Teknik Transformasi

Memasukkan Plasmid ke dalam Mikroorganisme Induk

Transformasi Transformasi genetik adalah proses

pengambilan DNA asing oleh sel penerima, yang menghasilkan sel transforman atau sel rekombinan. DNA asing merupakan DNA yang dilepaskan oleh sel donor, baik berupa fragmen DNA bebas atau fragmen DNA yang disisipkan dalam suatu vektor (L. Snyder & W. Champness, 1997).

Pengertian lain dari Transformasi Transformasi adalah

ekspresi materi genetik asing yang masuk melalui dinding sel. Pada dasarnya dinding sel berfungsi melindungi sel dari masuknya benda-benda asing termasuk DNA,tapi dalam kondisi tertentu,dinding sel ini bisa memiliki semacam celah atau lubang yang bisa dimasuki DNA.

Faktor Penentu Jenis mikroba penerima

Prokariot Eukariot

Jenis energi Waktu

Goal

Membuka dinding sel mikroba sesaat (kurang dari satu detik)

Dinding sel harus kembali bersatu, kalau tidak mikroba mati

Plasmid masuk pada saat dinding sel terbuka

Sekilas tentang Dinding sel Struktur fosfolipid bilayer

pada membran plasma mempunyai sisi luar yang bersifat hidrofobik dan sisi dalam yang hidrofobik. Gugus hidrofobik berinteraksi dengan gugus hidrofobik lainnya untuk memperkuat struktur membran. Struktur ini menyebabkan berbagai molekul polar, termasuk DNA dan protein, tidak dapat melewati membran tersebut.

Metoda Transformasi Terdapat perbedaan metoda untuk prokariot

dan eukariot Heat shock adalah metoda yang paling umum

dipakai untuk prokariot Karena eukariot lebih kompleks sruktur

dinding sel yang artinya lebih keras, maka lebih banyak metoda yang dapat dipakai

Jenis-jenis transformasi Heat shock

(kejutan panas) Mendinginkan

memanaskan dan mendinginkan kembali– bakteri,maka DNA dapat masuk ke dalam sel.

Teknik ini ditemukan oleh trio peneliti Stanley Cohen,Annie Chang,Leslie Hsu pada tahun 1972.

Jenis-jenis transformasi Elektroforasi

mengejutkan sel bakteri dengan medan listrik berkekuatan tinggi (10-20 kV/cm). Saking terkejutnya,akan terbentuk lubang-lubang pada dinding sel yang bisa diterobos DNA plasmid berukuran besar dan kemudian lubang tersebut akan tertutup dengan sendirinya.

Metoda Lain protoplas-polietilenglikol/PEG mediasi Agrobacterium mikropresipisitat, fusi DNA dalam liposom, vektor biologis maupun metode tranformasi

balistik menggunakan gene gun. Transformasi biolistik (microprojectile

bombardment)

Mari kita lihat video berikut