Validation des méthodes d'analyse - applis.cermav.cnrs.frapplis.cermav.cnrs.fr/ANGD_qualite_en_chimie/Blanchin2.pdf · RSD ≤ 3 % R2 ≥ 0,98 ou R ≥ 0,99 Rs satisfaisante entre

Validation des méthodes d'analyse

Journées Qualité et Chimie 2010 Une démarche qualité au service de la chimie

Autrans - 14 octobre 2010

Marie-Dominique Blanchin Laboratoire de Chimie Analytique

mdb - 14 octobre 2010 2

Référentiels

ISO 5725 : 1994 - Exactitude et fidélité d'une méthode de mesure

ISO 17025 : 2005 - Prescriptions générales concernant la compétence des laboratoires d'essai et d'étalonnage Compétences management de la qualité Compétences techniques


Référentiels/Industrie Pharmaceutique

ICH : International Conférence on Harmonisation Q2(R1) 2005 : validation of analytical procedures

test and methodology Pharmacopée américaine, USP33-NF28

<1225> Validation of compendial methods FDA guidance for industry.

Analytical procedures and method validation Eurachem


ICH /Définitions

Méthode d'analyse Document écrit "Moyen de réaliser l'analyse" "Description détaillée des différentes opérations

nécessaires pour effectuer l'analyse de la substance à examiner"


ICH / Définitions

Validation

"Le but de la validation d'une méthode d'analyse est de démontrer qu'elle correspond à l'usage pour lequel elle est prévue"

Ensemble des opérations nécessaires pour prouver que le protocole est suffisamment exacte et fiable pour avoir confiance dans les résultats fournis et ceci pour un usage déterminé


Définitions

Validation

Application déterminée Niveau de la validation

Fonction de l'application Objectif clairement déterminé


Critères de validation

Spécificité Linéarité Exactitude Fidélité Intervalle d'application Limite de détection Limite de quantification Robustesse Stabilité des solutions


Spécificité Specificity

"Capacité de la méthode de permettre une évaluation non équivoque de l'analyte en présence de composants qui sont susceptibles d'être présents"

Capacité de faire la discrimination analyte /substances interférentes

Garantir que le résultat de l'analyse analyte Absence d'interférences


Spécificité Specificity

Impuretés Ajouts dosés impuretés disponibles sur composé ou

formulation Comparaison avec résultats obtenus sur des

échantillons contenant des impuretés ou des produits dégradation (lumière, t°, humidité, hydrolyse acide ou alcaline, oxydation)

Profil impuretés


Spécificité Specificity Si méthode CLHP, vérifiée par

Injection placebo analytique = matrice (dégradé, non dégradé) composés interférents potentiels, produits de décomposition,

intermédiaires, précurseurs de synthèse échantillons dégradés (lumière, t°, acide, alcalin, oxydant)

Observation des chromatogrammes obtenus Vérification homogénéité des pics


Linéarité Linearity

"Capacité dans un intervalle donné d'obtenir des résultats de dosage directement proportionnels à la concentration ou à la quantité d'analyte dans l'échantillon"

Relation linéaire signal - concentration



Exemple méthode CLHP, vérifiée par injection de

solutions étalons d’analyte : linéarité de la gamme d'étalonnage

Solutions échantillons reconstitués concentrations d'analyte différentes : linéarité de la méthode

n ≥ 5 concentrations n ≥ 3 répétitions de chaque niveau



Intervalle de linéarité fonction de Analyte (impureté, principe actif, conservateur,…) Application (formulation, test de dissolution,…)

Vérifiée : examen de la courbe, analyse de variance Exprimée : Équation de la droite avec intervalle de

confiance sur pente, ordonnée à l’origine, coefficient de détermination r2

Si linéarité + ordonnée origine =0 : 1 seul point étalon en routine


Exactitude (justesse) Accuracy

"Etroitesse d’accord entre la valeur trouvée et la valeur acceptée soit comme valeur conventionnellement vraie soit comme valeur de référence"

ISO 5725 Exactitude : étroitesse d'accord entre la résultat d'essai et la

valeur de référence acceptée Justesse : étroitesse d’accord entre la valeur moyenne obtenue à

partir de larges séries d'essais et une valeur de référence acceptée

écart d'une valeur obtenue / valeur considérée comme exacte



Inexact, fidèle Exact, fidèle

Inexact, non fidèle Exact, non fidèle



Exactitude erreur systématique (biais) d'une valeur obtenue / valeur considérée comme exacte

Vérifiée par comparaison méthode de référence préparation échantillons reconstitués (matrice + quantité

connue d’analyte) et étalons n ≥ 3 x 3 concentrations différentes en analyte



Tracé droite qté trouvée - qté ajoutée (= théorique ou vraie)

Méthode exacte si pente=1 ordonnée origine =0

Tracé droites réponse-qté ajoutée et réponse- quantité étalons Méthode exacte si pente et ordonnée origine =0

identiques Taux de recouvrement ou erreur relative %


Fidélité Precision

" Etroitesse d’accord entre une série de mesures obtenues dans des conditions prescrites à partir de prises d’essais multiples provenant d’une même échantillon homogène"

ou degré de dispersion des résultats ou écart aléatoire de valeurs / valeur moyenne



Fidèle, inexact

Fidèle, exact

Non fidèle, inexact

Non fidèle, exact



Fidélité erreurs aléatoires

Répétabilité Fidélité intermédiaire Reproductibilité


Fidélité, répétabilité Repeatability

"La répétabilité exprime la fidélité évaluée dans des conditions opératoires identiques et dans un court intervalle de temps"

Déterminée à partir d'un même échantillon, évaluée dans des conditions opératoires identiques (même analyste, même équipement, même laboratoire,…) et dans un court intervalle de temps


Fidélité, répétabilité Repeatability

Répétabilité de la mesure : n ≥ 6 même échantillon

Répétabilité de la méthode : n ≥ 6 ou n ≥ 3x3


Fidélité, fidélité intermédiaire Intermediate precision

"La fidélité intermédiaire exprime la variabilité intra-laboratoire : jours différents, analystes différents, équipements différents, etc… "

Détermination à partir d'un même échantillon → bien spécifier les conditions → plan expériences


Fidélité, reproductibilité Reproductibility " La reproductibilité exprime la variabilité inter

laboratoires (études collaboratives) habituellement appliquées à la standardisation de la méthodologie"

Déterminations à partir d’un même échantillon


Fidélité, expression Precision

Écart-type s (standard deviation) Variance s2 Coefficient de variation, s/m*100 ( relative

standard deviation) %


Intervalle de validité Range

"Intervalle compris entre la concentration (quantité ) la plus élevée et la plus faible de l'échantillon dans lequel il a été démontré que la méthode d'analyse présente une fidélité, une exactitude et une linéarité satisfaisante."


Limite de détection Detection Limit

" La limite de détection d'une méthode d'analyse est la plus petite quantité d’analyte qui peut être détectée mais pas nécessairement quantifiée comme une valeur exacte"

Exprimée en quantité injectée ng, µg



Évaluation visuelle Évaluation signal/bruit Évaluation pente et écart-type



Exemple méthode CLHP Masse ou concentration d’analyte qui donne un

rapport S/B = 3 Bruit pic à pic Vérifiée dans matrice par injection à la

concentration retenue comme LD


Limite de quantification Quantification Limit

"Quantité la plus faible d’analyte dans un échantillon qui peut être déterminée quantitativement avec une fidélité et une exactitude appropriée"

Exprimée en ng ou µg



Évaluation visuelle Évaluation signal/bruit Évaluation pente et écart-type



Évaluée : quantité ou concentration d’analyte S/B = 10

Vérifiée en injectant des solutions de conc. =LQ


Robustesse Robustness

"Capacité du protocole de rester non affectée par des variations faibles mais délibérément introduites dans les paramètres de la méthode; fournit une indication sur sa fiabilité dans des conditions normales d’utilisation"

Variations faibles : modifications contrôlées des conditions d'application (changements délibérés mais limités facteurs indépendants)

étude de l'effet de chaque facteur sur le résultat de l'analyse



Vérifiée par approche multivariée ou univariée (plan d'expériences)

Permet de fixer les limites des tests de conformité Donne une idée sur variations entre jours, entre

laboratoires étape préliminaire avant de transférer les méthodes, avant les études collaboratives



Exemples de facteurs Temps d'extraction Temps d' agitation CLHP

pH de la phase mobile Composition de la phase mobile Débit Colonne Température ….

Permet de fixer les limites des tests de conformité


Stabilité des solutions

Vérifiée sur solutions étalons et échantillons Vérifiée par comparaison des facteurs de

réponse

Exemple méthode CLHP Solution « vieillie » Solution « fraîche » Temps > 16h (injecteur automatique)


Conclusion

Validation initiale Pas de règles Recommandations; lignes directrices Pas de protocole figé Adaptation à l'usage, aux exigences


Conclusion

Routine Validation in situ : confirmation validation initiale

applicable ( suivi des paramètres, CQ,…)

Tests de conformité HPLC Paramètres chromatographiques Tr, Rs, N Répétabilité injections successives (n = 6)


TEST PARAMETRE CRITERE D’ ACCEPTATION

Identification Spécificité Test garantissant l’identité de l’analyte

Tests quantitatifs majeurs

Exactitude/TR Répétabilité Fidélité intermédiaire Linéarité Spécificité

Robustesse

95 à 105 % qté théorique Doit être prouvée RSD ≤ 3 % R2 ≥ 0,98 ou R ≥ 0,99 Rs satisfaisante entre les pics PA et pdts de dégradation connus; évaluation de l’interférence du placebo

Doit être démontrée

Dosage de faibles conc. (pdts de dégradation, impuretés)

Exactitude/TR Répétabilité Linéarité Spécificité

LD LQ

70 à 130 % de la qté tolérée RSD ≤ 10 % R2 ≥ 0,95 ou R ≥ 0,97 Rs satisfaisante entre pics PA et pdts de dégradation connus; évaluation de l’interférence du placebo Pour tests limites uniquement Doit être démontrée


Quelques livres

Validation and Qualification in Analytical Laboratories – L. Huber – Interpharm / CRC 1999

L'assurance qualité dans les laboratoires agro-alimentaires et pharmaceutiques – M. Feinberg, coordonnateur – Ed TEC&DOC 2001

Analytical method validation and instrument performance verification – Ed Chung Chow Chan, H. Lam, Y.C. Lee, X.M. Zhang – John Wiley&Sons, 2004

Validation of chromatography data systems – Meeting business and regulatory requirements – R.D. McDowall – Ed Royal Society of Chemistry, 2005

Method validation in pharmaceutical analysis – a guide to best practice – Ed J. Ermer and J.H. McB. Miller – Wiley- VCH, 2005

……

Documents

Validation des méthodes d'analyse - applis.cermav.cnrs.frapplis.cermav.cnrs.fr/ANGD_qualite_en_chimie/Blanchin2.pdf · RSD ≤ 3 % R2 ≥ 0,98 ou R ≥ 0,99 Rs satisfaisante entre