Prova de Coombs Direta

Prova de Coombs Directa

O que é a prova de Coombs

O seu conceito baseia-se na reacção dos eritrócitos com um

soro de antiglobulina humana, servindo para identificar a

presença ou não de imunoglobulina no sangue do paciente.

É utilizado

• Como prova ao doente, antes de qualquer transfusão

• Na detecção da doença hemolítica do recém-nascido

• Em reacções transfusionais

• No diagnóstico de anemias hemolíticas auto-imunes


(Ou seja deteta anticorpos ligados à superfície dos eritrócitos)

Como se realiza

1 – identificar o card

2– Colocar nos microtubos identificados

como I e II 50 μl de solução preparada

com 10 μl de concentrado de eritrócitos

e 1000 μl de diluente 2.

3 – Incubar 15 minutos a 37

4 – Centrifugar 10 minutos

5 – Ler os resultados


Resultados

Teste positivo

Teste negativo


Em caso de resultado positivo

Falsos positivos Verdadeiro positivo

Preparar eluição ácida Suspensões celulares exageradas

Remoção da IgG – alteração de Ag eritrocitários

Aglutinação precoce dos eritrócitos

Partículas ou contaminantes nos tubos Agregação eritrocitária


O que fazer quando a prova é realmente positiva

1 – Deitar num tubo o concentrado de eritrócitos.

2 – Lavar três vezes com soro fisiológico

3 – Entre cada lavagem levar a centrifugar

2 minutos a 3500 rpm

4 – Em seguida preparar o teste da

antiglobulina directo com soros

monoespecíficos


Este card é meramente informativo


Teste das Igs é meramente especulativo. Devemos repetir a coombs directa depois das lavagens para verificar se é realmente um verdadeiro positivo Este card diz kal é o tipo de Ig ou factor do complemento que está a causar uma prova de coombs positiva


Técnica da eluição ácida

1- Preparar a solução de lavagem de 1:10 em água destilada

2 – Lavar o concentrado de eritrócitos do paciente 4 vezes

3 - Em cada uma delas levar a centrifugar e rejeitar o sobrenadante

4 - Na ultima centrifugação guardar o sobrenadante num tubo limpo (que depois vai servir de

controlo)

5 – Passar os eritrócitos que ficaram no fundo do tubo da última lavagem para um tubo limpo

(cerca de 20 gotas)

6 – Aí juntar a solução de eluição (que tem cor amarela)

7 - Inverter o tubo 4 vezes e centrifugar durante 45 a 60 segundos a 3500 rpm

8 – Depois da centrifugação dos eritrócitos + solução de eluição retirar o sobrenadante para outro

tubo limpo e juntar a este sobrenadante 20 gotas de solução tampão (até este ficar azul) - este vai

ser o eluado

9 – Depois repetir novamente a prova de liss/coombs e a placa de enzimas

Células

+

eluado

Células

+

controlo

Vai para a estufa

Vai a centrifugar


Em primeiro pomos sempre as células e só depois o eluado e o controlo Caso o resultado que se obtenha não seja conclusivo passamos à prova das 11 células


Caso o resultado que se obtenha para o painel de três células não seja

conclusivo passamos para o painel de onze células

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