UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVEPrírodovedecká fakulta

Katedra organickej chémie

Rýchla chromatografická technika pre preparatívnu separáciu so strednou

rezolúciou

Miroslav Murár

Školiteľ: doc. RNDr. Andrej Boháč, PhD.

BRATISLAVA 2014

• Autori porovnávajú flash chromatografiu s bežnou (gravitačnou chromatografiou) a opisujú postup flash chromatografie

• Gravitačná chromatografia je pri preparatívnom delení časovo náročná metóda.

• Pri delení 1 až 2 gramov sa rapídne predlžuje čas a ďalšie použitie chromatografickej kolóny ťažko realizovateľné.

• Autori popisujú kombináciu tlakovej a stĺpcovej chromatografie, ktorú nazvali flash chromatografia.

• Vychádzali z chromatografických metód, kedy bolo možné podeliť látky s rozdielom RF = 0.05 a metód skrátenia času o 1 až 3 hodiny.

• Cielom bolo opísať najvhodnejšiu metodiku a parametre flash chromatografie a upozorniť na jej praktické obmedzenia

• Autori pri flash chromatografii sledovali nasledovné parametre:

• - rezolúciu

• - mesh SiO2

• - prietok

• - priemer kolóny a množstvo SiO2

• - veľkosť vzorky

• Vypracovali metodiku ako postupovať pri flash chromatografii.

• Rezolúcia bola určovaná na základe pomeru čas medzi píkmi látkami a šírky v ½ výšky signálu.

• Mesh sili gélu udáva veľkosť povrchu na základe veľkostí častíc. Čím menší rozmer SiO2

čím menší rozmer sili gélu tým väčší mesh.

• Prietok pri ktorom dostávali autori najefektívejšie delenie látok bol 2 ml/L ( 2 palce za minútu na kolóne)

• Priemer kolóny a množstvo sili gélu je závislé od veľkosti vzorky, RF hodnôt, autori v tabulke aj odporúčajú ideálnu veľkosť frakcie.

• Metodika pri flash chromatografii

• 1 Pomocou TLC nájsť vhodnú elučnú zmes

• 2 Určiť kolónu o vhodných rozmerov (tabuľka)

• 3 Pridanie SiO2 do chrom. kolóny

• 4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou

• 5 Nanesenie vzorky

• 1. Identifikácia ideálnej elučnej zmesi

• Pomocou TLC hľadáme elučnú zmes, kde je rozdiel medzi RF hodnotami látok 0.35 ideálne ak je tento rozdiel v strede TLC platničky.

• Dosiahnutie rozdielných RF hodnôt dosahujeme zmenou polarity eleučnej zmesi alebo jej kvality.

• V prípade rozdielu RF hodnôt pod 0.15 je delenie problematické, treba zvoliť väčší priemer kolóny, menšie frakcie...

• 2. Určenie vhodnej veľkosti kolóny

• Autori udávajú konštantnú výšku 5-6 palcov (12-14 cm)

• 3 Pridanie SiO2 do chrom. Kolóny

• Na dno chromatogra-

fickej kolóny vata, po-

tom zrnite jší SiO2 (1/8),

alebo aj morský piesok,

následne dané množ-

stvo pevnej fázy,

opäť zrnitejší SiO2.

• 4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou

• Následne začíname premývať chromatografickú kolónu elučnou zmesou pri prietok ideálne 2ml/L.

• Nezabudnite otvoriť ventil !!!

• Tento konštantný prietok je dosahovaný pri istom tlaku, ktorý pevnú fázu zhutní

• Túto elučnú zmes je možno opätovne použiť na chromatografické delenie.

• 5 Nanesenie vzorky

• Autori nanášajú vzorku na v roztoku pri 20-25 % koncentrácii.

• Vzorka by nemala byť nanesená na suchý sili gél.

• Nanášanie na pevnej fáze autori nespomenuli.

• Pri samotnom delení je vhodné robiť TLC analýzu z frakcii (každá druhá). Odporúčaný objem na TLC je 5 μL.

Záver• Flash chromatografia je lacná metóda. Pri hore

uvedenej metodike je možné počas 10-15 minút podeliť od 0.1 – 10 g látky.

• Najlepšie výsledky ak je rozmer SiO2 40-63 μm, prietok 2 ml/min a RF viac ako 0.35.

• Pri veľkých kolónach je vhodná ich regenerácia, premytím polárnejšou zmesou (EA Acetón)

NEZABUDNITE SI NECHAŤ ŠTANDART DELENEJ ZMESI !!!

Ďakujem za pozornosť