Payal Mehta 1 , Anne-Sophie Wavreille 2 , Steven E. Justiniano 2 , Rachel L.

Marsh 2 , Yu Jianhua 3 , Richard W. Burry 4 , David Jarjoura 5 , Timoteo

Eubank 2 , 6 , Michael A. Caligiuri 2 , 6 , Jonathan P. Butchar 2 , 6 , Susheela

Tridandapani 1 , 2 , 6 *

Laura Isabel Gómez Rivas

Estefani La Rotta Gallego

Medicina UPB

10 de agosto 2011

INTRODUCTION

The immune response is very important in

our body, is regulated by lymphocytes, in

this case, monocytes, macrophages.

In this presentation we're gonna talk about

the immune response by monocyte FcyR

receptor. For this you need to know some

importants concepts .

INTRODUCTION PHAGOCYTOSIS: It is a

mechanism through which

some cells (neutrophils and macrophages) aroundwith

a plasma membrane antigen and introduced into the cell.

•LyGDI

Binding Proteins

INTRODUCTION

SHIP PROTEIN: Inositol phosphatases are

enzymes that influence multiple signaling

pathways. are also enzymes that

regulate phagocytosis.

FCɣR: Receptor mediator; binds ligands

and is linked with the ability inm

unofagococitica effector cells such

as macrophages and neutrophils.

INTRODUCTION

OBJETIVE

Knowing the effect of protein LyGDI

linked to the phosphatase SHIP in the

regulation of phagocytic receptor

response FCyR.

METODOLOGÍA

REACTIVOS:

Anticuerpos: FCɣR

RAC

CD32

ACTINA

SHIP

LyGDI

FUNCION: BLOQUEO DE ACTIVIDAD.

METODOLOGÍA

INMUNOPRECIPITACIÓN

Técnica que utiliza anticuerpos específicos

para una proteína para quitar esas proteínas

de la solución.

METODOLOGÍAWESTERN BLOT

Técnica usada para detectar proteínas

especificas en una muestra

determinada, para separar proteínas

(peso molecular y estructura).

Detecta la unión antígeno-anticuerpo

por actividad enzimática y analiza la

cantidad de proteína.

METODOLOGÍA

PROTEÍNA RECOMBINANTE

Son aquellas que obtenemos a partir de

una especie o línea celular distinta a la

célula original.

La proteína se obtiene por la expresión

de un gen clonado en esa línea celular.

PÉPTIDOS PULL-DOWN

Mezcla completa de proteínas.

El péptido pull-down es una prueba

imparcial para identificar lectores de

proteínas que se unen a péptidos

específicos modificado por una mezcla

de proteínas complejas.

METODOLOGÍA

ENSAYO COMPETENCIA

Método en el que se utilizan dos

células, en la cual una es

estimulada, pero la otra no recibe

estimulo ambas en presencia de un

mismo receptor.

METODOLOGÍA

CITOMETRÍA DE FLUJO

Técnica que proporciona resultados que

son aplicables en un diagnostico de

forma rápida.

Gran especificidad para detectar una

población celular, en una muestra de

varias poblaciones celulares.

Ofrece información simultanea de cada

célula analizada.

METODOLOGÍA

TRANSFECCIONES

Introducción de material genético

externo en células eucariotas mediante

vectores víricos.

Se realiza abriendo poros en la

membrana plasmática mediante

electroporacion.

METODOLOGÍA

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

Microscopio de fluorescencia es una

variación del microscopio de luz

ultravioleta.

Se usa para detectar sustancias con

autofluorescencia o sustancias

marcadas con fluocromos.

METODOLOGÍA

DIGE ELECTROFORESIS

Separación simultánea de máximo 3 muestras.

Controla perfil proteómico entre las células.

METODOLOGÍA

ENSAYO FAGOCITOSIS

IgG con PKH26 Se marcaron GR de

oveja, fueron analizadas por microscopia de

fluorescencia. El índice fagocítico se definió

como numero total de GR ingeridos por los

fagocitos.

METODOLOGÍA

RESULTADOSDIGE

Verde: inmunoprecipitaciones

Amarillo: Pr- unidas a SHIP1

Rojo: Pr- unidas a SHIP2

Circulo: Puntos que se cortaron

Flecha: LyGDI

LyGDI relacionado con SHIP.

CitometríaWestern blot

Negro:

Clls

RNATRan

sfectadas

Rojo:

LyGDI

Transfect

adas

Gris:

tinción en

controles

AC.

DISCUSSION

AUTOR OPINION YES/NO

Damen JE et al. SHIP and SHIP-2 are important

regulatory phosphatases that

play distinct roles despite

similar catalytic activity, as

suggested

by in vivo studies.

YES

Allen LA et al. To identify as-yet undiscovered

proteins that uniquely associate

with SHIP or SHIP-2 we have

made use of DIGE analysis.

DIGE

is traditionally used to quantify

relative abundances and

monitor

differences in expression

profiles of proteins in a given

sample.

YES

DISCUSSION

AUTOR OPINION YES/NO

Koch A, Mancini A et al Both SHIP and SHIP-2 are

recruited to phagocytic cups

upon

FccR clustering and are known

to influence actin dynamics in-

directly through SHIP’s catalytic

activity.

YES

Nimmerjahn F et al FccR function has been

implicated in both the

pathophysio-

logy of autoimmune diseases

and in mediating cytotoxic

effects of

monoclonal anti-tumor

antibodies.

YES

CONCLUSIONS

Understand these interactions are

important to know about autoimmune

diseases.

The immune system is highly

regulated, this may cause deficiencies

and bad effects as self-destruction of

healthy tissue.

CONCLUSIONS

It is important that the human mind different

types of response against infections and

other, necessarily fails because there are

others.

They should conduct studies

to determine and eliminate the receptors

that cause autoimmune

diseases, developing methods for

total eradication.

THANKS!