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Paola Rangel Daniel Rodríguez
Tercer semestre
2014 UPB
INTRODUCTION
Spermatozoa Primordial germ cells
Mitosis Meiosis
Spermatocytogenesis
Spermatidogenesis
Spermiogenesis
ALCOHOLISM
It is a condition that creates a strong need for alcohol, so that there is a physical dependency on it, manifested through certain withdrawal symptoms when intake is not possible
DIABETES
Is a chronic condition that is triggered when the body loses its ability to produce enough insulin or use it effectively.
RESULT
a person with diabetes does not absorb glucose properly
hyperglycemia
damaging the tissues
causes the potentially lethal complications for health
Diabetes type 1: insulin deficient
Diabetes type 2: insulin resistance
Diabetes insipidus: ADH complete
deficient or relative deficient, or its resistance
• CYP2E1: a member of the cytochrome P450 mixed-function oxidase system, is involved in the metabolism of xenobiotics in the body.
- Is an important enzyme for the conversion of ethanol to acetaldehyde and to acetate in humans.
OBJETIVE
The aim of the study as investigate the correlation between spermatogenesis disorders and CYP2E1 mRNA contents in testes of rats with experimental alcoholism or type 1 diabetes
MATERIALES Y MÉTODOS
• Animales: usaron ratas wistar por recomendación de la convención europea para la protección de animales vertebrados utilizados para la experimentación y otros fines específicos y aprobado por el comité de cuidado y uso de animales institucionales.
La isoforma CYP2E1 está presente en humanos y en los ratones de laboratorio.
• Modelos experimentales:
1. Modelo de alcoholismo: Emplearon la autoadministración voluntaria de alcohol en ratas. Se les dio agua con una solución de etanol al 15% durante 150 días.
Esto fue utilizado para la reproducción del modelo de alcoholismo crónico experimental.
2. Modelo de diabetes tipo 1: las ratas fueron inyectadas con una dosis intraperitoneal única de STZ en tapón de citrato.
Para evaluar el estado diabético inducido.
Estimación del estado del epitelio espermatogénico:
Lo fijaron en una solución al 10% de formalina neutra, deshidratado en soluciones de etanol y embebidos en parafina
Se tiñeron las placas
con hematoxilina y eosina.
Se observó al microscopio en 100X y 400X
La determinación del índice espermatogénico se basó en los tipos y % de células germinales en cada etapa presentado en el epitelio seminífero
Escala
1Solo
espermatogonias presentes
2Espermatogonias y espermatocitos
presentes
3Espermatogonias, espermatocitos y
espermatides presentes
4Espermatogonias, espermatocitos y
espermatides redondas presentes con hasta 25
espermatides tardías por túbulo
* Simultáneamente los cambios cualitativos del epitelio espermatogénico:
Se usó para la evaluación de parámetros morfológicos y morfo métricos y los índices de espermatogénesis
Células de exfoliación
Epitelio de descamación de la membrana basal y
del túbulo
Presencia de regiones de
células libres “ ventanas”
PCR RT-PCR
Amplificación directa de un
gen o un fragmente de
DNA o indirecta de
un RNA presentes en mezclas de
diversas fuentes
Amplificación del RNA a través de la síntesis previa de su DNA copia.
Usa una
transcriptasa inversa seguido de varios ciclos de PCR convencional.
Con ello se puede determinar la expresión de genes en diversos tejidos.
Desnaturalización:
-Incubación breve a una Tº entre 90-97ºC
Alineamiento:
-Hibridación de las hebras sencillas del DNA primers y DNTp’s.
- Tº de 37-65ºC
Síntesis: -DNA polimerasa elonga los
primers.- La replicación ocurre en dirección 5’-3’ a partir del extremo 3’OH de
cada cebador.
- Electroforesis en gel de agarosa al 2%: se refiere a la migración de partículas o solutos cargados en un medio liquido, bajo la influencia de un campo eléctrico.
Los productos de la PCR fueron:
Separados por electroforesis en gel de agarosa al 2%
Aclarados con bromuro de etidio
Visualizados bajo un transiluminador UV
RESULTADOS
DISCUSSION AUTHOR COMENT YES/NOLa vignera s, Condorcili RA, Balercia G, Vicari E, Calogero AE (27)
Experimental evidence suggests that etanol is toxic for Leydig cells, although dose-dependent effects of alcohol on humans spermatogenesis are not well Known
Yes
Schoeller Erica, Albanna Gabriella, Frolova Antonina, Moley Kelle (38)
Whether the effects of diabetes on fertility are mediated thourgh testicular insulin insufficiency or thourgh systemic effects of diabetes
Yes
AUTHOR COMENT YES/NOCederbaum AL (41) With respect to reactive
oxygen species (ROS) formation, CYP2E1 appears to stand out against other CYP-enzymes, becouse it obviously possesses a higher oxidase-activity
Yes
Fujii J, Tsunoda S, That almost regardlees of the exact celular target of ROS within the reproductive system, the most common morphological consequence of such injury is a general disturbance of spermatogenesis, becouse of its great sensitivity
Yes
CONCLUSIONS
Cellular injury in testicles is caused by ROS that are produced in the process of metabolism catalyzed by CYP2E1.
The chronic alcohol consumption beside the consequences on liver function, has negative
effects on the hypothalamus pituitary
testicular axis, leading to damage to the reproductive
function.
Diabetes affects reproductive function
but is not known specifically in which
stage of spermatogenesis.
The chronic alcoholism leads to an increase of glycemia, linking this
process with the effects of diabetes on the alteration
of testicular function.
PAOLA RANGEL
Daniel Rodríguez