Pewarnaan

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 1

MIKROBIOLOGI DASARSMK ANALIS KESEHATAN ASSA’ADAH

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 2

PEWARNAANKholis Amalia Nofianti

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 3

Tujuan

• Siswa dapat menjelaskan fungsi pewarnaan• Siswa dapat menjelaskan macam-macam

metode pewarnaan• Siswa dapat menjelaskan cara melakukan

pewarnaan

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 4

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 5

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 6

CARA PEMERIKSAAN KUMAN

• Living state– Kuman yang tidak bisa dicat– Kuman yg sulit dikembangbiakkan

• Fixed state

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 7

Tujuan Fiksasi

• Melekatkan spesimen pada objek glas• Membunuh kuman tanpa merubah morfologi• Sebagai intensifier sehingga kuman mudah

dicat• Menyimpan slide yang tak mudah dicat

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 8

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 9

Fungsi Pewarnaan

• Memberi warna pada sel-sel atau bagian-bagian lain, sehingga menambah daya kontras dan tampak jelas

• Menunjukkan struktur sel• Menunjukkan distribusi dan susunan kimia sel• Membedakan mikroba satu dengan lainnya

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 10

MACAM PEWARNAAN

Jumlah Pewarna

Pewarnaan simultan

2 pewarna atau lebih digunakan bersamaan

Pewenn Suksedan

pewarna digunakan 1 per 1 dan ada masa

pencucian

pH pewarna

Asam

Gugus kromofor anion

Mis.eosin, Fushin, acid Fushin, congo red

basa

Gugus kromofor kation

Mis. biru metilen, safranin, merah netral

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 11

MACAM-MACAM PEWARNAAN

Pengecatan negatif

Pewarnaan Sederhana

Pewarnaan Difrential

• Pengecatam Gram

• Pengecatan Ziehl-Nelson

• Pengecatan spora

• Pengecatan Kapsula

• Pengecatan Granula metakromatik

• Pengecatan Flagel

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 12

Pengecatan Negatif

Pengecatan tidak langsung

Pengecatan pada latar

belakang bakteri

Bakteri tidak dicat

Tanpa fiksasi

Menggunakan negrosin dan

tinta cina

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 13

Pengecatan sederhana

Untuk melihat bentuk bakteri

Menggunakan satu macam cat

Dilakukan fiksasi lebih dahulu

cat : metilen blue, gentian violet,basic fushin, safranin

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 14

PENGECATAN GRAM

Dikembangkan oleh ahli Histologi Christian Gram (1884)

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 15

Proses Pengecatan Gram

Pemberian cat utama• K

ristal violet (ungu)

Pengintensifan cat utama• L

ar.Mordan

Pencucian (Dekolorisasi)• L

ar. alkohol

Pemberiaan cat penutup (cat lawan)• S

afranin

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 16

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 17

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 18

Bakteri Gram positif

mengikat cat utama dengan kuat, sehingga tidak dapat dilunturkan

dan tidak dapat diwarnai oleh cat lawan

terdapat teichoic acid yang bersifat

antigenik dan polysacharida

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 19

Bakteri Gram Negatif

dapat dilunturkan mengikat cat tidak kuat, dan dapat diwarnai oleh cat lawan

mengandung 3 polimers yang terletak di luar peptidoglycan layer yaitu : lipo protein, outer membrane yang terdiri atas phospholipids dan lipopolysacharida (LPS) yang bertanggung jawab dalam produksi endotoksin

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 20

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 21

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 22

KESALAHAN-KESALAHAN DALAM PEWARNAAN GRAM

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 23

ARTEFAK

Presipitasi kristal violet disangka sebagai gram positif cocci

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 24

Presipitasi kristal violet disangka sebagai gram positif cocci

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 25

OVERDECOLORIZATION

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 26

Pengecatan Ziehl-Nelson(Pengecatan Tahan Asam)

Pemberian cat utama• F

uchin (merah)

Pengintensifan cat utama• P

anaskan pada penangas air, suhu 90 º C, 4’

Pencucian (Dekolorisasi)• L

ar. Alkohol asam (alkohol 95 % + HCl 5-10 %)

Pemberiaan cat penutup (cat lawan)• M

etilen blue atau berlian hijau

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 27

Pengecatan Ziehl-Nelson(Pengecatan Tahan Asam)

• Bakteri dari genus Mycobacterium (M. tubercolosis dan M. leprae) selnya dilapisi lilin

• Bersifat gram positif tapi sangat sukar di cat

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 28

PENGECATAN SPORA

• Spora sukar dicat• Perlu dilakukan pengecatan khusus dan

pemanasan• Metode : Schaefer Fulton dan modifikasi

tahan asam

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 29

PENGECATAN SPORA

• Fiksasi• Tuangi malachite green• Panaskan 5 ‘• Bilas air• Tuangi safranin• Bilas air• keringkan

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 30

PENGECATAN KAPSULA

• Kapsul tidak dapat dpwarnai• Ada banyak metode, mis. pengecatan negatif

dan pengecatan sederhana• Latar akan berwarna hitam, sedangkan badan

bakteri akan berwarna merah (fuchin)

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 31

Demo_Pewarnaan_Gram.mp4 [www.keepvid.com].mp4

Package

Performing a Gram Stain [www.keepvid.com].mp4

Endospore Stain Technique [www.keepvid.com].mp4

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 32

FEED BACK

• JELASKAN FUNGSI PEWARNAAN• SEBUTKAN MACAM-MACAM PEWARNAAN• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

GRAM ?• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

TAHAN ASAM• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN

SPORA ?

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 33

Tugas

• Kerjakan secara berklompok• Tiap kelompok 2 orang, tidak boleh teman

sebangku• Dikerjakan di lembar kertas• Dikumpulkan minggu depan

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 34

Berdasarkan struktur tubuhnya, tentukan pewarnaan apa saja yang dibutuhkan untuk membuktikan adanya dugaan beberapa bakteri berikut :

• Staphlococcus aureus, • Klebsiela pneumonia, • Staphilococus coagulase negatif,

Mycobacterium tubercolosis, • E coli, Streptococus pneumonia, • Salmonela, Shigela, • Nisseria

04/13/2023 BAHAN AJAR PEWARNAAN 35

SEMOGA BERMANFAATterimakasih