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PRESENTADO POR:• RAMIREZ LEDESMA
MARIA JANETH
COLORACIONES ESPECIALES
PASOS PREVIOS
F-Dsh-A
“ESPECIALES” ?
agente bacteriano y problemas patológicos
Coloraciones histológicas especiales
Estructuras específicas en los tejidos, (tipo de agentes infecciosos), la forma de agrupación y
forma.
PAS Griedley
Glenn
Verde metilo pironina
Brown Brenn
Zielh Nielsen
Mucicarmin Giemsa
plata metenamina
Waysson Warthin Starry
Perls o azul de Berlín…
COLORANTES ?
PLATA METENAMINA: hongos , otros usos
para el dx histológico de la membrana basal en
biopsia renal.
Rutina en algunos laboratorios :
sospecha etiología infecciosa
VERDE METILO
PIRONINA
BROWN BRENN
PLATA METENAMINA
GRAM : detecta gérmenes y/o bacterias gram+ y gram- :
diferenciarEl uso y difusión de esta técnica
ha sido recomendada como método rápido y fácil en la
detección de bacteriemia en pacientes críticos.
Las bacterias Gram positivas, (Lactobacillus acidophilus) retienen el tinte y se colorean de azul.
Giemsa : gram+
PAS: CHO, (glucógenos), mucopolisacáridos neutros, mucoproteínas, los hongos,
entre otros.
ZIELH NIELSEN: BK
Perls o azul de Berlín:
Fe
TINCIÓN GIEMSA
Hematopatología: elementos hematolinfoides, incluyendo células cebadas.
Se puede usar para evidenciar HP en el moco superficial de la mucosa gástrica.
VERDE METILO PIRONINA FENICADA: gram -, color rojo vivo
y los núcleos verde azuloso.
LEVADITIS(espiroquetas): en sus componentes el nitrato de plata que identifica bacterias color oscuro.
GRIDLEY: hongos y Endoameba histolítica.
MUCICARMIN DE MAYER: mucoproteínas y
Criptococcus y se usa en centros especializados y en
infecciones.
WARTHIN STARRY Y WAYSSON : biopsias gástricas (HP)
Carnoy's, inmunohistoquímica, las que se comparan con las muestras histológicas fijadas en formol al 10 % y coloreadas con H/E(…mayor sensibilidad ).
Cohen utilizó una nueva técnica , +rápida, -costosa, fácil de realizar e interpretar y con una sensibilidad a
métodos de coloración convencional:
PAS azul de metileno
Hematoxilina
tiñe microorganismos de azul brillante, completa en pocos
minutos.
Técnicas histológicas según grupo de agentes infecciosos y forma de identificación
TÉCNICA HISTOLÓGICA
AGENTE INFECCIOSO
TINCIÓN DE IDENTIFICACIÓN
PAS Hongos, Parásitos
Rosado
Brown Brenn
Bacterias grampositivasBacterias gramnegativas
AzulRojo
Verde metilo Bacterias gramnegativas Rojo
Glenn Gramnegativas Rojo
Zielh Nielsen Bacilos Rojo
Relación de órganos muestreados según técnicas
empleadas
ÓRGANOS TÉCNICAS
EMPLEADAS
Pulmón PAS, H/E, BK
Cerebro Plata
HígadoPlata, Perls,
H/E,PAS
Riñón H/E, PAS y tricrómica
Piel H/E,PAS, rojo congo
SEGÚN LOS USOS EN ESSALUD
Zielh Nielsen
BK
Otros autores utilizan para los bacilos ácidos resistente, el PCR, lo que
demuestra una alta sensibilidad en el diagnóstico de micobacteria.
Ac. Clorhídrico 20%:
HCl = 20 mlH2O destilada = 80 ml
SOLUCIONESSol. de ferrocianuro de K
10%Ferrocianuro de K = 10 gH2O destilada = 100 ml
PROCEDIMIENTO
-Desparafinar e hidratar.- Sol. Diaria de HCl – ferrocianuro de K (30min)- Enjuagar las laminas con H2O d.-Solución de rojo núcleo durante 5 min-Lavar en H2O c. (2min)-Deshidratar, aclarar y montar.
Sol diaria
Solución de rojo núcleo
WARTHIN STARRY
H.P.
Fondo = amarillo parduzco
MARRON
SOLUCIONES
Solución tampón:-Acetato sodico 1.64g- ac, acetico 2.5 ml- H2O destilada 200 ml
Solución de nitrato de Ag:-Nitrato de Ag 0.5 g-Sol. Tampón 50 ml
Solución 1: - hidroquinona 0.3 g- Sol .tampón 10 ml
Solución de trabajo: sol 1 + sol 2
Solución 2:Sol. Acuosa de nitrato de plata 2 % a 60ºC. = 3 ml
PROCEDIMIENTO-Desparafinar e hidratar.- Sol. Tampón- nitrato de Ag 1 % x 30 – 60 min -Lavar en sol. Tampón.-Sol de trabajo 3 min.-Enjuagar en agua c. - Lavar en sol. Tampón-Deshidratar, aclarar y montar.
H.P.
Fondo = amarillo parduzco
OSCUROSRESULTADOS
ROJO CONGO ROJO
CONGO
SOLUCION DE PERMANGANATO ACIDO DE POTASIO:-sol acuosa de permanganato de K 0.5 % 47.5 ml- sol. Acuosa de ac. Sulfúrico 3 % 2.5 ml
SOLUCION ACUOSA DE ACIDO OXALICO 1 %:
PROCEDIMIENTO:-Desparafinar e hidratar.-Tratar con permanganato acido de potasio x 30 seg.- lavar en H2O destilada.-Ac oxálico 1 % hasta blanquear, lavar en H2O destilada.-Rojo congo 30 min-Sol. De carbonato de litio x 15 seg.-H2O c. x 15 min.- H. x 2min, lavar H2O c. X 1 min.-Deshidratar , aclarar y montar.
SOLUCIONES:SOLUCION DE ROJO CONGO:-Sol. De rojo Congo 1 g- H2O destilada 100 ml
polarizada (verde manzana)
COLORACIÓN PAS
Colorea los hidratos de carbonos, (glucógenos), mucopolisacáridos
neutros, mucoproteínas, los hongos, entre otros.
SOLUCIONES
Solución de HCl 1 N:-HCl concentrado 8.35 ml- H2O destilada 100 ml
Reactivo de Schiff: 1. Fucsina básica 0.5 g2.Solución de HCl 1 N 10 ml3.Disulfito de Na 0.5 g4.H2O destilada 100 ml5.Carbón activado 0.25 g
Disolver 1 en 2 en 4 caliente hasta ebullición. Enfriar, + 3, agitarlo x 20 min. Dejarlo hasta sgte. Día en frasco hermético y oscuro… adquirió color amarillento, + 5 , agitarlo…
Solución acuosa de ac. Periyódico 0.5 %-Cristales de ac, peryódico 0.5 g-H2O destilada 100 ml
PROCEDIMIENTO:-Desparafinar e hidratar las secciones.-Ac. Peryódico 10min -Lavar H2O destilada-Reactivo de Schiff 5-7min-Lavar c/ H2O destilada 3-5min-H x 2 min-Lavar en H2O c.-Deshidratar- Aclarar y montar
RESULTADO:Las sustancias PAS positivas color rojo, núcleo azul.
RIIÑON = GLUCOGENO
Se utiliza también para demostración de producción de mucina por las células tumorales de una neoplasia epitelial.
El borde en cepillo de los túbulos proximales tiene afinidad por los reactivos usados en la coloración de PAS (flechas). (PAS,
X200).
GLOMERULO NEFRITIS
tiñe de forma específica las membranas basales glomerulares, tubulares y de la cápsula de Bowman.
Dentro de las sustancias positivas tenemos:
- glucógeno- membrana basal- glándulas mucosas
COLORACIÓN
TRICÓMICA DE
MASSON
TRICRÓMICA DE MASSON:Fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseñados para dar resistencia; también evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean colorantes para diferenciar los núcleos, citoplasma y las fibras de colágeno.
SOLUCIONESSolución de Bouin:
-Sol. Acuosa saturada de ac, pícrico (75ml)-formaldehido comercial 25ml-Ac. Acético glacial 5ml
Solución A de HEMATOX. FERRICA:
-H (1g)-alcohol absoluto 100 ml
Solución B de HEMATOX. FERRICA:-cloruro férrico 29% (4ml)-agua destilada 95 ml-HCl concentrado 1 ml
Solución TRABAJO de HEMATOX.-SOL. A + SOL. B = 1/1 VOL
Solución FUCSINA ACIDA:-sol. acuosa de escarlata Biebrich 1% 90 ml-sol. acuosa de fucsina ac. 1% 10 ml-Ac. Acetico glacial 1 ml
Solución acido Fosfotúngtico 5 %-Ac. Fosfotúngtico 5g-H2O destilada 100mlSolución de azul de
anilina:-Azul anilina 2.5g-Ac. Acetico 2 ml-H2O destilada 100ml
Solución de acido acético 1%:-Ac. Acético glacial-H2O destilada 100ml
PROCEDIMIENTO:- Desparafinar e hidratar hasta agua c.- Fijador de Bouin x 1h- Lavar hasta desaparecer color amarillo.- H. Fe x 10 min y lavar agua c. 10min.- Sol. de fucsina ac. X 15 min- H2O destilada enjuague- Solución acido Fosfotúngtico 5 %- Sol. De anilina 5 a 10 min. y H2O destilada- H2O acética 1% 3-5 min- OH 95% y absoluto 2cambios, xilol 2 cambios - bálsamo
RESULTADOS-NUCLEOS= OSCUROS
- CITOPLASMA, QUERATINA, FIBRAS MUSCULARES= ROJO- FIBRAS COLAGENAS Y MOCO= AZUL (ANILINA)
Señalan trombos hialinos intracapilares.Estos "trombos" son positivos para inmunoglobulinas (IgG e
IgM). (Tricrómico de Masson, X600).
Las técnicas de tricrómico también definen nítidamente las zonas de glomeruloesclerosis, el depósito de colágeno
periglomerular y, por ende, la esclerosis intersticial con mayor resalte de la atrofia tubular.
Glomerulonefritis membranoproliferativa
destacar la cantidad y distribución de la fibrosis y demostración de nódulos en la cirrosis
PERLS(AZUL DE PRUSIA)
SOLUCIONESSolución acuosa de ferrocianuro de K 2%:- ferrocianuro de k 2 g- H2O destilada 100 ml
Solución acuosa de HCl 2%:- HCl 2 ml- H2O destilada 100 mlSolución de
H/E:
PROCEDIMIENTO-Desparafinar e hidratar.- 1 vol. Ferricianuro de K x 1min- + 1 vol. De HCl x 15-20 min hasta tomar colorac. Azul- lavar c/ H2O c. x 2 min-H x 2 min-Lavar en H2O c. x 1 min - E X 15 seg-Lavar en H2O C. x 20 seg.-Deshidratar, aclarar y montar.
OBJETIVO: - Demostración de hierro trivalente, El Fe
demostrable por este método se hala bajo forma de hemosiderina.
RESULTADOS:Los depósitos de Fe se observan de color azul turquesa, núcleos de color morado y citoplasma rosado.
Hemosiderina, sales de Fe = azul
Núcleos, citoplasma = rosa a rojo
Para hemosiderina: (Perls) especialmente útil en patología
hepática para la demostración de cúmulos de Fe en los hepatocitos en
distintas situaciones o en casos extremos de hemosiderosis (ejemplo
en la enfermedad genética hemocromatosis).
La hemosiderina es una forma parcialmente desnaturalizada de ferritina que se aglomera con facilidad y reconoce en el examen microscópico como unos gránulos azulinos en el citoplasma = debido a la reacción de Perls, (presencia de Fe trivalente).
Normalmente se halla en bazo, medula
ósea y células de Kupffer del hígado.
MONTAJE
ALMACENAMIENTO
GRACIAS POR SU
ATENCION