View
242
Download
3
Category
Preview:
Citation preview
OPTIMALISASI FERMENTASI PEMBENTUKAN CURD
MENTAH
Disusun untuk memenuhi sebagian persyaratan guna memperoleh gelar Magister Sains
Program Studi Biosains
Makhabbah Jamilatun NIM:
PROGRAM PASCA SARJANA UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SI FERMENTASI Rhizopus oryzae DALAM CURD DAN ANALISIS KUALITAS
MENTAH YANG TERBENTUK
TESIS
Disusun untuk memenuhi sebagian persyaratan guna memperoleh gelar Magister Sains
Program Studi Biosains
Oleh Makhabbah Jamilatun
NIM: S900908008
PROGRAM PASCA SARJANA UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA 2009
DALAM KUALITAS KEJU
Disusun untuk memenuhi sebagian persyaratan
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Upaya peningkatan kecerdasan masyarakat dapat dicapai dengan terpenuhinya
kebutuhan akan gizi. Sehubungan dengan gizi masyarakat, terdapat dua tujuan utama dari
penggunaan makanan. Pertama, menyediakan material untuk pertumbuhan tubuh dan
regenerasi jaringan tubuh, yang diperoleh dari protein dan tidak dapat digantikan dengan
elemen gizi lainnya. Kedua, untuk menyediakan bahan bakar berupa energi yang diperlukan
tubuh yang diperoleh dari protein, karbohidrat, dan lemak (Daulay, 1991).
Sehubungan dengan hal tersebut, keju yang terbuat dari susu yang sudah dikenal
bernilai gizi tinggi mampu memenuhi kedua tujuan utama penggunaan makanan. Keju adalah
makanan sumber protein dengan protein utama kasein dan mengandung lemak yang relatif
tinggi sehingga dapat menyediakan semua kebutuhan energi bagi tubuh terutama yang
dihasilkan dari lemak keju (Daulay, 1991). Keju disukai oleh sebagian besar masyarakat
Indonesia karena aromanya yang khas. Pemanfaatan keju dalam konsumsi sehari-hari dapat
meningkatkan nilai gizi serta citarasa makanan tambahan tersebut.
Keju bermanfaat bagi kesehatan karena berperan sebagai perantara bagi probiotik
menuju saluran pencernaan (Corbo et al., 2001). Dalam hal pengolahan susu menjadi keju,
akan menguntungkan bagi peternak susu karena menjadikan susu lebih tahan lama sehingga
nutrisi dalam susu dapat dipertahankan serta akan meningkatkan nilai ekonomi susu (Murti,
2004). Berkaitan dengan keadaan tersebut, maka peluang perkembangan industri keju dalam
memproduksi dan menganekaragamkan jenis keju akan semakin besar sehingga pemenuhan
dan penyediaan keju dapat dilakukan secara berkesinambungan.
Pada umumnya keju dibuat dengan menggunakan koagulan/penggumpal susu berupa
rennet anak sapi (Lampert, 1975). Menurut Cogan (1985) rennet menyebabkan kasein (protein
susu) menggumpal. Namun, terdapat kendala utama dalam pengembangan industri keju, yang
bukan hanya di Indonesia, tetapi juga di dunia yaitu kurangnya rennet sebagai penggumpal
susu. Hal ini disebabkan karena menurunnya pemotongan anak sapi untuk memperoleh
lambung sebagai sumber rennet, sehingga tidak ekonomis (Green, 1977; Shamsuzzaman dan
Haard, 1983). Dan dalam hal citarasa, penggunaan rennet sebagai koagulan akan menyisakan
sedikit rasa pahit (Fallico et al., 2005).
Dengan adanya keterbatasan rennet tersebut telah mendorong dilakukannya penelitian-
penelitian untuk mengganti sumber rennet yang cocok, baik berasal dari hewan, tumbuhan,
maupun mikroba (Wahba dan El-Abbassy, 1981). Enzim yang pernah digunakan sebagai
pengganti rennet antara lain adalah bromealin, papain, protease dari getah widuri dan rennet
dari babi. Kelemahan yang paling umum dengan penggumpal nabati adalah apabila berlebihan
akan timbul rasa pahit. Penggunaan getah widuri dengan dosis 0,2-0,8 cc getah/liter susu
memberikan rasa yang gurih akan tetapi akan timbul rasa pahit bila dosisnya mencapai 1,6
cc/liter susu (Wulandani cit Wulandani, 2003). Kelemahan lain dari tanaman sebagai sumber
protease adalah kesulitan untuk melakukan ekstraksi enzim secara efisien karena
membutuhkan peralatan berat untuk menghancurkan jaringan tanaman yang besar dan keras,
serta pertumbuhan tanaman terlalu lama untuk produksi enzim dalam skala besar (Fowler,
1998). Sementara itu, penggunaan rennet dari babi akan menimbulkan permasalahan bagi
kaum muslim. Produksi protease dari hewan pun sangat terbatas, membutuhkan jumlah hewan
dan biaya yang besar karena proses ekstraksi enzim dari jaringan hewan sulit dilakukan (Taylor
dan Leach, 1995).
Melihat kondisi yang seperti itu maka protease pengganti rennet yang dianggap paling
cocok adalah dari mikroba. Mikroba merupakan sumber penghasil enzim terbaik, karena
pertumbuhan mikroba relatif mudah diatur sehingga mutu enzim yang dihasilkan lebih seragam,
dan mampu untuk memproduksi enzim dalam jumlah besar (Standbury dan Whitaker, 1984).
Pada proses pembuatan keju, selain koagulasi kasein juga diperlukan fermentasi susu.
Selama ini fermentasi dilakukan oleh bakteri asam laktat. Kedua komponen ini dilakukan secara
terpisah. Penerimaan keju oleh konsumen sangat berkaitan dengan flavor (Akalin et al., 2002),
maka peningkatan citarasa keju penting dilakukan. Peningkatan citarasa keju biasa dilakukan
dengan penambahan lipase. Dalam proses produksinya, pembuatan keju akan lebih efisien jika
kebutuhan ini dapat dipenuhi dari satu jenis mikroba. Dengan demikian maka perlu dicari suatu
jenis mikroba yang mampu memenuhi seluruh kebutuhan yang diperlukan dalam produksi keju.
Rhizopus oryzae yang di Indonesia dikenal sebagai jamur tempe (Nout et. al., 2005;
Yoshio, et al., 2004), merupakan jamur yang mampu memenuhi kriteria yang telah disebutkan
di atas. R.oryzae diketahui mampu menghasilkan asam laktat (Mirdamadi, 2002), protease
(Banerjee and Bhattacharyya, 2004) dan lipase (Hiol et al., 2000). Asam laktat akan membantu
mengasamkan susu, protease berfungsi memecah kasein susu serta lipase berfungsi sebagai
pemecah lemak yang akan meningkatkan flavor keju. Akan tetapi, hingga saat ini belum
didapatkan informasi mengenai penggunaan R.oryzae untuk fermentasi susu dalam pembuatan
keju.
Oleh karena itu, pada penelitian ini dilakukan optimalisasi fermentasi oleh R.oryzae yang
meliputi variasi konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu fermentasi. Terdapat tiga tahapan
penelitian. Pertama, penghitungan laju pertumbuhan R.oryzae dan pengukuran nilai pH pada
starter dan selama fermentasi dalam pembentukan curd. Kedua, pembuatan keju yang
dilanjutkan dengan analisis kualitas fisik, kimia, dan uji kesukaan. Ketiga, uji kualitas
mikrobiologi dan analisis profil asam amino esensial pada keju mentah yang terbentuk pada
kondisi optimum fermentasi.
B. Perumusan Masalah
Permasalahan yang dikaji dalam penelitian meliputi :
1. Bagaimana kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu fermentasi
R.oryzae dalam pembentukan curd ?
2. Bagaimana pengaruh kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu
fermentasi yang berbeda terhadap kualitas keju mentah yang terbentuk ?
C. Tujuan Penelitian
Penelitian yang dilakukan ini bertujuan untuk :
1. Mendapatkan kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu fermentasi
R.oryzae dalam pembentukan curd.
2. Mengetahui pengaruh kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu
fermentasi yang berbeda terhadap kualitas keju mentah yang terbentuk.
D. Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberi manfaat antara lain :
1. Memberi informasi kepada masyarakat mengenai perkembangan ilmu dan teknologi
pengolahan susu khususnya pembuatan keju.
2. Meningkatkan potensi jamur Rhizopus oryzae dalam pengolahan makanan
terfermentasi. Memberi informasi tentang kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu,
dan waktu fermentasi R.oryzae dalam pembentukan curd dan pengaruhnya terhadap
kualitas keju mentah yang terbentuk.
BAB II
LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka
1. Keju
a. Definisi Keju
Keju merupakan salah satu produk fermentasi susu dengan menggunakan protease
sebagai koagulan dan merupakan penyatuan komponen-komponen susu terutama protein
dan lemak. Pada dasarnya keju adalah protein susu yang dijendalkan. Dalam pembuatan
keju, untuk memisahkan protein susu tidak dapat dikerjakan dengan separasi melainkan
dengan cara penambahan asam, misalnya asam laktat dan asam khlorida, atau dengan
penambahan enzim protease misalnya rennet, mucor-renin, dan sebagainya (Purnomo,
1996).
b. Klasifikasi Keju
Keju dapat dikelompokkan menjadi beberapa kelompok. Menurut Kosikowski dan
Mistry (1997), keju dapat dikelompokkan menjadi tiga berdasarkan komposisinya, yaitu keju
alami, keju proses, dan keju imitasi. Keju alami adalah keju sebenarnya. Keju proses adalah
keju buatan yang di dalamnya mengandung 50-90% keju alami. Keju imitasi adalah keju
buatan yang terbuat dari bahan selain susu dan aroma keju diperoleh dari aroma buatan
atau keju alami.
Menurut Sumarjono (1987), keju dapat dikelompokkan menjadi dua berdasarkan
teksturnya, yaitu keju keras dan keju lunak. Keju keras masih dapat dikelompokkan lagi
menjadi sangat keras dan agak keras. Keju sangat keras ada yang dengan lubang (keju
cheddar) dan ada yang tanpa lubang (keju swiss). Sedangkan keju agak keras ada yang
dimatangkan oleh jamur (keju requofort) dan ada yang dimatangkan oleh bakteri (keju
brick). Untuk keju lunak, pengelompokkan dilakukan menjadi tiga, yaitu keju yang
5
6
dimatangkan oleh bakteri (keju limburger), oleh jamur (keju camembert), dan keju yang
tanpa dimatangkan (keju cottage).
Berdasarkan kematangan, keju dikelompokkan menjadi 2 kelompok, yaitu keju
mentah dan keju matang. Keju mentah merupakan keju yang diperoleh dari pembuatan keju
sampai proses perendaman garam. Keju mentah dibedakan menjadi 3, yaitu keju cottage,
keju cream, dan keju cooking/no-melt. Keju matang merupakan keju mentah yang diperam
selama beberapa bulan (Sumarjono, 1987).
c. Sifat Fisik Keju
Pada proses pembentukan keju akan terbentuk dua golongan protein yaitu protein
menggumpal yang disebut curd yang akan menjadi keju melalui proses pembuatan
selanjutnya dan protein terlarut yang disebut whey (Murti, 2004). Curd adalah gumpalan
yang terbentuk oleh aktivitas koagulan yaitu campuran enzim yang mempunyai aktivitas
proteolitik (Marth dan Steele, 2001). Whey merupakan protein yang tidak mengalami
presipitasi karena asam, dan mencerminkan sekitar 20% dari total kandungan protein
(Murti, 2004). Whey merupakan hasil samping (by product) dari pembuatan keju.
d. Komposisi Kimia Keju
Komposisi kimia keju juga sama sebagaimana komposisi kimia susu, yaitu lemak,
protein, dan garam yang tidak larut bersama dengan air, laktosa, dan albumin (Daulay,
1991).
Komposisi kimia keju yang penting untuk diketahui dan bermanfaat bagi konsumen
antara lain kadar lemak dan kadar proteinnya. Berikut ini tabel kadar air, kadar lemak, dan
kadar protein dari berbagai keju :
Tabel 1. Kadar air, lemak, dan protein berbagai macam keju (%)
Jenis Keju Kadar air (%) Kadar lemak (%) Kadar protein (%) Camembert 50,3 26,0 19,8
Cheddar 37,5 32,8 24,2 Edam 39,5 23,8 30,6
Permesan 31,0 27,5 37,5
Requofort 39,5 33,0 22,0 (Lampert, 1975)
e. Tahapan Pembuatan Keju
Tahap pembuatan keju melibatkan dua fase yang saling berhubungan, yang
pertama yaitu pembentukan komposisi dan pH, yang kedua yaitu membangun karakteristik
fisik dan citarasa (Marth dan Steele, 2001). Pembuatan keju meliputi lima tahap, yaitu
pengasaman, penggumpalan, pengaliran cairan whey, penggaraman, dan pemeraman.
Berikut ini adalah tahap-tahap proses pembuatan keju menurut Sumarjono (1987):
1) Pengasaman
Sebelumnya susu dipasteurisasi dengan tujuan untuk membunuh bakteri
patogen dan mengurangi sejumlah besar bakteri lainnya yang akan dapat
mempengaruhi dalam pembuatan keju. Kondisi pasteurisasi biasanya dikerjakan dengan
suhu pemanasan sekitar 65-72 oC selama +30 detik. Selanjutnya, dilakukan
pengasaman agar susu bersifat sedikit asam. Sifat susu yang sedikit asam sangat
diperlukan untuk membantu mempercepat penggumpalan protein susu. Pengasaman
dikerjakan dengan menyimpan susu dengan penambahan starter dari bakteri asam
laktat. Bakteri-bakteri yang digunakan dalam pembuatan keju untuk starter adalah
bakteri yang dapat menghasilkan asam laktat dari laktosa, yaitu Streptococcus lactis,
Leuconostoc sp. dan Lactobacillus sp. (Sumarjono, 1987).
2) Penggumpalan/koagulasi
Penggumpalan bertujuan untuk menggumpalkan protein susu. Proses ini
dikerjakan dengan asam atau enzim protease. Hasil terbaik akan diperoleh apabila
menggunakan rennet, yang merupakan salah satu enzim protease.
Penggumpalan protein susu juga dapat dilakukan tanpa menggunakan enzim.
Beberapa agensia yang menyebabkan perubahan sifat alamiah dari protein, seperti
panas, asam, basa, solven organik, dan garam (Sudarmadji, 1996).
3) Pengaliran cairan whey (whey syneresis)
Pada tahap ini dilakukan penyaringan dengan kain yang bersih. Penyaringan ini
dimaksudkan untuk memisahkan curd dan whey. Curd yang dihasilkan dari penyaringan
kemudian diambil, sedangkan wheynya dibuang. Selanjutnya dilakukan pengepresan
yang bertujuan untuk memberikan kekompakan bentuk pada keju, disamping itu sisa-
sisa whey atau air dapat dikeluarkan seluruhnya.
4) Penggaraman dan pemeraman keju
Pada tahap ini, garam ditambahkan sebanyak kurang lebih 2-6% dari total
pembuatan keju agar keju mempunyai rasa asin. Garam ditambahkan dalam bentuk
kristal yang telah dihaluskan.
Beberapa jenis keju dikonsumsi langsung (fresh cheese), namun sebagian besar
keju diperam (dimatangkan) selama beberapa periode yaitu 3 minggu sampai 2 tahun
untuk membentuk karakteristik flavor dan tekstur. Selama pemeraman, terjadi banyak
sekali perubahan mikrobiologi, kimia, dan biokimia pada keju yang menyebabkan
perubahan pada komposisi utama keju tersebut, seperti protein, lemak, dan residu
laktosa yang biasanya menurun (Law, 1997).
f. Citarasa Keju
Citarasa berbagai jenis makanan merupakan kombinasi dari aroma dan rasa.
Citarasa dan tekstur terbentuk pada periode waktu yang lama, dimulai saat pembuatan keju
sampai periode pemeraman. Citarasa dibangun oleh kultur starter, dan modifikasi enzimatik
dari berbagai komponen susu. Proteolisis mempengaruhi tekstur, juga membuat formasi
citarasa dari peptida dan asam amino bebas yang merupakan prekusor pembentukan
komposisi aroma. Lipolisis sangat penting dalam pembentukan citarasa keju peram, dimana
starter bakteri mempunyai efek langsung pada citarasa fresh cheese, contoh keju cottage
(Law, 1997).
2. Asam Laktat dalam Produksi Keju
Dalam industri makanan termasuk keju, asam laktat berperan sebagai pembentuk
flavor dan sebagai agen antimikrobial (Raber cit Skory, 2000). Asam laktat berperan
terhadap komponen flavor, aroma dan tekstur keju (Samarzija et al., 2001). Asam laktat
dihasilkan oleh mikroorganisme pembentuk asam laktat yang terdapat di dalam susu yang
disebut dengan starter.
Starter merupakan susu segar yang telah ditumbuhi oleh mikroorganisme
nonpatogen yang ditambah dari luar sebagai pembentuk asam dan membentuk karakteristik
serta mutu tertentu berbagai jenis produk susu (Daulay, 1991). Fungsi penting dari karakter
kultur starter adalah mampu memproduksi asam laktat secara konsisten, sebagai perantara
dalam perkembangan bentuk keju, dan menjaga keseimbangan rasa yang terbentuk
(Muchtadi, 1989). Mikroorganisme yang paling banyak digunakan adalah BAL (Bakteri
Asam Laktat), yang menghasilkan asam terutama asam laktat dengan fermentasi laktosa.
Asam ini memberikan citarasa asam yang segar pada tahu keju, membantu terjadinya
penggumpalan oleh protease, menyebabkan terjadinya pemerasan tahu keju, membentuk
karakteristik tekstur spesifik selama pembuatan keju. Nilai pH rendah membantu menekan
pertumbuhan bakteri patogen dan bakteri pembusuk sehingga bersifat mengawetkan keju
(Daulay, 1991; Law 1997).
Dalam batas-batas tertentu, fermentasi laktosa dalam susu untuk pembuatan keju
dapat dilakukan oleh BAL yang mengkontaminasi susu secara alami. Namun demikian,
pada industri keju, dimana sejumlah besar susu diolah menjadi keju, hal tersebut tidak
efektif lagi karena diperlukan suatu proses fermentasi yang terpercaya dan berlangsung
cepat. BAL yang secara alami terdapat dalam susu terbunuh pada waktu proses
pasteurisasi dan untuk menggantikannya digunakan BAL yang terdapat dalam starter yang
diinokulasikan ke dalam susu. Galur-galur terpilih yang mampu meningkatkan keasaman
dan menghasilkan senyawa-senyawa citarasa yang diharapkan digunakan sebagai starter
untuk memperoleh kecepatan pengasaman sebagai starter yang mantap selama proses
pembuatan keju (Daulay, 1991; Samarzija et al., 2001).
Salah satu penggunaan jamur dalam pembuatan keju adalah sebagai starter.
Menurut Moerira et al. (2001), jamur yang sering digunakan dalam pembuatan keju adalah
Penicillium sp. Beberapa faktor yang menyebabkan jamur dapat digunakan dalam
pembuatan keju adalah kemampuannya untuk tumbuh dalam temperatur rendah, dalam
kadar oksigen rendah, resisten terhadap bahan pengawet, dan bersifat lipolitik (Muchtadi,
1989).
Penggunaan starter akan mempengaruhi sifat keju baik fisik, kimia, biokimia, dan
sensori. Hal itu disebabkan kultur starter mengkontribusikan proteolisis pada tingkat yang
berbeda (Hayaloglu et al., 2005).
3. Protease dalam Produksi Keju
Protease adalah enzim yang mampu menghidrolisis ikatan peptida. Enzim protease
mempunyai dua pengertian yaitu proteinase yang mengkatalis hidrolisis molekul protein menjadi
fragmen-fragmen besar dan peptidase yang menghidrolisis fragmen-fragmen polipeptida
menjadi asam amino. Enzim protease termasuk dalam golongan enzim hidrolase sehingga
dalam menghidrolisis substrat harus dengan pertolongan air (Frazier dan Westhoff, 1983).
Protease dimanfaatkan untuk menggumpalkan protein susu dalam pembuatan keju (Fowler,
1988).
Protease dihasilkan dari tiga sumber utama yaitu tanaman, hewan dan mikroba. Sumber
protease komersial berasal dari binatang ternak, sejumlah tanaman besar maupun ragi, kapang
dan bakteri (Bailey dan Olis, 1988). Enzim papain, bromealin, dan fisin merupakan protease
yang dihasilkan dari tanaman. Sedangkan tripsin, pepsin, dan rennet merupakan protease yang
berasal dari hewan. Enzim dari hewan yang paling banyak digunakan dalam industri pangan
adalah khimosin yaitu pada industri keju. Sedangkan enzim tanaman yang paling banyak
digunakan dalam industri pangan adalah papain dan bromealin. Pada tahun 1950-1960,
pemanfaatan enzim dari hewan dan tanaman mulai digantikan oleh enzim mikrobial
(Nagodawithana dan Reed, 1993).
Menurut Brown dan Enstrom (1998), United States Standards of Identity for Cheese telah
mengijinkan penggunaan rennet dari protease lain yang berasal dari hewan, dan tumbuhan.
Pada tahun 1974, dua pertiga perusahaan keju di Amerika Serikat telah menggunakan
pengganti rennet yang telah diperoleh dari sumber lain seperti Mucor miehei, Endothia
parasitica, atau Mucor pussilus (Garcia, 2005).
Rennet yang mengandung protease berperan untuk menggumpalkan susu sehingga
membentuk matriks tersebut. Selain berperan membentuk curd, rennet juga berperan dalam
pengembangan flavor keju selama pemeraman. Protease yang tersisa dalam curd selama
pemeraman akan menghidrolisis kasein menghasilkan peptida dengan rantai kecil, sedang dan
besar, tetapi sedikit asam amino bebas. Peptida tersebut kemudian didegradasi lebih lanjut oleh
bakterial flora yang terdapat dalam keju (Cheeseman, 1981; Johnson, 1988). Perubahan
hidrolitik yang disebabkan oleh proteolitik rennet, selama pematangan tidak hanya penting
dalam hal pengembangan flavor tetapi juga berpengaruh terhadap perubahan body dan tekstur
keju (Tarakci dan Kucukoner, 2006).
Koagulan adalah yang paling bertanggung jawab tehadap proteolisis primer yaitu
pemecahan protein menjadi peptide-peptida. Proteolisis berperan terhadap pembentikan
komponen volatil (Hayaloglu et al., 2007).
Proteolisis berperan secara langsung terhadap flavor maupun sabagai prekusor
pembentuk flavor (Singh et al., 2003; Visser cit Awad, 2005). Enzim proteinase dan peptidase
berperan penting dalam perubahan peptidase dan asam amino yaitu akan menjadi prekusor
dalam pembentukan flavor (Urbach, 1997; Broome, 1998).
Penggumpalan susu merupakan proses yang komplek, yang melibatkan tahap enzimatik
dan non enzimatik. Pada tahap enzimatik, yang merupakan tahap pertama, k-kasein diubah dan
kehilangan kemampuannya untuk menstabilkan komplek kaseinat yang lainnya. Tahap kedua,
yang merupakan tahap non enzimatik, terjadi agregasi kasein yang kemudian misel kasein
membentuk suatu struktur gel yang kokoh (Brown and Enstrom, 1998).
Enzim protease mengawali penggumpalan susu dengan memotong k-kasein pada
permukaan misel kasein untuk membentuk para k-kasein dan suatu makropeptida. Rennet
memotong ikatan Phe105- Met106 pada k-kasein dan sedikit pemotongan pada ikatan lain,
sehingga menghilangkan kemampuan menstabilkan alpha dan beta kasein yang lebih sensitif
terhadap kalsium. Hasilnya para k-kasein mengendap dengan adanya ion kalsium. Bagaimana
kalsium-para-k-kasein, yang bersama-sama dengan kasein yang sensitif dengan kalsium
lainnya, membentuk suatu agregat tidak diketahui dengan jelas. Enzim penggumpal susu selain
rennet, kurang spesifik tetapi mempunyai pengaruh umum sama (Brown and Ernstrom, 1988).
Tahap enzimatik dipengaruhi oleh semua faktor yang mempengaruhi reaksi enzim.
Perbedaan jumlah enzim mempunyai pengaruh yang paling besar. Temperatur meningkatkan
kecepatan pemotongan k-kasein sampai temperatur tersebut, kecepatan reaksi menurun
dengan cepat dan aktivitasnya tidak dapat dikembalikan (Brown and Ernstrom, 1998).
4. Lipase dalam Produksi Keju
Enzim lipase merupakan golongan enzim hidrolase yang bekerja pada lemak dan minyak
(Joseph et al., 2007). Penggunaan lipase semakin meningkat karena aplikasinya yang semakin
berkembang di dalam berbagai industri baik industri pangan maupun industri nonpangan
(Gandhi, 2007). Enzim lipase ini merupakan enzim yang dapat menghidrolisis trigliserida
menjadi asam lemak bebas, gliserida serta gliserol (Winarno, 1995; Benjamin, 1998). Lipase
juga mampu mengkatilasasi hidrolisa dari asilgliserol dan ester asam lemak lainnya pada
kondisi air dan mampu mensintesa ester pada pelarut organik (Ueda et al., 2002). Enzim lipase
dapat diperoleh dari beberapa sumber seperti tanaman, hewan dan mikroorganisme (Rapp,
1992). Enzim lipase bersumber dari hewan oleh Svenden (1994) dikelompokkan berdasarkan
sumbernya yaitu : lipase pada sistem pencernaan, lipase yang terdapat pada jaringan seperti
hati, paru-paru dan ginjal serta lipase dalam air susu. Lipase dari tanaman oleh Mukherjee dan
Hills (1994) dikelompokkan menjadi lipase triasilgliserol, asilhidrolase, fosfolipase dan
lisofosfolipase.
Enzim lipase dari mikroorganisme dapat diperoleh dari bakteri, kapang dan khamir
Svenden (1994) dan ditemukan sebagai enzim intraseluler dan enzim ekstraseluler. Enzim
ekstraseluler merupakan enzim yang dihasilkan sel kemudian dikeluarkan melalui dinding sel ke
dalam medium sekitarnya dan bereaksi memecah bahan organik tanpa tergantung pada sel
yang melepaskanya. Enzim intraseluler dihasilkan di dalam sel yaitu pada bagian membran
sitoplasma. Enzim tersebut melakukan metabolisme di dalam sel (Frost and Most, 1987). Pada
berbagai produk, enzim lipase sudah banyak digunakan terutama dalam pengolahan susu,
pembuatan keju, pembuatan mentega, serta dalam pembuatan produk-produk pangan yang lain
(Muchtadi et al., 1992).
Dalam industri keju, lipase berfungsi untuk menambah aroma. Lipolisis akan membantu
terbentuknya komponen pembentuk flavor melalui asam lemak bebas yang biasanya banyak
dilakukan oleh kapang. Lipase dari M.miehei mempengaruhi sama lemak rantai panjang pada
keju sedangkan lipase dari A.niger mampu memotong asam lemak rantai panjang dan rantai
pendek (Law, 1997).
5. Keuntungan Mikroba sebagai Penghasil Enzim
Keunggulan mikroba lainnya dibandingkan enzim dari tanaman dan hewan adalah
mikroba dapat berkembangbiak lebih cepat, tidak membutuhkan tempat yang luas untuk
tumbuh dan berkembang biak, tidak tergantung musim, pengontrolan faktor lingkungan lebih
mudah dan dapat diproduksi sewaktu-waktu, biaya produksi lebih murah (Standbury dan
Whitaker, 1984). Serta sebagian besar enzim mikroba yang dihasilkan secara komersial adalah
enzim ekstraselular yang diproduksi di dalam sel dan dikeluarkan ke cairan lingkungan sekitar
tempat sel tersebut tumbuh, yang menurut Fowler (1998) bahwa hal ini merupakan salah satu
kelebihan mikroba dibandingkan hewan dan tanaman yang membutuhkan proses
penghancuran sel untuk mendapatkan enzim yang diinginkan.
6. Rhizopus oryzae
a. Morfologi dan Kehidupan R.oryzae
R.oryzae termasuk mikroba aerob yang pertumbuhannya memerlukan oksigen.
R.oryzae mempunyai miselium yang berwarna putih, kemudian semakin lama menjadi abu-
abu kecoklatan dengan tinggi + 16 mm. Permukaan stolonnya halus atau agak kasar
dengan rhizoid yang berwarna kecoklatan dan sporangiofor tunggal ataupun kelompok.
Sporangianya globosa, kolumelanya ovoid atau globosa, sedangkan sporangiosporanya
globosa, ovoid, atau tidak beraturan berbentuk poligonal.
Pertumbuhan R.oryzae cepat dan membentuk miselium seperti kapas dengan
warna putih dan berwarna gelap ketika dewasa. R.oryzae dapat tumbuh pada suhu 7 0C
hingga 45 0C dan optimum pada suhu 37 0C (Pitt and Hocking, 1997). Morfologi R.oryzae
menurut Wikipedia (2007) seperti terlihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Morfologi R.oryzae
Klasifikasi R.oryzae menurut Wikipedia (2007):
Kingdom : Fungi Divisio : Zygomycota Class : Zygomycetes Ordo : Mucorales Familia : Mucoraceae Genus : Rhizopus Spesies : Rhizopus oryzae
b. R.oryzae dalam Bahan Pangan
R.oryzae termasuk kapang yang dimanfaatkan dalam industri makanan. Salah satu
pemanfaatannya adalah dalam pembuatan bahan pangan melalui proses fermentasi seperti
tempe (Lennartsson, 2007). R.oryzae aman dikonsumsi karena tidak menghasilkan toksin.
R.oryzae mempunyai kemampuan mengurai lemak kompleks menjadi trigliserida dan asam
lemak (Septiani, 2004).
R.oryzae merupakan salah satu jamur nonpatogen dan tidak beracun serta tidak
mengandung aflatoksin. Karbohidrase yang dihasilkan R.oryzae aman digunakan dalam
produksi dekstrosa dari pati (Food and Drug Administration, 2008).
Enzim Lipase yang dihasilkan oleh R.oryzae dari proses fermentasi tidak
menunjukkan adanya racun dan tidak berpotensi sebagai mutagen (Coenen et al., 1997).
Hasil penelitian Flood dan Mitsuru (2003), menunjukkan bahwa Lipase D yang
menghidrolisa triasilgliserol menjadi asam lemak aman digunakan untuk fermentasi dalam
industri pangan. Lipase intraseluler yang dihasilkan oleh R.oryzae tidak aktif pada suhu 30
0C (Essamri et al., 1998).
c. Peran R.oryzae dalam Produksi Keju
Peran R.oryzae dalam produksi keju berkaitan dengan kemampuan R.oryzae dalam
menghasilkan asam laktat, protease dan lipase.
Menurut Prescott dan Dunn (1959) R.oryzae merupakan jamur yang paling banyak
digunakan untuk produksi asam laktat sampai saat ini. Penggunaan R.oryzae mempunyai
keuntungan yang berupa asam laktat yang dihasilkan hanya berbentuk isomer L(+) asam
laktat saja (Midarmadi et al., 2002). Penelitian Saito et al. (2004), R.oryzae strain NBCR
4707 memproduksi asam laktat lebih efisien daripada strain NRRL 395 dalam substrat
kentang. Ditambahkan oleh Zhang et al. (2007) bahwa strain R.oryzae hanya memproduksi L-asam
laktat yang bermanfaat bagi industri makanan karena D-isomer berbahaya bagi manusia. Dalam
bidang farmasi dan makanan, hanya L(+) asam laktat yang digunakan karena dapat dicerna
oleh usus manusia. Berdasarkan asam laktat yang dihasilkan, R.oryzae termasuk dalam
mikroba heterofermentatif, yaitu proses fermentasi yang menghasilkan laktat sebagai
produk utama dan etanol, CO2, asetat sebagai produk sekunder yang biasanya diproduksi
melalui jalur fosfoketolase (Kuswanto dan Slamet, 1989).
R.oryzae adalah salah satu fungi yang mampu menghasilkan protease. Produksi
enzim proteolitik dari R.oryzae pada bioreaktor secara optimum dilakukan pada aerasi 8
jam dan inkubasi 2 hari (Prasad et al., 2004). Pada penelitian Tunga et al. (2004), R.oryzae
menghasilkan protease alkalin ekstraseluler pada kondisi optimum dengan temperatur 32
0C.
R.oryzae adalah fungi yang mampu menghasilkan lipase. Penelitian Saleh (1993),
telah menggunakan kapang R.oryzae termofilik untuk menghasilkan enzim lipase
intraseluler dan ekstraseluler menunjukkan bahwa sumber karbon yang digunakan seperti
glukosa, fruktosa arabinosa, sorbitol dan maltosa umumnya meningkatkan produksi enzim
lipase intraseluler R.oryzae. Nuraida et al. (2000) telah mempelajari aktivitas lipase 10
kapang Rhizopus dan 10 kapang Mucor. Enzim lipase dari kapang-kapang tersebut baik
yang intraseluler maupun ekstraseluler menunjukkan aktivitas hidrolisis dan aktivitas
esterifikasi. Lipase dari kapang Rhizopus oryzae TR 32 mempunyai aktivitas hidrolisis dan
aktivitas esterifikasi yang tinggi dibanding kapang-kapang yang di uji. Hasil seleksi Hou dan
Johnston (1992), pada media padat menunjukkan organisme penghasil lipase tertinggi
adalah kapang, diikuti bakteri dan khamir. Kapang penghasil lipase yang paling baik adalah
Rhizopus spp. Rapp dan Backhaus (1992) telah menyeleksi 17 kapang Rhizopus dan
diantaranya terdapat 12 galur yang dapat menghasilkan lipase ekstraseluler yang cukup
tinggi. Pada media kultur biasa, R.oryzae hanya membentuk satu macam lipase, ROL32.
Namun jika disimpan dalam suhu 0 0C selama beberapa bulan atau dijaga pada suhu 6 0C
selama beberapa hari akan menampakan bentuk yang lebih pendek yaitu ROL29 dengan
kehilangan N-terminalnya. Hal ini penting dalam spesifitas aktivitas enzim dan ikatan antara
enzim dan substrat (Sayari et. al., 2005).
7. Fermentasi
Proses fermentasi adalah suatu proses yang mendayagunakan suatu mikroba tertentu
atau campuran dari beberapa spesies mikroba untuk menghasilkan senyawa tertentu (Rahman,
1992). Fermentasi ialah proses baik secara aerob maupun anaerob yang menghasilkan
berbagai produk yang melibatkan aktivitas mikroba atau ekstraknya dengan aktivitas mikroba
terkontrol (Darwis dan Sukara, 1989). Fermentasi merupakan proses yang telah lama dikenal
manusia. Fermentasi merupakan proses untuk mengubah suatu bahan menjadi produk yang
bermanfaat bagi manusia, seperti fermentasi susu kambing, unta yang terjadi di Sumaria dan
Babilonia pada jaman Mesopotamia. Hingga saat ini, proses ferementasi telah mengalami
perbaikan-perbaikan dari segi proses sehingga dihasilkan produk fermentasi yang lebih baik
(Tamime dan Robinson, 1999).
Terdapat tiga macam proses fermentasi cair yaitu fermentasi batch, fermentasi kontinyu,
dan fermentasi fed-batch. Pada fermentasi batch, setelah inokulasi tidak dilakukan
penambahan substrat ke dalam media. Proses fermentasi ini umumnya dijumpai empat fase
pertumbuhan mikrob, yaitu fase lag, fase log, fase stasioner dan fase kematian. Pada
fermentasi kontinyu, ada penambahan dan pengurangan kultur selama proses fermentasi,
sehingga volume tetap dan kondisi fisiologi sel cenderung konstan. Sedangkan pada fase
fermentasi fed-batch, ada penambahan substrat pada fase pertumbuhan tertentu yang
bertujuan untuk memperpanjang fase pertumbuhan yang diinginkan (Rahman,1992)
B. Kerangka Berfikir
Gambar 2. Kerangka Berfikir Optimalisasi Fermentasi Rhizopus oryzae dalam Pembentukan Curd dan
Analisis Kualitas Keju Mentah yang Terbentuk
Susu, minuman kaya nutrisi
Kualitas fisik (rendemen curd, kadar air) Kualitas kimia (nilai pH, kadar lemak, kadar protein) Uji tingkat kesukaan (rasa, aroma, warna, tekstur)
Fermentasi
Optimalisasi: konsentrasi, suhu, waktu
Rhizopus oryzae Asam laktat, protease,
lipase
Curd
Keju mentah
Analisis
Kualitas mikrobiologi Analisis profil asam amino esensial
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan selama 4 bulan, yaitu bulan Oktober 2008 sampai dengan
Januari 2009 bertempat di Sub Lab. Biologi Laboratorium MIPA Pusat Universitas Sebelas
Maret Surakarta.
B. Alat dan Bahan Penelitian
1. Alat Penelitian
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah sebagai berikut :
Kompor listrik, panci, magnetic stirrer, hot plate, timbangan analitik, oven, inkubator,
erlenmeyer, gunting, gelas beker, gelas ukur, pH-meter, jarum ose, tabung reaksi, rak
tabung, pipet ukur, bunsen burner, termometer, alat press, beban, baskom, botol kaca, kain
saring, plastik, aluminium foil, autoklaf, soxhlet, desikator, peralatan HPLC, BD Phoenix.
2. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah sebagai berikut :
a. Bahan untuk pembuatan starter
Kultur kerja Rhizopus oryzae diperoleh dari Fakutas Pertanian UNS Surakarta, media PDA
agar, dan susu skim.
b. Bahan untuk pembuatan keju
23
Susu sapi segar yang diperoleh dari peternak sapi Kabupaten Boyolali, starter, rennet, dan
NaCl jenuh
c. Bahan khemikalia
Pelarut petroleum eter, alkohol 70%.
C. Rancangan Percobaan
Rancangan Percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah Rancangan Acak
Lengkap (RAL) dengan 13 perlakuan dan 3 ulangan dengan demikian diperoleh 39 satuan
ulangan. Formula yang digunakan disajikan pada Tabel 2.
Formula yang digunakan dalam optimalisasi fermentasi Rhizopus oryzae dalam
pembentukan curd dan analisis kualitas keju mentah yang terbentuk adalah sebagai berikut:
Tabel 2. Formula perlakuan optimalisasi fermentasi
Formula Variasi Perlakuan Konsentrasi; Suhu; Waktu
P1 10%; 370C; 6jam P2 10%; 370C; 9jam P3 10%; 400C; 6jam P4 10%; 400C; 9jam P5 15%; 370C; 6jam P6 15%; 370C; 9jam P7 15%; 400C; 6jam P8 15%; 400C; 9jam P9 20%; 370C; 6jam
P10 20%; 370C; 9jam P11 20%; 400C; 6jam P12 20%; 400C; 9jam K Rennet; 400C; 8jam
D. Cara Kerja
Penelitian ini meliputi beberapa tahapan kerja, yaitu sebagai berikut :
1. Persiapan
Tahapan pertama adalah penyiapan bahan-bahan dan alat-alat yang akan digunakan.
Selanjutnya dilakukan sterilisasi alat dan bahan serta pembuatan media.
a. Sterilisasi
Bahan dan alat yang akan digunakan dalam penelitian dicuci bersih dan disterilisasi.
Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua mikroba yang terdapat pada suatu
benda. Cara sterilisasi yang digunakan yaitu metode sterilisasi kering dengan menggunakan
oven pada suhu 160°C selama 2 jam dan metode sterilisasi basah dengan menggunakan
autoklaf dengan suhu 121°C pada tekanan 1 atm selama 30 menit.
b. Pembuatan Media
Proses pembuatan media diawali dengan mencampurkan bahan-bahan media PDA
(Potato Dextrose Agar), yang merupakan media untuk pertumbuhan Rhizopus oryzae, dan
aquades ke dalam labu erlenmeyer kemudian dipanaskan di atas hot plate dan dihomogenkan
dengan magnetic stirrer. Setelah campuran mendidih, media PDA dituang ke dalam tabung
reaksi kemudian dilanjutkan dengan proses sterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C
pada tekanan 1 atm selama 30 menit selanjutnya tabung reaksi diletakkan dalam posisi miring
agar terbentuk media PDA miring.
2. Pembuatan Kultur Kerja
Kultur kerja adalah kultur Rhizopus oryzae yang telah siap digunakan untuk pembuatan
starter. Kultur kerja didapatkan dengan meremajakan kultur murni R.oryzae yaitu dengan
menginokulasikan 1 ose kultur murni R.oryzae ke dalam media PDA miring kemudian diinkubasi
pada suhu 37 0C selama 3-4 hari, sedangkan sisanya disimpan pada suhu 4 0C sebagai kultur
stok dan diremajakan setiap 6 bulan. Inokulasi dilakukan secara aseptis dengan terlebih dahulu
membakar ujung ose sampai membara dan cepat didinginkan. Proses inokulasi juga dilakukan
di dekat bunsen burner (dimodifikasi dari Wijaya, 2002 dan Suharyanto dkk., 2006)
3. Pembuatan Starter
Starter merupakan susu segar (susu skim cair) yang telah ditumbuhi oleh
mikroorganisme pembentuk asam yang ditambah dari luar. Starter yang digunakan adalah
starter biakan Rhizopus oryzae dari media PDA yang berumur 3-4 hari, biakan R.oryzae diambil
sebanyak 3 ose untuk diinokulasikan ke dalam 250 ml susu skim cair steril dan diinkubasi pada
suhu 37 0C selama 11 jam (dimodifikasi dari Nurhidayati, 2003).
4. Pertumbuhan R.oryzae
Penghitungan pertumbuhan kapang dilakukan dengan cara Standard Plate Count setiap
3 jam mulai dari jam ke-0 hingga jam ke-9 (Modifikasi dari Yeganehzad, 2007; Rehman et al.,
2007).
Jumlah total kapang ditentukan dengan cara Standard Plate Count, dengan prosedur
sebagai berikut 1 ml starter diencerkan secara desimal, yaitu 10-1 sampai 10-6 dengan
menggunakan tabung reaksi yang masing-masing diisi 9 ml aquades steril. Lalu sebanyak 1 ml
starter biakan R.oryzae pada seri pengenceran ke 10-4, 10-5, 10-6 dipipet ke dalam cawan petri
steril yang sebelumnya telah dituangkan di dalamnya medium PDA steril sebanyak kira-kira 15
ml dan telah didinginkan sampai sekitar 44 0C. Dilakukan secara duplo. Segera setelah
penuangan, starter biakan R.oryzae pada setiap seri pengenceran dihomogenkan dengan cara
digerakkan menggunakan batang drigalsky di seluruh permukaan media untuk menyebarkan
sel-sel mikroba secara merata. Setelah itu, cawan-cawan tersebut diinkubasi pada suhu kamar
selama 2 hari (48 jam). Cawan yang digunakan dalam perhitungan ialah cawan yang
mengandung 30 – 300 koloni. Jumlah mikroba per mililiter atau per gram contoh, yaitu: jumlah
koloni x 1/faktor pengenceran. Faktor pengenceran = pengenceran x jumlah yang ditumbuhkan
(modifikasi dari Alexopoulos, 1962 dan Fardiaz cit Muhiddin, 2001).
5. Pembuatan Keju
Tahap pembuatan keju ini mengacu pada penelitian Legowo dkk. (2003), yang meliputi
pasteurisasi dan pengasaman, penggumpalan (koagulasi), pengaliran cairan whey,
pengepresan dan penggaraman.
a. Pasteurisasi dan Inokulasi R.oryzae / Penambahan Rennet
Susu sapi segar sebanyak 2400 ml dipateurisasi sampai suhu 70 0C selama 30
detik. Setelah dipasteurisasi, susu tersebut didinginkan sampai suhu mencapai 37 0C
kemudian dimasukkan ke dalam 12 buah gelas beker dengan volume masing-masing
200 ml. Setiap gelas beker diberi perlakuan yang berbeda. Empat gelas beker yang
pertama ditambahkan starter 10% atau 20 ml biakan Rhizopus oryzae. Selanjutnya
empat gelas beker kedua masing-masing ditambah starter 15% atau 30 ml starter
biakan Rhizopus oryzae. Dan empat gelas beker lainnya ditambah 20% atau 40 ml
starter biakan R.oryzae. Selanjutnya masing-masing gelas beker diinkubasi dengan
kombinasi suhu dan waktu fermentasi yang berbeda. Untuk kontrol, setelah pasteurisasi
susu didinginkan kemudian ditambahkan rennet sebagai koagulan dan disimpan pada
suhu 40 0C selama 8 jam
b. Penggumpalan (Koagulasi)
Masing-masing gelas beker diinkubasi dengan suhu dan waktu fermentasi yang
telah ditentukan dan diakhiri setelah terbentuknya gumpalan. Penggumpalan ditandai
dengan terbentuknya dua lapisan, curd dan whey secara terpisah.
c. Pengaliran Cairan Whey (Whey syneresis)
Lapisan yang terdiri dari gumpalan protein (curd) dan cairan whey dipisahkan
menggunakan kain saring. Setelah kedua bagian terpisah, cairan whey dibuang dan
gumpalan protein (curd) tersebut diproses menjadi keju.
d. Pengepresan dan Penggaraman
Gumpalan curd yang diperoleh dimasukkan ke dalam alat, kemudian penutupnya
ditekan, sehingga air akan keluar melalui pori. Setelah dipres gumpalan akan jadi padat.
Selanjutnya penggaraman dilakukan dengan menabur NaCl 3%, dari berat curd,
diseluruh permukaan curd. Setelah proses penggaraman selesai, terbentuklah keju.
6. Penghitungan Rendemen Curd
Rendemen adalah rasio antara keju yang terbentuk dengan susu yang digunakan sebagai
bahan dasar (Daulay, 1991). Pengujian rendemen curd dilakukan dengan menghitung efisiensi
keju yang dihasilkan.
Rumus perhitungan rendemen curd yaitu :
Keterangan : a = berat susu yang digunakan b = berat keju yang terbentuk
7. Penghitungan Kadar Air
Prinsip penghitungan kadar air adalah air yang terkandung dalam suatu bahan akan
menguap seluruhnya apabila dipanaskan pada suhu 105 0C (Oser, 1976). Cara kerjanya adalah
sampel keju ditimbang sebagai berat basah kemudian dimasukkan ke dalam oven pada suhu
105 0C selama 24 jam. Setelah dikeluarkan dari oven, sampel keju didinginkan di dalam
desikator selama 1 jam. Kemudian sampel keju yang telah kering ditimbang sebagai berat
kering.
Rumus perhitungan kadar air adalah sebagai berikut :
Keterangan : a = berat basah b = berat kering
8. Pengukuran Nilai pH
Penghitungan nilai pH dilakukan pada susu yang difermentasi R.oryzae dan pada keju
mentah. Nilai pH diukur menggunakan pH meter digital. Sensor (elektroda) pH meter
dibersihkan dengan aquades dan dikeringkan dengan kertas hisap, kemudian dikalibrasi
dengan buffer pH 7. Sensor ditancapkan pada permukaan susu yang difermentasi R.oryzae
yang telah menjadi keju. Nilai pH diamati pada layar. Angka yang sudah konstan dicatat
sebagai nilai pH.
% Rendemen = ab
x 100 %
% Kadar Air = a
ba )( - x 100%
Penghitungan nilai pH pada susu yang difermentasi R.oryzae dilakukan setiap
penambahan 3 jam mulai dari jam ke-0 hingga jam ke-9 untuk mengetahui peningkatan asam
yang dihasilkan dari aktivitas fermentasi tersebut (Modifikasi dari Yeganehzad, 2007).
9. Analisis Lemak
Pengukuran kandungan lemak dilakukan dengan mengambil sampel keju sebanyak 1,5
gram lalu dimasukkan ke dalam timbel kemudian di oven dalam suhu 105 0C hingga berat
konstan selama 24 jam. Sebelum diekstraksi timbel dimasukkan dalam desikator selama 1 jam,
kemudian ditimbang untuk mengetahui berat awal. Timbel dimasukkan ke dalam soxhlet,
kemudian labu lemak dihubungkan dengan soxhlet dan ditambahkan pelarut petroleum eter 150
ml melewati soxhlet. Labu lemak dan soxhlet dihubungkan dengan penangas dan diekstrak
selama 6 jam. Setelah ekstraksi selesai, timbel dimasukkan ke dalam oven bersuhu 105 0C
selama 24 jam. Setelah dingin, timbel dimasukkan ke dalam desikator selama 1 jam sebagai
berat akhir (Modifikasi dari Danuwarsa, 2006).
Untuk mengetahui kandungan lemak keju, dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
Keterangan : a = berat sampel keju b = berat akhir (sampel dan timbel setelah di oven) c = berat awal (sampel dan timbel sebelum di oven)
10. Analisis Protein
Kandungan protein dianalisis dengan menggunakan metode Lowry-Folin secara
spektrofotometri (Sudarmadji dkk., 1984).
Pengukuran dimulai dengan pembuatan larutan standar BSA (Bovine Serum Albumin).
Seri pengenceran dibuat dari larutan standar dengan masing-masing konsentrasi 0,00; 0,06;
% Kadar Lemak = a
bc - x 100%
0,12; 0,18; 0,24 dan 0,30 (mg/ml H2O) dan dimasukkan ke dalam masing-masing tabung reaksi.
Satu ml larutan D ditambahkan ke dalam tabung reaksi kemudian divortek selama 5 menit.
Setelah itu dilakukan penambahan reagen E sebanyak 3 ml lalu didiamkan selama 10 menit.
Pengukuran OD dilakukan pada panjang gelombang 590 nm menggunakan spektrofotometer.
Tahap berikutnya adalah pengambilan sampel keju sebanyak 1 g dan dilarutkan dalam
100 ml aquades kemudian dilakukan pengadukan menggunakan magnetik stirrer. Kemudian
larutan sampel disaring dan ditambahkan 100 ml aquades. Satu ml larutan sampel diambil
kemudian ditambahkan larutan D sebanyak 1 ml lalu divortek selama 5 menit. Selanjutnya
dilakukan penambahan reagen E sebanyak 3 ml lalu didiamkan selama 10 menit. Pengukuran
OD pada panjang gelombang 590 nm menggunakan spektrofotometer.
Rumus perhitungan konsentrasi sampel yaitu :
Keterangan: a = banyak sampel (g)
b = konsentrasi c = faktor pengenceran
11. Uji Kesukaan
Uji tingkat kesukaan yang dinilai meliputi warna, rasa, aroma, dan tekstur keju. Penilaian
dilakukan oleh 20 panelis tidak terlatih. Uji kesukaan ini mengacu pada Leksono dan Syahrul
(2001); Zulaekah dan Widiyaningsih (2005). Skala dibuat lima tingkat (taraf 1-5), dimulai dari 1
(sangat suka), 2 (suka), 3 (agak suka), 4 (tidak suka), 5 (sangat tidak suka).
12. Uji Mikrobiologis
Uji Mikrobiologi meliputi penghitungan total mikroba dan identifikasi mikroba.
Penghitungan total mikroba dilakukan dengan menimbang keju 25 g kemudian dihomogenkan
% Protein = a
bxc x 100%
dengan 225 ml aquades (Modifikasi dari Rosa et al., 2003; Ceylan et al., 2003; Mennane, et al.;
2007).
Penghitungan total mikroba berdasarkan Standard Plate Count. Pemupukan dilakukan
dengan menggunakan media Plate Count Agar (PCA) dengan cara 1 ml inokulan dipipet ke
dalam cawan petri steril dan selanjutnya medium PCA yang telah dingin dituangkan ke dalam
cawan petri steril tersebut sebanyak 12-15 ml. Campuran tersebut dihomogenkan dengan
cawan petri digerakkan dengan arah membentuk angka delapan. Setelah agar mengeras,
cawan petri diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu 37 0C selama 24-48 jam. Kemudian
koloni yang terbentuk dihitung.
Identifikasi dilakukan dengan mengisolasi koloni mikroba kemudian menumbuhkan pada
media PDA untuk kapang dan media MRSA untuk bakteri. Identifikasi kapang berdasarkan ciri
morfologinya. Identifikasi bakteri menggunakan BD Phoenix.
13. Analisis Asam Amino
Preparasi sampel keju. Sampel keju ditimbang sebanyak 10 gram dan dimasukkan
dalam tabung reaksi tertutup. Ditambahkan HCL 6 N 15 ml kemudian dihomogenkan. Hidrolisis
dilakukan pada suhu 110 0C selama 12 jam. Kemudian didinginkan dan disaring dengan kertas
whatman, pH diatur hingga normal (pH 7). Ditambahkan aquades sebanyak 100ml ke
dalamnya. Diambil 3 ml dari larutan tersebut dan disaring dengan millex 0,45 µm.Untuk injeksi
ke HPLC, diambil larutan yang telah di millex sebanyak 10 µL+ 990 µL OPA dan divortex.
Direaksikan selama 3 menit. Selanjutnya diinjeksikan ke HPLC.
Pembuatan larutan standar. Standar stok terdiri dari L-Threonin=1050 ppm; L-
Methionine=1000 ppm; L-Valine=1010 ppm; L-Thriptophan=1010; L-Phenylalanine=1000; L-
Isoleucine=1060; L-Leucine=1010; L-Lycine=1000; Masing-masing diambil dengan
perbandingan 1:1:1:1:1:1:1:1 menjadi 10 µL + 990 µL OPA diinjeksikan ke HPLC.
Kondisi HPLC. Asam amino keju dideteksi dengan seperangkat alat HPLC. Sampel
yang telah dipreparasi diambil sebanyak 20 µl dengan menggunakan injektor. Asam amino
dideteksi seperangkat alat HPLC kolom Eurospher 100-5 C18, 250x4.6 mm dengan precolumn
P/N: I115Y535. Eluen: A= Buffer Asetat 0.01 M pH 5.9; B=(MeOH:Buffer Asetat 0.01 M pH 5.9).
E. Analisis Data
Data yang diperoleh dari analisis kualitas fisik (rendemen curd, kadar air), kimia (nilai
pH, lemak, protein) dan uji kesukaan (rasa, aroma, warna, tekstur) serta pengaruh konsentrasi
inokulum Rhizopus oryzae terhadap kualitas fisik dan kimia keju mentah dianalisis dengan
Analisis variansi (Anava) untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh perlakuan kemudian
dilanjutkan dengan uji Duncan’s Multiple Range Test (DMRT) pada taraf signifikansi 5% untuk
mengetahui beda nyata antar perlakuan. Pengaruh suhu dan waktu fermentasi terhadap
kualitas fisik dan kimia keju mentah dianalisis menggunakan T-Test. Data HPLC dianalisis
secara deskriptif
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kondisi optimum fermentasi Rhizopus oryzae
dalam pembentukan curd dan analisis kualitas keju mentah yang terbentuk.
Terdapat tiga tahapan dalam penelitian ini. Pertama, penghitungan laju pertumbuhan
R.oryzae dan pengukuran nilai pH pada starter dan selama fermentasi dalam pembentukan
curd. Kedua, pembuatan keju yang dilanjutkan dengan analisis kualitas fisik, kimia, dan uji
kesukaan. Ketiga, uji kualitas mikrobiologi serta analisis profil asam amino esensial pada keju
mentah yang terbentuk pada kondisi optimum fermentasi.
Kondisi optimum fermentasi diperoleh melalui kombinasi dari tiga variasi perlakuan yaitu
konsentrasi inokulum (10%, 15%, 20%), suhu fermentasi (37 0C, 40 0C) dan waktu fermentasi (6
jam, 9 jam). Dari kombinasi variasi perlakuan fermentasi tersebut diperoleh 12 Formula
Perlakuan dan Kontrol. P1 (10%, 370C, 6 jam), P2 (10%, 370C, 9 jam), P3 (10%, 400C, 6 jam),
P4 (10%, 400C, 9 jam), P5 (15%, 370C, 6 jam), P6 (15%, 370C, 9 jam), P7 (15%, 400C, 6 jam),
P8 (15%, 400C, 9 jam), P9 (20%, 370C, 6 jam), P10 (20%, 370C, 9 jam), P11 (20%, 400C, 6
jam), P12 (20%, 400C, 9 jam) dan Kontrol (Rennet, 400C, 8jam).
A. Pertumbuhan R.oryzae dan Pengukuran Nilai pH
1. R.oryzae pada Starter
Starter yang digunakan untuk pembuatan keju adalah susu yang diinokulasikan dengan
R.oryzae dan difermentasi selama 11 jam. Starter berperan sebagai pemula fermentasi untuk
substrat susu yang digunakan sebagai bahan dasar pembuatan keju. Hasil penghitungan
menunjukkan bahwa jumlah koloni jamur R.oryzae pada starter siap pakai adalah 3,7x105
cfu/ml. Pada saat pembuatan starter terjadi perubahan pH dari 6,65 turun menjadi 5,47.
Penurunan pH terjadi karena terbentuknya asam organik, salah satunya adalah asam laktat,
34
akibat penggunaan substrat fermentasi oleh R.oryzae yang merupakan mikroba
heterofermentatif.
Pada fermentasi yang dilakukan oleh mikroba heterofermentatif, selain asam laktat juga
dihasilkan etanol, karbondioksida, dan sedikit asam-asam lain (Schlegel dan Scmidt, 1994).
Jenis karbohidrat yang terdapat dalam susu adalah laktosa yang merupakan oligosakarida.
Oligosakarida dapat dihidrolisis menjadi glukosa oleh enzim glukoamilase (amiloglukosidase)
(Jin et.al., 1999). R.oryzae adalah kapang yang mampu menghasilkan glukoamilase (Hesseltine
et al. 1985; Nout et al. 1987). Oleh karena itu, laktosa dapat dihidrolisis oleh R.oryzae menjadi
glukosa yang selanjutnya dikatabolisme menjadi asam laktat, etanol, karbondioksida, dan
sedikit asam-asam lainnya.
Menurut Purwandhani dan Suladra (2003), asam laktat merupakan hasil dari
metabolisme glukosa yang digunakan selama pertumbuhan sel dengan jumlah semakin
meningkat seiring bertambahnya waktu. Meningkatnya produksi asam laktat tersebut ditandai
dengan menurunnya pH atau meningkatnya asam akibat timbulnya ion H+ yang terjadi karena
dekomposisi laktosa yang menghasilkan asam-asam yang mudah menguap dan pecahnya
phosphat organik yang terdapat di dalam kasein, sehingga menghasilkan asam (Mc.Kay et al.,
1971).
Gambar 3. Metabolisme glukosa pada
2. Laju Pertumbuhan R.oryzae
Penghitungan laju pertumbuhan dilakukan untuk mengetahui fase
mikroba yang meliputi fase lag, fase eksponensial, fase stationer, dan fase kematian. Laju
pertumbuhan R.oryzae dihitung menggunakan metode
kapang dalam media fermentasi berbentuk serabut
tidak tersuspensi secara merata dalam media. Metode ini didasarkan pada anggapan bahwa
setiap sel dapat tumbuh dan berkembang menjadi satu koloni (Hadioetomo, 1990). Metode ini
sangat tepat bila digunakan untuk mengetahui jumlah sel hidup dalam suatu kultur ka
Metode standard plate count dilakukan dengan membuat seri pengenceran dari biakan cair
kapang. Suspensi kapang disebar dengan metode
akan tumbuh di permukaan media sehingga lebih mudah dihitung (Black, 1999).
r 3. Metabolisme glukosa pada Rhizopus oryzae (Longacre et.al., 1997).
R.oryzae dan Pengukuran Nilai pH selama Fermentasi dalam
Pembentukan Curd
Penghitungan laju pertumbuhan dilakukan untuk mengetahui fase-fase pertumbuhan
eliputi fase lag, fase eksponensial, fase stationer, dan fase kematian. Laju
dihitung menggunakan metode standard plate count karena miselium
kapang dalam media fermentasi berbentuk serabut-serabut panjang sehingga sel
tersuspensi secara merata dalam media. Metode ini didasarkan pada anggapan bahwa
setiap sel dapat tumbuh dan berkembang menjadi satu koloni (Hadioetomo, 1990). Metode ini
sangat tepat bila digunakan untuk mengetahui jumlah sel hidup dalam suatu kultur ka
dilakukan dengan membuat seri pengenceran dari biakan cair
kapang. Suspensi kapang disebar dengan metode spread plate. Dengan cara ini seluruh sel
permukaan media sehingga lebih mudah dihitung (Black, 1999).
, 1997).
dan Pengukuran Nilai pH selama Fermentasi dalam
fase pertumbuhan
eliputi fase lag, fase eksponensial, fase stationer, dan fase kematian. Laju
karena miselium
serabut panjang sehingga sel-sel kapang
tersuspensi secara merata dalam media. Metode ini didasarkan pada anggapan bahwa
setiap sel dapat tumbuh dan berkembang menjadi satu koloni (Hadioetomo, 1990). Metode ini
sangat tepat bila digunakan untuk mengetahui jumlah sel hidup dalam suatu kultur kapang.
dilakukan dengan membuat seri pengenceran dari biakan cair
cara ini seluruh sel
Laju pertumbuhan R.oryzae dan pengukuran nilai pH dilakukan setiap 3 jam mulai jam
ke-0 hingga jam ke-9 selama fermentasi dalam pembentukan curd pada 6 formula perlakuan
yaitu P2 (10%, 370C, 9 jam), P4 (10%, 400C, 9 jam), P6 (15%, 370C, 9 jam), P8 (15%, 400C, 9
jam), P10 (20%, 370C, 9 jam), P12 (20%, 400C, 9 jam) (Lampiran 3.). Pola pertumbuhan
R.oryzae dan perubahan nilai pH selama fermentasi dalam pembentukan curd dapat dilihat
pada Gambar 4.
Gambar 4. Histogram Laju pertumbuhan dan perubahan nilai pH R.oryzae selama fermentasi dalam pembentukan curd
Gambar 4. menunjukkan bahwa laju pertumbuhan R.oryzae dari seluruh formula
perlakuan mengalami penurunan. R.oryzae tidak mengalami fase penyesuaian maupun fase
eksponensial, namun langsung menuju fase stationer yang diikuti dengan fase kematian seiring
0.01 4.
1
26.2
5.01
46.4
1
7.1
3.3
2 2.11 5.
3
4.1 9.
04
1.2 4.2
5
1.1 4.1
2.17
0 0
13.3
7.1
40
10
20
30
40
50
P2 P4 P6 P8 P10 P12
CF
U
Perlakuan Fermentasi
Pola pertumbuhan R.oryzae
jam ke-0
jam ke-3
6.52
6.43
6.35
6.39
6.27
6.3
5.4 5.78
5.64
5.44
5.53
5.52
4.95
5.14
5.18
5.11
5.13
5.13
4.51 4.81
4.87
4.79
4.89
4.82
0
2
4
6
8
P2 P4 P6 P8 P10 P12
Nila
i pH
Perlakuan Fermentasi
Perubahan Nilai pH
jam ke-0jam ke-3jam ke-6jam ke-9
dengan penurunan nilai pH. Hal ini berarti bahwa pertumbuhan R.oryzae dibatasi oleh kondisi
asam.
Fase stationer dimulai ketika sel-sel kapang tidak lagi menunjukkan pertambahan jumlah
yang signifikan, jumlah sel relatif sama dengan sel yang mati. Sel yang mati akan mengalami
lisis dan zat metabolitnya digunakan oleh sel yang masih hidup, sementara itu substrat yang
masih tersisa dikonversi menjadi produk sekunder (Saraswati, 2003). Saat fase stationer ini,
pertumbuhan kapang sangat singkat dan kemudian mengalami kematian.
Selama fase stationer pH media cenderung asam. Menurut Simanjuntak et al. (2002),
pH menurun karena proses katabolisme sumber karbon oleh kapang yang menyebabkan
terakumulasinya sejumlah asam dalam media. Penurunan pH pada penelitian ini disebabkan
karena R.oryzae menghasilkan asam laktat hasil dari fermentasi glukosa (Park et al., 1998).
Asam laktat yang dihasilkan pada fermentasi R.oryzae adalah L(+)-asam laktat (Hang, 1989;
Soccol, 1994, Oda et al., 2002; Liu, et al., 2005). Hal ini berbeda dengan fermentasi yang
dilakukan oleh bakteri Lactobacillus yang menghasilkan campuran D(-)-asam laktat dan L(+)-
asam laktat (Mirdamadi et al.,2002)
Bertambahnya waktu fermentasi menyebabkan pH semakin menurun dan menandakan
semakin banyaknya asam yang dihasilkan. Hal tersebut mengakibatkan terhambatnya
pertumbuhan R.oryzae.
B. Analisis Kualitas Fisik, Kimia, dan Uji Kesukaan
I. Analisis Fisik
Analisis sifat fisik keju mentah meliputi rendemen curd dan kadar air.
Tabel 3. Sifat fisik keju mentah pada beberapa kondisi fermentasi yang berbeda Formula Var.Perlakuan
(Konsentrasi;Suhu;Waktu) Sifat Fisik
Rendemen Curd (%)
Kadar Air (%)
P1 10%;370C;6jam 10,07ab 48,77a P2 10%;370C;9jam 9,79ab 51,45a P3 10%;400C;6jam 9,83ab 49,57a P4 10%;400C;9jam 8,85a 49,48a P5 15%;370C;6jam 9,91ab 49,37a P6 15%;370C;9jam 9,95ab 51,17a P7 15%;400C;6jam 10,05ab 46,17a P8 15%;400C;9jam 9,54ab 49,03a P9 20%;370C;6jam 10,63bc 49,50a P10 20%;370C;9jam 10,76bc 47,23a P11 20%;400C;6jam 10,39 bc 43,17a P12 20%;400C;9jam 9,61ab 47,48a
Kontrol Rennet;400C;8jam 11,44c 44, 42 a Ket: Superskrip berbeda pada rerata menunjukkan adanya perbedaan nyata pada uji DMRT 5%.
Rendemen curd dan kadar air dihitung dalam berat basah
1. Rendemen Curd
Rendemen curd keju mentah yang difermentasi R.oryzae dengan variasi kondisi
fermentasi ditampilkan pada Tabel 3. Hasil analisis variansi rerata rendemen curd ditampilkan
dalam Lampiran 5a. Berdasarkan uji statistik, variasi kondisi fermentasi terhadap rendemen
curd menunjukkan perbedaan nyata. Rendemen curd tertinggi diperoleh pada P10 (20%, 370C,
9 jam) sebesar 10,76%. Rendemen curd terendah diperoleh pada P4 (10%, 400C, 9 jam)
sebesar 8,85%.
Dari hasil penelitian tersebut dapat diketahui bahwa rendemen curd yang terbentuk
dipengaruhi oleh kombinasi perlakuan fermentasi yang meliputi konsentrasi inokulum, suhu,
dan waktu fermentasi. Sedangkan perlakuan fermentasi secara terpisah tidak mempengaruhi
rendemen curd (Lampiran 4a.,4b.,4c.). Rendemen curd tertinggi diperoleh pada kombinasi
perlakuan fermentasi P10 yakni banyaknya konsentrasi inokulum R.oryzae mampu
memproduksi protease dan asam laktat dalam jumlah banyak pada suhu 370C seiring dengan
pembentukan curd selama 9 jam.
Enzim protease yang dihasilkan R.oryzae berperan dalam pemotongan ikatan peptida
kasein dan asam laktat yang dihasilkan R.oryzae menyebabkan pH susu turun sehingga
mencapai titik isoelektrik kasein. Menurut Adnan (1984), titik isoelektrik protein kasein susu
adalah pada pH 4,5 sampai 4,7. Pada titik ini, struktur protein mengalami presipitasi secara
irreversibel, kemudian menyebabkan koagulasi protein susu yang diinduksi oleh asam laktat
secara terus menerus (Marshall et al., 1997 cit Samarjiza et al., 2001). Dan pada penelitian ini
fermentasi oleh R.oryzae diketahui mampu menurunkan pH mendekati titik isoelektrik kasein
pada akhir fermentasi (Lampiran 3.).
Suhu yang digunakan pada penelitian ini tidak mempengaruhi rendemen curd, karena
curd dapat terbentuk baik pada suhu 370C maupun 400C. Suhu fermentasi hanya
mempengaruhi aktivitas mikroorganisme melalui pengaruh pergerakan membran sel (Tao et al.,
2008).
Rendemen curd yang dihasilkan dari fermentasi R.oryzae secara keseluruhan lebih
rendah jika dibandingkan dengan kontrol, yaitu sebesar 11,44%. Ini bisa terjadi karena menurut
Banerjee dan Bhattacharyya (2004), R.oryzae merupakan kapang yang menghasilkan protease
basa (alkaline protease) yang meskipun stabil pada kisaran pH 3-11, namun optimal pada pH 8.
Oleh karena itu, pada pembentukan curd ini aktivitas protease tidak bisa optimal karena adanya
asam laktat yang dihasilkan oleh R.oryzae sendiri. Berbeda dengan kontrol, rennet merupakan
enzim yang dapat bekerja optimal pada suhu 40 0C selama 8 jam sehingga curd yang
dihasilkan lebih banyak.
2. Kadar Air
Air merupakan komponen yang penting dalam bahan makanan, karena air dapat
mempengaruhi penampakan, tekstur, serta citarasa makanan, dengan daya ikat yang berbeda-
beda pada setiap bahan pangan (Winarno cit Achyadi, 2004). Dengan mengetahui kadar air
dalam suatu bahan makanan, maka dapat dijadikan patokan untuk mengetahui mutu standar
terkait dengan keawetan bahan pangan tersebut (Ernie dan Lestari, 1992).
Kadar air keju mentah yang difermentasi R.oryzae dengan variasi kondisi fermentasi
ditampilkan pada Tabel 3. Hasil analisis variansi rerata kadar air ditampilkan dalam lampiran 5b.
Berdasarkan uji statistik, variasi kondisi fermentasi terhadap kadar air tidak menunjukkan
perbedaan nyata. Kadar air tertinggi diperoleh pada P2 (10%, 370C, 9 jam) sebesar 51,45%.
Kadar air terendah diperoleh pada P11 (20%, 400C, 6 jam) sebesar 43,17%. Begitu juga
dengan perlakuan fermentasi secara terpisah tidak mempengaruhi kadar air keju mentah
(Lampiran 4a.,4b.,4c.)
Kombinasi perlakuan fermentasi tidak berpengaruh terhadap kadar air yang dihasilkan,
hal ini disebabkan karena metode yang digunakan saat pengepresan keju. Pengepresan
bertujuan untuk menghilangkan sisa-sisa air yang masih terdapat dalam curd (Pearse and
Mackinlay, 1989). Menurut Fox (1993), saat pengepresan keju kadar air bisa turun dalam
kisaran dari 55% menjadi 42%. Kadar air keju berbeda-beda sesuai dengan jenis keju yang
diinginkan.
Metode pengepresan yang digunakan dalam penelitian ini dilakukan secara manual
dan tidak menggunakan alat pengepres khusus. Proses pengepresan diakhiri ketika sudah
terlihat tidak terdapat air yang keluar. Peristiwa ini menyebabkan kadar air dalam keju mentah
yang terbentuk tidak berbeda dan tidak dipengaruhi oleh kombinasi perlakuan fermentasi. Jadi
kadar air dipengaruhi oleh metode pengepresan.
Berdasarkan kadar air keju, maka keju mentah yang terbentuk dalam penelitian ini
termasuk keju setengah keras. Sesuai dengan klasifikasi produk keju yang didasarkan pada
komponen kandungan air, ada keju keras (hard) dengan kadar air 20-42%, keju setengah keras
(semi hard) dengan kadar air 44-55%, dan keju lunak (soft) dengan kadar air lebih dari 55%
(Scott cit Early, 1988).
II. Analisis Kimia
Analisis kimia keju mentah meliputi nilai pH, kadar protein dan kadar lemak.
Tabel 4. Komposisi kimia keju mentah pada beberapa kondisi fermentasi yang berbeda
Formula Var.Perlakuan (Konsentrasi;Suhu;Waktu)
Sifat Kimia Nilai pH Kadar
Lemak (%) Kadar
Protein (%) P1 10%;370C;6jam 5,46 ab 47,93b 2,87 a
P2 10%;370C;9jam 5,32 a 47,23b 3,47 a P3 10%;400C;6jam 5,24 a 47,07b 3,03 a P4 10%;400C;9jam 5,05 a 44,22b 3,36 a P5 15%;370C;6jam 5,64 ab 44,69b 1,89 a P6 15%;370C;9jam 5,72 ab 44,72b 3,26 a P7 15%;400C;6jam 5,41 ab 42,69b 2,85 a P8 15%;400C;9jam 5,26 a 43,96b 2,74 a P9 20%;370C;6jam 6,04 bc 42,12b 2,89 a P10 20%;370C;9jam 5,56 ab 40,70b 2,23 a P11 20%;400C;6jam 5,63 ab 41,33b 2,91 a P12 20%;400C;9jam 5,24 a 30,26a 2,05 a
Kontrol Rennet;400C;8jam 6, 37c 49, 74 b 2, 21 a
Ket: Superskrip berbeda pada rerata menunjukkan adanya perbedaan nyata pada uji DMRT 5%. Nilai pH, kadar protein dihitung dalam berat basah dan kadar lemak dihitung dalam berat kering
1. Nilai pH
Penghitungan nilai pH pada keju penting dilakukan, karena pH berpengaruh terhadap
aroma dan pemeraman keju. Nilai pH juga mempengaruhi pertumbuhan mikroba yang ada di
dalamnya. Beberapa bakteri patogen tidak dapat tumbuh pada kondisi asam dan pH rendah
(dibawah 5,4). Nilai pH menentukan kualitas dan keamanan keju (Johnson, 2002).
Nilai pH keju mentah yang difermentasi R.oryzae dengan variasi kondisi fermentasi
ditampilkan pada Tabel 4. Hasil analisis variansi rerata nilai pH ditampilkan dalam lampiran 5c.
Berdasarkan uji statistik, nilai pH menunjukkan perbedaan nyata. Nilai pH tertinggi diperoleh
pada P9 (20%, 370C, 6 jam) sebesar 6,04 dan pH terendah diperoleh pada P4 (10%, 400C, 9
jam) sebesar 5,05.
Berdasarkan perlakuan fermentasi secara terpisah yang tidak mempengaruhi nilai pH
keju mentah (Lampiran 4a., 4b., 4c.) dan saat penghitungan perubahan nilai pH selama
pembentukan curd (Lampiran 3.), maka diketahui bahwa perbedaan nilai pH keju mentah tidak
dipengaruhi oleh kombinasi perlakuan fermentasi. Perubahan nilai pH ini mungkin dipengaruhi
oleh beberapa tahapan dalam pembuatan keju.
Beberapa tahapan dalam pembuatan keju yang mempengaruhi nilai pH meliputi whey
syneresis dan penggaraman (Fox, 1993). Asam laktat yang terbentuk setelah fermentasi oleh
R.oryzae akan larut dalam whey, dimana saat whey syneresis yang bertujuan untuk
mengurangi kadar air curd yang terbentuk, asam laktat ikut hilang bersama whey yang
mengalir. Ditambahkan oleh Jaroe et al. (1997), pengeluaran whey akan mengikutkan sebagian
besar laktosa dan termasuk asam laktat sehingga akan mempengaruhi nilai pH. Dan menurut
Tarakci et al., (2004), penggaraman dalam proses pembuatan keju dapat mempengaruhi
keasaman keju. Proses penggaraman mampu mempengaruhi jumlah total mikroba yang
tumbuh di dalamnya sehingga akan mempengaruhi produksi asam. Hal inilah yang
menyebabkan nilai pH pada keju tidak dipengaruhi oleh kombinasi perlakuan fermentasi.
Dibandingkan dengan kontrol, nilai pH pada keju yang difermentasi oleh R.oryzae lebih asam
karena dalam fermentasinya R.oryzae menghasilkan asam.
2. Kadar Lemak
Kadar lemak keju mentah yang difermentasi R.oryzae dengan variasi kondisi
fermentasi ditampilkan pada Tabel 4. Hasil analisis variansi rerata kadar lemak ditampilkan
dalam lampiran 5d. Berdasarkan uji statistik, variasi kondisi fermentasi terhadap kadar lemak
menunjukkan perbedaan nyata. Dari perlakuan fermentasi secara terpisah, hanya konsentrasi
inokulum R.oryzae yang berpengaruh terhadap kadar lemak keju mentah (Lampiran 4a., 4b.,
4c.). Kadar lemak tertinggi diperoleh pada P1 (10%, 370C, 6 jam) sebesar 47,93 %. Kadar
lemak terendah diperoleh pada P12 (20%, 400C, 9 jam) sebesar 30,26%.
Baik tidaknya keju dengan kadar lemak tinggi tergantung jenis asam lemaknya.
Berdasarkan ikatannya, terdapat dua jenis asam lemak, yaitu asam lemak jenuh dan asam
lemak tak jenuh. Lemak yang mengandung asam lemak jenuh diketahui meningkatkan kadar
kolesterol dalam darah dan lemak yang mengandung asam lemak tak jenuh menurunkan kadar
kolesterol dalam darah. Pada penelitian yang dilakukan oleh Pariza and Gayda cit Orrashid,
(2008), asam lemak pada keju mengandung CLA (Conjugated Linoleic Acid) yang termasuk
asam lemak tak jenuh yang berpotensi sebagai zat antikarsinogenik.
Kadar lemak dalam keju mentah yang terbentuk pada penelitian ini dihitung setelah
koagulasi dalam proses pembentukan curd, yakni lemak yang terperangkap di dalamnya. Curd
terbentuk dari pemecahan kasein oleh protease R.oryzae dan memperangkap lemak ke
dalamnya. Pada pembuatan keju, protein yang ada di dalam keju mengalami flokulasi dan
mengikutkan 90% lemak susu yang ada di dalam proses pengolahannya (Fox, 1993), sehingga
aktivitas lipase R.oryzae tidak dipengaruhi tahapan dalam pembuatan keju dan hanya
dipengaruhi oleh kombinasi perlakuan fermentasi yang meliputi konsentrasi inokulum, suhu dan
lama fermentasi.
Gambar 5. Diagram pembentukan curd oleh enzim protease. Curd memperangkap lemak, air,
dan ion (Fox, 1993).
R.oryzae merupakan kapang yang diketahui mampu menghasilkan lipase (Yamane,
1987). Oleh karena itu, konsentrasi inokulum yang tinggi maka akan menghasilkan lebih banyak
lipase akibatnya semakin banyak lemak yang didegradasi sebagai sumber nutrien bagi
pertumbuhan kapang tersebut. Hal ini menyebabkan berkurangnya jumlah total lemak karena
telah terhidrolisis seiring dengan bertambahnya waktu fermentasi. Lipase merupakan kelompok
enzim yang secara umum berfungsi dalam hidrolisis lemak, mono-, di-, dan trigliserida untuk
menghasilkan asam lemak bebas dan gliserol (Suzuki et al,. 1988; Kosugi et al. 1990). Ikatan
ester trigliserida pada keju mentah dihidrolisis oleh enzim lipase R.oryzae menjadi gliserol dan
asam lemak bebas.
Secara umum, kadar lemak yang tinggi pada penelitian ini disebabkan karena bahan
baku pembuatan keju mentah merupakan susu segar tanpa pengurangan krim yang
mempunyai kadar lemak yang tinggi. Namun, tingginya kadar lemak tersebut bermanfaat dalam
proses pemeraman keju, karena dalam fermentasi selanjutnya akan berperan sebagai
pembentuk aroma keju (Gambar 6.). Lebih jauh lagi, matrik dan kandungan lemak yang tinggi
pada keju melindungi organisme selama melalui saluran pencernaan (Stanton et al. cit Corbo et
al., 2001). Keju diketahui dapat digunakan sebagai sistem lewatnya probiotik menuju saluran
pencernaan yang merupakan organ targetnya.
Gambar 6. Jalur metabolisme trigliserida dan asam lemak (Singh, 2003).
3. Kadar Protein
Kadar protein keju mentah yang difermentasi R.oryzae dengan variasi kondisi
fermentasi ditampilkan pada Tabel 4. Hasil analisis variansi rerata kadar protein ditampilkan
dalam lampiran 5e.
Penghitungan kadar protein ini bertujuan untuk mengetahui kadar protein akhir setelah
fermentasi oleh R.oryzae. R.oryzae merupakan kapang yang mampu menghasilkan protease
sehingga mampu memecah protein menjadi molekul penyusunnya yaitu asam amino-asam
amino yang lebih mudah diserap oleh tubuh. Pemecahan protein menjadi asam amino tersebut
menyebabkan kadar protein berkurang namun kadar asam amino meningkat.
Berdasarkan uji statistik, variasi kondisi fermentasi terhadap kadar protein tidak
menunjukkan perbedaan nyata. Begitu juga dengan perlakuan fermentasi secara terpisah tidak
mempengaruhi kadar protein keju mentah (Lampiran 4a., 4b., 4c.). Kadar protein tertinggi
diperoleh pada P2 (10%, 370C, 9 jam) sebesar 3,47%. Kadar protein terendah diperoleh pada
P5 (15%, 370C, 6 jam) sebesar 1,89%.
R.oryzae yang diketahui sebagai kapang penghasil protease, dalam penelitian ini
perlakuan kombinasi fermentasi tidak mempengaruhi kadar protein keju mentah yang terbentuk.
Hal ini mungkin disebabkan proses whey syneresys yang menyebabkan sejumlah protein
hilang.
Pada penelitian ini protein yang dihitung adalah protein terlarut dari keju mentah yang
terbentuk. Penghitungan protein terlarut menggunakan metode Lowry Folin-ciocalteu. Metode
ini diukur dengan spektrofotometer dengan tujuan untuk menghitung jumlah protein yang
terlarut dalam air yang berada di permukaan luar dari suatu protein (Sudarmadji, 1984). Prinsip
Kerja metode Lowry adalah reduksi Cu2+ dari CuSO4 (Reagen B) menjadi Cu+ oleh asam amino
yang terdapat dalam protein. Ion Cu+ bersama-sama dengan fosfomolibdat dan fosfotungstat
yang terkandung dalam reagen Folin membentuk warna biru yang dapat ditera dalam
spektrofotometer (Tranggono dan Setiaji, 1989).
Pada penelitian ini proses whey syneresys dilakukan dengan menggantungkan curd
pada alat penggantung selama beberapa waktu tertentu dan diakhiri setelah curd tampak kering
sehingga tidak ada kesamaan dalam waktu. Pada saat whey syneresis tersebut, protein ikut
mengalir bersama whey (Gupta and Reuter, 1992). Peristiwa ini menyebabkan kombinasi
perlakuan fermentasi tidak mempengaruhi kadar protein yang terhitung setelah keju mentah
terbentuk.
III. Uji Kesukaan
Uji kesukaan pada penelitian ini pada dasarnya merupakan pengujian dari panelis
dengan mengemukakan responnya yang berupa suka atau tidaknya terhadap sifat yang di uji.
Pada pengujian ini dilakukan oleh 20 panelis yang belum terlatih dan tanpa membandingkan
dengan sampel standar. Uji tingkat kesukaan yang dilakukan meliputi rasa, aroma, warna, dan
tekstur keju mentah dengan variasi kondisi fermentasi. Panelis memberikan kisaran nilai 1-5
yaitu 1 (sangat suka), 2 (suka), 3 (agak suka), 4 (tidak suka), 5 (sangat tidak suka). Lembar
untuk pengujian tingkat kesukaan disajikan pada Lampiran 7.
Hasil analisis statistik (Lampiran 6.) diketahui bahwa kesukaan panelis terhadap keju
mentah berada pada skala 2-3, yaitu nilai kesukaan suka dan agak suka. Hasil pengujian keju
mentah pada beberapa variasi kondisi fermentasi dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Uji kesukaan (rasa, aroma, warna, tekstur) keju mentah pada beberapa kondisi fermentasi yang berbeda
Ket: *Hasil rata-rata dari 20 panelis. Nilai 1=sangat suka; 2= suka; 3=agak suka; 4=tidak suka; 5=sangat tidak suka. Superskrip berbeda pada rerata menunjukkan adanya perbedaan nyata pada uji DMRT 5%.
Formula Var.Perlakuan (Konsentrasi;Suhu;Waktu)
Uji Kesukaan Rasa* Aroma* Warna* Tekstur*
P1 10%;370C;6jam 2,45ab 2,60ab 2,30a 2,55a P2 10%;370C;9jam 2,65abc 2,45a 2,30a 2,85abc P3 10%;400C;6jam 3,35d 2,75ab 2,35a 3,25bc P4 10%;400C;9jam 3,50d 3,20b 2,70a 2,90abc P5 15%;370C;6jam 3,10cd 3,10ab 2,50a 3,20bc P6 15%;370C;9jam 2,85bcd 2,45a 2,35a 2,80ab P7 15%;400C;6jam 3,25cd 3,10ab 2,70a 3,20bc P8 15%;400C;9jam 3,40d 2,95ab 2,70a 3,40c P9 20%;370C;6jam 2,05a 2,65ab 2,40a 3,00abc P10 20%;370C;9jam 2,45ab 2,80ab 2,50a 2,75ab P11 20%;400C;6jam 2,95bcd 2,75ab 2,55a 3,15bc P12 20%;400C;9jam 3,25cd 2,55ab 2,65a 3,00abc
Kontrol Rennet;400C;8jam 3,45d 2,95ab 2,75a 2,85abc
Berdasarkan uji statistik (Tabel 5.), variasi kondisi fermentasi dari panelis terhadap rasa,
aroma, warna, dan tekstur keju mentah seluruhnya berada pada kisaran suka hingga agak
suka. Hasil ini menunjukkan bahwa keju mentah hasil fermentasi R.oryzae bisa diterima.
Variasi kondisi fermentasi terhadap rasa menunjukkan perbedaan nyata yang berada
pada kisaran 2,05 (suka) hingga 3,50 (agak suka). Variasi kondisi fermentasi terhadap aroma
menunjukkan perbedaan nyata yang berada pada kisaran 2,45 (suka) hingga 3,20 (agak suka).
Variasi kondisi fermentasi terhadap warna tidak menunjukkan perbedaan nyata. Penilaian
panelis terhadap warna ini berada pada kisaran 2,30 (suka) hingga 2,75 (suka). Variasi kondisi
fermentasi terhadap tekstur menunjukkan perbedaan nyata yang berada pada kisaran 2,55
(suka) hingga 3,4 (agak suka).
Namun berdasarkan hasil analisis statistik (Lampiran 6a.,6b.,6c.,6d.) diketahui bahwa
tingkat kesukaan panelis terhadap rasa, aroma, warna, dan tekstur keju mentah menyebar
pada formula perlakuan fermentasi baik konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu fermentasi
R.oryzae dalam pembuatan keju. Hal ini berarti bahwa tingkat kesukaan terhadap keju mentah
lebih ditentukan oleh panelis bukan berdasarkan variasi kondisi fermentasi. Panelis pada
penelitian ini adalah panelis yang belum terlatih yang belum berpengalaman dalam menilai
citarasa suatu produk makanan sehingga lebih bersifat subjektif.
Pada umumnya rasa dan aroma keju muncul disebabkan oleh komponen volatil yang
terbentuk setelah inokulasi mikroba starter yang dapat mengakibatkan perubahan biokimia,
meliputi proteolisis, lipolisis, dan fermentasi laktosa (Khalid dan Marth, 1989). Dalam penelitian
ini perubahan biokimia dilakukan oleh R.oryzae, yang merupakan salah satu kapang yang
menghasilkan lipase, protease dan amiloglukosidase (Maeda, 2003).
Warna keju dipengaruhi oleh warna susu yang digunakan (Rahman, 1992). Tekstur keju
merupakan struktur kekompakan keju (Daulay, 1991). Keju mentah yang terbentuk dengan
variasi kondisi fermentasi ini memiliki warna putih kekuningan dan tekstur padat berongga.
Variasi kondisi fermentasi tidak berperan sebagai penambah zat warna dalam pembuatan keju,
sehingga warna yang terbentuk hanya berasal dari warna susu yang berwarna putih
kekuningan. Warna kekuningan tersebut berasal dari pigmen karoten yang larut di dalam lemak
(Buckle et al., 1987). Tekstur berongga atau terbuka merupakan tekstur yang terdapat lubang
dipermukaan keju, yang disebabkan aktivitas mikroba saat fermentasi menghasilkan CO2,
dalam penelitian ini dilakukan R.oryzae yang merupakan mikroba heterofermentatif.
Sedangkan pada keju mentah kontrol, penilaian panelis berada pada tingkat kesukaan
agak suka. Hai ini disebabkan pada keju kontrol muncul sedikit rasa pahit yang disebabkan
ketidakseimbangan proteolisis dan peptidolisis dari protease rennet dan tekstur yang lembek
(Fallico et al., 2005).
Berdasarkan analisis fisik, kimia, dan uji kesukaan, diketahui keju mentah yang
terbentuk pada kondisi optimum fermentasi yang disukai panelis adalah keju mentah yang
terbentuk pada P10 (20%, 370C, 9 jam) dengan jumlah rendemen curd 10,76%, kadar air
47,23%, nilai pH 5,56, kadar lemak 40,70% dan kadar protein 2,23%.
C. Uji Mikrobiologis dan Profil Asam Amino Esensial Keju Kontrol dan
Keju Mentah yang Terbentuk pada Kondisi Optimum Fermentasi
Uji mikrobiologis dan analisis profil asam amino dilakukan pada keju mentah kontrol dan
keju mentah P10 (20%, 370C, 9 jam).
1. Uji Mikrobiologis
Kandungan Total Mikrobia dan Keragaman Jenis Mikroba
Pada umumnya bahan makanan memiliki kandungan nutrisi yang lengkap, hal ini
menyebabkannya menjadi media pertumbuhan yang baik bagi berbagai macam
mikroorganisme (Prescott et al., 1999). Keju merupakan makanan hasil olahan susu, yang
merupakan minuman bergizi tinggi karena mengandung hampir semua zat gizi yang diperlukan
tubuh sehingga selain baik dikonsumsi juga dapat digunakan sebagai media pertumbuhan
mikroba (Wahyudi, 2006).
Setiap bahan pangan tidak hanya terdapat satu jenis mikroba saja, tetapi sekumpulan
mikroba mampu tumbuh di dalamnya. Bahan pangan yang sama dapat mempunyai keragaman
jenis mikroba yang berbeda, tergantung kondisi bahan (Makfoeld, 1993). Kandungan total
mikrobia mengindikasikan level mikrobia pada produk yang terkadang digunakan untuk
mengindikasikan kualitas makanan dan kontaminasi proses pengolahan. Oleh karena itu untuk
mengetahui bahwa bahan pangan tidak mengalami perubahan sifat serta bebas dari
kontaminasi mikroba maka diperlukan uji mikrobiologis. Berbagai macam uji mikrobiologis
dapat dilakukan terhadap bahan pangan, meliputi uji kuantitatif mikroba untuk menentukan daya
tahan suatu makanan dan uji kualitatif mikroba untuk menentukan tingkat keamanan.
Penghitungan total mikroba pada penelitian ini dilakukan dengan dengan metode
Standar Plate Count (SPC) pada media Plate Count Agar (PCA) yang dilakukan dengan
pengenceran. Metode ini merupakan metode analisis kuantitatif yang paling umum untuk
menentukan jumlah sel-sel yang hidup (Colony Forming Unit/CFU) dalam bahan pangan.
Pada penelitian ini, isolasi dan identifikasi mikroba diambil dari sampel keju mentah
kontrol dan P10. Isolasi dilakukan dengan metode cawan gores untuk menghasilkan isolat
murni. Selanjutnya, jenis mikroba diketahui dengan menumbuhkan isolat murni ke dalam media
identifikasi. Untuk jenis kapang, isolat ditumbuhkan pada media PDA. Dan untuk bakteri
ditumbuhkan pada media MRSA. Identifikasi kapang dilakukan dengan pengamatan
mikroskopis. Identifikasi bakteri dilakukan dengan alat identifikasi mikroba ‘BD Phoenix’,
berdasarkan karakter biokimianya. Sistem Mikrobiologi Otomatis BD PhoenixTM digunakan
untuk mengidentifikasi genus dan spesies dari suatu mikroorganisme (bakteri) bardasarkan
kemampuan fermentasi gula-gula. Sistem ini terdiri dari substrat florogenik dan khromogenik.
Ketika bakteri bersinggungan dengan substrat, maka bakteri tersebut akan bereaksi dengan
substrat (reaksi positif (+)) atau tidak bereaksi (reaksi negatif (-)). Ketika reaksi positif dan reaksi
negatif dikombinasikan maka bakteri tersebut akan teridentifikasi secara otomatis oleh BD
PhoenixTM dengan membandingkan pada data basenya.
Hasil penghitungan total mikroba dan identifikasi keragaman jenis mikroba pada keju
mentah kontrol dan P10 dapat dilihat pada Tabel 6. dan Tabel7.
Tabel 6. Total Plate Count (TPC) dan jumlah mikroba pada media Potato Dekstrosa Agar (PDA) dan de Man Ragosa Sharpe Agar (MRSA) pada keju mentah kontrol dan perlakuan (P10).
Penghitungan Keju kontrol Keju P10 Total mikroba pada media TPC (cfu/ml)
10,5x106
8,1x106
Jumlah kapang pada media PDA (cfu/ml) (Aspergillus sp)
4,1x106
1,2x106
Jumlah bakteri pada media MRSA (cfu/ml) (Enterococcus hirae dan Bacillus subtilis)
4,4x106
3,7x106
Dari Tabel 6. tersebut dapat diketahui bahwa pada keju P10 (menggunakan inokulum
R.oryzae) memiliki jumlah total mikroba yang lebih rendah, hal ini bisa terjadi karena saat
fermentasi oleh R.oryzae dihasilkan asam organik yang bersifat antimikroba sehingga mampu
mengurangi jumlah mikroba yang ada, jika dibandingkan dengan keju mentah kontrol. Secara
keseluruhan, jumlah mikroba dalam keju mentah pada penelitian ini lebih rendah daripada
jumlah mikroba pada penelitian Tayar cit Hayaloglu (2005) yaitu jumlah mikroba yang
ditemukan pada keju berkisar pada jumlah 1.3x108- 7.8x109 cfu/ml untuk bakteri dan 1.0x101-
2.0x107 cfu/ml untuk kapang dan yeast.
Tabel 7. Keragaman jenis mikroba pada keju mentah kontrol dan perlakuan
Keju kontrol Keju P10 Enterococcus hirae (Enterococcus faecalis) Enterococcus hirae
Bacillus subtilis Bacillus subtilis Aspergillus sp. Aspergillus sp.
Dari hasil identifikasi jenis mikroba pada keju mentah P10 maupun kontrol sesuai
dengan Tabel 7., ditemukan tiga jenis mikroba yang sama yaitu 1 jenis kapang, Aspergillus dan
2 jenis bakteri, Enterococcus hirae dan Bacillus subtilis. Sedangkan R.oryzae tidak ditemukan
pada keju P10 karena pertumbuhannya yang terbatas oleh asam dan diketahui dari pola
pertumbuhannya (Gambar 4.), bahwa dengan semakin meningkatnya asam laktat yang
dihasilkan maka akan menghambat pertumbuhan kapang tersebut. Jenis mikroba yang
ditemukan pada keju mentah ini bukan merupakan mikroba patogen. Menurut Little and Sagoo
dalam European Commission Recommendation (2004), bakteri pembatas kontaminasi pada
keju adalah Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli.
Ditambahkan oleh Wirtanen et al. (2002), bakteri patogen yang sering ditemukan pada produk
olahan susu antara lain adalah Staphylococcus aureus, Listeria sp., Clostridium botulinum.
Pada penelitian ini jenis-jenis tersebut tidak ditemukan.
Identifikasi mikroba yang terdapat pada keju penting dilakukan untuk mengetahui
kontribusi mikroba pada kualitas keju (Beresford et al., 2002). Bakteri yang ditemukan pada
penelitian ini adalah Enterococcus hirae dan Bacillus subtilis, keduanya termasuk bakteri asam
laktat (BAL) yang merupakan mikroorganisme alami dalam air susu. BAL hampir selalu ada,
kelompok ini kebanyakan dari famili Lactobacteriae, BAL ini akan mati saat pasteurisasi susu di
awal pembuatan keju kecuali bakteri yang bersifat termofilik dan mampu membentuk spora.
Habitat alaminya adalah saluran pencernaan pada membran mucus manusia atau hewan
(Anggarwal, 2006).
Bakteri dari genus Enterococcus dan Bacillus adalah bakteri yang sering terdapat dalam
bahan pangan yang bersifat termodurik yang mampu bertahan pada suhu pasteurisasi. Selain
itu, Enterococcus merupakan bakteri yang mampu hidup pada pH rendah dibawah 4,0 termasuk
aciduric bacteria. Sedangkan Bacillus merupakan bakteri yang mampu hidup pada konsentrasi
kadar garam tinggi (10%) termasuk halotolerant bacteria. Genus Bacillus mampu membentuk
spora. Kelompok Bacillus adalah bentuk termofilik yang paling umum dalam susu.
Pada makanan Bacillus merupakan bakteri yang bersifat proteolitik (mampu
mengidrolisis protein dalam makanan, oleh enzim ekstraselular proteinase) dan sakarolitik
(mampu menghodrolisis karbohidrat yang kompleks). Bacillus subtilis merupakan bakteri gram-
positif yang berbentuk batang. Jenis ini memiliki endospora yang letaknya di tengah dan secara
alami sering ditemukan di tanah. B.subtilis tumbuh di berbagai mesofiilik suhu berkisar 25-35
0C. B.subtilis juga telah berevolusi sehingga dapat hidup walaupun di bawah kondisi ekstrim
dan lebih cepat mendapatkan perlindungan terhadap stres situasi seperti kondisi pH rendah
(asam), bersifat alkali, osmosa, atau oksidatif, dan panas atau etanol (Madigan dkk., 2000).
B.subtilis bukan merupakan bakteri patogen. B.subtilis menghasilkan α-amilase dengan
konsentrasi yang lebih tinggi pada media laktosa daripada pada media pati (Grassano and
Balatti cit Wirtanen et al., 2002). B. subtilis juga mampu menghasilkan vitamin B2 (DSM, 2008).
B.subtilis dikenal mampu menghasilkan chymosin (rennet mikroba) sebagai koagulan dalam
pembuatan keju, sehingga dimungkinkan bakteri ini turut berkontribusi dalam pembentukan
curd di awal pembuatan keju.
Genus Enterococci adalah bakteri asam laktat yang sering ditemukan pada makanan
hasil olahan susu dan jenis makanan lainnya. Walaupun sebelumnya, keberadaan bakteri ini
dalam makanan digunakan sebagai indikator kondisi higienis, namun sekarang dalam industri
bioteknologi, bakteri probiotik ini penting digunakan karena komponen-komponen yang
dihasilkan dari hasil metabolisme bakteri ini penting dalam perkembangan flavor keju.
Berdasarkan penelitian Mannu et al., (2004); Paparella et al., (2004); Brasca et al., (2004);
Cakmakci et al., (2007), meskipun penggunaan Enterococcus sebagai starter pembuatan keju
jarang digunakan, namun penggunaan bakteri ini penting dalam pematangan keju karena
kemampuannya untuk tumbuh pada kondisi dengan kadar garam tinggi, dapat beradaptasi
pada kondisi asam serta mampu menghasilkan antimikroba.
Enterococcus hirae dahulunya dikenal sebagai Streptococcus faecalis atau faecium
(Edinburgh, 1947 dalam www.ikp.unibe.ch/lab1/gram.gif, 2009). Secara tradisional, BAL terdiri
dari empat genus yaitu Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus dan Streptococcus. Saat ini
beberapa genus baru telah dimasukkan ke dalam kelompok BAL untuk revisi taksonomi baru.
Hal ini disebabkan adanya beberapa perkembangan dalam beberapa sifat fisiologi, perbedaan
dan persamaan dalam produksi metabolit. Genus Streptococcus telah direorganisasi menjadi
Enterococcus (Yang, 2000).
Pada penelitian yang dilakukan oleh Soda et al. (2006), ditemukan Enterococcus
sebagai BAL yang diisolasi dari ‘Egyptian Ras Cheese’ berdasarkan karakter biokimianya.
Enterococcus faecalis termasuk bakteri asam laktat yang berperan sebagai probiotik (Conway,
1996). Pada penelitian yang dilakukan oleh Pimentel et al.(2004), dilaporkan bahwa beberapa
spesies Enterococcus telah diisolasi dari keju Serra da Estrela dan keju Terrincho, keju yang
berasal dari Portugis yaitu Enterococcus faecium, E. durans. Dari penelitian Beresford et al.,
(2000), dilaporkan bahwa penambahan E. faecium pada keju sebagai kultur starter
meningkatkan flavor keju dan mempercepat pemeraman keju. Enterococcus faecalis
merupakan bakteri homofermentatif yang murni menghasilkan 90% laktat dalam fermentasinya
(Schlegel, 1997).
BAL berpotensi sebagai probiotik yaitu mikroba hidup yang digunakan sebagai
suplemen yang mempunyai pengaruh menguntungkan pada tubuh manusia karena
meningkatkan keseimbangan mikroba dalam usus (Fuller, 1989). Makanan yang mengandung
bakteri probiotik termasuk ke dalam makanan fungsional karena berpengaruh positif terhadap
kesehatan tubuh (Fueller cit Pato, 2003). Enterococcus merupakan probiotik nonpatogen yang
yang juga sering digunakan dalam makanan fermentasi selain dari genus Bifidobacterium and
Lactobacillus (Sanders and Huis, 1999).
BAL dalam industri keju penting untuk menentukan kualitas keju. Peran asam laktat
dalam industri keju adalah mengubah laktosa menjadi asam laktat. Asam laktat bertanggung
jawab dalam flavor asam pada keju mentah dan penting dalam pembentukan dan teksturisasi
curd. Selain itu, juga berperan penting dalam sintesis enzim proteolitik dan lipolitik yang terlibat
dalam pematangan keju dan menekan mikroba patogen maupun spoilage. Produksi asam
dalam susu dan perkembangan flavor selama pematangan tergantung pada aktivitas proteolitik
BAL. Aktivitas proteolitik dari BAL bertujuan untuk menghasilkan asam amino untuk
pertumbuhannya. Sehingga BAL juga berperan dalam pembentukan curd dan flavor dalam
pembuatan keju.
Kapang adalah kelompok mikroba yang tergolong dalam fungi. Fungi dapat mensintesis
protein dengan mengambil sumber karbon dari karbohidrat, sumber nitrogen dari bahan organik
atau anorganik, dan mineral dari substratnya. Sumber karbon yang terbaik adalah glukosa yang
merupakan penyusun laktosa susu. Isolat kapang Aspergillus ditemukan pada keju kontrol dan
keju optimum fermentasi. Aspergillus dikenal sebagai kapang dalam industri fermentasi. Isolat
kapang dimasukkan ke dalam genus Aspergillus karena karakter sesuai dengan ciri umum
morfologi yaitu hifa bersepta, konidiofor jelas pada ujung berbentuk gelembung seperti botol.
Cabang konidia terbentuk langsung pada sterigmata (Malloch, 1997). Aspergillus merupakan
kapang yang sering ditemukan sebagai kapang yang mengkontaminasi pada keju Belanda
(Tuma et al., 2004). Akan tetapi, keberadaan kapang ini bermanfaat dalam mengasilkan asam
organik (Jon et al.,2004; Domsch, 1980). Sehingga berkontribusi juga dalam pembentukan curd
serta flavor keju.
Keberadaan kapang dan bakteri asam laktat ini penting dalam mempengaruhi flavor
keju. Kapang ini akan meningkatkan flavor keju karena mampu menghasilkan asam organik.
Bakteri asam laktat mempengaruhi flavor keju melalui beberapa mekanisme, yaitu: 1). Hidrolisis
protein menjadi peptida dan asam amino bebas; 2). Metabolisme asam amino bebas; 3).
Hidrolisis lemak susu menjadi asam lemak bebas dan konversinya menjadi ester (Steel et al.,
2004).
Flavor adalah atribut yang paling penting dalam keju. Pemecahan komponen susu
memberikan peningkatan dalam komponen volatil dan non-volatil yang memiliki kontribusi
dalam pembentukan flavor keju. Pemecahan secara enzimatik, baik oleh mikroba starter
maupun bukan starter, penting dalam produksi komponen flavor volatil, seperti komponen sulfur
dan komponen yang merupakan derivat dari rantai cabang dan asam amino aromatic (Smith et
al., 2004). Enzim yang dhasilkan oleh starter baik proteinase maupun peptidase berperan
penting dalam pembentukan peptida kecil dan asam amino yang akan menjadi prekusor
komponen pembentuk flavor (Urbach, 1997; Broome and Limsowtin cit Hayaloglu et al., 2005).
2. Profil Asam Amino Esensial
Asam amino merupakan komponen utama penyusun protein. Asam amino dibagi dua
kelompok yaitu asam amino esensial dan non-esensial. Asam amino esensial tidak dapat
diproduksi dalam tubuh sehingga sering harus ditambahkan dalam bentuk makanan,
sedangkan asam amino non-esensial dapat diproduksi dalam tubuh. Asam amino umumnya
berbentuk serbuk dan mudah larut dalam air, namun tidak larut dalam pelarut organik nonpolar
(Suharsono cit Sitompul, 2004).
Analisis profil asam amino esensial dilakukan menggunakan High Performance Liquid
Chromatography (HPLC) dengan delapan target asam amino esensial yang terdiri dari L-
Threonin, L-Methionine, L-Valine, L-Thriptophan, L-Phenylalanine, L-Isoleucine, L-Leucine, dan
L-Lycine.
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) merupakan sistem pemisahan
komponen larutan dengan akurasi yang cukup tinggi. Dasar pemisahan kromatografi adalah
kesetimbangan komponen-komponen campuran diantara fase gerak dan fase diam. Hasil
analisis berupa kromatogram. Kromatogram berfungsi sebagai analisis kualitatif dan kuantitatif.
Posisi puncak (peak) pada sumbu waktu berfungsi untuk mengidentifikasi komponen cuplikan,
sedangkan luas area (area %) atau tinggi peak merupakan ukuran kuantitatif tiap komponen.
Waktu retensi (RT= Retention Time) merupakan petunjuk kualitatif suatu senyawa. Waktu
retensi adalah waktu yang dibutuhkan oleh suatu senyawa untuk mencapai detektor. Jumlah
peak yang terdapat dalam kromatogram menunjukkan jumlah komponen yang terdapat dalam
cuplikan. Hasil analisis asam amino esensial keju mentah kontrol dan P10 (20%, 370C, 9 jam)
dapat dilihat pada Tabel 8. RT dan area masing–masing asam amino esensial pada lampiran 8.
Tabel 8. Komposisi senyawa asam amino keju mentah kontrol dan perlakuan
Senyawa Asam Amino Esensial
Kadar asam amino esensial Keju Mentah
Kontrol (ppm) P10 (ppm) L-Threonine 0,72 1,15 L-Methionine 0,29 0,47
L-Valine + L-Thriptophan 0,44 0,70 L-Phenylalanine 0,42 0,66
L-Isoleucine 0,30 0,48 L-Leucine 0,81 1,28 L-Lycine 1,02 1,64
Hasil analisis HPLC menunjukkan bahwa jumlah peak yang terbentuk baik pada
kromatogram asam amino standard, kontrol, dan P10 adalah sebanyak 7 RT, hal ini
dikarenakan peak untuk RT asam amino L-Valine + L-Thriptophan sama.
Uji kualitatif asam amino meliputi identifikasi delapan jenis asam amino esensial
berdasarkan tinggi peak yang muncul, kemudian diregresikan dengan standar. Uji kuantitatif
asam amino dihitung berdasarkan luas area peak yang muncul.
Rerata kandungan asam amino esensial keju mentah ditampilkan pada Tabel 8. Dari
hasil penelitian diketahui bahwa kadar masing-masing delapan asam amino esensial keju
mentah P10 lebih tinggi daripada keju mentah kontrol, hal ini berarti bahwa aktivitas protease
R.oryzae pada keju mentah P10 lebih baik daripada aktivitas protease rennet. Dari hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa keju mentah P10 memiliki kadar gizi yang lebih tinggi
daripada keju kontrol yang dikoagulasikan dengan rennet. Aktivitas proteolitik pada pembuatan
keju ini juga dilakukan oleh bakteri asam laktat yang juga mampu menghasilkan protease.
Menurut Muhiddin dkk. (2001), fermentasi menyebabkan kandungan protein berubah
(meningkat) karena adanya mikroba yang tumbuh diatasnya. Protein tersusun oleh ikatan
peptida yang tersusun oleh beberapa asam amino, sehingga kadar asam amino juga akan
meningkat. Nutrisi yang tinggi dalam keju dikarenakan keju terbuat dari susu dengan kasein
sebagai protein yang memiliki asam amino esensial lengkap (Hughes and Willenberg, 1993).
Kandungan asam amino terutama asam amino esensial penting bagi tubuh manusia,
selain asam amino esensial tidak dapat disintesis oleh tubuh, juga karena protein yang terdapat
dalam bahan pangan akan diserap oleh usus dalam ben
Selain itu, dalam industri keju, asam amino yang telah dikonversi oleh enzim yang dihasil
starter berfungsi sebagai pembentuk flavor (Broome
pemecahan kasein menjadi peptide kecil dan asam amino penting untuk perkembangan flavor
keju (Singh et al., 2003). Produk-produk ini memiliki kontribusi secara langsung
keju atau sebagai prekusor dalam komponen pemb
Gambar 7. Ringkasan jalur konversi protein yang berkaitan dengan pembentukan flavor keju (Smit, 2004).
dalam bahan pangan akan diserap oleh usus dalam bentuk asam amino (Winarno, 1995
dalam industri keju, asam amino yang telah dikonversi oleh enzim yang dihasil
starter berfungsi sebagai pembentuk flavor (Broome et al.,1998). Keseimbangan pada
pemecahan kasein menjadi peptide kecil dan asam amino penting untuk perkembangan flavor
produk ini memiliki kontribusi secara langsung terhadap flavor
ekusor dalam komponen pembentuk flavor (Visser cit Awad et al
. Ringkasan jalur konversi protein yang berkaitan dengan pembentukan flavor keju
tuk asam amino (Winarno, 1995).
dalam industri keju, asam amino yang telah dikonversi oleh enzim yang dihasilkan
Keseimbangan pada
pemecahan kasein menjadi peptide kecil dan asam amino penting untuk perkembangan flavor
terhadap flavor
et al., 2005).
. Ringkasan jalur konversi protein yang berkaitan dengan pembentukan flavor keju
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Berdasarkan analisis fisik, kimia, dan uji kesukaan, diketahui keju mentah yang terbentuk
pada kondisi optimum fermentasi yang disukai panelis adalah keju mentah yang terbentuk
pada kondisi optimum konsentrasi inokulum, suhu, dan waktu fermentasi formula perlakuan
20%, 370C, 9 jam.
2. Perbedaan kondisi fermentasi berpengaruh terhadap rendemen curd, nilai pH, kadar lemak,
dan tidak berpengaruh terhadap kadar air, kadar protein keju mentah yang terbentuk. Keju
mentah yang terbentuk pada kondisi optimum fermentasi memiliki kualitas sebagai berikut :
a. Jumlah rendemen curd 10,76%, kadar air 47,23%, nilai pH 5,56, kadar lemak 40,70%,
dan kadar protein 2,23%.
b. Jumlah total mikroba sebanyak 8,1x106, bakteri sebanyak 3,7x106 dan kapang sebanyak
1,2x106. Hasil identifikasi mikroba meliputi Enterococcus hirae (Enterococcus faecalis),
Bacillus subtilis, dan Aspergillus sp.
c. Analisis profil delapan asam amino esensial meliputi : L-Threonine (1,15 ppm), L-
Methionine (0,47 ppm), L-Valine + L-Thriptophan (0,70 ppm), L-Phenylalanine
(0,66ppm), L-Isoleucine (0,48ppm), L-Leucine (1,28ppm), L-Lycine (1,64 ppm).
B. Saran
1. Pada penelitian pembuatan keju berikutnya perlu diciptakan suatu kondisi yang dapat
mempertahankan pertumbuhan R.oryzae hingga akhir fermentasi.
63
2. Identifikasi mikroba pada keju menggunakan metode analisis tingkat molekuler sehingga
didapatkan hasil yang lebih tepat.
DAFTAR PUSTAKA
Achyadi, N., A. Hidayanti. 2004. Pengaruh Konsentrasi Bahan Pengisi dan Konsentrasi Sukrosa Terhadap Karakteristik Fruit Leather Cempedak (Artocarpus champeden Lour). Infomatek. 6 (3): 127-142.
Adnan, M. 1984. Kimia dan Teknologi Pengolahan Air Susu. Fakultas Teknologi Pertanian.
Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. Aggarwal, S. 2006. Isolation and Characterization of Strach Degrading Lactic Acid Bacteria.
Thesis. Dept.of Biotechnology and Env.Sciences Thapar Institute of Eng.&Technology, Deemed University, Patiala.
Akalin, A. S., S. Gonc., Y. Akbas. 2002. Variation in Organic Acids Content during Ripening
Picled White Cheese. J. Dairy Sci. 85: 1670-1676. Awad, S., A.N. Hassan and F. Halaweish. 2005. Application of Exopolysaccharide-Producing
Cultures in Reduced-Fat Cheddar Cheese: Composition and Proteolysis. J. Dairy Sci. 88: 4195–4203.
Bailey J. E., D.F. Ollis. 1998. Dasar-Dasar Rekayasa Biokimia. Diterjemahkan oleh Darwis AA.,
Liesbetini, Sailah I, Herlina. PAU IPB, Bogor. Banerjee, R. and B. C. Bhattacharyya. 2004. Purification and Characterization of Protease from
a Newly Isolated Rhizopus oryzae. J. Bioprocess and Biosystems Engineering. 7 (8): 369-374.
Benjamin, S. dan A. Pandey. 1998. Candida rugosa lipases: Molecular biology and versatility in
biotechnology, Yeast.14:1069–1087. Beresford T.P., Fitzsimons N.A., Brennan N.L., Cogan T.M., 2002. Recentn Advances in cheese
microbiology, Int. Dairy J. 11: 259-274. Black, J.G. 1999. Microbiology Principles and Exploration. Prentice Hall, New Jersey. Brasca, M., S. Morandi, R. Lodi. 2004. Technological of Lactic Acid Bacteria Isolated from
‘Formagela Valseriana ‘A Traditional Italian Cheese. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Broome, M.C., Limsowtin G.K.Y.1998. Starter Peptidase Activity in Maturing Cheese. Aust. J.
Dairy Technol. 5: 79–82. Brown, R. J. dan C. A. Enstrom. 1998. Milk Clotting Enzymes di dalam Fundamental of Dairy
Chemistry. 3rd ed. Var Nostrand Reinhold, New York. Cakmakci, S., E. E. Dagdemir, A. A. Hayaloglu, M. Gurses and E. Gundogdu. 2007. Influence of
ripening container on the lactic acid bacteria population in Tulum cheese. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 24 (3): 293-299.
Ceylan, Z., H. Turgoklu, K.S. Dayisoylu. 2003. The Microbiological and Chemical Quality of Sikma Cheese Produced in Turkey. Pakistan Journal of Nutrition, 2 (2): 95-97.
Cheeseman, G.C. 1981. Rennet and Cheesemaking. Di dalam Enzymes and Food Processing.
C.G. Birch, N Blakebrough dan K.J. Parker (eds). Applied Sci. Publisher, Lt. London. Coenen T. M., Aughton P, Verhagen H. 1997. Safety evaluation of lipase derived from Rhizopus
oryzae: summary of toxicological data. Food Chem Toxicol. 35(3-4): 315-22. Cogan T.M. 1985. The Leuconostoc: Milk Products. Di dalam Bacterial Starter Culturs for
Foods. CRC Press Inc., Boca Raton. Conway, P.L., 1996. Selection criteria for probiotic microorganisms. Asia Pacific J. Clin. Nutr.,
10-14 Corbo, M.R., M. Albenzio, M. De Angelis, A. Sevi, and M. Gobbetti. 2001. Microbiological and
Biochemical Properties of Canestrato Pugliese Hard Cheese Supplemented with Bifidobacteria. J. Dairy Sci. 84:551–561.
Danuwarsa. 2006. Analisis Proksimat dan Asam Lemak pada Beberapa Komoditas Kacang-
kacangan. Buletin Ilmu Pertanian. 11(1): 5-8. Daulay, D. 1991. Fermentasi Keju. PAU Pangan dan Gizi. IPB, Bogor. Darwis, A.A. dan E. Sukara. 1989. Teknologi Mikrobial. PAU Bioteknologi, IPB, Bogor Domsch, K.H., W. Gams dan T.Anderson. 1980. Compendium of Soil Fungi. Academic Press,
London. DSM and their applications. 2008. Current overview of the micro-organisms used. Early, R. 1998. The Technology of Dairy Products. 2nd. Blackie Academic and Professional. An
Imprint of Thomson Science. 2-6 Boundary Row, London, UK. Edinburgh, 1947 dalam www.ikp.unibe.ch/lab1/gram.gif [ 2 Februari 2009]. Ernie A. B., dan Lestari N., (1992), Pengembangan Pemanfaatan Buahbuahan Tropis untuk
Pembuatan Olahan Eksotis (Leather Fruit). BBIHP, Bogor. Essamri, M., V. Deyris dan L. Comeau. 1998. Optimization of lipase production by Rhizopus
oryzae and study on the stability of lipase activity in organic solvents. J. Biotechnology. 60(1-2): 97-103.
Fallico, V. P. L. H. McSweeney, J. Horne, C. Pediliggieri, J.A. Hannon, S. Carpino, and G.Licitra. 2005. Evaluation of Bitterness in Ragusano Cheese. J. Dairy Sci. 88: 1288-1300.
Femena, O.R. 1976. Principles of Food Science. Marcel Dekker. Inc. New York. Flood, M. T. dan Mitsuru K. 2003. Safety evaluation of lipase produced from Rhizopus oryzae:
summary of toxicological data. Regulatory Toxicology and Pharmacology. 37 (2): 293-304.
Food and Drug Administration. 2008. American Type Culture Collection, Parklawn Drive,
Rockville, MD 20852. Fowler, M. W. 1988. Enzyme Technology. Di dalam A. Scragg (ed). Biotechnology for
Engineers. Ellis Horwood Ltd., England. Fox, P.F. 1993. Cheese: Chemistry, Physics and Microbiology 2nd. Chapman and Halll, London. Frazier W. L., dan D. C. Westhoff 1983. Food Microbiology. Mc Graw Hill Publishing Company,
Ltd. NewDelhi. Frost G. M., and Moss. 1987. Production Enzyme by Fermentation. In Biotechnology. Volume
70, Germany. Fuller, R. 1989. Probiotics in man and animals. J. Appl. Bacteriol. 66:365–378. Gandhi, N. 2007. Application of Lipase. J. of The American Oil Chemists’ Society. 74 (6): 621-
634. Garcia, G., G. Monteiro dan E. Julio. 2005. Microbial Rennet Produced by Mucor miehei in
Solid-State and Submerged Fermentation. Brazilian Archives of Biology and Technology. An International Journal. 48 (6): 931-937.
Green M. L. 1977. Review of The Progress of Dairy Science Milk Coagulant. J. Dairy Research.
44:159. Gupta, V.K. and H. Reuter. 1992. Processed cheese foods with added whey protein
concentrates Lait .72: 201-212. Hadioetomo, R.S. 1990. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek: Teknik dan Prosedur Dasar dalam
Laboratorium. PT Gramedia, Jakarta. Hang, Y., 1989. Direct fermentation of corn to L(+)-lactic acid by Rhizopus oryzae.
Biotechnology Letter 11: 299-300. Hayaloglu, A.A., M. Guven, P. F. Fox, and P. L. H. McSweeney. 2005. Influence of Starters on
Chemical, Biochemical, and Sensory Changes in Turkish White-Brined Cheese During Ripening J. Dairy Sci. 88:3460–3474.
Hayaloglu, A. A., S. Cakmakci, E. Y. Brechany, K. C. Deegan and P. L. H. McSweenwy. 2007.
Microbiology, Biochemistry and Volatile Composition of Tulum Cheese Ripened in Goat’s Skin or Plastic Bags. J. Dairy Sci. 90: 1102-1121.
Hesseltine CW. 1983. Microbiology of oriental fermented foods. Ann Rev Microb 37:575–601. Hiol, A., M.D. Jonzo, N. Rugani, D. Druet, L.Sarda, L.C. Coemau. 2000. Purification and
Characterization of An Extracellular Lipase from A Thermophilic Rhizopus oryzae Strain Isolated from Palm Fruit. Enzyme and Microbial Technology. 26 : 421-430.
Hou, C. T., dan T. M. Jonhston. 1992. Screening of Lipase activities with Cultures from Agricultural Research Service Culture Collection. JAOCS. 69 : 1088-1097.
Hughes, K.V. and B.J. Willenberg, 1993. Using and McSweeney, P.L.H. and P.F. Fox, 2004.
Metabolism of Storing Cheddar Cheese. Department of Food Science and Human Nutrition, University of Missouri Columbia. Human Environmental Science Publication GH1287.
Jaroe, D., W. Ginzinger, E. Tschager, H.K. Mayer, H. Rohm. 1997. Effects of water addition on
composition and fracture properties of Emmental cheese. Lait. 77: 467-477. Jin, B., J. van Leeuwen, B. Patel, H. Doelle, Q. Yu, 1999. Production of fungal protein and
glucoamylase by Rhizopus oligosporus from starch processing wastewater, Process Biochem. 34: 59–65.
Johnson, M.E., 1988. Part II-Cheese Chemistry. Di dalam Fundamental of Dairy Cemistry. N.P.
Wong (ed). Van Nostrand Reinhold. New York. Johnson, M. 2002. Cheese pH. What’s behind the rise and fall? Dairy Pipeline. 14: 4. Jon K. Magnuson and Linda L. Lasure. 2004. Organic Acid Production by Filamentous Fungi
Advances in Fungal Biotechnology for Industry, Agriculture, and Medicine. Edited by Jan and Lene Lange, Kluwer Academic/Plenum Publishers.
Justa, M. Poveda, Lourdes C. and Paul L. H. Mc. Sweeney. 2004. Free amino acid content of
Manchego cheese manufactured with different starter cultures and changes throughout ripening. Food Chemistry. 84(2): 213-218.
Khalid, N.M and E.H. Marth. 1989. Enzym Activities of Lactic Streptococcy and Their role in
Maturation of Cheese. J. Dairy Scie. 73: 2669-2684. Kosikowski, F.V. and V.V. Mistry. 1997. 3rd ed. Cheese and Fermented Milk Foods. Origin and
Principles Westport. Conn. Kosugi Y., H. Tanaka & N. Tomizuka. (1990). Continuous hydrolysis of oil by immobilized lipase
in a countercurrent reactor. Biotechnol. & Bioengin., 36 (6), 617-622. Kurniati, T. 2007. Rendemen Curd Komposisi Kimia dan Citarasa Keju Peram dengan
Penambahan Yogurt Probiotik pada Level Konsentrasi Rennet yang Berbeda. Skripsi. Fak. Peternakan. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Kuswanto, K.R. dan S. Slamet. 1989. Mikrobiologi Pangan. PAU Pangan dan Gizi. UGM,
Yogyakarta. Lampert, M. L. 1975. Modern Dairy Product. 3rd. Ed. Chemical Publication. Co.Inc. New York. Law, B. A. 1997. Microbiology and Biochemistry of Cheese and Fermented Milk. 2nd Edition.
Backle and Professional. Chapman and Hall, London. Legowo, A., Nurwantoro, A.N. Albaari. 2003. Kadar Protein, Lemak, Nilai pH dan Mutu Hedonik
Keju Cottage dengan Bahan Dasar Susu Kambing dan Susu Sapi Skim. Seminar
Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Puslitbang Peternakan, Bogor. p: 272-277. 29-30 September 2003.
Leksono, T. dan Syahrul. 2001. Studi Mutu dan Penerimaan Konsumen Terhadap Abon Ikan.
Jurnal Natur Indonesia III (2): 178– 184. Lennartsson, P. 2007. Antimicrobial Effect of Zygomycetes Cell Wall on Nonwoven Textiles.
Thesis. Institutionen Ingenjorshogskolan Hogskolan Boras, Lars Edebo. . Little, CL and Sagoo, SK. 2004. European Commission Co-ordinated Programme for the Official
Control of Foodstuffs for 2004: Microbiological Examination of Cheeses made from Raw or Thermised Milk from Establishments of Production and Retail in the United Kingdom, Colindale Avenue, London.
Liu, Y., Wen, Z., Liao, W., Liu, C., Chen, S., 2005. Optimization of L-(+)-lactic acid production
process from cull potato by Rhizopus oryzae. Engineering in Life Sciences 5: 343–349. Longacre, A., J.M. Reimers, J.E. Gannon, B.E. Wright. 1997. Flux analysis of glucose
metabolism in Rhizopus oryzae for the purpose of increasing lactate yields, Fungal Genet. Biol. 21: 30–39.
Maeda. 2003. “Effects of Mutant Thermostable α-Amylases on Rheological Properties of Wheat
Dough and Bread”. Cereal Chemistry. 80(6): 722-727. Mahdawi, A. H. H. R. Rahmani and J. Pourezze. 2005. Effect of Probiotic Supplement on Egg
Quality and Laying Hen’s Performance. Journal of Asian Network for Scientific Information.
Makfoeld, D. 1993. Mikotoksin Pangan. Penerbit Kanisius, Yogyakarta. Malloch, D. 1997. Mould Isolation, Cultivation, Identification. Micology. Univ. of Toronto. Mannu, L., E. Daga, R. Comunian, A. Paba. 2004. Biodiversity of Lactic Acid Present in The
Natural Microflora of Traditional Ewe’s Raw Milk Flora Sardo Cheese. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Marth, H.E. and J.L. Steele. 2001. Applied Dairy Microbiology. 2nd Edition. Revised and
Expanded Marcel Dekker, Inc. New York. Martin, P.G. 1979. Manual of Food Quality Control 3nd. FAO, Rome. Mc. Kay, L.L., W.E. Sandine and P.R. Elliker. 1971. Lactose Utilization by Lactic Acid and
Bacteria. J. Dairy Science. 37: 493. Mennane, Z., Faid, M., Lagzouli, M. 2007. Physico-Chemical, Microbial and Sensory
Characterisation of Moroccan Klila. Middle-East Journal of Scientific Resarch 2 (3-4): 93-97.
Mirdamadi, S., H. Sadeghi., N.Sharafi., M.Falahpour., F.A. Mohseni, dan M.R. Bakhtiari. 2002.
Comparison of Lactic Acid Isomers Produced by Fungal and Bacterial Strains. Iran Biomed J 6(2&3): 69-75.
Mishra,C. and J. Lambert, 1996. Production of antimicrobial substances by probiotics. Asia
Pacific J. Clin. Nutr., 5:20- 24. Moreira, S. R., R. Schwanl, Eliana. 2001. Isolation and Identification of Yeast and Filamentous
Fungi from Yoghurts in Brazil. Brazilian Journal of Microbiology. 32: 117-122. Muchtadi, T. R. 1989. Teknologi Proses Pengolahan Pangan. Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi PAU Pangan dan Gizi. IPB, Bogor. Muchtadi D., Palupi N.S., Astawan M., 1992. Enzim dalam Industri Pangan. PAU IPB, Bogor. Muhiddin, N., N. Juli, P. Aryantha. 2001. Peningkatan Kandungan Protein Kulit Umbi Ubi Kayu
Melalui Proses Fermentasi. JMS. 6 (1): 1 – 12. Mukherjee K. D., Hills M. J. 1994. Lipases from Plant. In Lipase: Their Structure, Biochemistry
and Aplication. Woolley P, Peterson S.B. ed. Cambridge University Press. P. 49-75. Murti, T.W. 2004. Aneka Keju. Fakultas Peternakan. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Nagodawithana, T. dan G. Reed. 1993. Enzymes in Food Processing 3rd ed. Academic Press
Inc, California. Nout, M.J.R dan J.L. Kiers. 2005. Tempe fermentation, innovation and functionality: update into
the third millennium. J. Applied Microbiology. 98: 789-805. Nout MJR, Bonants-van Laarhoven TMG, de Jongh P, de Koster PG. 1987. Ergesterol content
of Rhizopus oligosporus NRRL 5905 grown in liquid and solid substrates. Appl Microbiol Biot 26:456–461.
Nuraida L., Dewanti R., Hariyadi P., Budijanto S. 2000. Eksplorasi, Karakterisasi, dan Produksi
Lipase dengan Aktivitas Esterifikasi Tinggi dari Kapang Indigenus. Laporan tahun Pertama Penelitian Hibah Bersaing VIII. IPB, Fa Teknologi Pertanian, Bogor.
Nurhidayati, T. 2003. Pengaruh Konsentrasi Enzim Papain dan Suhu Fermentasi Terhadap
Kualitas Keju Cottage. Kappa. 4 (1): 13-17. Oda, Y., Saito, K., Yamauchi, H., Mori, M., 2002. Lactic acid fermentation of potato pulp by the
fungus Rhizopus oryzae. Current Microbiology 45: 1-4. Orrashid, M. M., N. E. Odongo., B. Subedi. 2008. Fatty Acid Composition of Yak (Bos
grunniens) Cheese Including Conjugated Linoleic Acid and trans-18:1 Fatty Acids. J. agric. Food Chem. 56 : 1654-1660.
Oser, B. L. 1976. Hawk’s Psisiological Chemistry. Tata McGraw. Hill Publishing Company
Limited. New Delhi. Paparella, P., A. Serio, G. Martino, T. Casacchia, C. Chaves Lopez, M. Bellocci, M. Martuscelli,
G. Suzzi. 2004. Ripening and Seasonal Change in Microflora and Physico-chemical Characteristics of The Ewe’s Cheese Pecorino a Bruzzese. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Park, E. Y., Y. Kosakai, and M. Okabe. 1998. Efficient production of l(_)- lactic acid using mycelial cotton-like flocs of Rhizopus oryzae in an air-lift bioreactor. Biotechnol. Prog. 14:699–704.
Pato, U. 2003. Potensi Bakteri Asam Laktat yang diisolasi dari Dadih untuk Menurunkan Resiko
Penyakit Kanker. Jurnal Natur Indonesia 5(2): 162-16. Pearse, M.J. and A.G.Mackinlay. 1989. Biochemical Aspects of Syneresis: A Review. J Dairy
Sci. 72: 1401-1407.Pellet, P.L., Young, V.R. 1980. Nutrition Evaluation of Protein Foods. The United Nations University. Japan.
Pimentel, L.L, J.C. Soares, M.M.E. Pintado, A.I.E. Pintado, A.M.P. Gomes, A.C. Ferreira, F.X. Malcata. 2004. Acicifying and Aromatic Properties of Enterococcus Strains in Ovine and Bovine Milks. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Pitt, J.I. and A.D. Hocking. 1997. Fungi and Food Spoilage. An Imprint Chapman & Hall, New
York. Prasad, S., R. Banerjeeand B. C. Bhattacharyya. 2004. Production of Proteolytic in A Bubble
Column Bioreactor. J.Bioprocess and Biosystem Engineering. 13: 41-43. Prescott, M.C. dan C.G. Dunn. 1959. Industrial Microbiology. Mc Graw Hill Book Company Inc.,
London. Prescott, L.M., J.P. Hartley and D.A. Klein, 1999. Microbiology. McGraw-Hill Publishing, New
York, 96. Purnomo, H. 1996. Rekayasa Paket Teknologi Produksi Starter dan Enzim Mikrobia dan Paket
Aplikasinya Pada Pengolahan Susu. UMM Press, Malang. Purwandhani, S.N. dan M. Suladra. 2003. Optimasi Produksi Biomassa Bakteri Asam Laktat
Lacobacillus acidopiphilus SNP 2 pada Media Air Kelapa dengan Berbagai Konsentrasi Ekstrak Tauge. Prosiding Seminar Nasional PATPI : 256-262.
Rahman, A., Srikandi F., Winiati P.R. dan C.C Nurwitri. 1992. Teknologi Fermentasi susu.
Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi PAU Pangan dan Gizi IPB. Bogor.
Rapp P. dan Backhaus. 1992. Formation of Extraselluler Lipases by Filamentous Fungi, Yeast
and Bacteris. Enzyme Microb. Technol. 14: 938-943. Rehman, S., S. Hussain, H. Nawaz. 2007. Inhibitory Effect of Citrus Peel Essential Oils on The
Microbial Growth of Bread. Pakistan Journal of Nutrition. 6 (6): 558-561. Rosa, T., C.F. Volken, M. Antonio. 2003. Changes in The Microbiological and Physicochemical
Characteristics of Serrano Cheese during Manufacture and Ripening. Brazilian Journal of Microbiology 34: 260-266.
Sanders, M. E., and J. Huis in’t Veld. 1999. Bringing a probiotic containing functional food to the
market: microbiological, product, regulatory and labelling issues. Antonie van Leeuwenhoek 76:293–315.
Saito, K. Naoya T. and Yuji O. 2004. Purification of the extracellular pectinolytic enzyme from the fungus Rhizopus oryzae NBRC 4707. J. Microbiology. 159. 1: 83-86.
Saleh A.B. 1993. Extra- and intrasellularlipase from Rhizopus oryzae and factors affecting their
production. Can J Microbiol 39: 978-981. Samarjiza, D., J. Lukac, N. Sikora. 2001. Characteristics and Role of Mesophilic Lactic Cultures
REVIEW. Agriculturae Conspectus Scientificus, Vol. 66 No. 2: 113-120. Samsuzzaman, K. dan N.F. Haard. 1985. Milk Clotting and Cheese Making Properties of A
Chymosin-like Enzyme from Harp Seal Mucosa. J of Food Biochem., 9, 173. Saraswati, F., K. Syamsu, D.N. Susilowati, B. Laila dan R.S. Andhayani. 2003. Produksi Masal
Sel Rhizobium dengan Teknologi Bioproses. J.Mikrobiol. Ind. 3 (2): 47-52. Sayari, A., Fakher F., Nabil M., Hounaida M., Yassine B., Robert V. and Youssef G. 2005. N-
terminal peptide of Rhizopus oryzae lipase is important for its catalytic properties. J. Botechnology. 579(5): 976-982.
Schlegel, H.G. dan K.Schimdt. 1994. Mikrobiologi Umum. Diterjemahkan oleh: Prof. Dr. R.M.
Tedjo Baskoro. UGM Press, Yogyakarta. Septiani, Y. 2004. Studi Kadar Karbohidrat, Lemak, dan Protein pada Kecap dari Tempe.
Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Simanjuntak, P., R. Melliawati, A. Soeksmanto, T.Parwati dan Bustanussalam. 2002.
’Pengembangan Bahan Baku Zat Bioaktif Antimalaria dari Mikroba Endofit Tumbuhan Obat Indonesia”. Laporan Teknik Penelitian Puslit Bioteknologi-LIPI, Cibinong-Bogor.
Singh, T. K., M. A. Drake, and K. R. Cadwallader. 2003. Flavor of Cheddar cheese: A chemical
and sensory perspective. Comp. Rev. Food Sci. Food Safety 2:139–162. Sitompul, S.2004. Analisis Asam Amino dalam tepung ikan dan bungkil kedelai. Buletin Teknik
Pertanian. 9: 1. Skory, C.D. 2000. Lactic Acid Production by Rhizopus oryzae with Increased
LactateDehydrogenase.http://www.Ars.usda.gov/research/publications/publication.htm?Seq_no_115=151614 [5 September 2007].
Skory, C. D. 2000. Isolation and Expression of Lactate Dehydrogenase Genes from Rhizopus
oryzae. Appplied and Enviromental Microbiology. Vol: 2343-2348. Smith, B.A., W.J.M. Engels, G. Smit. 2004. Characteriation of A Decarboxylase Involved in The
Formation of The Potent Flavour Component 3-Methylbutanal. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Smit, B.A. 2004. Flavour Formation from Amino Acids in Fermented Dairy products. Thesis. Wageningen University, The Netherlands.
Soccol, C. R., Martin, B., Raimault, M., 1994. Potential of solid state fermentation for production of L (+)-lactic acid by Rhzipopus oryzae. Journal of Applied Microbiology and Biotechnology 41:286-290.
Soda, L., Eman H.E., Nadia O. 2006. Characterisation of lactic acid bacteria isolated from
artisanal Egyptian Ras Cheese. Lait 86 : 317–331. Stanbury, P.F dan A. Whitaker. 1984. Principles of Fermentation Technology. Fergamon Press
ltd., Oxford. Steele, J.L. and , J.R. Broadbent, J.R. 2004. Biochemistry of Cheese Flavor Development: New
Insights From The Genetics and Physiology of Lactic Acid Bacteria. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhandi. 1984. Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian.
Edisi II. Penerbit Alumni, Bandung. Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhardi, 1996. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Penerbit
Liberty, Yogyakarta. Suharyanto, T. Panji, Abdullah dan K. Syamsu. 2006. Biokonversi CPO dengan Desaturase
Amobil Sistem Kontinu pada Skala Semipilot untuk Produksi Minyak mengandung GLA. Menara Perkebunan. 74(2) : 97-108.
Sumarjono, H. 1987. Kapita Selekta II Susu dan Hasil Olahannya. Fakultas Pertanian. Institut
Pertanian Bogor, Bogor. Suzuki, T., Y. Mushiga, T. Yamane & S. Shimizu. 1988. Mass production of lipase by fedbatch
culture of Pseudomonas fluorescens. Appl. Microbiol.Technol., 27, 417-422. Svenden A. 1994. Sequence Comparison Within The lIpase Family. In Woolley P, Peterson
S.B., (eds). Lipases, Their Stucture, Biochemistry and Aplication. Cambridge University. Tamime, A.Y. and R.K. Robinson. 1999. Yoghurt: Science and technology. 2nd Edition. CRC
Press. Boston. Tao, L., Yang Y., Liu D., F. Yonghong, Z. Zhiming. 2008. Optimization of L(+)-Lactic Acid
Fermentation Without Neutralisation of Rhizopus Oryzae Mutant RK02 by Low-Energy Ion Implantation. Plasma Science and Technology, Vol.10, No.2.
Tarakci, Z., E. Sagun , H. Sancak and H. Durmaz. 2004. The Effect of Salt Concentration on
Some Characteristics in Herby Cheese. Pakistan Journal of Nutrition 3 (4): 232-236. Tarakci, Z., E. Kucukoner. 2006. Changes on Physicochemical, Lipolysis and Proteolysis of
Vacuum-Packed Turkish Kashar Cheese during Ripening. J. Central Euro. Agric. 7 (3): 459-464.
Taylor, A. J. dan E. M. Leach. 1995. Enzymes in The Food Industry. In Tucker dan L. F. J.
Woods (eds). Enzymes in Food Processing 2nd ed. G. A. Blackie Academic and Professional, Glasgow.
Tranggono dan Setiaji B. 1898. Biokimia Pangan. Pusat Antar Universitas Panagn Gizi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Tuma, M. Giesová, J. Chumchalova, M. Plockova. 2004. Antifungal Effectiveness of
Lactobaciluus rhamnosusu VT1 In L. Houdek and N. Galen (eds.). Model Cheese System. IDF Symposium on Cheese: Ripening, Characterizaton & Technology.
Tunga, R., R. Banerjee, B. C. Bhattacharyya. Optimizing some Factors Affecting Protease
Production under Solid State Fermentation. J.Bioprocess and Biosystem Engineering. 19(3): 187-190.
Ueda, M., S. Takahashi, M. Washida. 2002. Expression of Rhizopus oryzae lipase gene in
Saccharomyces cerevisiae. J. Mol.Catal. B. Enzym. 17: 113-124. Urbach, G. 1997. The Flavour of Milk and Dairy Product. II. Cheese: Contribution of volatile
Compound. Int. J. Dairy technol 50:79-89. Wahba, A. dan F.El-Abbassy.1981. Milk Clotting Activity of Rennet and of Rabit Sheep and
Porcine Pepsins. Egyptian J. Dairy Sci., 9: 5. Wahyudi, M. 2006. Proses Pembuatan dan Analisis Mutu Yoghurt. Buletin Teknik Pertanian. 11:
1. Wijaya, S. 2002. Isolasi Kitinase dari Scleroderma columnare dan Trichoderma harzianum.
Jurnal Ilmu Dasar. 3(1): 30-35. Wikipedia, 2007. http://en.wikipedia.org/ wiki/Rhizopus [ 2 Oktober 2007]. Winarno, F.G. 1995. Enzim Pangan. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Wirtanen, G., S. Langsrud, S.Salo, U.Olofson. 2002. Evaluation of Sanitation Procedures for
Use in Dairies. Espo VTT Publication 481. Wulandani, R.D. 2003. Kombinasi Penggunaan Getah Widuri (Calotropis gigantea) dan Bakteri
Asam Laktat Pada Pembuatan Keju Lunak. Tesis. Institut Pertanian Bogor. Yamane, T. 1987. Enzyme technology for the lipids industry: An Engineering overview. In
Applewhite, T. H. (ed.). Proceeding of World Conference on Biotechnology for the Fats and Oils Industry. AOAC. Champaign, p. 17-22.
Yang, Z. 2000. Antimicrobial compounds, and extracellular polysaccharides produced by lactic
acid bacteria structures and properties. Dissertation, University of Helsinki, Faculty of Agriculture and Forestry. Helsinki.
Yeganehzad, S., M.Tehrani dan F. Shahidi. 2007. Studying Microbial, Physiochemical and
Sensory Properties of Directly Concentrated Probiotic Yoghurt. African Journal of Agricultural Research. 2 (8): 366-369.
Yoshio O., T. Seiji, T. Keisuke. 2004 An Original Habitat of Tempeh Molds. Mycoscience. 45 (4):
271-276.
Zhang, Z.Y., Bo Jin, and J.M. Kelly. 2007. Production of Lactic Acid from Renewable Materials by Rhizopus Fungi. J. Biochemical Engineering. 35: 251-26.
Zulaekah, S. Dan E.N. Widiyaningsih. 2005. Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Daun Teh Pada
Pembuatan Telur Asin Rebus Terhadap Jumlah Bakteri dan Daya Terimanya. Jurnal Penelitian Sains & Teknologi. 6 (1): 1-13.
Recommended