช ของสารสกดตวอยางจากใบผสมยอด

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาเปอรเซนตการยบย �ยอนมลอสระดพพเอช

โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก

การคานวณหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging

activity) จากคาการดดกลนแสงเฉล�ยของสารตวอยาง (Asample) โดยคดเทยบกบคาการดดกลนแสง

ของชดควบคม, (Actrl) ดงสมการขางลางน�

100A


lctr

samplectrl

คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร ซ�งไดจากการอาน

เทยบกบกราฟมาตรฐาน ดงแสดงในตารางท� 28 นาคาการดดกลนแสงของสารตวอยางไปแทนคา

y = 0.007x - 0.103R² = 0.991

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0 20 40 60 80 100

DPPH คร�งท� 1


คาการดดกลนแสง

49

ในสมการ เพ�อหาเปอรเซนตการย บย �งอนมลอสระดพพ เอช ของพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. ของตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด) 5.0000 กรม และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอด

อบแหง) 5.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 29


แสง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร เทากบ 0.3588 mAU และสารควบคม (control) มคาการ

ดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร เทากบ 0.4132 mAU เม�อนาคาดงกลาวไปคานวณใน

สตร พบวา เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ท�มอยในตวอยางมคาเฉล�ยเทากบ 15.80

เปอรเซนต






ตารางท� 29 เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ของสารตวอยาง คร� งท� 1 (n=2)*







DPPH 5

15.80

5

16.63

% การยบย �ง

อนมลอสระ


50

การหาเปอรเซนตการยบย�ยอนมลอสระดพพเอช คร�งท� 2

การหาเปอรเซนตการยบย �ยอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 2 โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐาน

กรดแกลลก ตอน� าหนกตวอยางสด 5.0000 กรม และน� าหนกตวอยางอบแหง 3.0000 กรม


เตรยมสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 10, 20, 40, 60 และ 80 พพเอม นาไปทา

ปฏกรยากบสารละลาย DPPH จากน�นใชเคร�องสเปกโทรโฟโตมเตอรวดคาการดดกลนแสงท�ความ

ยาวคล�นท� 515 นาโนเมตร ดงตารางท� 30 และภาพท� 14

ตารางท� 30 คาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ท�ความเขมขนตาง ๆ และ

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช คร� งท� 2



ความเขมขน (ppm) คาการดดกลนแสง ท�ความยาว

คล�น 515 นาโนเมตร (mAU)

(Acontrol –Asample )

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระ

ดพพเอช

[(Acontrol –Asample )/ (Acontrol)]100

10 0.0054 3.23

20 0.0147 8.80

40 0.0387 23.17

60 0.0601 35.99

80 0.0891 53.35

51



ตารางท� 31 คาการดดกลนแสงของสารควบคม (control) และสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)

คาการดดกลนแสง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร

สารควบคม (control) 0.1670



การหาเปอรเซนตการยบย�ยอนมลอสระดพพเอช ของสารสกดตวอยางจากใบ

นาสารตวอยางท�สกดไดจานวน 2 ชนด มาหาเปอรเซนตการยบย �ยอนมลอสระดพพเอช

โดยเทยบกบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก

การคานวณหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (%DPPH radical scavenging

activity) จากคาการดดกลนแสงเฉล�ยของสารตวอยาง (Asample) โดยคดเทยบกบคาการดดกลนแสง

ของชดควบคม, (Actrl) ดงสมการขางลางน�

100A


lctr

samplectrl

y = 0.001x - 0.008R² = 0.996

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

0.1

0 20 40 60 80 100


DPPH คร�งท� 2 คาการดดกลนแสง

52

คาการดดกลนแสงของสารตวอยาง ท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร ซ�งไดจากการอาน

เทยบกบกราฟมาตรฐาน ดงแสดงในตารางท� 31 นาคาการดดกลนแสงของสารตวอยางไปแทนคา

ในสมการ เพ�อหาเปอรเซนตการย บย �งอนมลอสระดพพ เอช ของพชสมนไพร Gynura

auriculata Cass. ตวอยางท� 2.1 (ใบผสมยอดสด) 5.0000 กรม และตวอยางท� 2.2 (ใบผสมยอด

อบแหง) 3.0000 กรม ดงแสดงในตารางท� 32


แสงท�ความยาวคล�น 515 นาโนเมตร เทากบ 0.0532 mAU และสารควบคม (control) มคาการ









ตารางท� 32 เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ของสารตวอยาง คร� งท� 2 (n=2)*







DPPH 5

68.17

3

59.79

%การยบย �ง

อนมลอสระ


53

สรปและวจารณผลการวจย

โรคเบาหวาน เปนผลมาจากความอวน และการมภาวะน� าตาลในเลอดสง มรายงานเก�ยวกบ

โรคเบาหวานวามความสมพนธกบความเครยดท�มออกซเจนเขามาทาปฏกรยา หรอท�เรยกวา

“oxidative stress” ดงน�น สารแอนต�ออกซแดนจงสามารถใชในการรกษาโรคเบาหวานได [28,29]

สารแคโรทนอยด มอานาจในการตานอนมลอสระ (antioxidant) [30]

Lutein และ zeaxanthin จดเปนสารแคโรทนอยด ท�มสเหลอง ซ�งมคณสมบตปองกนเซลล

จากการทาลายของแสงและปฏกรยาออกซเดชน ของดวงตา โดยท�วไปพบสารท�งสองในพชผกใบส

เขยว [31] มรายงานวา Astaxanthin เปนสารท�มอานาจในการตานอนมลอสระ (antioxidant)

มากกวาวตามน อ ถง 500 เทา ในและชวยปองกนเซลลจากการถกทาลายดวย oxidative damage

เน�องจากมระดบน� าตาลในเลอดสง ปจจบนไดมการนามาใชเปนอาหารเสรมเพ�อสขภาพในหลาย

ประเทศ พบตามธรรมชาตในกงและเคย เปนตน [32,33,34,35]

Tomonori Nagao และคณะ ไดรายงานวา catechin จากเคร�องด�ม อาจใช ปองกนโรคอวน

และควบคมระดบของฮโมโกลบนไดสมผสกบน� าตาลในเลอด หรอท�เรยกวา hemoglobin A1C

หรอ HbA1C ใหมระดบต�าในผปวยท�เปนโรคเบาหวานชนดท�สอง ซ�งเกดจากการท�รางกายผลต

อนซลนไมเพยงพอตอความตองการ [36]

Savitree Mongkolsilp และคณะ ไดรายงานวาสารประกอบฟนอลกรวมมความเขมขน

สง จะมคณสมบตในการตานอนมลอสระสง นอกจากน�นไดรายงานเก�ยวกบสารแคโรทนอยด และ

วตามนซ (ascorbic acid) วามคณสมบตในการตานอนมลอสระ [37,38]

งานวจยคร� งน� ไดทาการศกษาสารสาคญ ไดแก สาร Catechin, สาร Lutein, สาร Beta-

carotene, สาร Zeaxanthin, และสาร Astaxanthin จากพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ซ�ง

เกบมาจาก ตาบลหนองหาร อาเภอสนทราย จงหวดเชยงใหม โดยนาพชสมนไพรดงกลาวมาเตรยม

เปนตวอยางได 4 ตวอยาง ไดแก

ตวอยางท� 1.1 คอ ใบผสมยอดสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 1.2 คอ ใบผสมยอดท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

ตวอยางท� 2.1 คอ ใบสดของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. และ

ตวอยางท� 2.2 คอ ใบท�อบแหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass.

โดยนาตวอยางแตละตวอยางไปทาการทดลองซ� าตวอยางละ 2 คร� ง เราใชเคร�องโครมาโท กราฟ

ของเหลวสมรรถนะสง (HPLC) เพ�อหาปรมาณสารสาคญ โดยเทยบกบสารมาตรฐาน ไดแก สาร

Catechin, สาร Lutein, สาร Beta-carotene, สาร Zeaxanthin, และสาร Astaxanthin แสดงสตร

โครงสราง [39,40] ไดดงน�

54

Catechin

Lutein

Zeaxanthin

�-carotene

Astaxanthin

รายงานสรปผลจากการทดลอง ไดดงน�

1. พบปรมาณสาร Catechin ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบผสม

ยอดอบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) เทากบ 12.59, 166.77, 12.60,

และ 277.90 mg/kg ตามลาดบ จากผลการทดลองท�ได แสดงอยางชดเจนวา ในสารสกดตวอยางใบ

แหงของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. มปรมาณของสาร Catechin สงท�สด รองลงมาคอ

สารสกดตวอยางใบผสมยอดท�อบแหง ดงน�น สารสกดตวอยางท�อบแหง มปรมาณของสาร

Catechin มากกวาสารสกดตวอยางสด

2. พบปรมาณสาร Lutein ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอด

อบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) เทากบ 28.50, 9.47, 6.60, และ 3.65

55

mg/kg ตามลาดบ จากผลการทดลอง แสดงอยางชดเจนวาในสารสกดตวอยางใบผสมยอดสดมสาร

Lutein มากท�สด

3. พบปรมาณสาร Beta-carotene ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบ

ผสมยอดอบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) เทากบ 2.76, 3.94, 6.09,

และ 2.85 mg/kg ตามลาดบ จากผลการทดลอง พบวา สารสกดตวอยางท�งส� มปรมาณสาร Beta-

carotene ไมแตกตางกนอยางชดเจน

4. พบปรมาณสาร Astaxanthin ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด) และตวอยางท� 1.2 (ใบ

ผสมยอดอบแหง) เทากบ 47.96 และ 66.86 mg/kg ตามลาดบ แตไมพบสารดงกลาวในตวอยางท� 2.1

(ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) จากผลการทดลอง พบสาร Astaxanthin เฉพาะในสวนของ

สารสกดตวอยางใบผสมยอด

5. ไมพบปรมาณสาร Zeaxanthin ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบ

ผสมยอดอบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) อาจเปนผลมาจาก

สารสาคญท�มอยในตวอยางท�งส�มปรมาณนอยกวาความเขมขนของสารละลายมาตรฐานตาง ๆ ท�

เตรยมไว

จากการคนควา ไมพบการรายงานเก�ยวกบ การวเคราะหหาปรมาณของสารประกอบ

ฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent (Total phenolics content by Folin-Ciocalteu’s

reagent) และทดสอบฤทธ� การตานอนมลอสระดพพเอช (DPPH radical)

ในงานวจยคร� งน� จงไดทาการศกษา การทดสอบฤทธ� การตานอนมลอสระดพพเอช (DPPH

radical) และ การหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent จากรายงาน

ของ รตตกาล ตง ไดศกษาสมบตการตานอนมลอสระของใบชาเม�ยงสด ดวยวธ ABTS และวธ

DPPH พบวา การสกดตวอยางพช ดวยวธการรฟลกซและใช 100 % เมทานอล เปนตวทาละลาย

อนทรย จะใหสารสกดท�มฤทธ� ตานอนมลอสระสงกวาการสกดดวยตวทาละลายอนทรยชนดอ�น

และการสกดดวยวธวธอ�น นอกจากน�น มการรายงานวาวธการสกดดงกลาวทาใหไดสารประกอบ

ฟนอลกรวมสงท�สด ดวยวธ Folin-Ciocalteu (Folin-Ciocalteu’s reagent) ดงน�น ในการวจยคร� งน�

เราจงใชวธการสกดตวอยางดวยวธรฟลกซและใช 100 % เมทานอล เปนตวทาละลาย การวเคราะห

หาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวม (Total phenolics compounds) โดยใชสาร Folin-Ciocalteu’s

reagent กรดแกลลกถกใชเปนสารมาตรฐาน ดงน�น ปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมจงรายงานโดย

มหนวยเปน mg / g เทยบเทากรดแกลลก

6. การวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกรวมโดยใช Folin-Ciocalteu’s reagent

จากผลการทดลอง พบวา ในตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอด

อบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และ ตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) มปรมาณของสารประกอบ

56

ฟนอลกรวม เทากบ 2.21, 2.23, 23.98 และ 26.03 มลลกรม GAE ตอผก 1 กรม ตามลาดบ จากผล

การทดลอง พบวาในสารสกดตวอยางใบของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. ท�งสดและท�

อบแหง มปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวมมากกวาในตวอยางใบผสมยอดสดและใบผสมยอด

ท�อบแหง อยางชดเจน

จากผลการทดลองท�ได แสดงอยางชดเจนวา ในสารสกดตวอยางใบของพชสมนไพร

Gynura auriculata Cass. มปรมาณของสารประกอบฟนอลกรวมมากกวาสารสกดตวอยางใบผสม

ยอด ดงน�น สารสกดตวอยางใบจงมอานาจในการตานอนมลอสระสงกวาสารสกดตวอยางใบผสม

ยอด

7. การหาเปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช (DPPH radical)

จากผลการทดลอง พบวา เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ท�มอยในตวอยางท� 1.1

(ใบผสมยอดสด), ตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง), ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2

(ใบอบแหง) มคาเฉล�ยเทากบ 15.80, 16.63, 68.17, และ 59.79 ตามลาดบ จากผลการทดลองท�ได

แสดงช�ชดวา ในสารสกดตวอยางใบของพชสมนไพร Gynura auriculata Cass. มเปอรเซนตการ

ยบย �งอนมลอสระดพพเอชมากกวาสารสกดตวอยางใบผสมยอด ประมาณ 4 เทา เม�อนาเปอรเซนต

การยบย �งอนมลอสระดพพเอช ของตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) ไปเทยบ

กบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก พบวา ตวอยางท� 2.1 (ใบสด) และตวอยางท� 2.2 (ใบอบแหง) ม

ฤทธ� การตานอนมลอสระดพพเอช (DPPH radical) มากกวา 80 ppm ของสารละลายมาตรฐานกรด

แกลลก แตสาหรบตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด) และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) เม�อนา

เปอรเซนตการยบย �งอนมลอสระดพพเอช ไปเทยบกบสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก พบวา

ตวอยางท� 1.1 (ใบผสมยอดสด) และตวอยางท� 1.2 (ใบผสมยอดอบแหง) มฤทธ� การตานอนมลอสระ

ดพพเอช (DPPH radical) อยในชวงความเขมขนของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก ระหวาง 20

ถง 40 ppm

57

เอกสารอางอง

1. http://www.bangkokhealth.com/kidney_htdoc/kidney_health_detail.asp?Number

=9235

2. a) การประชมวชาการโภชนาการแหงชาตคร�งท� 2 เร�อง “Advancing Nutrition in

Diabetes Management Achieving Better Overcomes” ณ ศนยนทรรศการและ

การประชมไบเทค บางนา กรงเทพฯ, 3 ตลาคม 2550 b) ท�ศนยการประชมแหงชาต

สรกต� , งานสมมนา "ระบาดวทยาของโรคเบาหวาน : ความทาทายในการรกษา

และคาใชจายทางสขภาพท�เพ�มสงข�นในเอเชย"

3. http://www.thai4u-thailand.com/sick_2.html (ขอมลจากศนยสงเสรมสขภาพ

โรงพยาบาล มหาราชนครเชยงใหม)

4. http://www.medplant.mahidol.ac.th/pharm/botanic.asp?bc =0861 (ขอมลจาก

สานกงานขอมลสมนไพร มหาวทยาลยมหดล)

5. สมพร หรญรามเดช สมนไพรใกลตว อนสรณ วาดวย สมนไพรเพ�อสขภาพดถวน

หนา, 1992.

6. สงหบตรา, สนทร สรรพคณสมนไพร 200 ชนด, 2536.

7. http://thecoffee.multiply.com/journal/item/19

8. Chemical abstracts, 1996, 125, 668.

9. Roeder, E.; Eckert, A.; Wiedenfeld, H. Planta Med., 1996, 62, 386.

10. Bingru, R.; Hongjiang, W.; Chengyuan, L.; Min, Z.; Yong, H. Zhiwu Ziyuan

Yu Huanjing Xuebao, 2004, 13, 55-56.

11. Sheng-Chin, C.; Li-Ling, H.; Chung-Yang, C.; Chun-Jen, C.; Mei-Hua, H.;

Yuan-Chao, H.; Tai-Hung, H.; Sheng-Chu, K. Chiness Phamaceutical Journal,

2003, 55, 109-119.

12. Yong, H.; Wei-Lin, L.; Hou-Wen, L.; Min, Z.; Bing-Ru, R. Zhongguo Tianran

Yaowu, 2006, 4, 156-158.

13. Qi, H.; Rong-hua, L.; Zhao, Z.; Bing-ying, Y.; Ru-kai, C.; You-qiang, C. Fujian

Shifan Daxue Xuebao, Ziran Kexueban, 2006, 22, 118-120.

14. Xianfeng, Z.; Chunmiao, H.; Heyuan, Q. Shipin Kexue, 2005, 26, 297-299.

15. Xianfeng, Z.; Heyuan, Q. Yunnan Zhiwu Yanjiu, 2005, 27, 321-326.

16. Xian, Y.; Juxian, G. Shipin Kexue, 2002, 23, 121-125.

58

17. Akowuah, G. A.; Sadikun, A.; Mariam, A. Pharm. Bio., 2002, 40, 405-410.

18. Chemical abstracts, 2002, 139, 282.

19. Aoun, E.; Rima, J.; Chidiac, G.; Hanna, K. High-performance liquid

chromatographic and spectrofluorometric determination of α-tocopherol in a

natural plant: Ferula hermonis (Zalooh root). J. Food Compos. Anal, 2005, 18,

607-615.

20. Chávez-Servín, J.L.; Castellote, A.I.; López-Sabater, M.C. Simultaneous

Analysis of vitamin A and E in infant milk-based formulae by normal-phase

high-performance liquid chromatography-diode array detection using a short

narrow-bore column. J. Chromatogr. A, 2006, 1122, 138-143.

21. Determination of ascorbic by HPLC: No.17 a, International Union of Fruit

Juice Producers (IFU).

22. Lakshanasomya, N. Determination of ascorbic acid in some kinds of food by

HPLC. Division of food, Department of Medical Science, 1998.

23. Cummiff, D. ed. Official Method of Analysis of AOAC International 16th ed.

V.2 AOAC International MA., 1996.

24. Finglas, P.M.; Faulks, R.M. the HPLC Analysis of Thiamine and Riboflavin,

Potatoes. Food Chem., 1984, 15, 37-44.

25. Dallage, J.J.; Nelson, B.C. J. Chromatogr. A., 2000, 881, 411.

26. Britton, G. 2005. Workshop on Carotenoid : The Qualitative and

Quantitative Analysis. Prince of Songkla University.

27. Mukai, K.; Nagai, S.; Ohara, K. Free radical Biology& Medicine, 2005, 39,

752.

28. Sies, H.; Stahl, W.; Alex Sevanian, A. The journal of Nutrition, 2005, 969-972.

29. Rosenblat, M.; Hayek, T.; Aviram, M. Atherosclerosis, 2006, 187, 363–371.

30. Ford, E. S.; Will, J. C.; Bowman, B. A.; American Journal of Epidemiology,

1999, 149, 168-176.

31. Jewell1, V.C.; Mayes, C.B.D.; Tubman, T.R.J.; Northrop-Clewes, C.A.;

Thurnham, D.I. European Journal of Clinical Nutrition, 2004, 58, 90–97.

59

32. Aoi W. et al. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008,

366, 892-97.

33. Kim T.J. et al. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009; online

doi:10.1021/jf9019745

34. Nagaki et al. Journal of Clinical Therapeutics and Medicines, 2006; 22(1),

41-54.

35. Seki T. et al. Fragrance Journal, 2001, 12,98-103.

36. Nagao, T.; Meguro, S.; Hase, T.; Otsuka, K.; Komikado, M.; Tokimitsu, I.;

Yamamoto T.; Yamamoto K. Obesity, 2009, 17, 310-317.

37. Mongkolsilp, S.; Pongbupakit, I.; Sae-Lee, N.; Sitthithaworn, W. SWU J

Pharm Sci, 2004, 9, 32-35.

38. Sengul, M.; Yildiz, H.; Gungor, N.; Cetin, B.; Eser, Z.; Ercisli, S. Pak. J.

Pharm. Sci., 2009, 22, 102-106.

39. Kijlstra, A.; Tian, Y.; Kelly, E.R.; Berendschot, Tos T.J.M. Progress in

Retinal and Eye Research, 2012, 31, 303–315.

40. Shibata, A.; Kiba, Y.; Akati, N.; Fukuzawa, K.; Terada, H. Chemistry and

Physics of Lipids, 2001, 113, 11–22.

Documents

รายงานผลการวิจัย - Maejo Universitylibrae.mju.ac.th/goverment/20111119104834_librae/File20130418125913... · Gynura auriculata Cass. ทีใช้ในการรักษาโรคเบาหวาน