Seminario biomol

Paola Rangel Daniel Rodríguez

Tercer semestre

2014 UPB

INTRODUCTION

Spermatozoa Primordial germ cells

Mitosis Meiosis

Spermatocytogenesis

Spermatidogenesis

Spermiogenesis

ALCOHOLISM

It is a condition that creates a strong need for alcohol, so that there is a physical dependency on it, manifested through certain withdrawal symptoms when intake is not possible

DIABETES

Is a chronic condition that is triggered when the body loses its ability to produce enough insulin or use it effectively.

RESULT

a person with diabetes does not absorb glucose properly

hyperglycemia

damaging the tissues

causes the potentially lethal complications for health

Diabetes type 1: insulin deficient

Diabetes type 2: insulin resistance

Diabetes insipidus: ADH complete

deficient or relative deficient, or its resistance

• CYP2E1: a member of the cytochrome P450 mixed-function oxidase system, is involved in the metabolism of xenobiotics in the body.

- Is an important enzyme for the conversion of ethanol to acetaldehyde and to acetate in humans.

OBJETIVE

The aim of the study as investigate the correlation between spermatogenesis disorders and CYP2E1 mRNA contents in testes of rats with experimental alcoholism or type 1 diabetes

MATERIALES Y MÉTODOS

• Animales: usaron ratas wistar por recomendación de la convención europea para la protección de animales vertebrados utilizados para la experimentación y otros fines específicos y aprobado por el comité de cuidado y uso de animales institucionales.

La isoforma CYP2E1 está presente en humanos y en los ratones de laboratorio.

• Modelos experimentales:

1. Modelo de alcoholismo: Emplearon la autoadministración voluntaria de alcohol en ratas. Se les dio agua con una solución de etanol al 15% durante 150 días.

Esto fue utilizado para la reproducción del modelo de alcoholismo crónico experimental.

2. Modelo de diabetes tipo 1: las ratas fueron inyectadas con una dosis intraperitoneal única de STZ en tapón de citrato.

Para evaluar el estado diabético inducido.

Estimación del estado del epitelio espermatogénico:

Lo fijaron en una solución al 10% de formalina neutra, deshidratado en soluciones de etanol y embebidos en parafina

Se tiñeron las placas

con hematoxilina y eosina.

Se observó al microscopio en 100X y 400X

La determinación del índice espermatogénico se basó en los tipos y % de células germinales en cada etapa presentado en el epitelio seminífero

Escala

1Solo

espermatogonias presentes

2Espermatogonias y espermatocitos

presentes

3Espermatogonias, espermatocitos y

espermatides presentes

4Espermatogonias, espermatocitos y

espermatides redondas presentes con hasta 25

espermatides tardías por túbulo

* Simultáneamente los cambios cualitativos del epitelio espermatogénico:

Se usó para la evaluación de parámetros morfológicos y morfo métricos y los índices de espermatogénesis

Células de exfoliación

Epitelio de descamación de la membrana basal y

del túbulo

Presencia de regiones de

células libres “ ventanas”

PCR RT-PCR

Amplificación directa de un

gen o un fragmente de

DNA o indirecta de

un RNA presentes en mezclas de

diversas fuentes

Amplificación del RNA a través de la síntesis previa de su DNA copia.

Usa una

transcriptasa inversa seguido de varios ciclos de PCR convencional.

Con ello se puede determinar la expresión de genes en diversos tejidos.

Desnaturalización:

-Incubación breve a una Tº entre 90-97ºC

Alineamiento:

-Hibridación de las hebras sencillas del DNA primers y DNTp’s.

- Tº de 37-65ºC

Síntesis: -DNA polimerasa elonga los

primers.- La replicación ocurre en dirección 5’-3’ a partir del extremo 3’OH de

cada cebador.

- Electroforesis en gel de agarosa al 2%: se refiere a la migración de partículas o solutos cargados en un medio liquido, bajo la influencia de un campo eléctrico.

Los productos de la PCR fueron:

Separados por electroforesis en gel de agarosa al 2%

Aclarados con bromuro de etidio

Visualizados bajo un transiluminador UV

RESULTADOS

DISCUSSION AUTHOR COMENT YES/NOLa vignera s, Condorcili RA, Balercia G, Vicari E, Calogero AE (27)

Experimental evidence suggests that etanol is toxic for Leydig cells, although dose-dependent effects of alcohol on humans spermatogenesis are not well Known

Yes

Schoeller Erica, Albanna Gabriella, Frolova Antonina, Moley Kelle (38)

Whether the effects of diabetes on fertility are mediated thourgh testicular insulin insufficiency or thourgh systemic effects of diabetes

Yes

AUTHOR COMENT YES/NOCederbaum AL (41) With respect to reactive

oxygen species (ROS) formation, CYP2E1 appears to stand out against other CYP-enzymes, becouse it obviously possesses a higher oxidase-activity

Yes

Fujii J, Tsunoda S, That almost regardlees of the exact celular target of ROS within the reproductive system, the most common morphological consequence of such injury is a general disturbance of spermatogenesis, becouse of its great sensitivity

Yes

CONCLUSIONS

Cellular injury in testicles is caused by ROS that are produced in the process of metabolism catalyzed by CYP2E1.

The chronic alcohol consumption beside the consequences on liver function, has negative

effects on the hypothalamus pituitary

testicular axis, leading to damage to the reproductive

function.

Diabetes affects reproductive function

but is not known specifically in which

stage of spermatogenesis.

The chronic alcoholism leads to an increase of glycemia, linking this

process with the effects of diabetes on the alteration

of testicular function.

PAOLA RANGEL

Daniel Rodríguez