Prova de Coombs Direta

Prova de Coombs Directa

O que é a prova de Coombs

O seu conceito baseia-se na reacção dos eritrócitos com um

soro de antiglobulina humana, servindo para identificar a

presença ou não de imunoglobulina no sangue do paciente.

É utilizado

• Como prova ao doente, antes de qualquer transfusão

• Na detecção da doença hemolítica do recém-nascido

• Em reacções transfusionais

• No diagnóstico de anemias hemolíticas auto-imunes

Prova de Coombs Directa

(Ou seja deteta anticorpos ligados à superfície dos eritrócitos)

Como se realiza

1 – identificar o card

2– Colocar nos microtubos identificados

como I e II 50 μl de solução preparada

com 10 μl de concentrado de eritrócitos

e 1000 μl de diluente 2.

3 – Incubar 15 minutos a 37

4 – Centrifugar 10 minutos

5 – Ler os resultados

Prova de Coombs Directa

Resultados

Teste positivo

Teste negativo

Prova de Coombs Directa

Em caso de resultado positivo

Falsos positivos Verdadeiro positivo

Preparar eluição ácida Suspensões celulares exageradas

Remoção da IgG – alteração de Ag eritrocitários

Aglutinação precoce dos eritrócitos

Partículas ou contaminantes nos tubos Agregação eritrocitária

Prova de Coombs Directa

O que fazer quando a prova é realmente positiva

1 – Deitar num tubo o concentrado de eritrócitos.

2 – Lavar três vezes com soro fisiológico

3 – Entre cada lavagem levar a centrifugar

2 minutos a 3500 rpm

4 – Em seguida preparar o teste da

antiglobulina directo com soros

monoespecíficos

Prova de Coombs Directa

Este card é meramente informativo

Prova de Coombs Directa

Teste das Igs é meramente especulativo. Devemos repetir a coombs directa depois das lavagens para verificar se é realmente um verdadeiro positivo Este card diz kal é o tipo de Ig ou factor do complemento que está a causar uma prova de coombs positiva

Prova de Coombs Directa

Técnica da eluição ácida

1- Preparar a solução de lavagem de 1:10 em água destilada

2 – Lavar o concentrado de eritrócitos do paciente 4 vezes

3 - Em cada uma delas levar a centrifugar e rejeitar o sobrenadante

4 - Na ultima centrifugação guardar o sobrenadante num tubo limpo (que depois vai servir de

controlo)

5 – Passar os eritrócitos que ficaram no fundo do tubo da última lavagem para um tubo limpo

(cerca de 20 gotas)

6 – Aí juntar a solução de eluição (que tem cor amarela)

7 - Inverter o tubo 4 vezes e centrifugar durante 45 a 60 segundos a 3500 rpm

8 – Depois da centrifugação dos eritrócitos + solução de eluição retirar o sobrenadante para outro

tubo limpo e juntar a este sobrenadante 20 gotas de solução tampão (até este ficar azul) - este vai

ser o eluado

9 – Depois repetir novamente a prova de liss/coombs e a placa de enzimas

Células

+

eluado

Células

+

controlo

Vai para a estufa

Vai a centrifugar

Prova de Coombs Directa

Em primeiro pomos sempre as células e só depois o eluado e o controlo Caso o resultado que se obtenha não seja conclusivo passamos à prova das 11 células

Prova de Coombs Directa

Caso o resultado que se obtenha para o painel de três células não seja

conclusivo passamos para o painel de onze células