รายงานการวิจัย อิทธิพลของ ...research.rmutsb.ac.th/fullpaper/2556/2556239509818.pdf · 2016-10-26 · สารสกัดจากแก่นมะหาดประกอบไปด้วย

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

รายงานการวจยอทธพลของวธการสกดตอสารออกซเรสเวอราทรอลและฤทธตานอนมล

ของแกนมะหาด

Influence of Extractive Methods on Oxyresveratrol andAntioxidative Capacity of ArtcarpuslakoochaHeartwood

ผศ.อาพล โพธศร

งานวจยนไดรบงบประมาณจากเงนกองทนสงเสรมงานวจย ป พ.ศ. 2556

มหาวทยาลยเทคโนโลยราชมงคลสวรรณภม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

หวของานวจย อทธพลของวธการสกดตอสารออกซเรสเวอราทรอล อนมลอสระ

ของแกนมะหาด

ผวจย ผศ.

สาขาวชา เคม

คณะ/หนวยงาน วทยาศาสตรและเทคโนโลย

บทคดยอ

สารสกดจากแกนมะหาดประกอบไปดวย สารออกซเนส( )และในสารทาใหผวขาว.(Varani J, et al, 2000)อาโทรคาปส (Artocarpus)หลายชนด วธ ทานอล และเอทวเคราะหปรมาณสารออกซเรสเวอราโทลโดยคอลมน C-18 HPLC สารประกอบฟโนลกโดยรวมทดลองโดยใชสารละลาย Folin-Ciocalteau นมลอสระทดสอบกบสารอนมลอสระสเถยร DPPHผลการทดลองพบวาในบรรดาวธ วธการสกดดวยเมทานอลใหปรมาณสารประกอบฟโนลกโดยรวม (135.5 mg/100g) ปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอล (11.49mg/l)เปอรเซนการกาจดอนมลอสระเสถยร DPPH (47.87±0.0173) (p<0.05)

ออกซเรสเวอราทรอลจากแกนมะหาดArtocarpusheartwoodextract contains oxyresveratrol, which has been found to have strong

tyrosinase-inhibitory activity and potential use as askin-whittening agent.(Varani J etc2000). Thesephytoalexin have been reported in a genusArtocarpus. Analytical methods for measuring oxyresveratrolinArtocarpuslakoocha heartwood extracts were adapted to isolate with several methods (aqueousextract,60% methanolic extract and 60% ethanolic extract ), and analyzed by reversedphase HPLC usingaC-18 column. Total phenolic content was determined spectrophotometrically with phenol Folin-Ciocalteau’s reagent ,and antioxidative capacity employing the 1,1- diphenyl- 2- picryhydrazyl stable freeradical (DPPH). Obtained results were evaluated statistically by Statistical programme. Among the

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

extractive methods, the methanol extract had a showed the highest content of total phenolic was 135.5mg/100goxyresveratrolcontants were 11.49 mg/lscavenging (47.87±0.0173) which statistically significantdifferences(p<0.05)with other extractive methods.TheArtcarpuslakoocha heartwood extract with60%methanol could therefore be an excellent sourc of oxyresveratrol and with high antioxidative capacity.

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ก

สารบญ

หนา

สารบญ กสารบญตาราง งสารบญภาพ จ

1 บทนา1.1 11.2 วตถประสงคของงานวจย 21.3 ขอบเขตของงานการวจย 21.4 21.5 2

22.1 3

2.1.1 มะหาด 32.1.2 สารประกอบฟนอลก 62.1.3 อนมลอสระ 92.1.4 สารตานอนมลอสระ 102.1.5 การวเคราะหหาความสามารถรวมในการตานออกซเดชน 172.1.6 สารตานอนมลอสระดวยวธ DPPH 17

2.2 183 วธดาเนนการวจย

3.1 223.1.1 223.1.2 สารเคมและวตถดบ 22

3.2 วธดาเนนงานวจย3.2.1 แผนผงงานวจย 233.2.2 วธการสกดสารจากแกนมะหาด 24

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ข

สารบญ

หนา

3.2.3 การวเคราะหอทธพลของวธการสกดตางๆ 24ฟนอลกโดยรวม ของ แกนมะหาด

3.2.4 การวเคราะหอทธพลของวธการสกดตางๆ 25ของแกนมะหาด

3.2.5 การวเคราะห 26การวเคราะหหารอยละความสามารถในการตานอนมลอสระของสารสกดของแกนมะหาดโดยวธDPPH

4 ผลการทดลอง4.1 284.2 ฟนอลก 28

โดยรวมของ แกนมะหาด4.3 33

ออกซเรสเวอราทรอล ของ แกนมะหาด4.4 36

การวเคราะหหารอยละความสามารถ ในการตานอนมลอสระของสารสกดของแกนมะหาดโดยวธDPPH

5 สรปผลการทดลอง5.1 สรปผลการทดลอง 38

5.1.1 ผลการศกษาวธการสกดตางๆ 38สารฟนอลกโดยรวมของแกนมะหาด

5.1.2 ผลการศกษา 38ปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอลของแกนมะหาด

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ค

สารบญ

หนา5.1.3 ผลการศกษาอทธพลของวธการสกดตางๆ 39

ผลตอการศกษาการวเคราะหหารอยละความสามารถในการตานอนมลอสระของแกนมะหาดโดยวธDPPH

5.2 ขอเสนอแนะ 39บรรณานกรม 41ภาคผนวก

ก ขอมลการดดกลนแสงสาหรบการหาปรมาณสารโพลฟนอล 49

ข 51ค. รปภาพในการทดลอง 53

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ง

สารบญตารางหนา

3.1 264.1 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก 29

( )4.2 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก 30

(โดยใชเมทานอล 6o% เปนตวทาละลาย)4.3 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก 31

(โดยใชเอทานอล 6o% เปนตวทาละลาย)4.4 ปรมาณสารฟนอลกโดยรวม วธการสกดตางๆ 324.5 แสดงความเขมขนของสารละลายมาตรฐานออกซเรสเวอราทรอล 34

มลลกรมตอลตร4.6 354.7 แสดงการตานทานอนมลอสระดวยวธ DPPH จากแกนมะหาด 365.1 แสดงวธการสกด,ปรมาณฟนอลกโดยรวม ปรมาณออกซเรสเวอราทรอลและรอยละ 39

การตานอนมลอสระก - 1 49ก – 2 การวเคราะหหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH 50

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

จ

สารบญภาพ

ภาพ หนา2.1 ภาพ ก ตนมะหาด 3

ภาพ ข แกนมะหาด 32.2โครงสรางของสารประกอบฟนอลก 62.3 72.4 โครงสรางทางเคมของสารประกอบฟนอลกค-1 94.1 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก ( ) 294.2 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเมทานอล 60% เปนตวทาละลาย) 304.3 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเอทานอล 60% เปนตวทาละลาย) 314.4 กราฟแสดงผลของวธการสกดตางๆในการสกดสารฟนอลกโดยรวมจากแกนมะหาด 324.5 กราฟมาตรฐานสารออกซเรสเวอราทรอล 344.6 กราฟแสดงรอยละการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH จาแกนมะหาด 37ค-1 ผงแกนมะหาด 53ค-2 การสรางกราฟมาตรฐานกรดแกลลก 53ค-3 53ค-4 DPPH 54ค-5 สารละลายโฟลน-ซโอเคาทล 54ค-6 สารละลายโซเดยมคารบอเนต 54ค-7 กรดแกลลก 54ค-8 -วซเบล สเปกโทรโฟโตมเตอร 54ค-9 54ค-10 HPLC 55

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

1

1

บทนา

1.1ออกซเรสเวอราทอล (oxyresveratrol) หรอ 2,4,3′,5′-Tetrahydroxystilbene

(เพญพชญา เตยว, 2551)

1ลกษณะโครงสรางของสารออกซเรสเวอราทอล: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Oxyresveratrol.svg

มะหาด (องกฤษ: Lakoocha, Monkey jack; : Artocarpuslacuchaเปนไมยนตนในวงศ Moraceae ตนกาเนดจากภมภาคเอเชยใต นยมปลกเอาไวใชประโยชนทกสวนของตน สามารถเจรญเตบโตไดในดนทราย, ดนรวนปนทราย, ดนรวน และ ดนเหนยว มความทนทานตอความแหงแลง สงและแสงแดดเขาถงไดน

ภาคเหนอเรยก "หาดหนน" ในจงหวดเชยงใหมเรยก "ปวกหาด" ภาคกลางเรยก "หาด" ทางภาคใตเรยก "มะหาด" ในจงหวดตรงเรยก"มะหาดใบใหญ" จงหวดนราธวาสถงประเทศมาเลเซย เรยก "กาแย, ตะแป , ตะแปง" (วกพเดย สารานกรมเสร, 2557)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

2

1.2 วตถประสงค1.2.1 อทธพลของวธการสกดตางๆตอปรมาณสารฟนอลกโดยรวม

ของแกนมะหาด1.2.2 ศกษาอทธพลของวธการสกดตางๆตอปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอล

ของแกนมะหาด1.2.3 ศกษาอทธพลของวธการสกดตางๆ การตานอนมลอสระของแกนมะหาด

1.3 ขอบเขตงานวจย1.3.1อทธพลของวธการสกด , เมทานอล60% และเอทานอล60%

ตอปรมาณสารฟนอลกโดยรวมของแกนมะหาด1.3.2 อทธพลของวธการสกด , เมทานอล60% และเอทานอล60%

ตอการหาปรมาณสารออกซเรสเวอราทอลของแกนมะหาด1.3.3 อทธพลของวธการสกด , เมทานอล60% และเอทานอล60%

ตอการหาเปอรเซนตการตานอนมลอสระของแกนมะหาด

1.41.4.1 ทราบถงอทธพลของวธการสกดตางๆตอปรมาณสารฟนอลกโดยรวมของแกนมะหาด1.4.2 ทราบถงอทธพลของวธการสกดตางๆตอปรมาณสารออกซเรสเวอราทอล

ของแกนมะหาด1.4.3 ทราบถงอทธพลของ

ของแกนมะหาด1.4.4 สามารถใหคาปรกษาแกวสาหกจชมชนกลมแมบานเกษตรกรในวธการสกด

1.5หองปฏบตการเคม อาคาร 23504 คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยเทคโนโลย

ราชมงคลสวรรณภม ศนยหนตรา

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

3

2

2.1.

2.1.1มะหาด

: มะหาดวงศ : Moraceae

: Artocarpuslakoocha Roxb.: กาแย ขนนปา ตาแป ตาแปง มะหาดใบใหญ หาดหนน หาด

แหลงกาเนดและการกระจายพนธ : ปาดงดนทางภาคตะวนออกเฉยงใต ภาคตะวนตกเฉยงใต และภาคใตของประเทศไทย

ภาพ ก ภาพ ข2.1 ภาพ กตนมะหาด

ภาพ ขแกนมะหาด: http://www.healthyenrich.com/ครมมะหาด-ผวขาว/

(นราธวาส)มะหาดใบใหญ (ตรง)ArtocarpuslakoochaRoxb. Artocarpus

น (Himalayan) ในประเทศอนเดย เนปาล ศรลง ทางตอนใตของประเทศจน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

4

14-15( , 2551)ไดแก

1.ราก ใชเปนยาแกไข2.เปลอกตน ใชเปนยาแกไข3.

ดมหลายชนด อาจแบงกลมตามลกษณะโครงสรางเปนกลมสารฟลาโวนอยด (flavonoids) เชน อารโทรพน (artopin), นอรอารโทรพน (norartopin), ไซโคอารโทรพน (cycloartopin) และ นอรไซโคอารโทพน (norcycloartopin) เปนตน กลมสารสตลบนอยด (strilbenoids) ดในสารสกดจากมะหาดคอ สารออกซเรสเวอราทรอลกลมสารไทรเทอรพนอยด (triterpenoids)

(phenol) และ แทนนน (tannins)(antioxidant activity)

รจงมาจาก

ษาคณสมบตมากมายของสารสกดออกซเรสเวอราทร อนามาใช

1.ยาถายพยาธ (anthelmintic effect)5

1-2 ชอนชา

ความสมดลของการดดซมของพยาธ (osmotic imbalance)

2. (anti-virus) herpes simplex virus (HSV)เปน DNAvirus 2 ชนด คอ HSV1 และ HSV2 viral replicationระยะแรกและระยะหลงของ HSV1 และ HSV2 30 ไมโครกรมตอมลลลตร มผล

HSV1 (late viral protein synthesis) และการทดลองในหน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

5

พบวาการทา 10% oxyresveratrol cream จานวน 3 5% acyclovircream จานวน 5 cutaneous HSV inflection

3.ตานการอกเสบ (anti-inflammatory activity) proinflammatorymediators: nitric oxide (NO) ใน lipopolysaccharide (LPS)-activated macrophage cell ในหน

แสดงออก (expression) ของเอนไซม iNOS(inducible nitric oxide synthase)4. (tyrosinase)

ประสทธภาพในการย (skin-whitening agent)

5. (antioxidant) และเปนfree radical scavenger ปรมาณกลมไฮดรอกซล (hydroxyl)(Jagtap UB, et.al2010, and Likhitayawuid K et.al2006)

การทดสอบความเปนพษ(Chuanasa T, Phromjai J, Lipipun V, Likhitwitayawuid K,Suzuki M, PromyothinP,et al., 2008)

ขอมลจากสานกงานสมนไพร คณะเภสชศาสตรผงปวกหาดในปรมาณ 100 หรอ 200 2 10 พบวาไม

(LD50) คอ 5.74กรมตอกโลกรม และการใหหนขาวกนยา 1.25 กรมตอกโลกรม ไมเกดพยาธสภาพใดๆ สารออกซ

(transformation)เกอบทกตวเปนพษตอเซลลมะเรง (cancer cell line) methoxy group มาจบกบaromatic ring จะทาใหเกดพษ และการศกษาความเปนพษตอเซลลไตของลง (vero cell, ATCCCCL81) พบวาความเขมขนของสารออกซ cell viability ลดลงรอยละ 50 คอ237.5 ไมโครกรมตอมลลลตร(Chuanasa T, Phromjai J, Lipipun V, Likhitwitayawuid K, Suzuki M,PramyothinP,et al, 2008)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

6

2.1.2 สารประกอบฟนอลก

ชนด เชน ผก ผลไม สมนไพร เมลดธญพช

ตานอนมลอสระ (antioxidant)2.1.2.1 โครงสรางโมเลกลของสารประกอบฟนอล

วงแหวนเบนซน มหมไฮดรอกซล (-OH group)คอ สารฟนอล (phenol) ในโมเลกลประกอบดวยวงแหวนเบนซน 1 วงและหมไฮดรอกซล1 หม

phenols phenolic acids flavonoids

2.2โครงสรางของสารประกอบฟนอลก: http://www.foodnetworksolution.com/wiki/word/2585/phenolic-compound

สารประกอบฟนอล(phenolic acids)

(lignin)

สารประกอบไกลโคไซด (glycoside)(glucose) และพบวาอาจมการรวมตวกนระหวางสารประกอบฟนอลดวยกนเอง

(organic acid) รวมอยในโมเลกลของโปรตนอลคาลอยด (alkaloid) และเทอรพนอยด (terpenoid) เปนตน (ไพสขศานตวฒนา, 2551)

2.1.2.2

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

7

สารประกอบฟนอล พบอยในสวนของชองวางภายในเซลล (cell vacuole) ในและการ

ขยายพนธของพชแตละชนด-- เมลดธญพช เชน ขาว และ งา- ผลไม ไดแก องน สม กระทอน- พรกไทย พรก ขง กระเทยม หอมแดง หอมหวใหญ- ชา โกโก- พชหว ไดแก มนเทศ

- จนเจอรอล (Gingerol) พบใน ขง- ยจนอล (Eugenol) ใน กานพล ตะไคร ใบกระเพรา- แคปไซซน (Capsaicin) ในพรก- เคอควมน (Curcumin) ใน- แคทชน (Catechin) ในชา

2.3: http://isnff.org/files/ISNFF_Newsletter_March_2011-1.pdf

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

8

2.1.2.3 สรรพคณของสารประกอบฟนอล1) -

(antimutagrns)ดตอสขภาพ สามารถการปองกนโรคตางๆ โดยเฉพาะโรคหวใจขาดเลอด และมะเรง โดย

(free radical)การ เก

2) การถนอมอาหาร โดยใชเปนสารกนหนปองกนปฏกรยาการออกซเดชนของลพด (lipid oxidation)

3) การแบงชนดของสารประกอบฟนอล แบงเปน 3 ชนด ตามจานวน phenolrings

4) monocyclic phenols ม 1 phenol ring phenolcatechol hydro-quinone และ p-hydroxycinnamic acid

5) dicyclic phenols ม 2 phenol rings ไดแก flavonoids และ lignans6) polycyclic phenols หรอ polyphenol ไดแก lignins catechol

melaninsflavolans (condensed tannins)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

9

2.4โครงสรางทางเคมของสารประกอบฟนอลก: http://www.vcharkarn.com/vcafe/187082.1.3 อนมลอสระ

อนมลอสระ เป เสถยรทาใหเกดปฏกรยาไดว ปฏกรยากบโมเลกลตางๆในรางกาย เชน ไขมน โปรตน หรอ สารพนธกรรมจะกออนตรายแกรางกาย วา สภาวะความเครยด (oxidative stress) องกบการเกดโรคหลายชนด เชน โรคหลอดเลอดหวใจอดตน(arterosclerosis)เปนสาเหตรวมในการเกดโรคมะเรง(cancer) ทาให น (wrinkle) และเกดเปนจดส (lipofuscin spot) เปนตน(Papus,1998)

(O2) โดยปกตรางกายกจะมระบบตานอนมลอสระขจดตามธรรมชาตอยแลวแตถารางกายไดรบสารอนมลอสระจากภายนอกมากเกนไป ตวอยางเชนไดรบจากอาหารบางชนดจากขบวนการประกอบอาหาร เชน การ

งๆ มาใชอกอลตราไวโอเลต (ultraviolet) การแผรงส (radiation)

รงส x-ray หรอ หรออนมลอสระในรางกายลดลง เชน ผสงอายจะรวมตวกบ LDL หรอไปรวมตวกบสารบางชนดในรางกายเรา

โรคความแก เปน

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

10

กาซจากกาซจากทอไอเสยรถยนต ( ,2555)2.1.4 สารตานอนมลอสระ

เปนสารอนมลอสระ งรางกายสาร

ออกซเดชนโดยถกออกซไ เชน ไธออลกรดแอสคอรบกและโพลฟนอล

พชและสตวจงรกษาสมดลดวยระบบอนซบซอนของปฏกรยาโดยสารตานอนมลอสระดงเชนกลตาไธโอนวตามนซและวตามนอเชนเดยวกบเอนไซมอยางตวเรงปฏกรยาและเอนไซมซเปอร-ออกไซดรวมถงเพอร

ตานอนมลอสระในทางเภสชวทยาไดรบการศกษาอยางละเอยดในการรกษาภาวะโรคหลอดเลอดในสมองและโรค neurodegenerative disease

ผลตภณฑเสรมอาหารหลายชนด ดวยคาดหวงในการรกษาสขภาพและปองกนโรคอยางโรคมะเรงและโรคหลอดเลอดหวใจรวมไปถงโรคกลวความสง แมการศกษาในชวงแรกใหการสนบสนนถงการเตมสารตานอนมลอสร

เภสชภณฑ สารกนบดในอาหารและและชวยลดการสกกรอนของยางและแกสโซลนอกดวยในทางเคมสารตานอนมลอสระ คอ

ออกซเดชน กระบวนการออกซเดชนมไดหลายรปแบบ เชน กระบวนการออกซเดช

เหมนหน หรอกระบวนการออกซเดช

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

11

อนมลอสระจาพวกแรกเชน กรดแอสคอรบก(วตามนซ)โพลฟนอลฟลาโวนอยดและโทโคเฟอรอลในชวง 50 - 200 ลานปกอนโดยเฉพาะชวงยคจแรสซก

ลายยคจแรสซก โดยเปนสารเคมตอตานจาพวกรแอกทฟออกซเจน กระบวนการสงเคราะหแสงคาวาสารตานอนมลอสระ องกนการใชออกซเจนในปฏกรยาในชวงปลาย

19 20ประเดนการใชสารตานอนมลอสระในกระบวนการสาคญของอตสาหกรรม อาท การปองกนการสกกรอนของโลหะ กระบวนการวลคาไนเซชนของยาง และกระบวนการเกดสารประกอบพอลเมอร

อยางไรกดวธการดงกลาวกทาใหสามารถระบไดวาวตามนเอซและอ

ความเปนไปไดของกลไกการเกดปฏกรยาของสารตาน

ออกซไดซอยางงายได การวจยวาวตามนอสามารถปองกนการเกดกระบวนการเพอรอกซเดชนของ

สารตานอนม 2 ทาง คอ1) ลดการสรางอนมลอสระในรางกาย2)

(super antioxidation)2.1.4.1สารสกดจากเมลดองนสามารถตานอนมลอสระสงกวาวตามนซ 20 เทา และ

วตามนอ 50 เทา อยในกระแสเลอดไดนานถง72 วโมง สามารถปองกนและลดการทาลายจากสาร

2.1.4.2ชาเขยวสารตานอนมลอสระประเภทฟลาโวนอยดหลายชนด โดยเฉพาะสาร EGCG 20 เทา

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

12

2.1.4.3 มพโนจนอลส(pycnogenol)อนมลอสระสงกวาวตามนซ 15 เทา และวตามนอ 30 เทา

2.1.4.4โคเอนไซมควเทนสรางพลงงานในระดบเซลลใหทางานไดอยางปกต สามารถตานอนมลอสระสงกวาวตามนซ 8 เทา

2.1.4.5กรดอลฟาไลโปอคสารตานอนมลอสระธรรมชาตมบทบาทสาคญในการชวย

2.1.4.6งชวย

40-80 มลลกรม2.1.4.7วตามนซ- าเขยว บรอคโคล ผกคะนา

ยอดสะเดา ใบปอ ผกหวาน ผกกาดเขยว2.1.4.8 วตามน อ-

2.1.4.9ซลเนยม- วต2.1.4.10วตามน เอ-ลองสม เชน ผกตาลง ผกกวางตง ผกบง ฟกทอง มะมวงสก มะละกอสก มะเขอเทศ2.1.4.11 แคโรทนอยด(เบตาแคโรทนลทนและไลโคฟน) -

สเหลองสม เชน ผกตาลง ฟกทองมะละกอสก มะเขอเทศแมวาสารตานอนมลอสระไมสามารถแกไขความเ

สารตานอนมลอสระถอวามความสาคญตอกระบวนการออกซไดซอนมลอสระหรอสามารถ

(singlet oxygenquenching) จบกบ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

13

(metal chelation) หยดปฏกรยาการสรางอนมลอสระ(chain-breaking) (synergism) (enzyme inhibition)ปฏกรยาอนมลอสระ (ตรวฒนา ทรงจตสมบรณ,2548) เปนตนตวอยางแสดงการดกจบอนมลอสระดงสมการ

R• + AH RH + A•RO• + AH ROH + A•

โดย R• และ RO• คออนมลอสระและ AH คอสารตานอนมลอสระ2 แหลงไดแกสารตานอนมลอสระสงเคราะห

(synthetic antioxidants) และสารตานอนมลอสระจากธรรมชาต (natural antioxidants)อนมลอสระสงเคราะหเกดจากการกระบวนการสงเคราะหทางเคมโดยเปนสารประกอบฟนอลกไดแกโพรพลกาเลส (propylgallate)2-บวทลเลสไฮดรอกซลอะนโซล (2-butylated hydroxyanisole)3-บวทลเลสไฮดรอกซลอะนโซล (3-butylate hydroxyanisole) BHT (butylatedhydroxytoluene) และ

(tertiarybutylhydroquinone)สารสงเคราะห ดงกลาวนยมนามาใชใน

คงตวกวาสารตานอนมลอสระจาก-อนมลอสระจาก

วตามนซ (vitamin C)เปนสารตานอนมลอสระโตพลาซมวตามนอ (vitaminE) กลตาไธโอน (glutathione)เปน

สซมและเมมเบรนสวนสารตานglutathione peroxidase (GPX) glutathione reductaseและ glutathione

transferase (H2O2)เอนไซมsuperoxid dismutase (SOD) O2 เปน H2O2 แคโรทนอยดและยบควโนน (ubiquinones) เปนสารตานอนมลอสระสามารถปองกนอนมลอสระ

2ชนดไดแก

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

14

1) สารตานอนมลอสระสงเคราะห (synthetic antioxidants)สารประกอบฟนอ-ลกสงเคราะห 5 ชนดไดแก propyl gallate 2- butylatedhydroxyanisole 3- butylatehydroxyanisole,BHT และ tertiary butylhydroquinone

าสารสกดจากธรรมชาตแตมขอจากดของ

2)สารตานอนมลอสระจากธรรมชาต(natural antioxidants)

โภชนาการ (non-nutrient) งมโครงสรางเปนสารประกอบฟนอลกโดยเฉพาะกลมโพลฟนอลเชนแซนโธน (xanthone) (aromatichydroxyl) 2 (functional group) เ คญในการดกจบอนมลอสระไมใหไปกระตนหรอกอใหเกดปฏกรยาออกซเดชนไดโดยการใหอนมล H• แกอนมล

ortho-dihydroxyl phenol อยในOH• ในปฏก นคอ Fe2+และ Cu2+

(complex)(Sanchez-Moreno et al., 2000)

(in vitro) กลไกการทางานของสารตานอนมลอสระจาก งานของสารตานอนมลอสระพบวามหลาย

การทาใหโมเลกลของอนมลอสระมความเสถย าเกดโดยการใหไฮโดรเจนหรออเลกตรอนแกอนมลอสระ(เจนจรา จรมย และประสงค สหานาม,2554)

งานของซงเกลทออกซเจน (singlet oxygen quenching, O2)สารกลมแคโรทนอยด (O2)

ใหอยในรปทรปเปรท (triplet oxygen (3O2)แคโรทนอยดจานวน 1 โมเลกลสามารถทาปฏกรยากบซงเกลทออกซเจนไดถง 1,000 โมเลกล

สารตานอนมลอสระสวนใหญเปนสารประกอบฟนอลกตวอยางเชนtocopherol, tocotrienol, - oryzanol, oryzanols, caffeic acid, syring acid, rutin, (-)-

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

15

epicatechin, (+)-catechin, gallic acid, vanilic acid, p-coumaric acid, feruric acid และquercetinกมกใชตวทาละลายอนทรย

หรบสกดสารประกอบฟนอลก เมธานอลเอทานอลเอทธลอะซเตด เชนเฮกเซน(C6H14)อะซโตน (C3H6O)คลอโรฟอรม (CHCl3) ปโตรเลยมอเทอรหรอคารบอนเตตระคลอไรด (CCl4) งาน

มวงจะมสารตานอนมลอนมลอสระมหลายวธแตละวธมความจาเพาะตอสารแตกตางกนโดยปกตแลวการตรวจสอบมกจะ

2,2-diphenyl-1-picryhydrazyl (DPPH), ferric reducing /antioxidantpower (FRAP), trolox equivalents antioxidant capacity (TEAC), lipid peroxidation reducingpower และ metal chelating ability การตรวจหาชนดของสารตานอนมล

highperformanceliquid chromatography (HPLC)

วองไวในการเกดปฏกรยาจงสามารถจบกบโมเลกลภายในรางกายและสงผลใหเกดความเสยหายตอองคประกอบของเซลลแลวนาโดยเฉพาะโรคมะเรงอนมลอสระถกทา

นหากมปรมาณมากเกนไปรางกายจาสงเคราะหและม

เกดจากอนมลอสระและกลไกการปองกนจากสารตานอนมลอสระ(เจนจรา จรมย และประสงค สหานาม,2548)

แหลงกาเนดอนมลอสระ (sources of free radical)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

16

ารเมต ใหเกดอนมลใหเกดอนมลอสระไดแก

(auto-oxidation)ออกเปน 2ระยะคอ

1) (initiation) อสระโดยมแสงหรออณหภมเปนตวเรงปฏกรยาและความรอนเปนตวเรงกจะเกดปฏกรยาตอทาใหอนมล

2) เอนไซมไลโพออกซจเนส(lipoxygenase:LOX)ทาออกซ (polyunsaturated fatty acid) มเหลก(Fe2+)

ปจจยภายนอกรางกาย

งยาในกลมตานจลชพและตานมะเรงเชนบลโอไมซน(bleomycin)แอนทราไซคลนส(antracyclines) และเมโธทรเสต (methotrexate) ฏกรยาออกซเดชน (pro-oxidation) รงสการใชรงสรกษาโรคเชนรงสเอกซ (x-ray) รงสแกมมา (γ-ray) อาจเปนสาเหตทาให

(secondary reaction)

(NO) ไนโตรเจนออกไซด(NO2)และเพอรอกซไนไตรท (ONOO-) (SO2) และคารบอนเตรตระคลอไรด (CCl4) P-450ไฮดรอกซเจส (cytochrome P-450 hydroxylase) บไดบางในเซลลปอดและลาไสเลกทาใหเปนสาเหตของการสรางอนมลซเปอรออกไซดภายในเซลลดงกลาว

โอโซนโอโซนไมไดเปนอนมลอสระแตจดเปนสารออกซไดซ

สารตานอนมลอสระกบการปองกนโรค

อนมลอสระสงผลเสยตอรางกายและเปนสาเหตสาคญของการเกดโรคหลายชนดในมนษยเชนโรคมะเรงความดนโลหตสงเบาหวานรมาตอยดการศกษาขอมลทางเภสชวทยาของสารตานอนมล

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

17

อสระพบวามตวอยางการศกษา (saknusit chitmittaphap,2013)

2.1.5การวเคราะหหาความสามารถรวมในการตานออกซเดชน(TotalAntioxidant Capacity,TAC) (บงอร วงศรกษ และ ศศลกษณ ปยะวรรณ, 2549)

การวเคราะหหาความสามารถรวมในการตานออกซเดชนมาหลายวธไดแก1) การวเคราะหจากการสงผานอะตอมไฮโดรเจน (hydrogen atom transfer, HAT)

เชน- วธ Oxygen radical absorbance capacity assay (ORAC) และ- วธ Total radical – trapping antioxidant parameter (TRAP)

2) การวเคราะหจากการสงผานอเลก (Electron transfer, ET หรอ SET)เชน

- วธ Diphenyl – 1 – picrylhydrazyl assay (DPPH)- วธ The ferric reducing ability of plasma assay (FRAP)- วธ Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)

2.1.6การวเคราะหสารตานอนมลอสระดวยวธDPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) (บงอรวงศรกษ และ ศศลกษณ ปยะสวรรณ,2549)

2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging capacity assayDPPH radical โดย DPPH

radical ในตวไปแลว จะได DPPH-Hส การตรวจวดคณสมบตการเปนสารตานอนมลอสระเชงปรมาณ โดยว

517 DPPH30 นาทหากในระบบมสารตานออกซเดชนมาก สของสารละลายกจะลดลงอยาง

ดแก รอยละของ(% radical scavenging activity)

อนมลอสระได รอยละ 50 (IC50) หรอคาความสามารถในการตานออกซเดชน(AntioxidantEfficacy,AE)

เหมาะสาหรบวดสมบตการตานออกซเดชนในตวอยางสมนไพร แตไมเหมาะสาหรบวดสมบตการ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

18

DPPH ตองละลายในเมทานอล จงสงผลใหเกดการตกตะกอนของโปรตน วธการว ดสมบตกา DPPHTEAC และFRAP จะมความสมพนธดมาก (R2>0.99) กบการวดปรมาณฟนอลกเปนกลไกเดยวกนแตในบางกรณ

แตกตางกน%AA = [(A control – A sample)/A control] ×100

เ AcontrolคอAsampleคอ

คาIC50ไดจากการทาcalibration curveระหวาง%AAกบความเขมขน

DPPHโดยอนมล DPPH• เป มสมวงอยในรปอนมลอยแลว โดยไมตองทา เกดอนมล การวเคราะหเปนการวดความสามารถในการรดวซการวดทา กโทรโฟโตมเตอรวดการลดลงสารตาน 515 นาโนเมตร

ข คอ งาย ใชทดสอบฤ านอนมลจากธรรมชาต ยกเวนสารกลมแคโรทนอยดดดกลนแสงในยานเดยวกน

ขอเสย DPPH•ในเซลล หรอร สามารถแยกแยะจดอนดบอนมล มความไวสงได

นโครงสรางทางเคมของ DPPH• มลอสระจะถกบดสามารถเขาไปทาปฏกรยาขจดอนมลหรอเกดปฏกรยาชากวาความเป านอนมล

ร สามารถทาใหสของ DPPH• จางลงไดอกดวย2.2

Nasaponpovichit, Ampaiphrutivorapongkul, Maitreesuttajit, Chaiyavatchaiyasut andPimpornleelapornpisid(2010) ไดทาการศกษาพช 15 ชนดมาทดสอบ total phenolic content และหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH และ ABTSวธ TBARS total phenolic contentกบการหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ ABTS (r=0.721) ดเพอรออกซ

TBARS (r=0.659) 3 จาก

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

19

Tamarindusindica, Camellia sinensisและ ArtocarpuslakoochaIC50 = 0.9-0.16 mg/ml ดวยวธ DPPH คา TEAC มคา

เทากบ 1.72-2.83 mg Trolox/mgของตวอยาง วธ ABTS มคา IC50 = 0.64-1.22 mg/ml วธ TBARS มคาIC50อยระหวาง 0.01 ถง 3.20 3

และสามารถพฒนาตอไป นาไป

บงอร วงศรกษ และ ศศลกษณ ปยะสวรรณ(2549)ไดทาการ6

สาระสาคญจากผกแตละชนดโดยการหมกดวยเมทานอลนาน3วนแลวนาไประเหยแหงดวยความรอน60 2

เมทานอล 6 ชนดดวยวธDPPH assay 2,2–diphenyl–1–picrylhydrazyl (DPPH)

515นาโนเมตรเปรยบเทยบกบcontrolวตามนซและวตามนอ(trolox)

IC50เทากบ205.96ไมโครกรมตอมลลลตรและ101.79 ไมโครกรมตอมลลลตรตามลาดบรองลงมาคอสารสกดจากยานางใหคาIC50499.24ไมโครกรมตอมลลลตร ( )และ772.63 ไมโครกรมตอมลลลตร( )สาหรบวตามนซและวตามนอใหคาIC509.34ไมโครกรมตอมลลลตรและ15.91ไมโครกรมตอมลลลตร ตามลาดบสวนสารสกดจากผกอก4ชนดมคาIC50มากกวา1,000ไมโครกรมตอมลลลตรนน (hydrolysable tannin) สวนสารสกดยานางมสารประกอบฟนอลกและไดจดทาTLC fingerprints

บหรน พนธสวรรค (2556) ไดทาการศกษาอนมลอสระสารตานอนมลอสระและการ

โมเลกลเปนสาเหตใหเกดโรคตางๆมากมายไดแกโรคชราโรคมะเรงโรคหวใจขาดเลอดโรคความจา

สารตานอนมลอสระ

ปฏกรยาออกซเดชนการหยดปฏกรยาการสรางอนมลอสระการเสรม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

20

ความจาเพาะแตกตางกนปกตมกใชหลายวธรวมกนในกา ผลการการ

ทาใหเกดสโครมาโท ของเหลวสมรรถนะสงสวน

วธการทาลายอนมลอสระดพพเอชการฟอกสอนมลอสระเอบท-เอสและการวเคราะหความสามารถ

สะดวกรวดเรวและสามารถนาไปประยกตใชกบตวอยางไดหลายชนด

ปราณ ศรบรณพพฒนา, ลอชย บตคป, ศภชย สมปปโต(2551) ไดทาการศกษาเรสเวอด

โรคหวใจ และโรคมะเรง Artocarpusหลายชนด การสกดแกนSoxhlet

ปรมาณสารเรสเวอราโทลและรซอซนอลโดยใชคอลมน C-18 HPLC ปรมาณสารประกอบฟโนลกโดยรวมทดสอบโดยใชสารละลาย Folin-Ciocalteauดดกลนแสง และความสามารถในการตานออกซเดชนทดสอบกบสารอนมลอสระเสถยร DPPH นา

การสกดดว Soxhletใหปรมาณสารประกอบฟนอลกโดยรวม (18.32±0.61มลลกรมของกรดแกลลกตอมลลลตร) ปรมาณสารรซอซนอลและเรสเวอราโทล (86.15±2.32 และ105.09±4.15 มลลกรมตอลตร ตามลาดบ) เปอรเซนตการกาจดอนมลอสระเสถยร DPPH(81.55±0.98%) และกจกรรมการตานอนมลอสระ (1.33±0.03)อยางมนยสาคญทางสถต (p<0.05)ซอซนอลจากแกนมะหาด

ปยศร สนทรนนท (2551) ไดทาการศกษาสารตานอนมลอสระ

กลมไทออล (-SH) 6ชนด คอ ผลมะอก( SolanumStramonifoliumJacq.) ด อ ก ด า ห ล า ( Etlingeraelatior(Jack)R.M.Smith) ผ ล ห ว า(Syzygiumcumini) ดอกเขม (IxorachinensisLamk. Ixora spp.) ใบทามง (Litseapetiolata Hook. F) และใบเหม ยง (Gnetumgnemon) 4ชนด ค อ ปรมาณ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

21

สารประกอบฟนอลก ปรมาณเบตาแคโรทน ปรมาณวตามนอ และปรมาณวตามนซ จากผลการทดลองหาปรมาณสารตานอนมลอสระตางๆในเปลอกมะอ ใบ

นซจากใบทามงการหาคาความสามารถในการดกจบสารอนมลอสระ DPPH ดวยสารสกดตวอยางจากพช

ในพช โดยรายงานในรปของ IC50(ความเขมขนของสารประกอบฟนอลกดดกลนแสงของ DPPH ได 50%) พบวาสารสกดจากดอกดาหลาจะใหคา IC50

ผานไป30 นาทมคาเทากบ 3.02 (ไมโครกรม/มลลลตร GAE) ไปไดคลอโรมเทนและเอทธลอะซเตดสาร ทธลอะซเตด

มการดกจบอนมลอสระDPPH ความTLC : คลอโรฟอรม: เมธานอลในอตราสวน 2: 6: 2

กรวมอยอยางนอย 4 ชนด โดยสารประกอบฟนอลกในแถบลางสด มความสามารถในการดกจบอนมลอสระDPPHได จงนาไปศกษาตอดวยวธ LC-MSพบวาสารประกอบฟนอลกมจานวนมากผสมอยในตวอยาง สามารถระบไดวาสารประกอบฟนอลกในสารสกดดอกดาหลาเปนสารประกอบฟนอลกในกลมสารฟลาโวนอยด

(2549)ไดทาการศกษา8 ชนดไดแกเหยงกระบกแมงลกคาหเสอเอนอามะ

พอกมะสงและตมกาขาวดวยการนาสวนตางๆของพชมาสกดโดยใชตวทาละลาย เอทธลอะซเตด(ethyl acetate)และเอทานอล(ethanol) เอทธลอะซเตดและเอทานอล 36 สารสกด

DPPH เอทานอลเอทธลอะซเตด 19.8+2.3

ถง 51.4+1.3 (500ไมโครกรม/มลลลตร) มคา vitamin C equivalentantioxidant capacity (VCEAC) อยในชวง 4.4+7.2 ถง 105.9+4.3 มลลกรมวตามนซ/100 กรมสาร

ทานอลโดยใชวธFolin-Ciocalteuพบวา5.4+0.1 ถง 41.5+0.3 มลลกรมกรดแกลลก/กรม

0.6

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

22

3

วธดาเนนงานวจย

3.13.1.1

1) – วซเบลสเปกโทรโฟโตมเตอร (UV – Visible Spectophotometer, ThemoScientific Evolution 300)

2) (Rotary Evaporator)3) 4 ตาแหนง (JB 3002 รน G/FACT)4) 2 ตาแหนง(METTLERรน TOLEND)5)กรวยกรอง6)กระดาษกรองเบอร 1

7)8)ขวดโหลแกว9) HPLC

3.1.2 สารเคมและวตถดบ1) เมทานอลรอยละ 60(methanol: CH3OH), Merck2)เอทานอลรอยละ 60(ethanol: C2H5OH), Merck3) (distilled water)4) สารโฟลน– ซโอเคาทล(Folin - Ciocalteu’s reagent), Carlo erba5) สารมาตรฐานกรดแกลลก (gallic acid: C 7 H 6 O 5 ), Fluka6) โซเดยมคารบอเนต(sodium Carbonate : Na 2 CO 3 ), Carlo erba7) 2,2 –ไดฟนล – 1 –ไพครล– ไฮดราซล(2, 2 - diphenyl - 1 - picry - hydrazyl:

C18H12N5O6), ALDRICH

8)อะซโตไนไตร (acetonitile)9)สารมาตรฐานออกซเรสเวอราทอล (Oxyresveratrol)10)แกนมะหาด

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

23

3.2 วธดาเนนงานวจยนาแกนมะหาดมาบดใหละเอยด สกดโดย วธการ

คอเมทานอล60% และ เอทานอล60% หาปรมาณฟนอลกโดยรวมโดย– วซเบลสเปกโทรโฟโตมเตอรปรมาณออกซเรสเวอราทรอล และหาความสามารถใน

การตานอนมลอสระ

3.2.1 แผนผงงานวจย

แหงปรมาณ250 กรม

วธการสกดดวย นก วธการสกดดวยตวทาละลายอนทรย

วธการสกดดวยเมทานอล60% วธการสกดดวยเอทานอล60%

หาปรมาณฟนอลกโดยรวม

หาปรมาณของสารออกซเรสเวอราทรอล

หา

ความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

24

3.2.2วธการสกดสารจากแกนมะหาด60 องศาเซลเซยส ใช

เวลา 3 นาไปสกด3.2.2.1

250 ใหทวมผงแกนมะหาด (ปรมาณ 1ลตร) 7 วน ตามวธการของ Hojima et al.,1996

3.2.2.2วธการสกดดวยเมทานอลเขมขน 60%หาดแหงปรมาณ 250 กรม เตมตวทาละลายเมทานอลเขมขน 60% (ปรมาณ

1 ลตร) 7 วน ตามวธการของลอชย บตคป อนทรตาขานพรหม และศภชย สมปปโต, 2551สญญากาศ กอนนาไปวเคราะห

3.2.2.3 วธการสกดดวยเอทานอลเขมขน 60%250 กรม เตมตวทาละลายเอทานอลเขมขน 60% (ปรมาณ

1 ลตร) 7กอนนาไปวเคราะห

3.2.3มะหาด(ดดแปลงมาจากปฏวทยลอยพมาย, ทพวรรณ ผาสกลและราตรมงคลไทย, 2554)

3.2.3.1 การวเคราะหหาปรมาณฟนอลกโดยรวม3.2.2.1, 3.2.2.2 และ 3.2.2.3มาทาการตรวจหา

– ซโอเคาทล มาทาปฏกรยากบสาร– ฟา

3.2.3.2 การวเคราะหหาสารประกอบฟนอลกโดยรวม3.2.2.1, 3.2.2.2 และ 3.2.2.3มาหาปรมาณ

สารประกอบฟนอลกโดยรวมใหสารประกอบฟนอลก ทาปฏกรยากบสารละลายโฟลน– ซโอเคาทลโดยใชกรดแกลลกเปนสารมาตรฐาน

3.2.3.3 การเตรยมสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 1000 ไมโครกรม/มลลลตรการเตรยมสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 1000 ไมโครลตร/มลลลตร โดย

0.025 กรม ละลายในตวทาละลายเมทานอลเขมขน 60% เอทานอลเขมขน 60%

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

25

25 มลลลตร ปเปตตสารละลายมาตรฐานกรดแกลลกมา 0.2 ,0.4 , 0.6 , 0.8 และ 1.0 10

20, 40, 60, 80 และ 100 ไมโครกรมตอมลลลตร ตามลาดบ

3.2.3.4 การสรางกราฟมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 100 ไมโครกรม/มลลลตรการสรางกราฟมาตรฐานกรดแกลลกเขมขน 100 ไมโครกรม/มลลลตร มาเจอจาง

ดวยตวทาละลายตางๆใหมความเขมขนเปน 20, 40, 60, 80 และ 100 ไมโครกรม/มลลลตร และนา200 โฟลน-

ซโอเคาทล ปรมาตร 1 มลลลตร ผสมใหเขากนเปนเวลา 3 นาทและ เตม 7.5 %โซเดยมคารบอเนตปรมาตร0.8 25

30 3,300 g เปนเวลา 5 นาท กอนนาไป– 765 นาโนเมตร

3.2.3.53.2.2.1, 3.2.2.2 และ 3.2.2.3มาอยางละ 200

ไมโครลตร เตมสารละลายโฟลน- ซโอเคาทล 1 มลลลตร ผสมใหเขากนเปนเวลา 3 นาทและ 7.5% โซเดยมคารบอเนต ปรมาตร 0.8 25

3,300 g เปนเวลา 5 นาท กอนนาไปวดคาการดดกลน- วซเบล 765 นาโนเมตร เปรยบเทยบกบ

นเปนสารละลายมาตรฐาน และแสดงผลในหนวยของมลลกรมกรดแกลลก (GAE) ตอมลลลตรของสารสกด3.2.4 ของ

แกนมะหาดการหาปรมาณของสารออกซเรสเวอราทรอลทาตามวธของ Keremและคณะ(2004)โดยนาสาร

20 ไมโครลตร มาวเคราะหดวย reversed-phase HPLCแบบ diode array HPLC Shimadzu ( Shimadzu Cooperation Analytical&Measuring Instruments Division Kyoto, Japan) LC-20AD และระบบการฉดตวอยางอตโนมตรน SIL-10AD และตวตรวจวดรนSPD-M20A ดวยแสงอลตราไวโอเลต ใชคอลมน Apollo C 18 (Alltech)(ขนาดเสนผาศนยกลางขนาด 4.6 มลลเมตรและ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

26

ยาว 250 มลลเมตร มขนาดร 5 ไมโครเมตร) ใชสวนปองกนคอลมนInertsil ODS-3 (ขนาดเสนผาศนยกลางขนาด 4.0 มลลเมตร และยาว 10 มลลเมตร มขนาดร 5 ไมโครเมตร

- (2 : 97.8 ปรมาตรตอปรมาตร) ระกอบดวย 0.2% กรดฟอสฟอรก (สารละลาย A) และอะซโตรไนไตร-ไอออน (2 : 97.8 ปรมาตรตอปรมาตร) 0.2% กรดฟอสฟอรก (สารละลาย B)

0.6 มลลลตรตอนาท อณหภมคอลมน 40254 20% ของสารละลาย B จนถง 50% ของ

สารละลาย B ในเวลา 30 นาท และ60% ของสารละลาย B ในเวลา 35 นาท และ20% ของสารละลายB ในเวลา 40 20% ของสารละลาย B 55 หาปรมาณสารโดยเทยบกบสารมาตรฐานโดยใชสภาวะเดยวกน 3

ตาราง 3.1

เวลา(นาท)

สารละลาย A(เปอรเซนต)

สารละลาย B(เปอรเซนต)

อตราการไหล(มลลลตรตอนาท)

0 80 20 0.69 71 29 0.413 67 33 0.630 50 50 0.635 40 60 0.640 80 20 0.655 80 20 0.6

3.2.5การวเคราะห การวเคราะหหารอยละความสามารถในการตานอนมลอสระของสารสกดของแกนมะหาดโดยวธDPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrazyl)

3.2.5.1 การเตรยมสารละลาย 1.0มลลโมลาร DPPHDPPH (MW=349.33) หนก 0.0349กรม ละลายในเมทานอล95 % แลวปรบปรมาตรใหเปน 100

4 องศาเซลเซยส3.2.5.2 การหาเปอรเซนตการตาน DPPH ของสารสกด

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

27

นาสารสกดมาอยางละ 5 มลลลตรใสลงในขวดวดปรมาตรขนาด10 มลลลตร เตมสารละลาย 1.0มลลโมลาร DPPH ในเมทานอลเขมขนรอยละ 95%ปรมาตร 2

10 30 นาท และนาไปวดคา517 นาโนเมตร (เปน Asample)โดยทาการทดลองตวอยางละ 3

และนามาคานวณหาเปอรเซนตการตาน DPPH ของสารสกดจากแกนมะหาดโดยใช A517ของเมทา2 มลลลตรทาปฏกรยากบ 1.0 มลลโมลารในเมทานอลเขมขน

รอยละ 95% ปรมาตร 2 30 นาท และนาไปวดคา517 (Acontrol) ตามสมการ

รอยละการตานอนมลอสระ DPPH ของสารสกด = (Acontrol – Asample/ Acontrol) x 100Acontrolคอ คาการดดกลนแสงของสารละลาย DPPH ในเมทานอลAsample DPPH

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

28

4

ผลการทดลอง

จากการว เคราะหหาปรมาณสารฟนอลกโดยรวม สารออกซเรสเวอราทรอล และอทธพลของวธการสกด

ตางๆในการสกดสารฟนอลกโดยรวมสารออกซเรสเวอราทรอล และการวเคราะหหารอยละความสามารถในการตานอนมลอสระของสารสกดจากแกนมะหาดโดยวธDPPH

4.1จากการทดลอง , เมทานอล60% และ เอทานอล60%สารฟ

นอลกโดยรวม โดยรวม

สารละลายโฟลน-ซโอเคาทล และ 7.5% -สารสกดจากแกนมะหาดมสารฟนอลกโดยรวม4.2อทธพลของวธการสกดตาง4.2.1 ผลการศกษาวธการสกด ฟนอลก

จากการศกษาการสกดแกนมะหาดโดยวธการสกดตางๆดวย , เมทานอล60% และ เอทานอล60% โดยทาการสกดตวอยางละ 3 นาไปหาสารฟนอลกโดยรวมดวยการทาปฏกรยากบสารละลายโฟลน-ซโอเคาทล และเทยบกบกราฟมาตรฐานกรดแกลลก ( 4.1, 4.2, 4.3) ไดผล

4.4 4.4

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

29

4.1 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก (ละลาย)

ความเขมขน (µg/ml) คาการดดกลนแสง (765 nm)

0 0

20 0.2204

40 0.5288

60 0.8416

80 1.1497

100 1.435

4.1 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก ( )

0 20

765nm

29



0 0

20 0.2204

40 0.5288

60 0.8416

80 1.1497

100 1.435


y = 0.015x - 0.079R² = 0.999

20 40 60 80 100

ความเขมขนของสารละลายมาตรฐาน (µg/ml)

29



0 0

20 0.2204

40 0.5288

60 0.8416

80 1.1497

100 1.435


100 120


สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

30

4.2 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเมทานอล 60%เปนตวทาละลาย)


0 0

20 0.2053

40 0.3589

60 0.5447

80 0.7509

100 0.9598

4.2 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเมทานอล 60% เปนตวทาละลาย)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0 20

765nm

30



0 0

20 0.2053

40 0.3589

60 0.5447

80 0.7509

100 0.9598


y = 0.009xR² = 0.996

20 40 60 80 100


30



0 0

20 0.2053

40 0.3589

60 0.5447

80 0.7509

100 0.9598


100 120


สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

31

4.3 แสดงคาการดดกลนแสงของสารละลายมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเอทานอล60%เปนตวทาละลาย)


20 0.1546

40 0.3452

60 0.5542

80 0.7432

100 0.9095

4.3 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก (โดยใชเอทานอล 60% เปนตวทาละลาย)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

0

765nm

31



20 0.1546

40 0.3452

60 0.5542

80 0.7432

100 0.9095


y = 0.009xR² = 0.996

20 40 60 80 100


31



20 0.1546

40 0.3452

60 0.5542

80 0.7432

100 0.9095


100 120


สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

32

4.4 แสดงปรมาณสารฟนอลกโดยรวม วธการสกดตางๆ

ตวอยางสารสกด

วธสกดแสง±SD

ปรมาณสารฟนอลก

mg/g mg/100g

มะหาด

1.5577±0.0604 0.107 107

เมทานอล60% 1.2735±0.0170 0.1355 135.5

เอทานอล60% 1.2207±0.0362 0.1341 134.1

4.4 กราฟแสดงผลของวธการสกดตางๆในการสกดสารฟนอลกโดยรวมจากแกนมะหาด

020406080

100120140160

/100กรม)

32





mg/g mg/100g

มะหาด

1.5577±0.0604 0.107 107

เมทานอล60% 1.2735±0.0170 0.1355 135.5

เอทานอล60% 1.2207±0.0362 0.1341 134.1


107

135.5

เมทานอล 60% เอทานอล 60%

วธสกด

32





mg/g mg/100g

มะหาด

1.5577±0.0604 0.107 107

เมทานอล60% 1.2735±0.0170 0.1355 135.5

เอทานอล60% 1.2207±0.0362 0.1341 134.1


134.1

เอทานอล 60%

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

33

จากการทดลองพบวาการวเคราะหหาปรมาณสารฟนอลกโดยรวมจากแกนมะหาด โดยทาการสกดดวยวธการสกดดวย , วธการสกดดวยเมทานอล60% และวธการสกดดวยเอทานอล60%

-ซโอเคาทล และ 7.5%765 -ว

สเบลสเปกโทรโฟโ วธใชเมทานอล60% ให135.5 มลลกรม/100 กรม รองลงมาคอ เอทานอล60% และ

วธสกด ไดแก เมทานอล60%

4.3 ออกซเรสเวอราทรอล

นาสารสกดจากแกนมะหาดดวยวธสกดตางๆ โดยทาการสกดตวอยางละ 3 วเคราะหปรมาณสารออกซเรสเวอราโทลโดยคอลมน C-18 HPLCเทยบกบกราฟมาตรฐานสารออกซเรสเวอราทรอล

จากการศกษาการสกดสารออกซเรสเวอราทรอลการสรางกราฟมาตรฐาน ทาไดโดยการเตรยม200

1.00, 10.00, 50.00, 100.00และ500.00 มลลกรมตอลตร 4.5กราฟเสน พบวาการวเคราะหหาปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอลจากแกนมะหาดสารสกดจากแกน

60% ใหปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอล 11.49มลลกรม/ลตร รองลงมาคอ เอทานอล60% คอ 9.22 มลลกรม/ลตร คอ 7.11 มลลกรม/ลตร 4.6 4.5

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

34

4.5แสดงความเขมขนของสารละลายมาตรฐาน มลลกรมตอลตร

สารออกซเรสเวอราทรอลความเขมขน(มลลกรมตอลตร)

1 67.9510 262.0350 1362.52100 2759.89500 14938.1

4.5 กราฟมาตรฐานสารออกซเรสเวอราทรอล

y = 29.97x - 84.82R² = 0.999

-2000

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

16000

0 100 200 300 400 500 600

(×10

6 )

ความเขมขนของสารละลายมาตรฐานมลลกรมตอลตร

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

35

4.6ปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอล

วธการสกด mean ปรมาณสาร

ออกซเรสเวอราทรอล

(มลลกรม/ลตร)

ความเขมขน

(มลลกรม/ลตร)xปจจยการเจอจาง

1 2

วธการ 132.77 123.94 128.355 7.11 71.12

วธการสกดดวยเอทานอล 196.83 186.23 191.53 9.22 9,219.03

วธการสกดดวยเมทานอล 263.96 255.03 259.495 11.49 11,468.27

4.5 กราฟแสดงผลของวธการสกดตางๆในการสกดสารออกซเรสเวอราทรอลจากแกนมะหาด

02468

101214

ปรมา

ณสาร

ออก

ซเรส

เวอรา

ทรอล

(มลล

กรม/

ลตร)

วธการสกด

ปรมาณสาร ออกซเรสเวอราทรอล(มลลกรม/ลตร)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

36

4.4

ตานอนมลอสระของสารสกดจากแกนมะหาดโดยวธDPPH

นาสารสกดจากแกนมะหาดดวยวธสกดตางๆ โดยทาการสกดตวอยางละ 3DPPH 30 517 นาโนเมตรนาคามาคานวณหารอยละความสามารถในการตานอนมลอสระ

จากผลการทดลองพบวาการหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH โดย1.0 มลลโมลารDPPH แลวนาไปวดคาการ

517 -วสเบลสเปกโทรโฟโตมเตอร พบวา สารสกดจากแก 60% มรอยละการตานอนมลอสระสงสดคอ รอยละ 47.87±0.017360% คอ 47.67±0.0051 คอ37.49±0.3291 4.6 4.6

4.7แสดงการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH

517nm

รอยละการตานอนมลอสระA control = 2.9338

A sample

มะหาด+ 1.8339±0.0097 37.49±0.3291

มะหาด+เมทานอล 1.5294±0.0006 47.87±0.0173

มะหาด+เอทานอล 1.5353±0.1706 47.67±0.0051

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

37

4.6กราฟแสดงรอยละการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH จาแกนมะหาด

37.49

0

10

20

30

40

50

60

มะหาด+

รอยละการตานอนมลอสระ

37


37.49

47.87 47.67

มะหาด+ มะหาด+เมทานอล มะหาด+เอทานอลวธการสกด

37


47.67

มะหาด+เอทานอล

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

38

5

สรปผลการทดลอง

จากการวเคราะหปรมาณปรมาณสารฟนอลกโดยรวมสารออกซเรสเวอราทรอลและความสามารถในการตานอนมลอสระจากแกนมะหาด อทธพลของวธการสกดตางๆในการสกดฟนอลกโดยรวมสารออกซเรสเวอราทรอลและความสามารถในการตานอนมลอสระจากแกนมะหาด

5.1 สรปผลการทดลอง5.1.1 ผลการศกษาวธการสกด ในการสกดสารประกอบฟนอลกโดยรวม

จากการวเคราะหหาปรมาณสารประกอบฟนอลกโดยรวม จากแกนมะหาด โดยนาสารสกดจากแกนมะหาด วธการสกดตางๆมาทาปฏกรยากบสารโฟลน –

765 – วสเบลสเปกโทรโฟโตมเตอร พบวา สารสกดจากแกนมะหาดวธสกดดวยเมทานอล60 % ใหปรมาณ

(135.5มลลกรม/ 100 กรม) รองลงมา ไดแก เอทานอล60 % (134.1มลลกรม/ 100 กรม)และ (107มลลกรม/ 100กรม) ตามลาดบ 5.1

5.1.2ผลการศกษาวธการสกดตางๆในการสกดสารออกซเรสเวอราทรอลจากการวเคราะหหาปรมาณสารออกซเรสเวอราทลอลวธการสกดแกนมะหาดดวย

C-18HPLC

ทานอล60% ใหปร 11.49 มลลกรม/ลตร รองลงมาคอ เอทานอล60% คอ 9.22 มลลกรม/ 7.11 มลลกรม/ลตร ตามลาดบ 5.1

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

39

5.1.3 DPPHจากการทดลองจากผลการทดลองพบวาการหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ

DPPH 1.0 มลลโมลารDPPH แลวนาไป517 -วสเบลสเปกโทรโฟโตมเตอร

พบวา สารสกดจากแก 60% มรอยละการตานอนมลอสระสงสด คอ รอยละ 47.87นอล60% คอ 47.67 % 37.49 %ตามลาดบ 5.1ตาราง 5.1 แสดงวธการสกด,ปรมาณฟนอลกโดยรวม ปรมาณออกซเรสเวอราทรอลและรอยละ

การตานอนมลอสระ

วธการสกด ปรมาณฟนอลกโดยรวมมลลกรมตอ 100 กรม

ปรมาณออกซเรสเวอราทรอลมลลกรมตอลตร

รอยละการตานอนมลอสระ

107 7.11 37.49±0.3291เมทานอล 135.5 11.49 47.87±0.0173เอทานอล 134.1 9.22 47.67±0.0051

5.2 ขอเสนอแนะ

1)

2) เพราะจะชวยรกษาสภาพของ

3)เหมาะสมของสาร

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

40

4)

5) สกดดวย 60% และเมทานอล60% มาวเคราะหปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอลโดยใช HPLC พบวาสารสกดแกนมะหาดวธสกดเปนเวลา 7 วนมปรมาสารออกซเรสเวอราทรอล7.11 mg/Lนอลและเมทานอลเปนเวลา 7 วน มปรมาณสารออกซเรสเวอราทรอล9.22 และ 11.49 mg/L

ขาว อยางไรกตามสาหรบการผลตในระดบวสาหกจชมชนกลมแมบานเกษตรกร ควรใชการสกด

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

41

บรรณานกรม

. 2551. .. สานกพมพแหงจฬาลงกรณมหาวทยาลยหนา 1-113

เจนจราจรมยและประสงคสหานาม.2554.การเกดปฏกรยา. 1 1 พ.ค.-ส.ค.

ตรวฒนา ทรงจตสมบรณ. 2548.สารตานอนมลอสระ จาเปนตอรางกายอยางไร. นตยสารหมอชาวบาน. เลม:316,08

บงอร วงศรกษและศศลกษณ ปยะสวรรณ.2549. .คณะเภสชศาสตร.มหาวทยาลยมหดล

บหรน พนธสวรรค.2556.อนมลอสระ ..มหาวทยาลยพะเยา

ปราณ ศรบรณพพฒนา, ลอชย บตคป, ศภชย สมปปโต. 2551.อทธพลของวธการสกดตอ. คณะเทคโนโลย.

มหาวทยาลยมหาสารคามปยศร สนทรนนท.2551.สารตานอนมลอสระในดอกดาหลา.วทยาศาสตรมหาบณฑต สาขาวชา

เคม.มหาวทยาลยสงขลานครนทร.1-129. 2555.อนมลอสระ. สถาบนวจยโภชนาการ. มหาวทยาลยมหดล

.2549. DPPH และปรมาณสารฟนอลรวมของสารสกดพชสมนไพรไทยบางชนด.คณะเภสชศาสตร.มหาวทยาลยอบลราชธาน.76-88

Chuanasa T, Phromjai J, Lipipun V, Likhitwitayawuid K, Suzuki M, Pramyothin P, et al. 2008.Anti-herpes simplex virus (HSV-1) activity of oxyresveratrol derived from Thaimedicinal plant: Mechanism of action and therapeutic efficacy on cutaneous HSV-1inflection in mice. Antivir Res; 80(1): 62-70

Jagtap UB, Bapat VA. 2010. Artocarpus:A review of its traditional uses. Phytochemistryandxpharmacology. J Ethnopharmacol; 129(2): 947-953

Lorez P, Roychowdhury S, Engelmann M, Wolf G and Horn TFW. 2003. Oxyresveratrol and

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

42

resveratrol are potent antioxidants and free radical scavengers: effect on nitrosativeand oxidative stress derived from microglial cells. Nitric oxide 9; 9(2): 64-76

Nasaponpovichit, Ampaiphrutivorapongkul, Maitreesuttajit, Chaiyavatchaiyasut and Pimpornleelapornpisid. 2010. Phenolic content and in vitro inhibitory effects on oxidation andprotein glycation of some thai medicinal plants. Pak. J. Pharm. Sci, Vol.23. No.4.October. 403-408

Varani J, Warner RL, Gharaee-Kermani M, Phan SH, Kang S, Chung JH, Wang ZQ, Datta SC,Fisher GJ, Voorhees JJ. Vitamin A antagonizes decreased cell growth and elevatedcollagen- degrading matrix metalloproteinases and stimulates collagen accumulation

in naturally aged human skin. J Invest Dermatol 2000, 114, 480–486.นรนาม. (2557). “ลกษณะโครงสรางของสารออกซเรสเวอราทอล”.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Oxyresveratrol.svg.( สบคน 18 มถนายน2557)

เพญพชญา เตยว. (2551). “สารสกดจากแกนมะหาด”.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.thairath.co.th/news.php?section=agriculture&content=96902.(19 มถนายน 2557)

วกพเดย สารานกรมเสร. (2557). “มะหาด”.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://th.wikipedia.org/wiki/มะหาด.( สบคน 13 มถนายน 2557)

วกพเดย สารานกรมเสร. (2557). “ออกซเรสเวอราทอล”.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://th.wikipedia.org/wiki/oxyresveratrol.( สบคน 13 มถนายน 2557)

Sanchez-Moreno et al.2000.อนมลอสระและสารตานอนมลอสระ:เกดปฏกรยา.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.journal.ksu.ac.th/10เจนจรา.pdf( สบคน 4 เมษายน2557)

กลยา สภาเจรญ.2556 . .สาขาวชาวทยาศาสตรและเทคโนโลยการอาหาร.มหาวทยาลยพายพ

เจนจราจรมย และประสงคสหานาม.2554.การเกดปฏกรยา. 1 1 พ.ค.-ส.ค.

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

43

ตรวฒนา ทรงจตสมบรณ. 2548 .สารตานอนมลอสระ จาเปนตอรางกายอยางไร. นตยสารหมอชาวบาน. เลม:316,08

,เบญจวรรณสงพงษ,กญญาเกดศรและภดท เกดศร.2555 .. สาขาวชาเคมคณะวทยาศาสตร. มหาวทยาลยราชภฏอบลราชธาน

บงอร วงศรกษและศศลกษณ ปยะสวรรณ.2549. .คณะเภสชศาสตร.มหาวทยาลยมหดล

บหรน พนธสวรรค.2556.อนมลอสระ .ม.มหาวทยาลยพะเยา

ปฏวทยลอยพมาย,ทพวรรณผาสกลและราตรมงคลไทย.2554 .อสระและสารประกอบฟนอลกรวมของเปลอกผลไม.ว. วทย. กษ. 42(2)(พเศษ): 385-388

ปรยานชอนทรรอด.2551. มาณสารประกอบฟนอลรวมของสวนสกดจากตนเรวหอมและวานสาวหลง. สาขาวชาชวเคมคณะวทยาศาสตร.มหาวทยาลยบรพา

ปยศร สนทรนนท.2551.สารตานอนมลอสระในดอกดาหลา.วทยาศาสตรมหาบณฑต สาขาวชาเคม.มหาวทยาลยสงขลานครนทร.1-129

พรรณทพยหอศรสมพนธ. 2550.Solid Phase Extraction .วารสารLabtoday. 14(54). 54 – 58.

. 2555 .อนมลอสระ. สถาบนวจยโภชนาการ. มหาวทยาลยมหดลมณชยเดชสงกรานนท.2556 . .คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย.

มหาวทยาลยราชภฏสวนดสตมณฑนานครเรยบและไมตรสทธจตต.2555 .

ตอสขภาพ. NarsuanPhayao Journal.Vol 5, No.1. Jan-Apr 2012.2549. DPPH และปรมาณสารฟ

นอลรวมของสารสกดพชสมนไพรไทยบางชนด.คณะเภสชศาสตร.มหาวทยาลยอบลราชธาน.76-88

วนทนสวางอารมณ. 2542.การเจรญและการเตบโตของพช. 2. กรงเทพฯ: มหาวทยาลยราชภฏบานสมเดจเจาพระยา

. 2551.. ภาควชาพชสวนคณะ

เกษตร มหาวทยาลยเกษตรศาสตร. กรงเทพฯ

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

44

วราภรณฉยฉาย. 2552. . นครสวรรค :มหาวทยาลยราชภฏนครสวรรค

, .2553 .สารตานอนมลอสระและปรมาณ(Suaedamaritima).ว. วทยาศาสตรเกษตร.

ป 41 3/1 (พเศษ) กนยายน-ธนวาคม 2553.621-624วไลพร ปองเพยร.2552.ความสมพนธระหวางความสามารถในการตานอนมลอสระของแอนโท-

. สาขาวทยาศาสตรศกษา(เคม).มหาวทยาลยราชภฏเพชรบรณ

ศศวมล แสวงผล, เชฏฐ สาทรกจ และทยา เจนจตตกล. 2546 . สารานกรมผลตผลและผลตภณฑจากพชในซปเปอรมารเกต ฉบบคอมพวเตอร. สานกงานกองทนสนบสนนการวจย และภาควชาพฤกษศาสตร คณะวทยาศาสตร มหาวทยาลยมหดล. กรงเทพฯ.

สถาบนวจยพชสวน.2538 .โกโก. กรมวชาการเกษตรจตจกรศนยวจยพช.กรงเทพฯสนจยชารดาและ ชลดาธรการณวงศ.2553.

เทคนคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสง.คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลยมหาวทยาลยราชภฏนครสวรรค

Adamson Sheryl, Alyson Mitchell, Ronald Prior, Guohua Cao, Pieter Jacobs, Bart G. Kremers,John Hammerstone, Robert Rucker, Karl Ritter and Harold Schmitz. 1999.HPLCMethod for the Quantification of Procyanidins in Cocoa and Chocolate Samples andCorrelation to Total AntioxidantCapacity .Agricultural and FoodChemistry:4184-4188

A.H. Azizah, N.M. NikRuslawati T. andSwee Tee.1999.Extraction and characterization ofantioxidant from cocoa by-products.Food Chemistry 64:199-202

Aleksandra Szydowska and Czerniak.2007.Determination of antioxidant capacities ofvegetable oils by ferric-ion spectrophotometric methods.Food Chemistry:899-905

AnamariaHosu,Vasile-MirceaCristea and Claudia Cimpoiu.2013.Analysis of total phenolic,flavonoids, anthocyanins and tannins content in Romanian red wines: Prediction ofantioxidant activities and classification of wines using artificial neuralnetworks.Food ChemMay;113-118

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

45

Arun K. Mishra and Amrita Mishra.2011 .Effects of Calendula Essential Oil-Based Cream onBiochemical Parameters of Skin of Albino Rats against Ultraviolet BRadiation.,Sci Pharm. 80: 669–683

Bravo L. 1998. Polyphenols: Chemistry, Dietary Sources, Metabolism, and NutritionalSignificance.Nutrition Reviews56 (11) : 317–333

Skoog D. A., West D. M., Holler F. J. and Crouch S. R.,:An Introduction,7th ed., AnalyticalChemistry Chapters 21 and 22, pp. 547-592.

Eugenio José, Garcia Tatiane,LuizaCadorin,OldoniSeverino, Matias de andAlencarAlessandraReis.2012.Antioxidant Activity by DPPH Assay of PotentialSolutions to be Appliedon Bleached Teeth.Brazillian dental journal:22-27

Fujiki, H., Suganuma, M., Okabe, S., Sueoka, N., Komori, A., Sueoka, E., Kozu, T., Tada, Y.,Suga, K., Imai, K. and Nakachi, K.1998.Cancer inhibition by green tea.Mutat. Res.402: 307-10

HabsahMohamad and FaridahAbas.2004.DPPH Free Radical Scavenger Components from theFruits of AlpiniarafflesianaWall.ex. Bak. (Zingiberaceae). Journal of NaturalProducts, 2005:811-815

Hara, I.1997.Actions of tea polyphenols in oral hygiene, antioxidant-Food suppl. Hum. Health.pp. 429-43

Johnson, M.K. and Loo, G. 2000.Effets of epigallocatechingallate and quercetin on oxidativedamage to cellular DNA. Mutat. Res. 459: 211-80

Maria Angeles, Martin Luis and Goya Sonia Ramos.2013.Potential for preventive effects ofcocoa and cocoa polyphenols in cancer. Food chem:336-351

Marina Bubonja-SonjeJasminka and GiacomettiMaja Abram.2011.Antioxidant andantilisterialactivity of olive oil, cocoa and rosemary extract polyphenols. Foodchem:1821-1827

Sakanaka, S.1997.Green tea polyphenols for prevention of dental caries, in, Chemistry andApplication of Green Tea.CRC Press. pp. 87-99

Sandra ElKhori, J.R. Jocelyn, Pare Jacqueline and M.R. Be´langerElevinaPe´rez.2006.Themicrowave-assisted process (MAPTM1): Extraction and determination of fat fromcocoa powder and cocoa nibs. Food chem:1110-1114

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

46

The Department of Chemistry University of Kentucky.2005.Molecular AbsorptionSpectroscopy: Determination of Iron With 1,10-Phenanthroline.Department ofChemistry:547-592

Yoshino K. 1994.Antioxidative effects of black tea theaflavins and thearubigin on lipidPeroxidationofratliver homogenates induced by tert-butyl hydroperoxide. Biol. Pharm.Bull. 17:146-9

.2548.การเตรยมตวอยางโดยวธ Solid Phase Extraction . [ออนไลน].เขาถงไดจาก: www.Sithiporn.co.th/ newweb/newletter.( 26 มนาคม 2557)

นรนาม.2552.การศกษาความเปนไปไดของการผลตชาเขยวและชาอหลงแบบซองในจงหวดเชยงราย.[ออนไลน].เขาถงไดจาก :http://fic.nfi.or.th/food/upload/pdf/11_498.pdf.( 4 เมษายน 2557)

นรนาม.2557.สารตานอนมลอสระชวยตานโรค.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.stou.ac.th/study/sumrit/12-55(500)/page2-12-55(500).html.(4 มนาคม2557)

นรนาม.2557.DPPH assay.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.foodnetworksolution.com/wiki/word/3200/dpph-assay.( สบคน4มนาคม 2557)

นรนาม.2557.2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH).[ออนไลน].เขาถงไดจาก:https://sites.google.com/site/sasinankongvanich/home/bth-thi2-xeksar-laea-ngan-wicay-thi-keiywkhxng.( 5 มนาคม2557)

พมพเพญ พรเฉลมพงศ และนธยา รตนาปนนท.2557.โพลฟนอล.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://tuvayanon.net/6b5308081951.html.( สบคน 4 เมษายน 2557)

วารสารของสมาคมการแพทยอเมรกน. 2556.ประโยชนของโกโก. [ออนไลน].เขาถงไดจากhttp://my.dekd.com/goodday2553/blog.( สบคน 26พฤศจกายน 2556).

สานกงานขอมลสมนไพร คณะเภสชศาสตร มหาวทยาลยมหดล.2557.สขภาพ.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://medplant.mahidol.ac.th.( 4 เมษายน2557)

อภชย อารยะเจรญชย.2557.สารตานอนมลอสระ.(ออนไลน). http://th.wikipedia.org/wiki/สารตานอนมลอสระ.( : 4 มนาคม 2557)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

47

Baldessarini and Greiner.1973.ทาความรจกกบPolyphenolผลตภณฑเสรมอาหารและวตามนจากอเมรกา.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://tuvayanon.net/6b5308081951.html. ( 4 เมษายน 2557)

Deng and Tao;Gomes and Gomes et al.1995.polyphenol.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.foodnetworksolution.com/wiki/word/3145/โพลฟนอล.( สบคน 4เมษายน 2557)

Dieter Schneider.2007. .[ออนไลน].เขาถงไดจาก: http://www.no-poor.com/giffarine_ck.html.( 4 เมษายน 2557)

MC Carty 1997:Mukhtar and Ahmad. 1999.Zellular Gen Active.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.startstemcell.com/. ( สบคน 4 เมษายน 2557)

Mukhtar and Ahmad.1999.Green Tea Polyphenols Induce Differentiation andProliferationin Epidermal Keratinocytes.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://jpet.aspetjournals.org/content/306/1/29.full.pdf.( 4 เมษายน 2557)

Nakachi et al.1998.Role of the Green Tea CatechinEpigallocatechinGallate in BreastCancer Treatment and Prevention.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:wwwwin.cord.edu/fnd/memolde/GreenTeaBreastCancer.doc.( 4 เมษายน2557)

Saknusitchimittaphap.2013 . .[ออนไลน]. เขาไดถงจากhttp://www.lovehealthier.blogspot.com/2013/05/blog-post.html. (26 พฤศจกายน 2556 )

Sanchez-Moreno et al.2000.อนมลอสระและสารตานอนมลอสระ:เกดปฏกรยา.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.journal.ksu.ac.th/10เจนจรา.pdf( สบคน 4 เมษายน2557)

Taraphderet al.2001.PhosphateSolubilization and Mobilization in Soil ThroughMicroorganisms Under Arid Ecosystems.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://cdn.intechopen.com/pdfs-wm/36245.pdf.( 4 เมษายน 2557)

Weisburger.1999.Antioxidant activities and polyphenolic contents of fifteen selectedplant species from the Amazonian region.[ออนไลน].เขาถงไดจาก:http://www.aseanbiodiversity.info/Abstract/51006402.pdf.( 4 เมษายน2557)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

48

Yokosawaet al.2002.Antioxidant Effect of Wen-Pi-Tang and Its Component Crude Drugs onOxidative Stress.[ออนไลน].เขาถงได

จาก:http://www.encognitive.com/files/Antioxidant%20Effect%20of%20Wen-Pi-Tang%20and%20Its%20Component%20Crude%20Drugs%20on%20Oxidative%20Stress.pdf.( สบคน 4 เมษายน 2557)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ภาคผนวกก

ขอมลการดดกลนแสงสาหรบการหาปรมาณสารโพลฟนอลตาราง ก-1 การวเคราะหหาปรมาณฟนอลกโดยรวม


ตวทาละลาย

1 2 3 ±SD

A 765 mg/g A 765 mg/g A 765 mg/g A 765±SDปรมาณสารฟนอลก

(mg/g)ปรมาณฟนอกลก

(mg/100g)

มะหาด

1.4897 0.1026 1.5782 0.1084 1.6052 0.1101 1.5577±0.0604 0.107 107

เมทานอล60% 1.2823 0.1364 1.2843 0.1366 1.2539 0.1334 1.2735±0.0170 0.1355 135.5

เอทานอล60% 1.1854 0.1303 1.219 0.1339 1.2577 0.1382 1.2207±0.0362 0.1341 134.1

หมายเหต y = 0.0153x – 0.0799 (R2 = 0.9997)กราฟมาตรฐานของตวทาละลายเมทานอล60% คอ y = 0.0094x – 0 (R2 = 0.9963)กราฟมาตรฐานของตวทาละลายเอทานอล60% คอ y = 0.0091x – 0 (R2 = 0.9962)

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

ตาราง ก-2 การวเคราะหหาความสามารถในการตานอนมลอสระดวยวธ DPPH

517 nmเปอรเซนตการตานอนมลอสระ ±SD

A control = 2.9338A sample

1 2 3 1 2 3 Abs 517 nm±SDเปอรเซนตการตานอนมล

อสระ±SD

มะหาด+ 1.823 1.8372 1.8416 37.86 37.38 37.23 1.8339±0.0097 37.49±0.3291

มะหาด+เมทานอล 1.529 1.5292 1.5299 47.88 47.88 47.85 1.5294±0.0006 47.87±0.0173

มะหาด+เอทานอล 1.5311 1.5338 1.5409 47.81 47.72 47.48 1.5353±0.0051 47.67±0.1706

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

51

00.20.40.60.8

11.21.41.6

0

765nm

ภาคผนวก ข

1.

-1 กราฟมาตรฐานกรดแกลลก

1765 นาโนเมตร ไดคาการดดกลนแสงเทากบ 1.4897

สมการ y = 0.0153x – 0.0799 (R2 = 0.9997) x

y = 0.0153x – 0.07991.4897 = 0.0153x – 0.0799

x = . ..x = 102.5882ไมโครกรมตอลตร

สารละลาย 1 มลลลตร มฟนอลก102.5882 ไมโครกรมตอลตรสารละลาย 0.2 มลลลตร มฟนอลก102.5882 × 0.2 = 20.5176 ไมโครกรม

51

y = 0.015x - 0.079R² = 0.999

0 20 40 60 80 100ความเขมขนของสารละลายมาตรฐาน (µg/ml)


1.



สมการ y = 0.0153x – 0.0799 (R2 = 0.9997) x

y = 0.0153x – 0.07991.4897 = 0.0153x – 0.0799



51

100 120ความเขมขนของสารละลายมาตรฐาน (µg/ml)


1.



สมการ y = 0.0153x – 0.0799 (R2 = 0.9997) x

y = 0.0153x – 0.07991.4897 = 0.0153x – 0.0799



สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

52

สารสกด 0.2 มลลลตร มฟนอลก20.5176 ไมโครกรมสารสกด 50มลลลตร มฟนอลก . ×. = 5.1294 มลลกรมตอกรม

1 กรม จะมฟนอลก5.1294มลลกรมตอกรม

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

53

ภาคผนวก ค

รปภาพในการทดลอง

-1 ผงแกนมะหาด

-2 -3

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

54

ภาพ -4 DPPH -5สารละลายโฟลน-ซโอเคาทล

-6 สารละลายโซเดยมคารบอเนต -7 กรดแกลลก

-8 – วซเบลสเปกโทรโฟโตมเตอร -9

สวพ.

มทร.ส

วรรณภ

ม

55

HPLC

55

HPLC

55

HPLC

Documents

รายงานการวิจัย อิทธิพลของ ...research.rmutsb.ac.th/fullpaper/2556/2556239509818.pdf · 2016-10-26 · สารสกัดจากแก่นมะหาดประกอบไปด้วย