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Universidade de São Paulo
Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”
Potencial do extrato pirolenhoso da madeira de eucalipto como agente conservante de cosméticos e saneantes
Raquel Silveira Ramos Almeida
Piracicaba 2012
Tese apresentada para obtenção do título de Doutor em Ciências. Programa: Recursos Florestais. Opção em: Tecnologia de Produtos Florestais
Raquel Silveira Ramos Almeida
Engenheiro Química
Potencial do extrato pirolenhoso da madeira de eucalipto como agente conservante de cosméticos e saneantes
Orientador:
Prof. Dr.JOSÉ OTÁVIO BRITO
Piracicaba 2012
Tese apresentada para obtenção do título de Doutor em Ciências. Programa: Recursos Florestais. Opção em: Tecnologia de Produtos Florestais
Dados Internacionais de Catalogação na Publicação DIVISÃO DE BIBLIOTECA - ESALQ/USP
Almeida, Raquel Silveira Ramos Potencial do extrato pirolenhoso da madeira de eucalipto como agente conservante
de cosméticos e saneantes / Raquel Silveira Ramos Almeida.- - Piracicaba, 2012. 110 p: il.
Tese (Doutorado) - - Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, 2012.
1. Balanço de massa 2. Carbonização 3. Cromatografia 4. Espectrometria de massa 5. Eucalipto 6. Extrato pirolenhoso I. Título
CDD 634.9734 A447p
“Permitida a cópia total ou parcial deste documento, desde que citada a fonte – O autor”
3
HOMENAGEM SAUDOSA
Ao meu pai, Algemiro Coelho Ramos e minha írmã Ruth Ramos Razera, pessoas
maravilhosas que sempre me deram apoio, incentivo e inspiração.
4
5
DEDICO
À minha mãe Jandyra Silveira Ramos que sempre está comigo em todos os
momentos importantes de minha vida.
OFEREÇO
Ao meu esposo Henrique e aos meus filhos Bruno e Anita,
pela compreensão durante todo o percurso de meu trabalho.
6
7
AGRADECIMENTOS
Ao Prof.Dr. José Otavio Brito, pela orientação, pelo incentivo e principalmente, pela
paciência em transmitir os connhecimentos sobre as florestas e suas árvores.
Ao Departamento de Ciências Florestais da Escola Superior de Agricultura “Luiz de
Queiroz” da Universidade de São Paulo, pela oportunidade de aprimoramento
profissional.
Aos funcionários do Departamento de Ciências Florestais, em especial ao técnico
Udemilson Luis Ceribelli dos Laboratórios Integrados de Química, Celulose e
Energia-LQCE /ESALQ /USP, pela dedicação e apoio na realização dos trabalhos.
Ao pesquisador Dr. Eduardo Gloria Micotti, pela disponibilização e apoio na
realização das análises, no Laboratório de Micotoxinas do Departamento de
Agroindústria, Alimentos e Nutrição (LAN)/ESALQ/USP.
À empresa São Manoel, pelo fornecimento de materias e informações relevantes aos
trabalhos.
Às bibliotecárias Eliana Maria Garcia e Sílvia Maria Zinsly pela orientação
bibliográfica.
Ao colega Marcel Miranda Taccini, pela troca de conhecimentos, apoio e incentivo
na realização dos trabalhos .
Aos colegas e estagiários do Departamento de Ciências Florestais, em especial aos
companheiros do Laboratórios Integrados de Química, Celulose e Energia – LQCE,
pelo apoio e incentivo e a todos aqueles que colaboraram direta ou indiretamente
para a realização deste trabalho.
À minha família que me fortalece em meus desafios e conquistas em especial aos
meus irnãos Ester e Caio, minha tia Maria da Glória e meus sobrinhos Renato, Paula
e João Pedro.
8
9
EPÍGRAFE
“Para entrar em estado de árvore é preciso partir de
um torpor animal de lagarto às três horas da tarde,
no mês de agosto.
Em dois anos a inércia e o mato vão crescer em
nossa boca.
Sofreremos alguma decomposição lírica até o mato
sair na voz.
Hoje eu desenho o cheiro das árvores.”
Manoel de Barros – O livro das ignorãças
10
11
SUMÁRIO
RESUMO................................................................................................................... 13
ABSTRACT ............................................................................................................... 15
LISTA DE FIGURAS ................................................................................................. 17
LISTA DE TABELAS ................................................................................................. 19
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS .................................................................... 21
1 INTRODUÇÃO ....................................................................................................... 23
2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ................................................................................... 27
2.1 O setor florestal no Brasil e a eucaliptocultura .................................................... 27
2.2 A produção de carvão vegetal e o extrato pirolenhoso ....................................... 28
2.3 O extrato pirolenhoso e suas origens .................................................................. 31
2.4 Referências de aplicação do extrato pirolenhoso ................................................ 33
2.4.1 Normas ............................................................................................................. 33
2.4.2 Pesquisas sobre aplicação do extrato pirolenhoso .......................................... 34
2.5 Os produtos “naturais/orgânicos” e a indústria cosmética e de produtos de
limpeza ...................................................................................................................... 34
2.6 Conservantes ...................................................................................................... 36
2.6.1 O conservante ideal.......................................................................................... 39
2.6.2 Regulamentações e Aprovações ...................................................................... 39
2.7 Exigências e desafios dos consevantes naturais para cosméticos e saneantes 41
3 MATERIAL E MÉTODOS ....................................................................................... 43
3.1 Material................................................................................................................ 43
3.1.1. Extrato pirolenhoso obtido em escala industrial .............................................. 43
3.1.2. Extrato pirolenhoso obtido em escala de laboratório ....................................... 43
3.2 Método ................................................................................................................ 44
3.2.1 Obtenção dos extratos pirolenhosos.. .............................................................. 44
3.2.1.1 Extrato pirolenhoso de laboratório ................................................................. 44
3.2.1.2 Extrato pirolenhoso industrial ........................................................................ 44
3.2.2 Balanço de massa e cálculo de rendimentos em carvão e co-produtos obtidos
em escala de laboratório ........................................................................................... 47
3.2.3 Determinação do pH do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e de
laboratório ................................................................................................................. 48
3.2.4 Análise organoléptica do extrato pirolenhoso ................................................... 48
12
3.2.5. Análises cromatográficas do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e
de laboratório ............................................................................................................ 49
3.2.6 Processo de destilação para determinação do teor de alcatrão ...................... 50
3.2.7 Balanço de massa e cálculo de rendimentos em alcatrão e extrato pirolenhoso
destilado obtido em escala industrial e laboratorial .................................................. 51
3.2.8 Avaliação do potencial antifúngico dos extratos pirolenhosos ......................... 52
3.2.9 Identificação e Análise da composição química de frações antifúngicas de
extrato pirolenhoso ................................................................................................... 53
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO ............................................................................. 57
4.1 Resultados do balanço de massa e cálculo de rendimentos em carvão e co-
produtos obtidos em escala de laboratório (PLO) ..................................................... 57
4.2 Determinação do pH do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e de
laboratório ................................................................................................................. 57
4.3 Análise organoléptica do extrato pirolenhoso ..................................................... 58
4.4 Resultados dos balanços de massa e cálculo de rendimentos em alcatrão e
extrato pirolenhoso destilado obtido em escala industrial (PIO) e laboratorial (PLO)59
4.5 Resultados das análises cromatográficas do extrato pirolenhoso ...................... 59
4.6 Análises da avaliação do potencial antifúngico dos extratos pirolenhoso .......... 64
4.7 Identificação e Análise da composição química de frações antifúngicas de extrato
pirolenhoso ............................................................................................................... 66
4.8 Potencial do extrato pirolenhoso para aplicação em produtos cosméticos e
saneantes ................................................................................................................. 68
5 CONCLUSÕES ..................................................................................................... 71
REFERÊNCIAS ........................................................................................................ 73
APÊNDICES ............................................................................................................. 79
ANEXOS ................................................................................................................... 97
13
RESUMO
Potencial do extrato pirolenhoso da madeira de eucalipto como agente conservante de cosméticos e saneantes
O extrato pirolenhoso é uma substância orgânica resultante da condensação da fumaça gerada durante a carbonização da madeira ou de outras fontes de matéria-prima vegetal, sendo constituído por, pelo menos, 80% de água e dezenas de compostos, dentre os quais se incluem substâncias fenólicas, aldeídos e ácidos orgânicos. Portanto, não seria utópico supor-se que nessa gama de compostos possam estar incluídas substâncias que apresentem propriedades conservantes para aplicações na área cosmética e de saneantes. É nessa direção que se avaliou o potencial de utilização do extrato pirolenhoso da madeira de eucalipto. Especificamente, houve a intenção de se estudar as características e propriedades do extrato pirolenhoso obtido dessa madeira levando-se em conta duas fontes distintas; avaliar em particular suas propriedades antifúngicas, e as possibilidades do uso do extrato pirolenhoso como conservante, na substituição de ingredientes como, por exemplo, o formaldeído, ainda hoje utilizado na indústria em formulações de produtos cosméticos e atualmente proibido em produtos saneantes, segundo nova resolução RDC 35/08 da ANVISA. Foi estudado o extrato pirolenhoso obtido da carbonização de cavacos da madeira, à temperatura final de 400°C, no tempo de aquecimento de 2,5h, em um forno-mufla conjugado a um sistema de coleta de gases condensáveis. Estudou-se também o extrato pirolenhoso obtido da carbonização da madeira de eucalipto, coletado entre as temperaturas de 80 e 120°C, em fornos de alvenaria, numa carvoaria localizada na região de Atibaia, São Paulo, estocado por 3 anos. Os compostos químicos presentes am ambos os extratos foram identificados mediante análises em cromatógrafo acoplado a espectrômetro de massa (GC/MS). De forma geral, as análises dos extratos demonstraram a presença de uma gama de compostos oxigenados, tais como ácidos carboxílicos, ésteres, éteres e cetonas. Além disso, foram detectados fenol, guaicol e derivados fenólicos. Qualitativamente, o extrato pirolenhoso industrial, apresentou menor número de componentes químicos ligados ao alcatrão, o quê também foi comprovado quantitativamente pela análise do teor de alcatrão, mediante destilação simples. O produto que apresentou o melhor potencial antifúngico foi o extrato pirolenhoso laboratorial, coincidindo com o fato dele possuir maior número de componentes ligados ao alcatrão. Pela análise da composição química de frações antifúngicas de extrato pirolenhoso, os potenciais ativos da amostra a serem considerados foram: corilon, mequinol, 2-metoxi 4-metilfenol, 4-etil 2-metoxifenol, 2,6 – dimetoxifenol, 1,2,4-trimetoxibenzeno e 5-tert-butilpirogalol. As diferenças nas participações dos compostos fracionados mostraram-se também estatisticamente diferentes, com os maiores valores sendo apresentados pelo extrato laboratorial. Em todos os extratos estudados, verificam-se componentes que são descritos na literatura como potencialmente tóxicos e suas presenças restringem o uso dos mesmos em produtos cosméticos, no entanto, a alternativa de uso do extrato para aplicação em saneantes se mostra promissora.
Palavras-chave: Carbonização; Balanço de massa; Cromatógrafo-espectrômetro de
massa; Extrato pirolenhoso; Eucalipto
14
15
ABSTRACT
Potential of pyroligneous extract of eucalyptus wood as a preservative of cosmetic and sanitizing products
The pyroligneous extract is an organic substance resulting of condensation of the smoke generated by the carbonization of the wood or other vegetal raw material. It has at least 80% of water and contains many compounds including: phenolic substances, aldehydes and organic acid. It would not be utopian, therefore, to assume that, in this gamma of compounds there could be substances having preservative properties for cosmetic and sanitizing products. This study evaluates the potential of the pyroligneous extract of eucalyptus wood. Specifically, the characteristics and properties of the pyroligneous extract from eucalyptus wood from two distinct sources; to evaluate in particular its antifungal proprieties and the possibility of using the pyroligneous extract as a preservative. This would substitute, for example, the formaldehyde currently used in the cosmetic industry in the manufacturing of shampoos and soaps. In fact formaldehyde has now been forbidden in sanitizing products; resolution RDC 35/08 of ANVISA. The experiment consisted of carbonization of wood at a final temperature of 400° C at a residence time of 2,5h in an oven-muffle joined a system to collect the condesable gases. Also, the pyroligneous extract obtained from the carbonization of the eucalyptus wood was used. This had been collected at temperatures between 80 °C and 120 °C from masonry ovens at a charcoal producer located in the Atibaia region of the State of São Paulo stored for 3 years. The chemical compounds of both extracts were identified by analyses of a gaseous chromatograph connected to the mass spectrometer (GC/MS). In general, the analysis of extracts demonstrated the presence of oxygenated components gamma such as carboxylic acids, esters, ethers and ketenes. Moreover,
phenol, guaicol and phenol derivatives were detected. The industrial pyrolignous extract, in qualitative terms, presented fewer chemical components related to the tar, and also this was proven by the tar quantitative analyzes using the method of simple distillation. The product that showed better potential antifungal results was the laboratory pyrolignous extract, coinciding with the fact that it contains a higher number of components related to the tar. From the analysis of the chemical of antifungal pyrolignous extract fractions, the potential actives under consideration from the sample were: corilon, mequinol, 2-metoxy 4-metylphenol, 4-etyl 2-methoxyphenol, 2,6-dimetoxyphenol,1,2,4-trimetoxybenzene and 5-tert-butylpirogallol. There was a significant statistically difference observed between the industrial and laboratory processes; the laboratory result showed a better participation of its fractionated compounds than those from the industrial. Toxic compounds described in the literature were shown to be presented in both of the studied extracts. These restrict use in cosmetic products, although they are still promising in sanitising products. Keywords: Carbonization, Material balance, Chromatograph-mass spectroscopy;
Pyroligneous extract; Eucalyptus
16
17
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 – Esquema de recuperação de gases da carbonização de madeiras.........31
Figura 2 – Processo de pirólise e coleta dos gases ..................................................45
Figura 3 – Equipamento utilizado na pirólise laboratorial...........................................46
Figura 4 – Processo industrial de pirólise e coleta dos gases....................................46
Figura 5 – Processo de Destilação Simples...............................................................50
Figura 6 – Cromatograma produzido nas carbonizações do experimento obtido a
400° C e 2,5h na escala laboratorial..........................................................61
Figura 7 – Cromatograma produzido nas carbonizações do experimento obtido na
escala industrial........................................................................................61
Figura 8 – Curva de inibição do extrato pirolenhoso amostra da escala industrial
(PIO) e amostra laboratorial (PLO)...........................................................64
Figura 9 – Placa de Bioautografia observada após 7 dias a esquerda e placa com
revelação com solução metanólica de ácido sulfúrico a 10%, a
direita........................................................................................................66
Figura 10 – Cromatograma da amostra laboratorial utilizando-se Metanol...............67
Figura 11 – Cromatograma da amostra laboratorial utilizando-se Acetato de Etila..67
18
19
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Balanço de massa das carbonizações..........................................57
Tabela 2 - Resultados obtidos de pH.............................................................58
Tabela 3 - Balanço de massa das destilações...............................................59
Tabela 4 - Compostos químicos presentes nos extratos pirolenhosos.........62
Tabela 5 - Compostos químicos presentes nos extratos pirolenhosos
obtidos da escala laboratorial (PLO) e da escala industrial (PIO)
com seus percentuais de participação...........................................63
Tabela 6 - Resultados obtidos da análise de inibição....................................65
Tabela 7 - Frações bioativas presentes nos extratos pirolenhosos...............68
20
21
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
ABIPLA Associação Brasileira de Produtos de Limpeza e Afins
AFSSAPS Agência Francesa de Segurança Sanitária dos Produtos de Saúde
ANVISA Agência de Vigilância Sanitária
ANOVA Análise de Variância
CMR1 “Categoria 1 de Subtâncias Carcinogênicas, Mutagênicas, Tóxica de
Reprodução (do inglês, Carcinogenic, Mutagenic, Reproduction Toxic
Substances Category 1°).
DE Detectável, mas com percentuais muito baixos, apenas traços
EMEA Agência Européia para Avaliação de Produtos Medicinais
EPA Agência de Proteção Ambiental (do inglês, Environmental Protection
Agency)
FDA Fundação de Alimentos e Medicamentos (do inglês, Food and Drug
Administration)
FISPQ Ficha de Segurança de Produtos Químicos
GC/MS Cromatógrafo acoplado a espectrômetro de massa
IARC Agência Internacional para Pesquisa do Câncer (do inglês, International
Agency for Research and Cancer )
MSDS Ficha de Segurança do Material (do inglês, Material Safety Datasheet)
ND Não detectado
OSHA Segurança e Saúde Ocupacional (do inglês, Occupational Safety and
Health)
PA Peso do alcatrão (g)
PCS Peso do carvão seco (g)
PGC Peso do gás condensado (g)
PIB Produto interno bruto
PIO Extrato (licor) pirolenho obtido em escala industrial
PLO Extrato (licor) pirolenho obtido em escala laboratorial
PLP Peso do extrato (licor) pirolenhoso (g)
PMS Peso da madeira seca (g)
RDC Resolução da Diretoria Colegiada
22
RGA Rendimento gravimétrico em alcatrão (%)
RGC Rendimento gravimétrico em carvão (%)
RGGC Rendimento gravimétrico em gases condensáveis (%)
RGLD Rendimento gravimétrico em extrato (licor) pirolenhoso destilado (%)
RGNC Rendimento gravimétrico em gases não-condensáveis (%)
RLP Rendimento gravimétrico em extrato ( licor) pirolenhoso (%)
SBS Sociedade Brasileira de Silvicultura
SCCP Comitê Científico da União Européia para Produtos de Consumo
23
1 INTRODUÇÃO
A demanda por produtos naturais tem crescido muito nos últimos anos,
principalmente devido aos conceitos que a eles são atrelados, em relação à saúde
do consumidor e à preservação do meio ambiente. Além disso, existe um movimento
mundial crescente, no sentido de se incluir os atributos de produto natural e/ou
orgânico a uma gama cada vez maior de cosméticos por meio de ingredientes,
dentre os quais se encontram aqueles que possuam ação anti-microbiana, os
chamados conservantes (COSMETICS & TOILETRIES, 2007).
No setor de saneantes, as tendências mundiais mais marcantes são o
desenvolvimento e o lançamento de produtos de limpeza com matéria-primas e
ingredientes mais “amigáveis” ao meio ambiente. A indústria tem se dedicado nos
últimos anos ao desenvolvimento de novas tecnologias para a substituição de
ingredientes considerados nocivos, por exemplo, formol, por outros conservantes
(QUÍMICA E DERIVADOS, 2011).
Conservantes são substâncias adicionadas aos produtos de higiene pessoal,
cosméticos, perfumes e saneantes com a finalidade primária de preservá-los de
danos e/ou deteriorações causados por microorganismos, durante sua fabricação e
estocagem, bem como proteger o consumidor de contaminação inadvertida durante
a utilização do produto (COSMÉTICOS E PERFUMES, 2010; AGÊNCIA NACIONAL
DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA - ANVISA, 2008a).
Existe uma lista de substâncias de ação conservante permitidas pela ANVISA
(Agência Nacional de Vigilância Sanitária, Ministério da Saúde) para produtos de
higiene pessoal, ou seja, cosmética. Um exemplo é o ácido benzóico, tricloro-3,4,4-
hidróxi-2-difeniléter, mais conhecido pelo nome comercial Triclosan e o 3-hidroxi-4-
isopropil tolueno, ambos com definições sobre a máxima concentração permitida,
suas condições e advertências de uso. O formaldeído ainda é considerado a
substância mais utilizada e popular no meio cosmético. A solução de formaldeído, o
formol, é a matéria-prima com utilização permitida em cosméticos nas funções de
conservante, com limite máximo de 0,2% no total do produto. É também utilizado
como agente endurecedor de unhas (limite máximo de uso permitido de 5%).
Entretanto, o formol, em aplicações diferentes das citadas e em limites acima dos
permitidos, seria nocivo à saúde. Seu contato com a pele pode causar irritação,
24
vermelhidão, dor e queimaduras. Por inalação, seus danos podem resultar em
câncer, irritação e sensibilização do trato respiratório. Pode ainda causar graves
ferimentos nas vias respiratórias, levando ao edema pulmonar e pneumonia. O
formol é fatal em altas concentrações (ANVISA, 2008c).
No caso de saneantes, uma nova resolução do governo brasileiro, a
RDC35/08, proíbe o uso de formaldeído e considera a necessidade de baní-lo das
formulações de tais produtos, devido à sua reconhecida carcinogenicidade e atual
classificação toxicológica pela IARC (International Agency for Research on Cancer).
Ainda há o artigo 5º da Resolução RDC nº. 184 de 22 de outubro de 2001 que
proíbe o uso de substâncias carcinogênicas, teratogênicas e mutagênicas nas
formulações de produtos saneantes (ANVISA, 2008b).
Os produtos orgânicos (por exemplo, os cosméticos orgânicos) são uma
opção interessante para quem busca atender as aspirações de saúde, ecologia e
responsabilidade social, indo contra todo possível efeito nocivo de substâncias como
o formaldeído. Mas para aproveitar esta nova tendência, é necessária atenção a
alguns detalhes importantes como o de enfrentar o desafio de selecionar um
conservante adequado para a formulação e uma embalagem que irão compor o
produto (COSMETIC & TOILETRIES, 2007). O pesquisador deve esquecer os
sistemas conservantes tradicionais e prestar atenção a ingredientes que tenham
potencial ação anti-microbiana como poderia ser o caso do extrato pirolenhoso.
O extrato pirolenhoso é uma substância orgânica resultante da condensação
da fumaça gerada durante a carbonização da madeira ou de outras fontes de
matéria-prima vegetal, sendo constituído pelo menos de 80% de água e dezenas de
compostos, dentre os quais se incluem-se substâncias fenólicas, aldeídos e ácidos
orgânicos Quadros (2005) e Loo (2007). Não seria utópico, portanto, supor-se que
nessa gama de compostos, possam existir substâncias que apresentem
propriedades conservantes para aplicações na área cosmética e de saneantes.
Ao se propor a utilização do extrato pirolenhoso, em geral considerado no
Brasil como subproduto do processo de carbonização da madeira, estaria sendo
oferecida a oportunidade para se agregar mais valor à matéria–prima da qual o
mesmo é produzido. Como consequência, a floresta estaria sendo mais valorizada,
não apenas para obtenção de carvão, mas também graças ao valor econômico dado
aos gases emitidos no processo de carbonização. Além disso, haveria uma
importante redução de emissões gasosas impactantes ao ambiente. Nesse sentido,
25
já existem experiências importantes quanto a aplicação do extrato pirolenhoso como
agente quelante e complexante orgânico de fertilizantes orgânicos e organominerais
(LIMA, 2008). A abertura de um potencial de aplicação para o produto como agente
conservante natural para indústria cosmética e de saneantes abriria um leque
adicional para sua valorização ainda maior como matéria-prima.
No entanto, deve-se ressaltar que, diante da grande quantidade de
compostos presentes no extrato pirolenhoso, qualquer estudo que vise determinar o
seu potencial de utilização, sobretudo em novas áreas como as mencionadas, deve
levar em conta a necessidade de se ter uma série de informações, que incluem o
conhecimento preciso da sua composição e características físico-químicas. No
campo da aplicação da indústria cosmética, faz-se também necessário avaliar suas
propriedades anti-microbianas e a detecção da presença de possíveis ingredientes
tóxicos ao ser humano. Pelo exposto, justifica-se a realização do presente trabalho.
O estudo teve por objetivo geral avaliar o potencial de utilização do extrato
pirolenhoso da madeira de eucalipto como agente conservante de produtos
cosméticos e saneantes.
Como objetivos específicos pretendeu-se:
Estudar as características e propriedades do extrato pirolenhoso
levando-se em conta as duas fontes distintas de obtenção: processo em
escala laboratorial e processo em escala industrial;
Avaliar aspectos microbiológicos do extrato pirolenhoso obtido;
Avaliar as possibilidades do uso do extrato pirolenhoso como
conservante em produtos cosméticos e saneantes.
26
27
2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA
2.1 O setor florestal no Brasil e a eucaliptocultura
Com base no ano de 2007, a indústria florestal brasileira representou 3,4% do
produto interno bruto (PIB) nacional, ou seja, um equivalente a US$ 44,6 bilhões. As
exportações foram de US$ 9,1 bilhões , equivalentes a 5,6% das exportações totais
brasileiras (SOCIEDADE BRASILEIRA DE SILVICULTURA - SBS, 2008).
No Brasil, a área ocupada por florestas naturais é cerca de 510 milhões de ha
enquanto as florestas plantadas ocupam 6,8 milhões de ha, dos quais 4,52 milhões
de ha (66%) com eucalipto; 1,79 milhão de ha (27%) com pinus; 0,47 milhão de ha
(7%) com outras espécies (acácia negra, seringueira, paricá, teca, araucária e
outras) (ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE PRODUTORES DE FLORESTA
PLANTADA - ABRAF, 2010). Os principais produtos são a madeira em toras e seus
derivados: (madeira serrada, papel e celulose, carvão vegetal, lenha, aglomerados e
compensados, entre outros outros) (SBS, 2008).
Dentre os produtos florestais não madeireiros, destacam-se os taninos (10 mil
t/ano de 190 mil ha de acácia), a borracha natural (110 mil t/ano de 81 mil ha de
seringueira, suprindo 35% do consumo nacional), goma resina, breu e terebintina de
pinus (106 mil t de goma resina/ano), óleos essenciais de eucalipto (1,0 mil t/ano de
10 mil ha de eucalipto ) (SBS, 2008).
A instituição do Código Florestal em 1965 e os incentivos fiscais concedidos
pelo Governo Federal a partir 1966 (extintos em 1987) propiciaram o incremento das
atividades de reflorestamento com espécies de rápido crescimento por parte das
empresas do setor de papel e celulose, bem como do setor de carvão vegetal (SBS,
2008). As plantações florestais trouxeram alívio da pressão sobre as florestas
naturais e também a criação e desenvolvimento dos departamentos de silvicultura
dessas empresas, no ímpeto de aumentar o rendimento da matéria prima em suas
plantas industriais.
A expansão da eucaliptocultura é consequência direta da expansão dos
mercados interno e externo de celulose a partir da década de 1970 e da crescente
valorização da biomassa como insumo energético viável a partir das crises do
petróleo (1973 e 1979) e da incorporação definitiva da temática ambiental nas
28
discussões sobre desenvolvimento sustentável a partir da década de 1990 (COUTO
et al., 2008).
O eucalipto é uma espécie arbórea que se destaca devido à extensão de sua
área plantada nas regiões de clima tropical, tendo como maiores referências Brasil,
Índia, África do Sul, Portugal, Angola, Espanha e China. O Brasil tornou-se o maior
produtor mundial de eucalipto principalmente devido ao seu potencial edafo-
climático. Os principais produtores brasileiros são os estados de Minas Gerais, São
Paulo e Bahia (ALVES, 2005). Levando-se em consideração o ano base de 2009, o
Brasil possui uma região reflorestada com eucalipto de mais de 4,5 milhões de ha
(ABRAF, 2010).
O gênero Eucalyptus ou eucalipto pertence à famíla Myrtaceae e possui como
centro de origem a Austrália e regiões próximas ao Timor, Indonésia, Papua Nova
Guiné, Molucas, Java e sul das Filipinas, ou seja, uma faixa compreendida entre
latitudes 9º N e 44º S. Este gênero compreende mais de 700 espécies, várias das
quais são de grande importância econômica (ELDRIDGE, 1993; UDOVICICI et al.,
1995 apud ALVES 2005).
O híbrido de Eucaliptus urophylla x Eucalyptus grandis, popularizado como
Eucalyptus urograndis, foi obtido via programas de melhoramento genético, para
permitir melhor qualidade das florestas plantadas e, consequentemente, maior
produtividade de matéria-prima para a obtenção de celulose. A produtividade inicial
da década de 1960, estimada em torno de 20m3/ha/ano, foi elevada para atuais 45-
60 m3/ha/ano. Embora a maior parte das plantações de eucalipto no Brasil tenha por
finalidade a produção de papel e celulose (52 milhões de m3, em 2009) e carvão
vegetal/lenha industrial (51 milhões de m3 em 2009), tem aumentado a utilização da
madeira para construção civil e das folhas para extração de essências (ABRAF,
2010; SILVA; BRITO; SILVA, 2006; ROSSI, 2009; BRAGA, 2008).
2.2 A produção de carvão vegetal e o extrato pirolenhoso
A produção de carvão vegetal, no Brasil, é destinada ao atendimento da
demanda de diversos segmentos da indústria (siderurgia, metalurgia, cimento, etc),
bem como para utilização residencial urbana e rural. O setor siderúrgico é o que
mais se destaca (BRITO, 1990).
29
A produção é realizada por meio do processo denominado carbonização ou
pirólise, que consiste na decomposição da biomassa pelo calor, sob controle da
presença de ar. É um processo constituído por uma série de reações complexas,
onde o calor fraciona a estrutura molecular da biomassa, liberando compostos de
carbono na forma sólida, líquida e gasosa, que poderão ser utilizados como
combustíveis ou insumos químicos (DINIZ, 2005).
A quase totalidade das 10 milhões de toneladas anuais de carvão vegetal
produzidas no Brasil (o maior produtor mundial, respondendo por cerca de 30% do
total) é obtida pela carbonização conduzida de forma artesanal, em fornos
construídos em alvenaria (BRITO, 1990). Em diversos outros países, empregam-se
as chamadas retortas, equipamentos geralmente construídos em metal, onde a
carbonização é conduzida sob regime totalmente industrial, com elevado nível de
controle de processo (QUADROS, 2005).
A tecnologia utilizada no Brasil descarta, na maioria das vezes através da
emissão de gases à atmosfera, muitos componentes químicos. Dessa forma, o
resultado global das emissões de gases é importante tanto com relação a aspectos
ambientais quanto de perda de possíveis produtos químicos que poderiam agregar
valor à produção de carvão vegetal (BRITO, 1990).
Segundo Pimenta et al. (2000), os poluentes provenientes do processo de
carbonização podem ser classificados em três grupos principais: materiais
particulados, gases não condensáveis e os compostos orgânicos condensáveis. O
material particulado compõe-se de cinzas, partículas de carvão e fuligem, que são
arrastadas do leito de carbonização dentro de micro gotículas de alcatrão. Os gases
não condensáveis, por sua vez, se compõem essencialmente de CO2, CO, H2 e CH4,
enquanto que os compostos orgânicos condensáveis são um grupo formado por
compostos orgânicos agrupados em classes químicas variadas (BARCELLOS,
2002). A fumaça de carbonização apresenta em sua composição subprodutos
tóxicos como os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, que apresentam atividade
mutagênica e cancerígena (PIMENTA et al., 2000; CRISTALE et al., 2008).
Uma vez condensados mediante resfriamento, os compostos orgânicos dão
origem a duas frações: aquosa (extrato pirolenhoso) e oleosa (alcatrão).
(QUADROS; 2005; CAMPOS, 2007).
O extrato pirolenhoso é a fração aquosa do líquido condensado, de cor
marrom, contendo pelo menos 80% de água. O restante da sua composição
30
apresenta uma gama de dezenas de componentes químicos, com destaque para o
ácido acético, o álcool metílico e a acetona (QUADROS, 2005; LOO et al., 2007).
O alcatrão, que é a fração oleosa ou pesada do condensado, apresentando
coloração negra, é composto por dezenas de produtos químicos, mostrando-se mais
denso e viscoso que o extrato pirolenhoso, do qual se separa, em sua maior parte,
por simples decantação. A separação mais completa é obtida mediante a destilação
do liquido condensado. O alcatrão decantado apresenta composição rica em
compostos fenólicos. As principais referências de uso para o alcatrão são: como
combustível; como matéria-prima para obtenção de fenóis com finalidades químicas
e farmacêuticas; como preservativo de madeira; na produção de solventes, tintas e
vernizes.(FOELKEL, 2012). Se no exterior a maior ênfase é para usos químicos, no
Brasil, a sua recuperação tem sido conduzida desde a década de 80 para utilização
como combustível em fornalhas.
Apesar do extrato pirolenhoso conter muitos compostos químicos, as
concentrações dessas substâncias são relativamente muito baixas, comparadas à
quantidade de água no extrato, conforme observado por Quadros (2005) e Loo et al.
(2007). A grande maioria dos mesmos constitui-se de ácidos, especialmente o ácido
acético. Fengel e Wegener (1984) relataram que a degradação térmica da
hemicelulose gera ácido acético, metanol, furfural, aldeídos e cetonas. Geralmente
os ácidos são formados da destruição da celulose, hemicelulose e lignina. Com
relação aos componentes fenólicos e seus derivados, provavelmente eles são
oriundos da pirólise da lignina. Segundo Ratanapisit et al. (2009), geralmente a
quantidade de compostos fenólicos aumenta com o aumento da temperatura de
pirólise.
A figura 1 mostra uma ilustração sobre os produtos que podem ser obtidos da
carbonização da madeira, incluindo-se o extrato pirolenhoso.
31
Figura 1 – Esquema de recuperação de gases da carbonização de madeiras. Os valores (em kg) correspondem aos rendimentos médios de produtos obtidos da carbonização da madeira de eucalipto (valores laboratoriais para madeira seca) (BRITO, 2000)
2.3 O extrato pirolenhoso e suas origens
A fabricação e utilização do extrato pirolenhoso é muito antiga. Na China,
existem relatos de sua utilização há milênios atrás e na Índia foi muito utilizado para
tratamento de doenças. Na Europa, século 17, já havia destilação seca de madeira
para produção de alcatrão, com relato de aproveitamento do líquido pirolenhoso. O
início da produção do extrato pirolenhoso em maior quantidade ocorreu a partir de
1813 na Inglaterra, para ser utilizado na coloração do linho (CAMPOS, 2007).
Uma monografia produzida pela Sociedade Britânica para a História da
Ciência (BRITISH SOCIETY FOR THE HISTORY OF SCIENCE - BSHS, 1988)
enumera três companhias produzindo o ácido pirolenhoso em 1820 na Inglaterra e
aponta para a introdução dos destiladores para a produção do extrato pirolenhoso
em 1826. Em 1941, já havia oito companhias produzindo o extrato pirolenhoso com
grandes lucros.
A divulgação das primeiras pesquisas com o extrato pirolenhoso no Japão
data de 1874. Em 1893, as pesquisas experimentais visavam a construção de fornos
e de técnicas de carbonização para obtenção de óleo de terenbentina e alcatrão.
Após a Segunda Guerra, em 1944, no país iniciou-se a utilização do extrato
pirolenhoso nas lavouras. Em 1945, foi publicado o primeiro livro, intitulado
32
“Fabricação e Utilização do Extrato Pirolenhoso”, por Tatsujiro Fukuda, com relatos
interessantes sobre a eficiência do extrato pirolenhoso na cultura do arroz, sendo
utilizado contra pragas e pássaros e no processo de compostagem e esterelização
(CAMPOS, 2007).
No Brasil, a demanda por produtos naturais e/ou orgânicos tem crescido
muito nos últimos anos e, nesse contexto, o extrato pirolenhoso tem sido uma das
referências (GLOBO RURAL, 2009). O interesse pelo produto é decorrente do seu
reduzido nível de toxidez, protegendo, dessa forma, a saúde do agricultor, bem
como a do consumidor.
O pioneirismo em relação ao uso do extrato pirolenhoso na agricultura no
Brasil é atribuído ao Agrônomo Shiro Miyasaka, fundador da Associação dos
Produtores de Agricultura Natural de São Paulo (APAN), que passou a ser uma das
referências brasileiras nessa área. Atualmente, pode-se encontrar produtos
comerciais disponíveis à base de extrato pirolenhoso para aplicação agrícola e sua
utilização é proposta, por exemplo, como veículo para os micronutrientes de plantas,
ajuste de pH, entre outras propriedades não confirmadas, como controle de pragas.
(ECOPIROL; BAUSIL, 2009).
Tipicamente, o extrato pirolenhoso aparenta ser um líquido de cor marrom
avermelhada que assemelha-se à combinação de chá preto, da cor da cerveja ou
vinho. O extrato pirolenhoso pode variar da cor verde escura para uma vermelha
escura, dependendo da estocagem, do processo de fabricação, do tipo de madeira e
suas condições climáticas. O pH do extrato pirolenhoso é baixo, variando de 2 a 3,
devido à sua elevada quantidade (8 a 10%) de ácidos voláteis, principalmente ácido
acético e ácido fórmico, sendo que os mesmos são responsáveis pela propriedades
corrosivas do extrato (SIPILÄ et al., 1998; AUBIN et al., 1980; LOO et al., 2007).
De acordo com Campos (2007), o extrato pirolenhoso puro não é
concentrado, diluído ou misturado com quaisquer substâncias similares. Ele é
produzido por meio da colocação da solução não diluída natural no tanque de
armazenamento, à espera da estabilização natural com posterior filtragem da
solução com carvão ativado para refinamento (eliminando as pequenas impurezas).
Ele deve ser acondicionado em recipiente fácil de reconhecer e resistente aos
ácidos, além de nunca ser armazenado em vasilhas de ferro ou alumínio. Seu odor
característico é o cheiro de defumados. Deve-se evitar o contato do extrato
pirolenhoso bruto com a pele e o alcance de crianças.
33
Definições para o controle de qualidade do extrato pirolenhoso obtido de
diferentes métodos de produção, assim como sua utilização, ainda não existem que
especifiquem seus constituintes e uma norma mais rígida de controle de qualidade
torna-se necessária para garantir a segurança e eficácia desse produto. Um
procedimento que garantiria a segurança e eficácia do produto seria a especificação
de sua composição.
2.4 Referências de aplicação do extrato pirolenhoso
2.4.1 Normas
As regras de utilização do ácido pirolenhoso têm passado por mudanças.
Inicialmente o extrato pirolenhoso era considerado um composto
quelante/complexante, segundo a Secretária de Apoio Rural e Cooperativismo do
Ministério da Agricultura e Abastecimento (2004). Na agricultura, embora não
existisse muito material científico que comprovasse a propriedade quelante do
extrato, ele era utilizado para liberar os metais pesados adsorvidos no solo e
aumentar a sua disponibilidade, de forma que as plantas pudessem extrair maior
quantidade de metais (LIMA, 2008).
Em dezembro de 2008, o Ministério da Agricultura publicou a instrução
normativa nº 64, que mudava as regras proibindo a utilização de produtos que
tivessem contaminantes maléficos à saúde humana e mencionavam entre eles o
ácido pirolenhoso. Segundo Michella Taki, agrônoma da Cativar, Cooperativa de
Técnicos do Vale do Ribeira, essa instrução normativa proibia a utilização desse
ácido devido a falta de dados conclusivos sobre suas propriedades; por conter
alcatrão na sua composição, o produto entrou na lista de produtos proibidos na
agricultura orgânica (GLOBO RURAL, 2009).
Em 2009, a Secretaria de Defesa Agropecuária e Abastecimento aprovou
uma nova instrução normativa n°25 sobre especificações e as garantias, as
tolerâncias, o registro, a embalagem e a rotulagem dos fertilizantes orgânicos
simples, mistos, compostos, organominerais e biofertilizantes destinados à
agricultura. Nela o ácido pirolenhoso é aprovado como agente quelante e
complexante orgânico autorizado para fertilizantes orgânicos e organominerais, além
34
de aprovado como aditivo autorizado para uso em fertilizantes orgânicos
organominerais.
2.4.2 Pesquisas sobre aplicação do extrato pirolenhoso
Pesquisas sobre controle de bactérias indicam que o extrato pirolenhoso é
eficaz no controle da Pseudomona sp (DE MELO et al., 2007).
Em estudos conduzidos in vitro no controle de Sclerotinia sclerotiorum, a
aplicação de extrato pirolenhoso mostrou-se mais eficiente na redução do
crescimento micelial do que no tratamento com óleo da planta “nim”. Os resultados
do extrato pirolenhoso mostraram-se muito próximos ao tratamento testemunha
positiva (MELLO et al., 2002). Outra pesquisa comparou produtos químicos
preservantes e extrato pirolenhoso obtido a partir de três espécies do cerrado
(Vochysia thyrsoidea, Qualea grandiflora e Pouteria ramiflora) na inibição de fungos
emboloradores (Aspergillus Níger e Trichoderma sp.) em meio de cultura BDA
(batata, dextrose e ágar), quando comparado com o pentaclorofenato de sódio
(PCP-Na), tribromofenol (TBF), tribromofenato de sódio (TBP-Na) e 3-iodo-2 propinil
butil carbamato (IPBC), comercialmente utilizados para esta finalidade. Os
resultados indicaram que os extratos pirolenhosos foram mais eficientes no controle
do fungo Aspergillus Níger em relação ao Trichoderma sp (DA COSTA et al., 2003).
2.5 Os produtos “naturais/orgânicos” e a indústria cosmética e de saneantes
Atualmente o cosmético e saneante são definidos como descrito a seguir
segundo ANVISA (1977).
Cosmético - O de uso externo, destinado à proteção ou ao embelezamento
das diferentes partes do corpo, tais como pós faciais, talcos, cremes de beleza,
creme para as mãos e similares, máscaras faciais, loções de beleza, soluções
leitosas, cremosas e adstringentes, loções para as mãos, bases de maquilagem e
óleos cosméticos, rouges, blushes, batons, lápis labiais, preparados anti-solares,
bronzeadores e simulatórios, rímeis, sombras, delineadores, tinturas capilares,
agentes clareadores de cabelos, fixadores, laquês, brilhantinas e similares, tônicos
capilares, depilatórios ou epilatórios, preparados para unhas e outros
35
Saneante Domissanitário - Substância ou preparação destinada à
higienização desinfecção ou desinfecção domiciliar, em ambientes coletivos ou
públicos, em lugares de uso comum e no tratamento da água, compreendendo:
a) Inseticida - destinado ao combate, à prevenção e ao controle dos insetos
em habitações, recintos e lugares de uso público e suas cercanias.
b) Raticida - destinado ao combate a ratos, camundongos e outros roedores,
em domicílios, embarcações, recintos e lugares de uso público, contendo
substâncias ativas, isoladas ou em associação, que não ofereçam risco à vida ou à
saúde do homem e dos animais úteis de sangue quente, quando aplicado em
conformidade com as recomendações contidas em sua apresentação.
c) Desinfetante - destinado a destruir, indiscriminada ou seletivamente,
microrganismos, quando aplicado em objetos inanimados ou ambientes.
d) Detergente - destinado a dissolver gorduras e à higiene de recipientes e
vasilhas e à aplicação de uso doméstico.
Existe um movimento mundial crescente no sentido de se incluir os atributos
de produto natural e/ou orgânico a uma gama cada vez maior de cosméticos. Esse
movimento se intensificou a partir de 2001, inspirado, entre outras coisas, pela
virada do milênio como marco de resgate da essência do ser humano. No Brasil,
ainda não existem dados específicos sobre esse mercado, mas algumas pesquisas
estatísticas de outros países conseguem dar uma dimensão do quanto ele é
significativo. Nos Estados Unidos, onde a indústria de cosméticos já suplantou a
marca de faturamento de US$ 20 bilhões por ano, cerca de 10% dessa cifra, ou seja,
US$ 2 bilhões, são provenientes das vendas de produtos com base natural
(CORAZZA, 2006).
Segundo a revista Cosmetics & Toiletries (2007), o mercado de produtos
cosméticos naturais e orgânicos é muito promissor. Ela apresenta dados do “The US
Market for Natural Personal Care Products” informando que esses produtos
deveriam alcançar a cifra de 5,8 bilhões de dólares no ano de 2008. Na Europa,
esse mercado já ultrapassou a marca de 1 bilhão de euros, sendo que, na
Alemanha, os produtos representam 4% do que é comercializado pela indústria
cosmética, estimando-se que atinja 10% em 2012. Na França, onde esse mercado
de cosméticos é mais dinâmico, em 2005, a venda dos cosméticos naturais cresceu
40%. Apesar da extensão do território brasileiro, o país ocupa ainda a 7ª. posição
36
em área destinada à produção orgânica. No entanto, acredita-se que,
acompanhando a tendência mundial, este mercado esteja em franco crescimento.
Com relação a saneantes, o segmento de produtos de limpeza, há 6 anos
consecutivos, vem registrando crescimento acima do PIB. Segundo dados da
Associação Brasileira de Produtos de Limpeza e Afins (ABIPLA), o crescimento do
faturamento do setor no Brasil, medido como percentual em relação ao ano anterior
foi de 6,5% em 2008, 7,0% em 2009, 11% em 2010 e 6,7% em 2011 (valor
estimado) atingindo um valor de R$ 14,4 bilhões (ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DAS
INDÚSTRIAS DE PRODUTOS DE LIMPEZA E AFINS - ABIPLA, 2012). Muitos
estudos vêm apontando também que lançamentos constantes, novas tecnologias,
ingredientes especiais, maior eficiência, embalagens inovadoras e melhor relação
custo-benefício estão fazendo toda a diferença na escolha do consumidor e no
faturamento das empresas (HOUSEHOLD & COSMÉTICOS, 2009).
Como já mencionado, os produtos orgânicos são uma opção interessante
para empresas que buscam atender às aspirações de saúde, ecologia e
responsabilidade social dos novos clientes. A seleção de um sistema conservante
adequado para compor a fórmula de um produto preservando sua integridade ainda
é um grande desafio. Mencione-se que as listas de ingredientes permitidos para
cosméticos orgânicos, por exemplo, são bem restritas até o momento. No caso de
saneantes novos conservantes estão sendo estudados visando a substituição do
formaldeído, cuja utilização para este fim está proibida. Dessa forma, a busca por
novos produtos se mostra bastante importante, o que motiva a realização de estudos
nessa direção a partir do extrato pirolenhoso.
2.6 Conservantes
Os conservantes são substâncias químicas, também conhecidas como
preservantes (tradução adaptada do inglês, preservative), usados em muitos
cosméticos e saneantes para aumentar a vida útil dos produtos, impedindo o
desenvolvimento de bactérias, fungos, leveduras e mofos que podem causar
doenças ou, simplesmente, prejudicar o bom aspecto do produto final. Não é função
do conservante compensar más práticas de fabricação. Mesmo que o fabricante
possa oferecer um produto isento de contaminações, o próprio consumidor,
37
inadvertidamente, pode adicionar uma certa carga microbiana durante o seu uso,
tornando-se necessário prover o produto de algum sistema eficiente de conservação.
Um produto livre de microorganismos que possam causar danos à saúde
humana constitui uma exigência crescente, principalmente por parte dos
consumidores e também dos órgãos responsáveis pela vigilância sanitária do País.
Um creme ou xampus contaminado pode causar um dano à saúde do consumidor
devido à população de microorganismos. O crescimento de microorganismos pode
ainda provocar mudanças de cor, odor e consistência, resultando no abandono do
produto pelo consumidor, reclamações de produto junto à empresa e nas
consequentes perdas financeiras e de imagem da marca ou da empresa como um
todo. Embora o seu uso seja controvertido, vários conservantes são aprovados e
aplicados em uma infinidade de produtos cosméticos. Para se selecionar o melhor
sistema conservante para cada fórmula, na sua melhor combinação de tipos de ativo
e na concentração ideal, é preciso dominar o conhecimento do trinômio produto-
conservantes-microorganismos. Como produto, é importante considerar sua
composição química, embalagem e o processo de fabricação (COSMÉTICOS E
PERFUMES, 2010; ANVISA, 2008a).
O primeiro aspecto a ser considerado na escolha do conservante é a
regulamentação do uso de substâncias de ação conservante permitidas, uma vez
que é de caráter eliminatório. No Brasil, atualmente as normas de BPFeC (Boas
Práticas de Fabricação e Controle) são estabelecidas pela Portaria do Ministério da
Saúde No 348 de 18 de agosto de 1997. A lista de conservantes permitidos para
produtos de higiene pessoal, cosméticos e perfumes consta da Resolução RDC
(Resolução de Diretoria Colegiada) No 162 de 11 de setembro de 2001 (ANVISA,
2008c). Já a do setor de Saneantes consta da RDC n°35 de 03 de Juno de
(ANVISA, 2008b).
Para se definir se a susceptibilidade do produto é maior à contaminação por
bactérias, fungos ou leveduras, avalia-se inicialmente a atividade do produto sob a
água que, quanto maior a quantidade, mais susceptível será a bactérias. Em geral,
cremes e loções exigem atividade tanto bacteriostática quanto fungistática, fazendo-
se necessário utilizar misturas de conservantes de amplo espectro de atividade. As
propriedades físico-químicas e organolépticas devem ser avaliadas para prever-se
possíveis incompatibilidades químicas com os componentes da fórmula (e até de
inativação do conservante), possíveis interferências na cor, no odor e também no
38
sabor, em caso de produtos para os lábios (COSMÉTICOS E PERFUMES, 2010;
ANVISA, 2008a).
Na prática, todos os produtos cosméticos estão sujeitos à contaminação com
microrganismos. O crescimento de fungos e bactérias nos produtos dependerá de
uma série de fatores químicos e físicos, como disponibilidade de água, composição
do produto que fornecerá nutrientes para os microrganismos e temperatura de
estocagem (ORTH, 1984). A baixa qualidade de um cosmético pode ocorrer
principalmente devido à contaminação microbiana resultante da falta de higiene na
fabricação e da baixa estabilidade dos constituintes da formulação. Durante a
fabricação é importante evitar que os microrganismos invadam o produto, o qual é
um substrato com substâncias excelentes para o seu crescimento, provocando
modificações visíveis ou não no produto final, tais como alteração de cor, odor,
viscosidade, características sensoriais, degradação dos componentes da
formulação, além de poder ocasionar reações tóxicas ao usuário, dependendo do
tipo do microrganismo presente, da via de administração utilizada e do estado de
saúde do usuário do produto (CARVALHO et al.,1989).
Uma formulação cosmética geralmente apresenta requisitos importantes para
o crescimento microbiano, como água, vários minerais e vitaminas, além de ser um
ambiente com oxigênio, pH e temperatura favoráveis (PARKER, 1984). Dessa forma,
ela se torna alvo de contaminação em sua produção, para o desenvolvimento de
microrganismos. Alguns microrganismos estão relacionados com prováveis fontes de
contaminação: água (Pseudomonas, Xantomonas, Flavobacterium e
Achromobacter), ar (esporos de fungos, Penicillium, Mucor, Aspergillus, Bacillus sp.,
leveduras e esporos bacterianos), matéria-prima (Clostridium sp., Salmonella,
coliformes, Actinomyces, bolores e leveduras) e pessoal operacional (coliformes,
Staphylococcus, Streptococcus e Corynebacterium) (CORBETT, 1992; CHORILLI et
al., 2007).
A eficácia do sistema conservante só pode ser garantida por meio de testes
de desafio ou Challenge Tests, como são conhecidos, que consistem na inoculação
do produto com microorganismos especificados pela CTFA (The Cosmetic, Toiletry
and Fragrance Association) e a constante monitorização da carga sobrevivente.
Idealmente, estes testes devem ser realizados durante os testes de estabilidade das
amostras na fábrica (COSMÉTICOS E PERFUMES, 2010; ANVISA, 2008a).
39
2.6.1 O conservante ideal
O conservante ideal não existe e é por isso que se usam combinações ou
“blends” de produtos. Um bom conservante deve apresentar atividade de amplo
espectro, ou seja, deve eliminar todos os tipos de microorganismos, que incluem
fungos, bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Em geral, substâncias químicas
ativas contra bactérias não são ativas contra fungos e os ativos contra fungos não
são efetivos contra bactérias. Por outro lado, os conservantes devem ser usados nas
mais baixas concentrações possíveis, de acordo com as exigências, reduzindo as
chances de irritação e outras preocupações de toxicidade. O conservante ideal para
uso em cosméticos deve ser solúvel em água e insolúvel em óleo, pois os
microorganismos crescem na fase aquosa e na interface água-óleo. Assim, para
serem mais funcionais, os conservantes devem ser acrescentados na fase aquosa.
A estabilidade é outra importante propriedade tanto para cosméticos quanto para
saneantes. O conservante deve ser estável a qualquer temperatura e condições de
pH que sejam utilizadas durante o processo de fabricação dos cosméticos, deve ser
incolor e inodoro, bem como não deve reagir com outros ingredientes para formar
cores ou odores, nem deve perder atividade na sua presença. O conservante ideal
deve funcionar durante a fabricação e ao longo da vida útil dos cosméticos e
saneantes, apresentar facilidade de análise usando métodos atuais bem conhecidos
e deve ser de fácil controle, bem como não inflamável e não tóxico (COSMÉTICOS
E PERFUMES, 2010; ANVISA, 2008a).
2.6.2.Regulamentações e aprovações1
Embora existam algumas críticas ao uso de conservantes em cosméticos,
alguns deles estão inclusos em uma lista aprovada por autoridades competentes,
tendo sido testados repetidamente para assegurar sua segurança em aplicações
cosméticas.
Os parabenos, por exemplo, não são perigosos, são autorizados para uso na
indústria cosmética e atualmente são os conservantes que oferecem maior
efetividade a mais baixas doses. A regulamentação da União Européia e do Brasil
1 Os comentários desse item foram essencialmente baseados em COSMÉTICOS E PERFUMES, 2010.
40
permite o uso de no máximo 0,4% de cada parabeno e um máximo de 0,8% de
parabeno total. Já o Japão permite no máximo 1% de parabeno total em todos os
produtos cosméticos.
Os fenoxi-etanóis são confirmados pela Comissão de Cosmetologia da
AFSSAPS (Agência Francesa de Segurança Sanitária dos Produtos de Saúde) como
seguros em suas aplicações cosméticas. Na França, o fenoxi-etanol gerou
controvérsia devido aos éteres de glicol, porém, todos os estudos disponíveis foram
examinados e o caso foi arquivado.
De acordo com a Agência Internacional dos Estados Unidos de Pesquisa em
Câncer (IARC), o formaldeído é classificado como CMR1 (Carcinogenic, Mutagenic,
Reproduction Toxic Substances Category 1°) e esteve por muitos anos sob a
fiscalização da vigilância epidemiológica, em particular, com o monitoramento de
trabalhadores expostos a seus fumos. As autoridades de saúde estão revisando os
resultados deste estudo para decidir se os regulamentos precisam ser modificados.
A Agência de Substâncias Químicas Européia solicitou informações adicionais para
confirmar a classificação da IARC (Agência Internacional para Pesquisa do Câncer).
No caso de cosméticos, o formaldeído é o conservante menos usado, sendo
encontrado, principalmente, em xampus sem enxágue. O triclosan é um antimicótico
usado para propósitos terapêuticos, sendo um dos poucos antimicóticos ativos em
pacientes imunodeprimidos. Também é usado como conservante em muitos
produtos de consumo.
O problema quanto ao triclosan é a resistência, ou seja, quanto mais a pessoa
se expõe a esta substância, mais alto é o risco de ela se tornar menos resistente ao
organismo, tornando-o terapeuticamente inativo. Assim, de acordo com o SCCP
(Comitê Científico da União Européia para Produtos de Consumo) é melhor limitar
seu uso para evitar o desenvolvimento de resistência. Todavia, segundo a EMEA
(Agência Européia para Avaliação de Produtos Medicinais) seu uso tópico não
induziria à resistência.
Ainda com referência aos EUA, atualmente o FDA (Food and Drug
Administration) proíbe ou impõe severas restrições ao uso de vários conservantes. O
hexaclorofeno é um deles. Devido a seu efeito neurotóxico e a sua habilidade para
penetrar na pele humana, o hexaclorofeno só pode ser utilizado quando um
conservante alternativo não se mostrar efetivo. O nível de uso não pode exceder
0,1% e não pode ser usado em cosméticos que sejam aplicados em mucosa. As
41
combinações de mercúrio também são proibidas ou restritas, porque são
prontamente absorvidas pela pele em aplicações tópicas e têm a tendência de
acumularem-se no corpo. Podem causar reações alérgicas, irritação da pele ou
manifestações neurotóxicas. Em cosméticos, seu uso é limitado na área dos olhos a
uma concentração que não exceda 65ppm de mercúrio como metal
(aproximadamente 0,01% acetato de fenilmercúrio), desde que nenhum outro
conservante efetivo e seguro esteja disponível para uso. O bitionol também é
proibido, devido à sensibilização de foto-contato. O halogenato salicilanilides
também é proibido ou tem seu uso restrito, devido à sensibilização de foto-contato.
Este ingrediente inclui dibromsalan, tribromsalan, metabromsalan e
tetraclorosalicilanilide.
A União Européia pré-aprova os conservantes, trabalhando em uma Lista
Positiva conhecida como Anexo VI da Lista de Produtos Cosméticos que Contém
Conservantes (COMISSÃO EUROPÉIA, 2011). Atualmente existem 56
conservantes permitidos. Muitos outros países seguem o regulamento geral da
União Européia e agora possuem “Listas Positivas” para conservantes permitidos. O
Japão mudou os regulamentos cosméticos e publicou uma Lista Positiva, a qual é
ainda mais restrita. O Canadá estabeleceu uma “Lista Quente” de ingredientes
cosméticos que ou são proibidos ou são restritos. A adição ou mudanças estão sob
o controle da Divisão de Cosméticos da Agência de Segurança de Produtos de
Consumo, que faz parte do Ministério da Saúde do Canadá.
No Brasil, 60 conservantes estão aprovados para uso (Anexos A e B), sendo
que as proibições e restrições estão a cargo do Ministério da Saúde. No caso de
saneantes, o conservante formaldeído comumente utilizado nos produtos foi banido
das formulações devido à sua reconhecida carcinogenicidade e atual classificação
toxicolológica pela IARC. Uma lista com as substâncias de ação conservante
permitidas e suas respectivas concentrações foi fornecida na mesma resolução RDC
n°35. Uma lista com os conservantes aprovados pela ANVISA é colocada nos
Anexos A e B.
2.7 Exigências e desafios dos conservantes naturais para cosméticos e saneantes
A partir dos anos 90, houve uma conscientização global de que o novo século
seria o da preservação dos recursos ambientais e da qualidade de vida, com o
42
consequente aumento, em escala geométrica, da complexidade dos produtos, dos
mercados e da logística como um todo. O grande desafio das empresas passou a
ser, portanto, viabilizar matérias-primas e processos, que minimizem os impactos
ambientais, utilizem fontes naturais renováveis e possam ter, como vantagem
competitiva, funcionalidades que melhorem a qualidade de vida do ser humano
(PICCOLI, 2008; ROSSI, 2009).
As exigências do mercado consumidor induzem a indústria cosmética a
formular produtos seguros cada vez menos agressivos e naturais. Durante a
formulação para tais apelos, a dificuldade maior encontra-se em conservar o produto
final (PACKER; LUZ, 2007).
Tendo em vista a procura dos consumidores por produtos cada vez mais
seguros, a tendência mundial é a da minimização da concentração e do número de
tipos de ativos, permanecendo no mercado os que contam com melhores e mais
completos estudos toxicológicos, bem como com dados epidemiológicos
satisfatórios. Isto obriga o formulador a aprofundar seus conhecimentos em química,
para combinar sinergicamente um portifólio cada vez menor de ativos e reduzir a
necessidade do uso de conservantes. Repensa-se, assim, o método tradicional de
formulação em que os conservantes eram encarados como simples coadjuvantes
para se criar um conceito mais avançado de produtos auto-conservantes ou livres de
conservantes em que a conservação é inerente à própria fórmula. Esse conceito
alinha-se às metas de redução de custos de desenvolvimento e otimização de
fórmulas, uma prioridade que já se incorporou em todas as organizações (PINTO et
al., 2002).
43
3 MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Material
Foram utilizados dois tipos de extrato pirolenhoso:
a) Obtido em escala industrial junto a um produtor de carvão vegetal;
b) Obtido em escala de laboratório.
3.1.1 Extrato pirolenhoso obtido em escala industrial
Foi utilizado extrato pirolenhoso obtido da carbonização da madeira de
eucalipto, coletado entre as temperaturas de 80 e 120° C, em fornos de alvenaria,
numa carvoaria localizada na região de Atibaia, São Paulo2. O produto havia sido
armazenado durante 3 anos visando a separação de uma camada de residual
superior de aspecto oleoso (óleo leve) e uma camada inferior decantada (alcatrão).
A parte intermediária era considerada como o extrato pirolenhoso propriamente dito
(ASSOCIAÇÃO DOS PRODUTORES DE AGRICULTURA NATURAL - APAN, 2003).
3.1.2 Extrato pirolenhoso obtido em escala de laboratório
Foi utilizado extrato pirolenhoso obtido da carbonização laboratorial de
cavacos de madeira de Eucalyptus urograndis, clone híbrido interespecífico, que
concilia as características de crescimento rápido do E. grandis, espécie muito
difundida para a produção de carvão vegetal nos estados de Minas Gerais e São
Paulo, com as maiores densidade e variedade fenotípica do E. urophylla, espécie
que assumiu posição estratégica no melhoramento genético em áreas com vocação
para a silvicultura clonal (ASSIS, 2001; COUTO et al., 2008).
O produto foi obtido mediante a condensação dos gases da carbonização
como descrito no ítem 3.2.1.2.
2 Carvoaria São Manoel.
44
3.2 Método3
3.2.1 Obtenção dos extratos pirolenhosos
3.2.1.1 Extrato pirolenhoso de laboratório
Para obtenção do extrato pirolenhoso foi realizada carboninazação de
cavacos de madeira à temperatura de 400° C em forno-mulfa. Considerou-se o início
da carbonização a 100° C, equivalente àquela sob a qual o material havia sido
submetido à secagem em estufa, até peso constante. Para a condução do processo,
considerou-se um tempo total de 2,5 horas de tratamento. Foram conduzidas três
repetições de carbonizações. Após atingida a temperatura final, o aquecimento foi
interrompido e o material deixado em resfriamento natural no interior do forno-mufla
até 35 a 45° C. O forno-mufla aquecido era dotado de resistência elétrica e
indicação e controle analógicos de temperatura. Um recipiente metálico (volume
nominal de 500 cm3) foi colocado no interior da mesma, contendo amostras de
madeira seca. A quantidade de madeira utilizada em cada pirólise foi fixada em
função da máxima ocupação do volume do recipiente metálico. O forno-mufla estava
conjugado a um sistema de coleta e separação dos gases condensáveis e não-
condensáveis (figura 2 e figura 3).
3.2.1.2 Extrato pirolenhoso industrial
O extrato constou do líquido obtido pela condensação da fumaça da
carbonização da madeira, na fase em que a mesma era expelida nos limites de 80 e
120°C medida a cerca de 10cm abaixo da boca de saída da chaminé, em fornos de
alvernaria, na Carvoaria São Manoel, localizada na região de Atibaia, São Paulo.
Essa era a prática da empesa, visando a obtenção de extrato pirolenhoso para fins
de comercialização. A madeira utilizada foi Eucalyptus sp (provavelmente E.saligna)
com idade entre 5 e 8 anos, umidade entre 20 e 25% cortada a 1,10m de
comprimento e diâmetro médio de 20cm. O forno possuia volume para carga de 5
3 Os procedimentos foram conduzidos no LQCE – Laboratórios Integrados de Química, Celulose e Energia do
Departamento de Ciências Florestais / ESALQ / USP.
45
metros cúbicos aparentes de madeira. A figura 4 apresenta referências do local da
obtenção do extrato pirolenhoso industrial.
Figura 2 - Processo de pirólise e coleta dos gases. As setas indicam o sentido da entrada e saída da
água do condensador, (A) Balão de coleta de gases condensáveis, (B) Balão de coleta dos
gases não-condensáveis
46
Figura 3 - Equipamento utilizado na pirólise laboratorial
Figura 4 - Processo industrial de pirólise e coleta dos gases
47
3.2.2 Balanço de massa e cálculo de rendimentos em carvão e gases obtidos em
escala de laboratório
Após resfriamento do forno-mufla, o carvão vegetal e o gás condensado
(extrato pirolenhoso) foram pesados em balança semi-analítica, o que possibilitou o
cálculo dos seus rendimentos gravimétricos.
O rendimento gravimétrico em carvão expressa a relação entre o peso do
carvão e o peso da madeira, ambos na base seca, segundo a equação 1.
(1)100PMS
PCS RGC
onde RGC corresponde ao rendimento gravimétrico em carvão (%), PCS ao peso do
carvão seco (g) e PMS a peso da madeira seca (g).
O rendimento gravimétrico em gases condensáveis expressa a relação entre
o peso do liquido condensado e o peso da madeira, na base seca, segundo a
equação 2.
)2(100PMS
PGC RLP
onde RLP corresponde ao rendimento gravimétrico em extrato pirolenhoso (%),PGC
ao peso do gás condensado (g) e PMS ao peso da madeira seca (g).
O rendimento gravimétrico em gases não-condensáveis foi obtido pela
subtração dos rendimentos em peso do carvão e do gás condensado, de um total de
100%, segundo a equação 3.
(3)RLPRGC100 RGNC
48
onde RGNC corresponde ao rendimento gravimétrico em gases não-condensáveis
(%), RGC ao rendimento gravimétrico em carvão (%) e RGGC ao rendimento
gravimétrico em gases condensáveis (%).
Os dados de rendimentos gravimétricos em carvão e gases foram submetidos
a análise estatística com o intuito de verificar se havia variações no sistema.
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do
pressuposto de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação
do teste de Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS,
Statistical Analysis System, versão 9.0.
3.2.3 Determinação do pH do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e de
laboratório
O pH é o logaritmo negativo da concentração o molar de íons de hidrogênio.
Representa convencionalmente a acidez ou a alcalinidade de uma solução. A escala
de pH vai de 1 (ácido) a 14 (alcalino), sendo que o valor 7 é considerado pH neutro.
O pH é determinado pela diferença de potencial entre dois eletrodos, o de
referência e o de medida, imersos na amostra a ser analisada, sendo dependente da
atividade dos íons de hidrogênio na solução. Nesse experimento foi utilizado um
phgâmetro da marca Tecnal.
Os dados de pH foram submetidos a uma análise de variância (ANOVA) com
o intuito de verificar se havia variações no sistema.
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do
pressuposto de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação
do teste de Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS,
Statistical Analysis System, versão 9.0.
3.2.4 Análise organolética do extrato pirolenhoso
Foram realizadas avaliações no extrato pirolenhoso, compreendendo sua
estabilidade ao armazenamento em condições que pudessem ser analisadas
possíveis mudanças em suas características organolépticas ao longo de tempo.
Para tanto, as amostras foram acondicionadas em frascos de vidro, transparentes e
49
opacos (âmbar), devidamente fechados para garantia de boa vedação contra saída
de gases ou vapor. Sob tais condições, as amostras foram submetidas a duas
condições de armazenagem laboratorial (temperatura ambiente): (a) sem exposição
à luz; (b) com exposição à luz ambiente. O armazenamento foi conduzido durante 4
semanas, com a avaliação de cor, odor e formação de fases por decantação. Os
testes foram realizados tendo como referências as normas da ANVISA (2008a).
Deve-se ressaltar, no entanto, que as avaliações não foram conduzidas na sua
forma completa, no sentido de que pretendeu-se apenas obter um carácter
preliminar orientativo do assunto com os resultados obtidos. Pesou para tal decisão,
o fato da composição química dos extratos apresentar-se mais relevante em termos
de qualificação dos produtos, sobretudo na questão da presença de produtos
tóxicos.
3.2.5 Análises cromatográficas do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e
de laboratório 4
Todos os produtos obtidos como extrato pirolenhoso sofreram caracterização
de seus compostos por meio de análises em cromatógrafo gasoso acoplado a
espectrômetro de massa (GC/MS) usando um TRACE GC Ultra, marca Thermo
equipado com um DSQII. O método usou como referência inicial a metodologia
proposta por Loo et al. (2007).
Foi utilizado coluna capilar de silica (30 m x 0,30 mm i.d. x 0,25 µm). A
temperatura inicial da coluna foi programada de 40 °C (3min) com um aumento de
15 °C/min até 270 °C (6min). Helium foi usado como o gás de arraste. A temperatura
de injeção e do detector foram de 250 °C. A injeção de volume programada foi de 0
µl no modo split. Os dados foram processados utilizando o software Xcalibur.
Os extratos pirolenhosos produzidos foram comparados, com o intuito de se
identificar possíveis discrepâncias qualitativas entre os compostos presentes.
As amostras dos extratos pirolenhosos da escala de laboratório (PLO) e
escala industrial (PIO) foram comparadas, considerando a somatória dos picos dos
compostos majoritários identificados no extrato da fração bioativa proveniente da
4 Os procedimentos foram conduzidos no LQCE – Laboratórios Integrados de Química, Celulose e Energia do
Departamento de Ciências Florestais / ESALQ / USP.
50
bioautografia (item 4.8). A somatória dos percentuais destes picos observados para
os extratos PLO e PIO foram comparados através da análise de variância (ANOVA).
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do pressuposto
de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação do teste de
Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS, Statistical
Analysis System, versão 9.0.
3.2.6 Processo de destilação para determinação do teor de alcatrão
Em seguida à análise cromatográfica, foi realizado o processo de destilação
para determinação do teor de alcatrão. O experimento consistiu-se na avaliação de
um processo de destilação simples, onde um balão de destilação de 250 ml foi
conectado a um conjunto condensador–coletor do destilado. O balão foi colocado
sobre uma manta de aquecimento elétrico e um termômetro foi usado para controle
da temperatura (figura 5).
Figura 5 - Processo de Destilação Simples. As setas indicam o sentido da entrada e saída da água do
condensador, (A) e (B) Balão de entrada do extrato pirolenhoso e de coleta do destilado,
respectivamente; (C) Termômetro; (D) Condensador; (E) Manta de aquecimento
51
Todos os experimentos foram realizados colocando-se 180g de extrato
pirolenhoso no balão de destilação. O aquecimento se deu até a temperatura de
100°C com permanência de, em média, 1,5 horas, tempo que se mostrou suficiente
para a finalização da fase líquida no balão. Todos os experimentos foram realizados
à pressão atmosférica. A temperatura da água do condensador foi de 25ºC.
3.2.7 Balanço de massa e cálculo de rendimentos em alcatrão e extrato pirolenhoso
destilado obtido em escala industrial e laboratorial
Concluída a destilação, o alcatrão e o extrato pirolenhoso destilado foram
pesados em balança semi-analítica, o que possibilitou o cálculo dos seus
rendimentos gravimétricos.
O rendimento gravimétrico em alcatrão expressa a relação entre o peso do
alcatrão e o peso do extrato pirolenhoso, segundo a equação 4.
)4(100PLP
PA RGA
onde RGA corresponde ao rendimento gravimétrico em alcatrão (%), PLP ao peso
do extrato pirolenhoso (g) e PA ao peso do alcatrão (g).
O rendimento gravimétrico em extrato pirolenhoso destilado expressa a
diferença percentual do teor de alcatrão em relação ao extrato, segundo a equação
5.
(5)RGA100 RGLD
onde RGLD corresponde ao rendimento gravimétrico do extrato pirolenhoso
destilado (%).
Os dados de rendimentos gravimétricos em alcatrão e extrato destilado foram
submetidos a uma análise de variância (ANOVA) com o intuito de verificar se havia
variações no sistema. A realização da análise de variância foi condicionada à
52
adequação do pressuposto de normalidade da distribuição, que foi verificada
mediante a aplicação do teste de Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao
programa estatístico SAS, Statistical Analysis System, versão 9.0.
3.2.8 Avaliação do potencial antifúngico dos extratos pirolenhosos5
Duas amostras representando extratos pirolenhosos de diferentes origens
foram avaliados quanto à atividade antifúngica. Uma amostra de extrato proveniente
da escala industrial (PIO) e outra laboratorial (PLO) foram avaliados. Uma solução
de formol, um agente reconhecidamente antifúngico, com concentração de 37%
(Merck art.1040031001) foi utilizada para comparação com os extratos avaliados.
A avaliação da capacidade antifúngica foi realizada sobre o fungo Aspergillus
niger (ATCC 16404), utilizado normalmente em avaliações de cosméticos e
saneantes. O inóculo do fungo foi preparado a partir de colônias crescento em meio
Batata Dextrose Agár de 7 a 21 dias a 28oC. Para isto, uma alça de Drigalski foi
utilizada para raspar a superfície do meio onde as colônias estava se desenvolvendo
e imergida em 50 mL de solução aquosa estéril e 500 µL de dispersante Tween 20.
Este procedimento foi realizado 3 vezes e, então a concentração de esporos na
solução foi mensurada utilizando uma câmara de Neubauer, visando ajustar a
contagem de esporos para 106.
A técnica utilizada para avaliação do potencial antifúngico foi a diluição em
meio (Vilela et al., 2009), utilizando-se diferentes concentrações dos extratos
visando se obter a curva de inibição com a respectiva Concentração Inibitória
Mínima (CIM). As doses utilizadas foram de 25, 50, 100, 150 e 200 µL para o PIO,
de 20, 25, 30, 35 e 40 para o PLO e de 2,5, 5, 10, 15 e 17 para a solução de formol.
Cada uma das doses foi adicionada a 2 mL de meio de cultura Batata Dextrose Agár
(BDA, marca Himedia) fundente (45 -50oC) e contidos em uma placa de petri de 2
cm de diâmetro. O meio e o extrato foram homogeneizados e deixados resfriar sob
condições assépticas. Como tratamentos testemunha foram preparadas placas com
meio de cultura com os mesmos volumes utilizados de extratos e formol, entretanto
utilizando somente água esterilizada.
5 Os procedimentos foram conduzidos no Laboratório de Micotoxinas do Departamento de Agroindústria,
Alimentos e Nutrição (LAN) / ESALQ / USP.
53
Após o resfriamento o fungo foi inoculado no meio de cultura contido nas
placas utilizando-se um estilete de metal esterilizado, que foi imergido na solução de
inóculo e que perfurou o meio de cultura na posição central da placa. Três placas
para cada tratamento foram assim preparadas. As placas foram identificadas,
vedadas com filme plástico e armazenadas em câmara com controle de temperatura
a 28 ± 0,3 °C, na ausência de luz, por um período de 7 dias, após o qual foi
realizada a mensuração do crescimento radial da colônia desenvolvida a partir do
ponto de inoculação. O crescimento radial foi obtido através da média de duas
medidas perpendiculares do diâmetro da colônia. Utilizou-se para estas medidas um
paquímetro.
A percentagem de inibição foi calculada utilizando-se a equação 6.
)6(100
Controle
Tratamento - Controle PI
Como os tratamentos foram realizados em triplicatas a percentagem de
inibição representativa do tratamento constituiu-se de suas médias.
3.2.9 Identificação e análise da composição quimica de frações antifungicas do
extrato pirolenhoso
Como a amostra do extrato pirolenhoso laboratorial apresentou uma
Concentração Inibitória Mínima mais reduzida, ou seja, um potencial antifúngico
maior, esse extrato foi utilizado para o fracionamento dirigido utilizando a técnica da
bioautografia (Meepagala et al., 2002), visando tentar identificar os compostos
envolvidos nesta bioatividade6.
Nesta técnica 50 µL do extrato foram aplicados sobre uma placa de
cromatografia em camada delgada de 10 x 20 cm (Merck art. 10005553), que foi
seco com ventilação forçada e a placa colocada para desenvolver em uma cuba
contendo 50 mL da mistura de solvente tolueno e acetato de etila na proporção de
9,5:0,5. Duas placas foram assim preparadas. Uma placa foi então imersa
6 Os procedimentos foram conduzidos no Laboratório de Micotoxinas do Departamento de Agroindústria,
Alimentos e Nutrição (LAN) / ESALQ / USP.
54
rapidamente e uma solução de ácido sulfúrico 10% e metanol, seca e colocada em
estufa a 120oC, por 5 min. e então visualizada em cabine de visualização de placas
de cromatografia, sob luz ultravioleta de comprimento de 365 nm. Esse
procedimento nessa placa teve como objetivo, observar a separação de
componentes do extrato pirolenhoso proporcionada pela cromatografia. Uma
segunda placa preparada do mesmo modo, foi seca intensamente com auxílio de
ventilação forçada com o objetivo de remover o residual dos solventes de
desenvolvimento. Após isso, a placa foi então submersa por 5 segundos em caldo
de extrato de levedura e sacarose (YES) contendo esporos do fungo Asperigillus
niger.
O caldo YES com esporos foi obtido de modo semelhante ao inóculo
preparado para a avaliação do potencial antifúngico, entretanto substituindo-se a
água pelo caldo YES.
A placa após a submersão foi deixada escoar o excesso de caldo e colocada
sobre um suporte em um recipiente hermético contendo 1 L de solução de cloreto de
sódio a 14%. A solução de cloreto de cálcio dentro do recipiente teve o objetivo de
manter a umidade relativa da atmosfera interna do recipiente em equilíbrio a 90%, e
assim proporcionar uma condição adequada ao desenvolvimento fúngico. O
recipiente contendo a placa e a solução salina foi colocado em uma câmara com
controle de temperatura a 28°C (± 2°C) sem fotoperíodo, por sete dias. A placa foi
observada, quanto ao crescimento fúngico, no terceiro e no sétimo dias.
Com base na visualização da placa foi possível identificar a região onde o
crescimento não ocorreu, denotando a presença de substância(s) com atividade
antifúngica. A partir da distância desta região ao ponto de aplicação foi possível por
analogia, identificar na placa, que foi revelada com ácido sulfúrico, a mesma região
e, assim, observar a coloração identificativa da presença de alguma substância.
Com a identificação da região do desenvolvimento cromatográfico com
atividade antifúngica, 4 outras placas cromatográficas foram preparadas com o
extrato pirolenhoso laboratorial e desenvolvidas na cuba, do mesmo modo como o
descrito anteriormente, entretanto estas placas não foram imersas após o
desenvolvimento cromatográfico nem no ácido nem no caldo YES.
Após o desenvolvimento, cada placa foi bem seca com auxílio de ventilação e
a sílica, referente a cada zona nas seis aplicações, foi raspada e reunida em um
mesmo tubo teste para a extração dos compostos adsorvidos. O objetivo desta nova
55
placa foi de obter maior quantidade de compostos presentes em cada zona com
potencial antifúngico.
No tubo contendo a sílica da zona de inibição fez-se a extração dos
compostos. Para isso, 2 mL de metanol foi adicionado, agitou-se por 2 min. e
separou-se o sobrenadante em centrífuga (15 min. à temperatura de 27ºC e rotação
de 3000 rpm). O extrato obtido foi considerado como uma fração do extrato
pirolenhoso representando os compostos presentes na zona de inibição fúngica. O
extrato foi filtrado em filtro de seringa de poros de 0,22μm e, uma alíquota de 1600
μL foi coletada, transferida para outro tubo teste, seca a 50°C e redissolvida para
200 μL de metanol grau cromatográfico. O mesmo procedimento descrito foi repetido
com o solvente utilizado, para redissolução do material, o acetato de etila grau
cromatográfico.
O extrato da zona de inibição obtido com metanol e acetato de etila foi
analisado quanto a sua composição por cromatografia gasosa acoplada a
espectrometro de massas visando a identificação dos compostos presentes7.
7 Os procedimentos foram conduzidos no LQCE – Laboratórios Integrados de Química, Celulose e Energia do
Departamento de Ciências Florestais / ESALQ / USP.
56
57
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 Resultados do balanço de massa e cálculo de rendimentos em carvão e co-
produtos obtidos em escala de laboratório (PLO).
Os resultados do balanço de massa são apresentados na tabela 1.
Tabela 1 - Balanço de massa das carbonizações
Carbonizações RGC (%) RGNC (%) RGGC (%)
PLO1a PLO1b PLO1c
45,1 45,9 47,4
33,8 30,8 36,3
21,1 23,3 16,4
Média Desvio padrão
C.V.
46,1 1,2 2,5
33,6 2,8 8,2
20,3 3,6
17,5
(PLO) amostra laboratorial, (RGC) rendimento gravimétrico em carvão, (RGNC) rendimento gravimétrico em gases não-condensáveis, (RGGC) rendimento gravimétrico em gases condensáveis e C.V. coeficiente de variação.
A análise de variância foi realizada, levando-se em consideração o
pressuposto de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação
do teste de Shapiro-Wilk. Com base nessa análise, verificou-se que para os
rendimentos de carvão e gases condensáveis não houve variações no sistema
(Apêndice A).
4.2 Determinação do pH do extrato pirolenhoso obtido em escala industrial e de
laboratório
Os resultados de pH são apresentados na tabela 2.
58
Tabela 2 - Resultados obtidos de pH
Amostra pH
PLO 1a 1b 1c
2,10 2,29 2,24
PIO 2a 2b 2c
2,70 2,67 2,66
(PIO) extrato pirolenoso industrial; (PLO) extrato pirolenhoso laboratorial.
Análises comparativas dos dados foram realizadas por meio de ANOVA (α =
0,05) seguido do teste de Tukey (Apêndice B). Observou-se que houve diferença
significativa entre os pHs com relação ao extrato pirolenhoso obtido na escala de
laboratório e na escala industrial. Ambos, PLO e PIO, numericamente apresentavam
pH ácidos de 2,21 e 2,68 em média, respectivamente, Segundo a literatura
(ADITIVOS E INGREDIENTES, 2012), um dos métodos de inibição de atividade
fúngica é baseado em redução de pH. Assim, essa diferença de pH pode estar
influenciando os resultados comparativos da atividade antifúngica entre PLO e PIO.
4.3 Análise organolética do extrato pirolenhoso
Foram observadas alterações de cor nos dois extratos pirolenhosos
(laboratorial e industrial) acondicionados em frasco de vidro transparente, nas
condições de armazenagem (temperatura ambiente e exposição à luz). Essas
alterações não foram percebidas nos extratos acondicionados em frasco âmbar.
Não foram observadas alterações nos aromas dos extratos nas duas
condições e nas duas embalagens em questão.
Com relação à separação de fases, verificou-se que o extrato laboratorial
sofreu alteração, formando duas fases: uma camada superior de aspecto aquoso e
uma camada inferior decantada (alcatrão).
Nenhuma interação com as embalagens de vidro foram percebidas para os
dois extratos pirolenhosos.
59
4.4 Resultados do balanço de massa e cálculo de rendimentos em alcatrão e extrato
pirolenhoso destilado obtido em escala industrial (PIO) e laboratorial (PLO)
Os resultados do balanço de massa são apresentados na tabela 3.
Tabela 3 - Balanço de massa das destilações
Destilação RGA (%) RGLPD (%)
PLO1a PLO1b PLO1c
14,09 13,54 15,38
85,91 86,46 84,62
PIO1a PIO1b PIO1c
0,58 0,21 0,86
99,42 99,79 99,14
(PIO) extrato pirolenhoso industrial; (PLO) amostra laboratorial, (RGA) rendimento gravimétrico em alcatrão e (RGLD) rendimento gravimétrico do extrato pirolenhoso destilado.
Análises comparativas dos dados foram realizadas por meio de ANOVA (α =
0,05) seguido do teste de Tukey. Observou-se que houve diferença significativa
entre os processos industrial e laboratorial com relação a rendimentos do alcatrão ou
do destilado, com maior teor de alcatrão para o extrato laboratorial (Apêndice C).
4.5 Resultados das análises cromatográficas do extrato pirolenhoso
Em termos gerais, os componentes químicos identificados nos
cromatogramas estão muito próximos aos que têm sido relatados na literatura. As
análises demonstraram a presença de uma gama de compostos oxigenados, tais
como: ácidos carboxílicos, ésteres, éteres e cetonas. Além disso, foram detectados o
fenol, guaicol e derivados fenólicos. De forma, geral, a identificação dos constituintes
químicos revelou substâncias de estruturas complexas derivadas da degradação
química dos constituintes ligno-celulósicos da madeira, também concordantes com
referências da literatura especializada (MARTINS et al., 2007; ESTEVES et al.,
2008; RATANAPISIT et al., 2009). Segundo Ratanapisit et al. (2009), a presença dos
componentes é função da temperatura em que se inicia a degradação da madeira,
em geral, seguindo uma sequência que inclui as hemiceluloses, celulose e
posteriormente a lignina.
60
A tabela 4 mostra a maioria dos componentes químicos encontrados no
extrato pirolenhoso obtido na pirólise em escala de laboratório (PLO) e industrial
(PIO).
Deve-se ressaltar que foram obtidos cromatogramas de todos os três
pirolenhosos obtidos em escala de laboratório. A análise desses cromatogramas
permitiu observar a ausência de diferenças nos picos dos compostos, considerando
os 36 componentes mais representativos detectados. A figura 6 é um exemplo de
cromatograma do extrato pirolenhoso à 400°C e em 2,5h, e a figura 7 é de um
cromatograma do extrato pirolenhoso industrial.
Nas avaliações, os resultados obtidos se mostram compatíveis com as
análises realizadas por Ratanapisit et al. (2009), onde os ácidos e fenóis são
dominantes, comparados com outros compostos químicos presentes no extrato
pirolenhoso.
Os resultados encontrados na comparação entre os dois tipos de extratos
demonstram comportamento diferenciado para o obtido em escala industrial,
comparado aos obtidos em laboratório. Os compostos n-hexano, butirolactone, 3-
metilfenol (m-Cresol) e 3,4-dimetilfenol, presentes no extrato industrial, não foram
encontrados no extrato obtido em laboratório. O oposto ocorreu para os compostos
butanediol; 5,9-dodecadieno, 6-10 dimetil; 2-metil, 2-ciclopentanona; ciclopentanona;
ciclopropil carbinol; 2-metoxi-3-metilfenol; 1,2-benzenediol (pirocatecol); vanillin
lactoside; D-Allose; 4-propil-1,1-difenil; 4-hidroxi, 3,5 dimetoxi benzaldeído; 1,4-
hidroxi 3,5-dimetoxifenil etanona e 4-hidroxi 3,5-dimetoxi benzoidrazina.
61
Figura 6 - Cromatograma produzido nas carbonizações do experimento obtido a 400°C e 2,5h na
escala laboratorial. Os números sobre os picos correspondem aos componentes químicos
listados na Tabela 4
Figura 7 - Cromatograma produzido nas carbonizações do experimento obtido na escala industrial.
Os números sobre os picos correspondem aos componentes químicos listados na Tabela 4
62
Tabela 4 - Compostos químicos presentes nos extrato pirolenhosos
(PIO) amostra da escala industrial, (PLO) amostra laboratorial, (nd) não detectado.
Constatou-se que a amostra de procedência industrial apresentava menor
número de componentes, que geralmente estão vinculados ao alcatrão. Desse
modo, considerou-se ser menor seu risco de toxicidade, comparado ao obtido em
escala laboratorial. Deve-se destacar, no entanto, que o extrato com maior presença
de componentes, geralmente vinculados ao alcatrão, pode apresentar maior
potencial antifúngico, o que seria o caso do extrato pirolenhoso laboratorial.
Componente Químico PLO1a PLO1b PLO1c PIO1a PIO1b PIO1c
Metanol 1 1 1 1 1 1
Acetato de metila 2 2 2 2 2 2
n-Hexano nd nd nd 3 3 3
Ácido acético 4 4 4 4 4 4
1-Hidroxi, 2-propanona (acetol) 5 5 5 5 5 5
Ácido propanóico 6 6 6 6 6 6
1-hidroxi 2-butanona 7 7 7 7 7 7
Butanediol 8 8 8 nd nd nd
3-Furaldeido 9 9 9 9 9 9
5,9-Dodecadien 2-1, 6-10 dimetil 10 10 10 nd nd nd
2-metil, 2-ciclopentanona 11 11 11 nd nd nd
1-2-furanil etanona 12 12 12 12 12 12
Ciclopentanona 13 13 13 nd nd nd
Butirolactone nd nd nd 14 14 14
5-metil, 2-furaldeido (5 metil 2 furancarboxaldeido) 15 15 15 15 15 15
Fenol (acido carbolico) 16 16 16 16 16 16
Corilon (2-hidroxi 3-metil 2-ciclopentan-1-ona) 17 17 17 17 17 17
3-metilfenol (m-Cresol) nd nd nd 18 18 18
4-metilfenol (p-Cresol) 19 19 19 19 19 19
4-metoxifenol(mequinol) 20 20 20 20 20 20
Ciclopropil carbinol 21 21 21 nd nd nd
Maltol 22 22 22 22 22 22
3,4-dimetilfenol nd nd nd 23 23 23
2-metoxi-3-metilfenol 24 24 24 nd nd nd
2-metoxi 4-metilfenol 25 25 25 25 25 25
1,2-benzenediol (pirocatecol) 26 26 26 nd nd nd
4-etil 2-metoxifenol (p-etilguaiacol) 27 27 27 27 27 27
2,6-dimetoxifenol 28 28 28 28 28 28
Vanilin lactoside 29 29 29 nd nd nd
1,2,4,-trimetoxibenzeno 30 30 30 30 30 30
5-tert-butilpirogalol 31 31 31 31 31 31
D-Allose 32 32 32 nd nd nd
4-propil-1,1-difenil 33 33 33 nd nd nd
4-hidroxi, 3,5 dimetoxi benzaldeído 34 34 34 nd nd nd
1,4-hidroxi 3,5-dimetoxifenil etanona 35 35 35 nd nd nd
4-hidroxi 3,5-dimetoxi benzoidrazina 36 36 36 nd nd nd
Grupo Experimentais
63
Na tabela 5, pode-se ter uma noção do percentual de participação dos
compostos.
Tabela 5 - Compostos químicos presentes nos extratos pirolenhosos obtidos da escala laboratorial
(PLO) e da escala industrial (PIO) com seus percentuais de participação
(PIO) amostra da escala industrial, (PLO) amostra laboratorial,; (nd) não detectado; (d)
detectável, mas com percentuais muito baixos, apenas traços.
N° Componentes Químicos PLO1a PLO1b PLO1c PIO1a PIO1b PIO1c
%Area %Area %Area %Area %Area %Area 1 Metanol 4,68 2,73 0,52 6,80 7,03 6,79 2 Acetato de metila d d 0,15 1,56 1,42 1,30 3 n-Hexano nd nd nd 1,00 0,64 0,49 4 Ácido acético 27,68 32,78 33,31 55,42 53,55 54,32 5 1-Hidroxi, 2-propanona (acetol) d d d 1,76 2,25 2,08 6 Ácido propanóico 1,03 1,24 1,29 0,64 0,90 0,81 7 1-hidroxi 2-butanona 0,83 0,91 1,10 1,50 1,22 1,20 8 Butanediol 0,93 1,41 0,41 nd nd nd
9 3-Furaldeido 3,94 6,89 9,85 3,19 3,28 3,05 10 5,9-Dodecadien 2-1, 6-10 dimetil 1,07 1,48 1,11 nd nd nd 11 2-metil, 2-ciclopentanona d d d nd nd nd 12 1-2-furanil etanona d d d d 0,81 0,69 13 Ciclopentanona 2,06 1,66 1,72 nd nd nd 14 Butirolactone nd nd nd 1,40 1,21 1,42 15 5-metil, 2-furaldeido (5 metil 2 furancarboxaldeido) 1,66 2,45 2,61 1,19 1,37 0,68 16 Fenol (acido carbolico) 0,82 1,37 1,23 1,72 1,38 2,08 17 Corilon(2-hidroxi 3-metil 2-ciclopentan-1-ona) 3,10 2,90 2,93 2,16 2,03 2,07 18 3-metilfenol (m-Cresol) nd nd nd 0,84 0,51 0,93 19 4-metilfenol (p-Cresol) 1,16 1,37 1,21 0,90 2,05 1,50 20 4-metoxifenol(mequinol) 6,31 6,22 5,98 2,89 2,89 2,87 21 Ciclopropil carbinol 2,71 2,04 1,93 nd nd nd 22 Maltol 1,85 1,39 1,41 1,16 1,09 1,29 23 3,4-dimetilfenol nd nd nd 0,62 0,99 0,88 24 2-metoxi-3-metilfenol 0,56 0,59 0,51 nd nd nd 25 2-metoxi 4-metifenol 1,75 1,82 1,72 1,68 1,79 1,82 26 1,2-benzenediol (pirocatecol) 4,69 3,71 3,52 nd nd nd 27 4-etil 2-metoxifenol (p-etilguaiacol) 1,89 1,96 2,73 0,89 0,99 0,97 28 2,6-dimetoxi-fenol 9,79 5,88 6,46 5,87 5,39 5,58 29 Vanilin Lactoside 1,56 1,34 1,04 nd nd nd 30 1,2,4,-trimetoxibenzeno 2,05 2,00 2,38 0,64 0,59 0,61 31 5-tert-butilpirogalol 4,02 2,96 4,75 0,63 0,57 0,60 32 D-Allose 2,87 2,89 d nd nd nd 33 4-propil-1,1-difenil 1,16 0,88 0,90 nd nd nd 34 4-hidroxi, 3,5 dimetoxi benzaldeído 1,82 1,40 1,25 nd nd nd 35 1,4-hidroxi 3,5-dimetoxifenil etanona 1,06 0,80 0,69 nd nd nd 36 4-hidroxi 3,5-dimetoxi benzoidrazina 0,69 0,42 0,43 nd nd nd
Grupo Experimentais
64
Análises comparativas considerando a média da soma de participação dos
compostos majoritários presentes nas amostras (ítem 4.8) obtidos da escala de
laboratório (PLO) e em escala industrial (PIO), apresentados na tabela 5, foram
realizadas por meio de ANOVA (α = 0,05) seguido do teste de Tukey. Observou-se
que houve diferença significativa entre os extratos testados com relação a
participação dos compostos fracionados, com maiores teores para o laboratorial, o
que poderia estar potencializando a ação antifúngica do mesmo.
4.6 Análises da avaliação do potencial antifúngico dos extratos pirolenhoso
Os resultados são apresentados na figura 8 e na tabela 6.
R² = 0,8072
R² = 0,7374
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0,00 50,00 100,00 150,00 200,00 250,00
An
ális
e d
e I
nib
ição
(%
)
Dose (µl)
PLO
PIO
Logaritmo (PLO)
Logaritmo (PIO)
Figura 8 – Curva de inibição do extrato pirolenhoso amostra da escala industrial ( PIO) e amostra
laboratorial (PLO)
65
Tabela 6 - Resultados obtidos da análise de inibição.
Tratamento
Dose (µL)
Análise de
crescimento radial
(mm)
Análise de inibição (%)
Média
(mm)
Média
(%)
1 2 3 1 2 3
PIO
25
50
100
150
200
20,3
16,1
12,2
7,5
0,0
21,8
16,1
10,2
4,3
0,0
19,2
18,0
13,1
3,1
0,0
30,0
51,2
39,0
78,6
100,0
24,8
51,2
49,0
87,7
100,0
33,8
45,5
34,5
91,1
100,0
20,4
16,7
11,8
5,0
0,0
29,5
49,3
40,8
85,8
100,0
PLO
20
25
30
35
40
5,0
3,1
0,0
0,0
0,0
6,1
0,0
0,0
0,0
0,0
6,3
0,0
0,0
0,0
0,0
76,4
84,7
100,0
100,0
100,0
71,2
100,0
100,0
100,0
100,0
70,2
100,0
100,0
100,0
100,0
5,8
1,0
0,0
0,0
0,0
72,6
94,9
100,0
100,0
100,0
FORMOL
2,5
5
10
15
17
20
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
100,0
AGUA
0
15
17
25
30
35
40
50
100
150
200
23,4
22,0
19,2
20,2
21,2
20,1
19,0
19,2
19,1
20,0
20,0
22,8
21,1
19,1
20,0
21,0
20,3
19,2
19,2
20,0
20,3
20,2
21,0
21,0
20,1
20,3
21,3
20,5
19,2
20,1
19,8
19,7
20,3
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
22,4
21,4
19,5
20,2
21,2
20,3
19,1
19,5
19,6
20,0
20,2
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
*
(*) Não ocorreu inibição
Por meio do teste realizado pode-se observar que os produtos PIO, PLO e
Formol apresentaram a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 200, 30 e 2,5µL/2
66
mL, respectivamente. Assim, concluiu-se que o extrato pirolenoso laboratorial
apresentou maior inibição que a amostra industrial, mas menor que a solução de
formol.
4.7 Identificação e análise da composição química de frações antifungicas de extrato
pirolenhoso
Figura 9 – Placa de Bioautografia observada após 7 dias à esquerda e placa com revelação com
solução metanólica de ácido sulfúrico a 10%, à direita
A avaliação antifúngica por bioautografia mostrou que a maioria das frações
identificadas são bioativas (figura 9) e na análise cromatográfica associada à
espectrometria de massa, GC/MS, identificou quais os compostos majoritários
presentes na amostra estavam presentes na fração antifúngica.
Nessa análise qualitativa da composição química por CGMS, os extratos da
zona de inibição obtidos com metanol e acetato de etila mostraram os mesmos
componentes majoritários que foram: Corilon, Mequinol, 2-metoxi 4-metilfenol, 4-etil
2-metoxifenol, 2,6 – dimetoxifenol, 1,2,4-trimetoxibenzeno e 5-tert-butilpirogalol
(tabela 7) (figuras 10 e 11).
67
Figura 10 - Cromatograma da amostra laboratorial utilizando-se Metanol. Os números sobre os picos
correspondem aos componentes químicos listados na Tabela 7
Figura 11 - Cromatograma da amostra laboratorial utilizando-se Acetato de Etila. Os números sobre
os picos correspondem aos componentes químicos listados na Tabela 7
68
Tabela 7 - Frações bioativas presentes nos extratos pirolenhosos
Compostos PLO_Fracionada Metanol
PLO_Fracionada Acetato de Etila
Corilon (2-hidroxi 3-metil 2-ciclopentan-1-ona)
Mequinol(4-metoxifenol)
2-metoxi 4-metifenol
4-etil 2-metoxifenol (p-etil guaicol)
2,6-dimetoxifenol
1,2,4-trimetoxibenzeno
5-tert-butilpirogalol
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
(PLO) amostra laboratorial.
4.8 Potencial do extrato pirolenhoso para aplicação em produtos cosméticos e
saneantes
O extrato pirolenhoso obtido em escala de laboratório foi considerado com
maior potencial antifúngico, conforme análise descrita no ítem 4.6 e 4.7.
Para efeito comparativo, foi realizada uma análise qualitativa prévia da
presença de componentes tóxicos, baseada em regulamentações pertinentes, como
por exemplo, ANVISA (2008c). Alguns dos compostos identificados nos extratos são
citados na literatura como potencialmente tóxicos e/ou cancerígenos como é o caso
do mequinol, que deveriam ser isolados, na visão da aplicação em produtos
cosméticos. Para aplicação em saneantes, a presença desse componente oferece
ao extrato pirolenhos laboratorial um potencial para sua utilização, em substituição
ao formol. Contudo, uma análise complementar específica quanto à toxicidade do
produtos deveria ainda ser realizada.
Seguem, de forma resumida, algumas informações sobre os potenciais ativos
encontrados nos extratos:
1) Corilon (2-hidroxi-3-metil 2-ciclopentan-1-ona) – Em termos de informações
legais até a data de novembro 1999, a EPA (Environmental Protection Agency) tem
aprovado um produto insecticida, no caso uma armadilha de barata, que usa esse
69
ingrediente ativo (ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY - EPA, 2012). Essa
substância não é considerada perigosa pela Regulamentação (EC) No. 1272/2008 e
de acordo com a diretiva 67/548/EEC (SIGMA ALDRICH, 2012a).
2) Mequinol (4-metoxifenol) – Pessoas que manipularam essa substância
desenvolveram despigmentação na pele (OCCUPATIONAL SAFETY AND HEALTH
- OSHA, 2012). Ela é utilizada como químico para síntese (MERCK, 2012). Em
humanos, a exposição à 4-metoxifenol pode produzir queimadura na pele e olhos
(OSHA, 2012). Essa substância aparece na lista juntamente com as substâncias que
não podem ser utilizadas em Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.
A lista aparece na resolução RDC n°48 onde fica proibido o seu uso em produtos
cosméticos das categorias I e II do IARC e outras referências internacionais,
classificadas como cancerígenas, mutagênicas ou tóxicas para a reprodução
(ANVISA, 2008d).
3) 2-metoxi 4-metifenol – Conhecido pelo seu uso em fragrâncias. Causa
irritação na pele, nos olhos e toxicidade aguda na área bucal (SIGMA ALDRICH,
2012b).
4) 4-etil 2-metoxifenol – Conhecido pelo seu uso na produção de aromas em
vinhos (RAYNE et al., 2007). Causa irritação nos olhos, vias respiratórias e na pele
(HGSPACE, 2012).
5) 2,6-dimetoxifenol – É responsável pelo aroma smoky proveniente de
produtos a base de pirólise da lignina (CHEMICAL BOOK, 2012a). Substância
irritante aos olhos, vias respiratórias e pele (SIGMA ALDRICH, 2012c).
6) 1,2,4-trimetoxibenzeno – É utilizado como inseticida, repelente de insetos
para cahorros e gatos. Substância que pode causar irritação nas vias respiratórias,
pele, olhos e no sistema digestório (CHEMICAL BOOK, 2012b).
7) 5-tert-butilpirogalol – Causa irritação nos olhos, vias respiratórias e na pele,
podendo ocasionar câncer (CHEMICAL BOOK, 2012c).
Com relação à estabilidade do extrato pirolenhoso, estudos mais completos
devem ser ainda efetuados, visto que os resultados das avaliações organolépticas
aqui realizadas, mesmo que consideradas parciais, indicaram a necessidade de
cuidados especiais para uma eventual aplicação num produto final (cosmético ou
saneante) devido a instabilidade de cor, principalmente à luz, o odor característico e
o pH ácido.
70
Por ser um produto relativamente novo e com produção industrial ainda
tímida, não existem muitos estudos sobre o impacto ambiental gerado pela utilização
do extrato pirolenhoso, sobretudo em relação à presença de alcatrão ou produtos
dele derivados em sua composição, levando a questionamentos quanto à eventuais
malefícios que possam trazer às plantas e mesmo ao homem. Pode-se mencionar,
por exemplo, a eventual presença de compostos derivados do alcatrão que seriam
cancerígenos. No entanto, especialistas apontam que grande parte do alcatrão pode
ser retirado do extrato pirolenhoso, se for conduzida a destilação do composto
(HÜEBLIN, 2001).
No presente trabalho, foi observada uma potencial aplicação do extrato
pirolenhoso, principalmente como agente antifúngico e possível conservante. Na
eventualidade da aplicação em produtos cosméticos e saneantes, devem ser
aplicadas medidas para se evitar a presença de ingredientes avaliados como
tóxicos/cancerígenos e possíveis problemas de instabilidade de cor e odor no
produto final.
71
5 CONCLUSÕES
As análises dos extratos pirolenhosos obtidos da madeira de eucalipto
demonstraram a presença de uma gama de compostos oxigenados, tais como
ácidos carboxílicos, ésteres, éteres e cetonas, além de fenol, guaicol e derivados
fenólicos.
Pode-se verificar que o extrato pirolenhoso obtido em escala industrial,
em termos qualitativos, apresenta um menor número de componentes químicos
ligados ao alcatrão.
Quando os extratos pirolenhosos laboratorial e industrial são
submetidos a processos de destilação simples, seus rendimentos de alcatrão
apresentam diferenças significativas, com maior teor para o laboratorial.
Os extratos pirolenhosos obtidos de escala laboratorial e industrial
apresentam diferença significativa de pH, com menor valor para o laboratorial,
podendo ser este um dos aspectos a justificar a diferença de atividade antifúngica
entre eles.
Na análise organoléptica das amostras laboratoriais e industriais foram
observadas alterações na cor quando expostas a luz.
Com relação à composição química do extrato pirolenhoso, deve-se
ressaltar um comportamento diferenciado para o obtido em escala industrial,
comparado ao obtido em laboratório. Os compostos n-hexano, butirolactone, 3-
metilfenol (m-Cresol) e 3,4-dimetilfenol, presentes no extrato industrial, não foram
encontrados no extrato obtido em escala laboratorial. O oposto ocorreu para os
compostos butanediol; 5,9-dodecadieno, 6-10 dimetil; 2-metil, 2-ciclopentanona;
ciclopentanona; ciclopropil carbinol; 2-metoxi-3-metilfenol; 1,2-benzenediol
(pirocatecol); vanillin lactoside; D-Allose; 4-propil-1,1-difenil; 4-hidroxi, 3,5 dimetoxi
benzaldeído; 1,4-hidroxi 3,5-dimetoxifenil etanona e 4-hidroxi 3,5-dimetoxi
benzoidrazina.
O produto que apresentou o melhor potencial antifúngico foi o extrato
pirolenhoso obtido de escala laboratorial. A princípio, os compostos com um maior
número de componentes ligados ao alcatrão foram considerados como sendo
responsáveis pelo maior potencial de ação antifúngica.
Pela análise da composição química de frações antifúngicas de extrato
pirolenhoso, os potenciais ativos da amostra a serem considerados foram: corilon,
72
mequinol, 2-metoxi 4-metilfenol, 4-etil 2-metoxifenol, 2,6 – dimetoxifenol, 1,2,4-
trimetoxibenzeno e 5-tert-butilpirogalol.
Observou-se que houve diferença significativa entre os pirolenhosos
industrial e laboratorial com relação a participação das frações antifúngicas dos
compostos fracionados, com maior teor para o laboratorial.
Em todos os extratos estudados, verificam-se componentes
potencialmente tóxicos e suas presenças conferem restrições para suas utilizações
em produtos cosméticos, sugerindo suas remoções, visando tal destinação.
A alternativa de uso do extrato para aplicação em saneantes se mostra
promissora, principalmente para o extrato pirolenhoso laboratorial.
73
REFERÊNCIAS
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74
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APÊNDICES
80
APÊNCIDE A – Análise estatística
Os dados de rendimentos gravimétricos em carvão e gases foram submetidos
à análise estatística com o intuito de verificar se havia variações no sistema. A
realização da análise de variância foi condicionada à adequação do pressuposto de
normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação do teste de
Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS, Statistical
Analysis System, versão 9.0.
Obs REPETICAO RENDCARVAO RENDPIROLENHOSO RENDGASES
1 1 0.45086 0.33783 0.21131
2 1 0.45932 0.30755 0.23313
3 1 0.47388 0.36251 0.16360
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure Variable: RENDCARVAO
Moments
N 3 Sum Weights 3
Mean 0.46135426 Sum Observations 1.38406278
Std Deviation 0.01164558 Variance 0.00013562
Skewness 0.761822 Kurtosis .
Uncorrected SS 0.6388145 Corrected SS 0.00027124
Coeff Variation 2.52421671 Std Error Mean 0.00672358
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 0.461354 Std Deviation 0.01165
Median 0.459321 Variance 0.0001356
Mode . Range 0.02302
Interquartile Range 0.02302
81
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 68.61736 Pr > |t| 0.0002
Sign M 1.5 Pr >= |M| 0.2500
Signed Rank S 3 Pr >= |S| 0.2500
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.977131 Pr < W 0.7101
Kolmogorov-Smirnov D 0.235977 Pr > D >0.1500
Cramer-von Mises W-Sq 0.033532 Pr > W-Sq >0.2500
Anderson-Darling A-Sq 0.215119 Pr > A-Sq >0.2500
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure Variable: RENDPIROLENHOSO
Moments
N 3 Sum Weights 3
Mean 0.33596745 Sum Observations 1.00790236
Std Deviation 0.02752767 Variance 0.00075777
Skewness -0.3036903 Kurtosis .
Uncorrected SS 0.34013793 Corrected SS 0.00151554
Coeff Variation 8.19355173 Std Error Mean 0.01589311
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 0.335967 Std Deviation 0.02753
Median 0.337834 Variance 0.0007578
Mode . Range 0.05496
Interquartile Range 0.05496
82
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 21.13919 Pr > |t| 0.0022
Sign M 1.5 Pr >= |M| 0.2500
Signed Rank S 3 Pr >= |S| 0.2500
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.996553 Pr < W 0.8878
Kolmogorov-Smirnov D 0.193694 Pr > D >0.1500
Cramer-von Mises W-Sq 0.028754 Pr > W-Sq >0.2500
Anderson-Darling A-Sq 0.193333 Pr > A-Sq >0.2500
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure Variable: RENDGASES
Moments
N 3 Sum Weights 3
Mean 0.20267829 Sum Observations 0.60803487
Std Deviation 0.03555526 Variance 0.00126418
Skewness -1.0277452 Kurtosis .
Uncorrected SS 0.12576382 Corrected SS 0.00252835
Coeff Variation 17.5427074 Std Error Mean 0.02052784
83
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 0.202678 Std Deviation 0.03556
Median 0.211307 Variance 0.00126
Mode . Range 0.06952
Interquartile Range 0.06952
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 9.873338 Pr > |t| 0.0101
Sign M 1.5 Pr >= |M| 0.2500
Signed Rank S 3 Pr >= |S| 0.2500
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.95583 Pr < W 0.5956
Kolmogorov-Smirnov D 0.26254 Pr > D >0.1500
Cramer-von Mises W-Sq 0.038772 Pr > W-Sq >0.2500
Anderson-Darling A-Sq 0.239259 Pr > A-Sq >0.2500
84
APÊNCIDE B – Análise estatística (ANOVA) e teste de Tukey
Análises comparativas dos dados foram realizadas por meio de ANOVA (α = 0,05)
seguido do teste de Tukey para os dados de pH
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do
pressuposto de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação
do teste de Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS,
Statistical Analysis System, versão 9.0.
Obs REPETICAO PH
1 PLO 2.10
2 PLO 2.29
3 PLO 2.24
4 PIO 2.70
5 PIO 2.67
6 PIO 2.66
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure - Variable: PH
Moments
N 6 Sum Weights 6
Mean 2.44333333 Sum Observations 14.66
Std Deviation 0.26341349 Variance 0.06938667
Skewness -0.2258128 Kurtosis -2.5656265
Uncorrected SS 36.1662 Corrected SS 0.34693333
Coeff Variation 10.7809068 Std Error Mean 0.10753811
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 2.443333 Std Deviation 0.26341
Median 2.475000 Variance 0.06939
Mode . Range 0.60000
Interquartile Range 0.43000
85
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 22.72063 Pr > |t| <.0001
Sign M 3 Pr >= |M| 0.0313
Signed Rank S 10.5 Pr >= |S| 0.0313
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.837841 Pr < W 0.1251
Kolmogorov-Smirnov D 0.294614 Pr > D 0.0987
Cramer-von Mises W-Sq 0.087909 Pr > W-Sq 0.1337
Anderson-Darling A-Sq 0.510112 Pr > A-Sq 0.1180
Análise de homogeneidade da variância
The TRANSREG Procedure
86
Transformation Information for
BoxCox(PH)
Lambda R-Square Log Like
-3.00 0.88 13.40822
-2.75 0.89 13.56675
-2.50 0.89 13.72474
-2.25 0.90 13.88216
-2.00 0.90 14.03897
-1.75 0.90 14.19514
-1.50 0.91 14.35063
-1.25 0.91 14.50538
-1.00 0.92 14.65936
-0.75 0.92 14.81250
-0.50 0.92 14.96474
-0.25 0.93 15.11602 *
0.00 0.93 15.26626 *
0.25 0.93 15.41539 *
0.50 0.94 15.56333 *
0.75 0.94 15.70997 *
1.00 + 0.94 15.85522 *
1.25 0.94 15.99896 *
1.50 0.95 16.14108 *
1.75 0.95 16.28145 *
2.00 0.95 16.41993 *
2.25 0.95 16.55637 *
2.50 0.96 16.69061 *
2.75 0.96 16.82247 *
3.00 0.96 16.95177 <
< - Best Lambda
* - Confidence Interval
+ - Convenient Lambda
87
TRANSREG Univariate Algorithm Iteration History for
BoxCox(PH)
Iteration
Number
Average
Change
Maximum
Change R-Square
Criterion
Change Note
1 0.00000 0.00000 0.95936 Converged
Algorithm converged.
Análise da variância – Teste F
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
REPETICAO 2 PIO PLO
Number of observations 6
Dependent Variable: PH
Source DF
Sum of
Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 1 0.32666667 0.32666667 64.47 0.0013
Error 4 0.02026667 0.00506667
Corrected Total 5 0.34693333
R-Square Coeff Var Root MSE PH Mean
0.941583 2.913255 0.071181 2.443333
88
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 0.32666667 0.32666667 64.47 0.0013
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 0.32666667 0.32666667 64.47 0.0013
Tukey´s Studentized Range (HSD) Test for PH
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 4
Error Mean Square 0.005067
Critical Value of Studentized Range 3.92649
Minimum Significant Difference 0.1614
Means with the same letter are not
significantly different.
Tukey Grouping Mean N REPETICAO
A 2.67667 3 PIO
B 2.21000 3 PLO
89
APÊNCIDE C – Análise estatística (ANOVA) e teste de Tukey
Análises comparativas dos dados foram realizadas por meio de ANOVA (α = 0,05)
seguido do teste de Tukey para os resultados do balanço de massa e cálculo de
rendimentos em alcatrão e extrato pirolenhoso destilado obtido em escala industrial
(PIO) e laboratorial (PLO).
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do pressuposto
de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação do teste de
Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS, Statistical
Analysis System, versão 9.0.
Obs REPETICAO ALCATRAO LPD
1 PLI 0.5818 99.42
2 PLI 0.2050 99.79
3 PLI 0.8644 99.14
4 PLO 14.0900 85.91
5 PLO 13.5400 86.46
6 PLO 15.3800 84.62
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure - Variable: ALCATRAO
90
Moments
N 6 Sum Weights 6
Mean 7.44354604 Sum Observations 44.6612762
Std Deviation 7.57751433 Variance 57.4187234
Skewness 0.02273451 Kurtosis -3.2486456
Uncorrected SS 619.531882 Corrected SS 287.093617
Coeff Variation 101.799791 Std Error Mean 3.09350727
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 7.443546 Std Deviation 7.57751
Median 7.202205 Variance 57.41872
Mode . Range 15.17498
Interquartile Range 13.50815
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 2.406183 Pr > |t| 0.0612
Sign M 3 Pr >= |M| 0.0313
Signed Rank S 10.5 Pr >= |S| 0.0313
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.749372 Pr < W 0.0196
Kolmogorov-Smirnov D 0.30737 Pr > D 0.0753
Cramer-von Mises W-Sq 0.126264 Pr > W-Sq 0.0377
Anderson-Darling A-Sq 0.743396 Pr > A-Sq 0.0241
91
Análise de homogeneidade da variância
The TRANSREG Procedure
Transformation Information for
BoxCox(ALCATRAO)
Lambda R-Square Log Like
-3.00 0.23 -39.2342
-2.75 0.24 -35.8941
-2.50 0.25 -32.5838
-2.25 0.27 -29.3059
-2.00 0.30 -26.0637
-1.75 0.33 -22.8604
-1.50 0.38 -19.6996
-1.25 0.45 -16.5852
-1.00 0.54 -13.5212
-0.75 0.65 -10.5119
-0.50 0.77 -7.5620
-0.25 0.87 -4.6777
0.00 0.94 -1.8762
0.25 0.98 0.7643
0.50 0.99 2.8771 *
0.75 0.99 3.4571 <
1.00 + 0.99 2.0750 *
1.25 0.99 -0.2289
1.50 0.99 -2.7582
1.75 0.98 -5.3322
2.00 0.98 -7.9153
2.25 0.97 -10.5005
2.50 0.96 -13.0866
2.75 0.96 -15.6733
3.00 0.95 -18.2606
< - Best Lambda
* - Confidence Interval
+ - Convenient Lambda
92
TRANSREG Univariate Algorithm Iteration History for
BoxCox(ALCATRAO)
Iteration
Number
Average
Change
Maximum
Change R-Square
Criterion
Change Note
1 0.00000 0.00000 0.99357 Converged
Algorithm converged.
Análise da variância – Teste F
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
REPETICAO 2 PLI PLO
Number of observations 6
Dependent Variable: ALCATRAO
Source DF
Sum of
Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 1 285.0906722 285.0906722 569.34 <.0001
Error 4 2.0029448 0.5007362
Corrected Total 5 287.0936169
R-Square Coeff Var Root MSE ALCATRAO Mean
0.993023 9.506587 0.707627 7.443546
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 285.0906722 285.0906722 569.34 <.0001
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 285.0906722 285.0906722 569.34 <.0001
93
Tukey´s Studentized Range (HSD) Test for ALCATRAO
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 4
Error Mean Square 0.500736
Critical Value of Studentized Range 3.92649
Minimum Significant Difference 1.6042
Means with the same letter are not
significantly different.
Tukey Grouping Mean N REPETICAO
A 14.3367 3 PLO
B 0.5504 3 PLI
94
APÊNCIDE D – Análise estatística (ANOVA) e teste de Tukey
Análises comparativas dos dados foram realizadas por meio de ANOVA (α = 0,05)
seguido do teste de Tukey para as médias das participações nos extratos
pirolenhosos obtidos da escala de laboratório (PLO) e em escala industrial (PIO)
A realização da análise de variância foi condicionada à adequação do pressuposto
de normalidade da distribuição, que foi verificada mediante a aplicação do teste de
Shapiro-Wilk. Os dados foram submetidos ao programa estatístico SAS, Statistical
Analysis System, versão 9.0.
Obs REPETICAO PARTICIPACAO
1 PLO 22.51
2 PLO 25.74
3 PLO 27.72
4 PIO 13.08
5 PIO 12.46
6 PIO 12.70
Análise de Variância
Teste de normalidade de Shapiro-Wilk
The UNIVARIATE Procedure - Variable: PARTICIPACAO
Moments
N 6 Sum Weights 6
Mean 19.035 Sum Observations 114.21
Std Deviation 7.08924185 Variance 50.25735
Skewness 0.20953398 Kurtosis -2.7598234
Uncorrected SS 2425.2741 Corrected SS 251.28675
Coeff Variation 37.2431933 Std Error Mean 2.89417087
Basic Statistical Measures
Location Variability
Mean 19.03500 Std Deviation 7.08924
Median 17.79500 Variance 50.25735
Mode . Range 15.26000
Interquartile Range 13.04000
95
Tests for Location: Mu0=0
Test Statistic p Value
Student's t t 6.577013 Pr > |t| 0.0012
Sign M 3 Pr >= |M| 0.0313
Signed Rank S 10.5 Pr >= |S| 0.0313
Tests for Normality
Test Statistic p Value
Shapiro-Wilk W 0.814279 Pr < W 0.0787
Kolmogorov-Smirnov D 0.299547 Pr > D 0.0897
Cramer-von Mises W-Sq 0.091252 Pr > W-Sq 0.1198
Anderson-Darling A-Sq 0.547431 Pr > A-Sq 0.0921
Análise da variância – Teste F
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
REPETICAO 2 PIO PLO
Number of observations 6
Class Level Information
Class Levels Values
PROCESSO 2 PLI PLO
Number of observations 42
96
Dependent Variable: PARTICIPACAO
Source DF
Sum of
Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 1 237.2588167 237.2588167 67.65 0.0012
Error 4 14.0279333 3.5069833
Corrected Total 5 251.2867500
R-Square Coeff Var Root MSE PARTICIPACAO Mean
0.944176 9.838162 1.872694 19.03500
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 237.2588167 237.2588167 67.65 0.0012
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
REPETICAO 1 237.2588167 237.2588167 67.65 0.0012
Tukey´s Studentized Range (HSD) Test for PARTICIPACAO
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 4
Error Mean Square 3.506983
Critical Value of Studentized Range 3.92649
Minimum Significant Difference 4.2453
Means with the same letter are not
significantly different.
Tukey Grouping Mean N REPETICAO
A 25.323 3 PLO
B 12.747 3 PIO
97
ANEXOS
98
ANEXO A - LISTA DE SUBSTÂNCIAS DE AÇÃO CONSERVANTE PERMITIDAS
título: Resolução RDC nº 162, de 11 de setembro de 2001
ementa: Estabelece a Lista de Substâncias de Ação Conservantes
para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.
publicação: D.O.U. - Diário Oficial da União; Poder Executivo, de 12 de
setembro de 2001
órgão emissor: ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária
alcance do ato: federal - Brasil
área de atuação: Cosméticos
relacionamento(s):
revoga:
Erro! A referência de hiperlink não é válida.
Resolução RDC nº 162 de 11 de setembro de 2001
Estabelece a Lista de Substâncias de Ação Conservantes para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.
A Diretoria Colegiada da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, no uso da atribuição que lhe confere o art. 11, inciso IV, do Regulamento da ANVISA aprovado pelo Decreto 3.029, de 16 de abril de 1999, em reunião realizada em 5 de setembro de 2001,
considerando que a Vigilância Sanitária tem como missão precípua a prevenção de agravos à saúde, a ação reguladora de garantia de qualidade de produtos e serviços que inclui a aprovação de normas e suas atualizações, bem como a fiscalização de sua aplicação;
considerando a necessidade de atualizar as Listas de Substâncias constantes da Resolução 79/00, permitidas para uso em produtos de higiene pessoal, cosméticos e perfumes e outros com abrangência neste contexto, com base na Lei 6.360/76 e seu Regulamento, Decreto 79.094/77 e na Resolução GMC nº 54/99 - Mecanismo de Periodicidade Para Atualização das Listas de Substâncias;
99
considerando a importância de compatibilizar os regulamentos nacionais com os instrumentos harmonizados no âmbito do Mercosul, especificamente a Resolução GMC nº 72/00 - Lista de Substâncias de Ação Conservante Para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes;
considerando que a legislação sanitária vigente se aplica a produtos nacionais, provenientes dos Estados Partes do Mercosul e de outros países;
adotou a seguinte Resolução de Diretoria Colegiada e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicação:
Art.1º Aprovar a Lista de Conservantes Permitidos Para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes, que consta do Anexo desta Resolução.
Art. 2º Revogar o Anexo II da Resolução nº 79, de 28 de agosto de 2000.
Art . 3º Esta Resolução entra em vigor na data de sua publicação.
GONZALO VECINA NETO
ANEXO
LISTA DE SUBSTÂNCIAS DE AÇÃO CONSERVANTE PERMITIDAS PARA PRODUTOS DE HIGIENE PESSOAL, COSMÉTICOS E PERFUMES
1. CONSERVANTES : São substâncias adicionadas aos Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes com a finalidade primária de preservá-los de danos e/ou deteriorações causados por microorganismos durante sua fabricação e estocagem, bem como proteger o consumidor de contaminação inadvertida durante o uso do produto.
2. As substâncias com o símbolo (+) também podem ser adicionadas à estes produtos em concentrações outras das listadas abaixo, com a finalidade aparente específica diferente à da conservação do produto, como por exemplo: desodorante, anticaspa, etc.
3. Existem outras substâncias usadas em formulações de Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes que também possuem ação conservante nestes produtos, como por exemplo: muitos óleos essenciais e alguns álcoois. Estas substâncias não estão incluídas nesta lista.
4. Para fins desta lista:
`SAIS` significa: sais dos cátions de sódio, potássio, magnésio, amônio e etanolaminas; sais dos ânions: cloreto, brometo, sulfato e acetato.
`ESTERES` significa: ésteres de metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila e fenila.
100
5. ASSOCIAÇÕES:
É permitida a associação de substâncias conservantes obedecidos seus limites individuais.
Em casos especiais, quando houver necessidade de utilizar-se uma concentração que ultrapasse os valores individuais estipulados na lista, a empresa deverá apresentar documentação técnico-científica justificando o seu uso.
. Lista de Substâncias de Ação Conservante Permitidas para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.
Nº
ORD
Substância (NOME INCI) MÁXIMA
CONCENTRAÇÃO
AUTORIZADA
LIMITAÇÕES CONDIÇÕES DE
USO E
ADVERTÊNCIAS
1 Ácido benzóico, seus sais e
ésteres (+) (BENZOIC ACID,
salts e esters)
0,5% (expresso
como ácido)
. .
2 Ácido propiônico e seus sais (+)
(PROPIONIC ACID e salts)
2,0% (expresso
como ácido)
. .
3 Ácido salicílico e seus sais (+)
(SALICYLIC ACID e salts)
0,5% (expresso
como ácido)
Proibido em
crianças com
menos de 3 anos
de idade, exceto
para shampoos.
Não usar em
crianças com
menos de 3 anos
de idade.
4 Ácido sórbico e seus sais (+)
(SORBIC ACID e salts)
0,6% (expresso
como ácido)
. .
5 Formaldeído e paraformaldeído
(+) (FORMALDEHYDE e
PARAFORMALDEHYDE)
0,1% (em produtos
de higiene oral)
0,2% (outros
produtos não
destinados à
higiene oral).
(expresso como
formaldeído livre)
Proibido em
aerossóis
Contém
formaldeído
(somente para
concentrações
superiores a
0,05% no produto
final)
6 Bifenil-2-ol (o-fenilfenol) e seus
sais (+) (O-PHENYLPHENOL e
salts)
0,2% (expresso
como fenol)
. .
7 Piritionato de zinco(+) (ZINC
PYRITHIONE)
0,5% Somente em
produtos de
breve contato
com a pele e
cabelo. Proibido
em produtos de
higiene oral.
.
8 Sulfitos e Bisulfitos
inorgânicos(+) (AMMONIUM
0,2% (expresso
como SO2 livre)
. .
101
SULFITE e BISULFITE, etc.)
9 Iodato de sódio (SODIUM
IODATE)
0,1% Somente para
produtos que se
enxagüe
.
10 1,1,1-Tricloro-2-metilpropanol-2-
(clorobutanol)
(CHLOROBUTANOL)
0,5% Proibido em
aerossóis
Contém
clorobutanol
11 Ácido 4-hidroxibenzóico, seus
sais e ésteres(+) (PARABEN
salts e esters)
0,4%( expresso
como ácido)
individual para 1
éster 0,8%(
expresso como
ácido) para misturas
dos sais ou ésteres.
. .
12 Ácido dehidroacético e seus
sais (DEHYDROACETIC ACID
e salts)
0,6%( expresso
como ácido)
Proibido em
aerossóis
.
13 Ácido fórmico e seu sal
sódico(+) (FORMIC ACID e
sodium salt)
0,5%( expresso
como ácido)
. .
14 3,3`-Dibromo-4,4`hexametileno-
dioxidibenzamidina e seus sais
(incluindo isotionato)
(dibromohexamidina)
(DIBROMIHEXAMIDINE e salts)
0,1% . .
15 Tiosalicilato de etilmercurio
sódico (Tiomersal) (Timerosal)
(THIMEROSAL)
0,007%(de Hg).Se
misturado com
outros compostos
mercuriais o total de
Hg não pode ser
maior que 0,007%
no produto final.
Somente em
produtos para a
área dos olhos.
Contém timerosal
16 Fenilmercúrio e seus sais
(incluindo borato)
(PHENYLMERCURIC e salts)
0,007%(de Hg).Se
misturado com
outros compostos
mercuriais o total de
Hg não pode ser
maior que 0,007%
no produto final.
Somente em
produtos para a
área dos olhos.
Contém
compostos
fenilmercuriais
17 Ácido undecanóico-10-eno,
(undecilênico), seus sais(+),
ésteres, aminas e
sulfosuccinato (UNDECILENIC
ACID e SALTS)
0,2% (expresso
como ácido)
. .
18 Amino-5-bis(etil-2-hexil)-1,3 0,1% . .
102
metil-5-perhidropirimidina (+)
(HEXETIDINE)
19 5-Bromo-5-nitro-1,3 dioxano (5-
BROMO-5-NITRO-1,3-
DIOXANE)
0,1% Somente para
produtos que se
enxague. Evitar
formação de
nitrosaminas.
.
20 2-Bromo-2-nitropropano-1,3-diol
(Bronopol) (+) (2-BROMO-2-
NITROPROPANE-1,3-DIOL)
0,1% Evitar formação
de nitrosaminas.
.
21 3,4,4`- Triclorocarbanilida(+)
(TRICHLOCARBAN)
0,2% Critério de
pureza: 3,3`,4,4`-
Tetraclo-
roazobenzeno <
1ppm 3,3`,4,4`-
Tetraclo-
roazoxibenzeno
< 1ppm
.
22 p-cloro-metacresol (+) (p-
CHLORO-m-CRESOL)
0,2% Proibido em
produtos que
entram em
contato com
mucosas.
.
23 p-cloro-metaxileno (+)
(CHLOROXYLENOL)
0,5% . .
24 Imidazolidinil uréia(+)
(IMIDAZOLIDINYL UREA)
0,6% . . .
25 Cloridrato de polihexametileno
biguanida(+)
(POLYAMINOPROPYL
BIGUANIDE)
0,3% . .
26 2-Fenoxietanol (+)
(PHENOXYETHANOL)
1,0% . .
27 Cloreto de 1-(3-cloroalil)-3,5,7-
triazo-1-azoniadamantano
(QUATERNIUM 15)
0,2% . .
28 1-(4-clorofenoxi)-1-(1-
imidazolil)-3,3-dimetil-2-
butanona (+) (CLIMBAZOLE)
0,5% . .
29 1,3-Dimetilol-5,5-
dimetilhidantoína (+) (DMDM
HYDANTOINE)
0,6% . .
30 Álcool benzílico (+) (BENZYL
ALCOHOL)
1,0% . .
31 1-Hidroxi-4-metil-6(2,4,4-
trimetilpentil)2-piridona e seus
sais de monoetanolamina (+)
1,0% 0,5% Para produtos
que se enxágüe.
Para outros
.
103
(Octopirox) (PIROCTONE
OLAMINE)
produtos
32 1,2-Dibromo-2,4-dicianobutano
(METHYL
DIBROMOGLUTARONITRILE)
0,1% Não usar em
produtos para
bronzear em
concentração
maior que
0,025%
.
33 4-Isopropil-m-cresol (O-
CYMEN-5-OL)
0,1% . .
34 Mistura de 5-cloro-2-metil-4-
isotiazolina-3-ona e 2-metil-4-
isotiazolina-3-ona com cloreto
de magnésio e nitrato de
magnésio (3:1)
(METHYLISOTHIAZOLINONE
+ METHYL CHLORO
ISOTIAZOLINONE)
0,0015% . .
35 2-Benzil-4-Clorofenol
(CHLOROPHENE)
0,2% . .
36 2-Cloroacetamida
(CHLORACETAMIDE)
0,3% . Contém
cloroacetamida
37 Bis-(p-clorofenildiguanida)-1,6-
hexano (+): acetato, gluconato
e cloridrato (CHLORHEXIDINE
DIGLUCONATE,
DIHYDROCHLORIDE,
DIACETATE)
0,3% (expresso
como clorohexidina)
. .
38 1-Fenoxi-2-propanol
(PHENOXYPROPANOL)
1,0% Somente para
produtos que se
enxágüe
.
39 4,4-Dimetil-1,3-oxazolidina
(DIMETHYL OXAZOLIDINE)
0,1% pH do produto
final não deve
ser < 6
.
40 N-(hidroximetil)-N-
(dihidroximetil-1,3-dioxo-2,5-
imidazolidinil-4)-
N`(hidroximetil)urea (+)
(DIAZOLIDINYL UREA)
0,5% . .
41 Glutaraldeído (GLUTARAL) 0,1% Proibido em
aerossóis.
Contém
glutaraldeído
(somente para
concentrações
superiores a
0,05% no produto
final)
42 5-Etil-3,7-dioxo-1- 0,3% Proibido em .
104
azobiciclo(3.3.0)octano (7-
ETHYLBICYCLO
OXAZOLIDINE)
produtos para
higiene oral e
que entram em
contato com
mucosa.
43 3-Hidroxi-4-isopropil tolueno
(timol) (THYMOL)
0,1% . .
44 Farnesol (+) (FARNESOL) 0,6% . .
45 Monometilol dimetil hidantoína
(MDM HYDANTOIN)
0,5% Somente para
produtos que se
enxágüe.
.
46 6,6-dibromo-4,4-dicloro-2,2-
metilenodifenol (+)
(BROMOCHLOROPHENE)
0,1% . .
47 Álcool 2,4-Diclorobenzílico (+)
(DICHLOROBENZYL
ALCOHOL)
0,15% . .
48 Tricloro-3,4,4`hidróxi-2`
difenileter (+) (TRICLOSAN)
0,3% . .
49 Hexametilenotetramina (+)
(METHENAMINE)
0,15% . .
50 Brometo e Cloreto de
Alquil(C12-C22) Trimetilamônio
(+) (BEHENTRIMONIUM,
CETRIMONIUM,
LAUTRIMONIUM,
MYRTRIMONIUM,
STERTRIMONIUM: BROMIDE
e CHLORIDE)
0,1% . .
51 1,6-Di-(4-amidinofenoxi)-n-
hexano e seus sais (incluindo
isotionato e p-hidroxibenzoato)
(+) (HEXAMIDINE e salts)
0,1% . .
52 3-(p-clorofenoxi)-propano-1,2-
diol (CHLORPHENESIN)
0,3% . .
53 Hidroximetil aminoacetato de
sódio (SODIUM
HYDROXYMETHYL
GLYCINATE)
0,5% . .
54 Cloreto de prata depositado em
dióxido de titânio (TITANIUM
DIOXIDE + SILVER
CHLORIDE)
0,004% ( calculado
como Cloreto de
prata)
20% AgCl (p/p)
em TiO2.
Proibido em
produtos para
crianças abaixo
de 3 anos de
idade, em
produtos para
.
105
higiene oral e em
produtos para a
área dos olhos e
lábios.
55 Brometo de dodecil-dimetil-
fenoxietilamônio (DOMIPHEN
BROMIDE)
0,3% . .
56 Cloreto de alquil piridínio
(ALKYLPYRIDINIUM
CHLORIDE)
0,3% 0,2% em
produtos para
crianças e em
produtos que
entram em contato
com mucosas.
. .
57 Cloreto, Brometo e Sacarinato
(C8-C18) de Alquil
dimetilbenzilamônio (+)
(BENZALKONIUM BROMIDE,
CHLORIDE, SACCHARINATE)
0,1% (Calculado
como cloreto de
benzalcônio)
. Evite contato com
os olhos
58 Benzilhemiformal
(BENZYLHEMIFORMAL)
0,15% Somente para
produtos que se
enxágüe.
.
59 Carbamato de 3-Iodo-2-
propinilbutil (IODOPROPINYL
BUTYLCARBAMATE)
0,05% 1.Não usar em
produtos para
higiene bucal e
em produtos
para os lábios.
2.Se a
concentração
nos produtos que
permanecem em
contato
prolongado com
a pele for
superior à 0,02%
deverá ser
mencionado no
texto: Contém
Iodo
Contém iodo
60 Cloreto de Diisobutil
Fenoxietoxietil -dimetil -
benzilamônio
(BENZETHONIUM CHLORIDE)
0,1% Somente para
produtos que se
enxágüe.
.
106
LISTA DE SUBSTÂNCIAS DE AÇÃO CONSERVANTE PERMITIDAS PARA PRODUTOS DE HIGIENE PESSOAL, COSMÉTICOS E PERFUMES ATÉ : 31/12/2001
Nº
ORD
SUBSTÂNCIA (NOME INCI) MÁXIMA
CONCENTRAÇÃO
AUTORIZADA
LIMITAÇÕES CONDIÇÕES DE
USO E
ADVERTÊNCIAS
24a Cloreto de diisobutil-
cresoxietil-dimetilbenzil
amônio
(METHYLBENZETHONIUM
CHLORIDE)
0,2% 0,1% em
produtos infantis
Proibido em
produtos que
entram em
contato com
mucosas
.
25a Cloreto de N-(lauril-
colaminoformilmetil) Piridínio
(LAPYRIUM CHLORIDE)
0,2% Proibido em
produtos que
entram em
contato com
mucosas e em
produtos
infantis.
.
26a 6-Clorotimol
(CHLOROTHYMOL)
0,1% Proibido em
produtos
infantis.
.
27a 3,5-Dibromo-3-trifluor-metil-
salicilanilida
(FLUOROSALAN)
2% Somente para
sabonetes
.
28a 2,4-dicloro-3,5-xilenol
(DICHLORO-m-XYLENOL)
0,1% Proibido em
produtos
infantis
.
29a 2-Feniletanol (PHENETYL
ALCOHOL)
0,5% p .
31a 1-Hidroximetil-3,5-
dimetilpirazol (DIMETHYL
HYDROXYMETHYL
PYRAZOLE)
0,1% . .
35a Isotimol e carvacrol
(ISOPROPYL CRESOLS)
0,1% . .
107
ANEXO B - RESOLUÇÃO DA DIRETORIA COLEGIADA - RDC Nº 35, DE 3 DE
JUNHO DE 2008
Dispõe sobre conservantes permitidos
para produtos saneantes.
A Diretoria Colegiada da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, no uso
da atribuição que lhe confere o inciso IV do art. 11 do Regulamento aprovado
pelo Decreto nº 3.029, de 16 de abril de 1999, e tendo em vista o disposto no
inciso II e nos §§ 1º e 3º do art. 54 do Regimento Interno aprovado nos termos
do Anexo I da Portaria nº 354 da ANVISA, de 11 de agosto de 2006, republicada
no DOU de 21 de agosto de 2006, em reunião realizada em 29 de maio de 2008,
e
considerando que a Vigilância Sanitária tem como missão precípua a
prevenção de agravos à saúde, a ação reguladora de garantia de qualidade de
produtos e serviços que inclui a aprovação de normas e suas atualizações, bem
como a fiscalização de sua aplicação;
considerando a necessidade de implementar ações que venham contribuir
para a melhoria da qualidade, oferecendo produtos com menor risco toxicológico
e de assegurar o nível de proteção à saúde da população;
considerando a necessidade de estabelecer lista de conservantes e
respectivas concentrações para utilização na formulação de produtos saneantes;
considerando a necessidade de banir o conservante Formaldeído das
formulações de produtos saneantes, devido a sua reconhecida carcinogenicidade
e atual classificação toxicológica pela IARC (International Agency for Research
on Cancer);
considerando que o art. 5º da Resolução RDC nº. 184 de 22 de outubro de
2001 proíbe o uso de substâncias carcinogênicas, teratogênicas e mutagênicas
nas formulações de produtos saneantes;
adota a seguinte Resolução da Diretoria Colegiada e eu, Diretor-
Presidente, determino a sua publicação:
Art.1º Aprovar a lista de conservantes permitidos para produtos saneantes,
108
que consta do Anexo desta Resolução.
Art. 2° A concentração máxima permitida para os respectivos
conservantes, constante no Anexo desta Resolução deve ser obedecida.
Art. 3º É permitida a associação de substâncias conservantes, obedecidos
seus limites individuais.
Art. 4° Fica proibido o uso do Formaldeído em produtos saneantes, assim
como concentrações dos demais conservantes superiores às permitidas no
anexo desta Resolução e devidas atualizações.
Art. 5º Conceder o prazo de 360 (trezentos e sessenta) dias para que os
produtos anteriormente notificados e/ou registrados ajustem-se aos dispositivos
desta Resolução, observado o disposto no art. 13 da Lei nº. 6.360/76.
Parágrafo único. A empresa que não optar pelo descrito no caput deste
artigo terá automaticamente a notificação e/ou registro do produto cancelado,
com fulcro no art. 6º da Lei nº. 6.360/76.
Art. 6º. Todas as alterações, inclusões e/ou exclusões no conteúdo da
presente lista serão publicadas em Diário Oficial da União.
Art. 7º - As situações em desacordo com o disposto nesta Resolução
constituem infração sanitária, sujeitando o infrator às penalidades previstas na
Lei no 6.437, de 20 de agosto de 1977, no Decreto-Lei nº. 2.848, de 7 de
dezembro de 1940, demais regulamentos cabíveis e devidas atualizações.
Art. 8º Esta norma revoga as demais disposições em contrário.
Art. 9º Esta Resolução entrará em vigor na data de sua publicação.
DIRCEU RAPOSO DE MELLO
109
ANEXO C
LISTA DE SUBSTÂNCIAS DE AÇÃO CONSERVANTE PERMITIDAS PARA
FORMULAÇÕES DE PRODUTOS SANEANTES
Nº NOME QUÍMICO NÚMERO CAS CONCENTRAÇÂO MÁX.
PERMITIDA (% p/p)
01 BENZOATO DE SÓDIO 532-32-1 1,00
02 BROMO-2 NITRO-2
PROPANODIOL
52-51-7 0,10
03 CLOROTALONIL 1897-45-6 0,05
04 MISTURA MIT/ CMIT1:3 - METIL
ISOTIAZOLINONA / METILCLORO
ISOTIAZOLINONA
2682-20-4
26172-55-4
0,0015
05 1,2-BENZO-ISOTIAZOLINONA
(BIT)
2634-33-5 0,05
06 METIL ISOTIAZOLINONA (MIT) 2682-20-4 0,01
07 OCTIL-ISOTIAZOLINONA 26530-20-1 0,0005
08 METIL BROMO
GLUTARALNITRILA
35691-65-7 0,10
09 PARA-CLORO META-CRESOL 59-50-7 0,20
10 2,4 DICLORO BENZIL ALCOOL 1777-82-8 0,15
11 ORTOFENIL FENOL 90-43-7 0,20
12 2-BENZIL 4-CLOROFENOL 120-32-1 0,20
13 1-FENOXI -2-PROPANOL 770-35-4 0,50
14 4,4-DIMETIL-1,3-OXAZOLIDINA 51200-87-4 0,10
15 7-ETIL BICICLO OXAZOLIDINA 7747-35-5 0,30
16 CLOROXILENOL 88-44-0 0,50
17 PIRITIONATO DE ZINCO 13463-41-7 0,50
18 CLORETO DE DIDECILDIMETIL
AMÔNIO
7173-51-5 0,10
19 CLORETO DE ALQUIL DIMETIL
BENZIL AMONIO / CLORETO DE
39403-41-3
68424-85-1
0,10
110
BENZALCONIO
(C12 - C16)
63449-42-3
68424-95-3
70294-44-9
8001-54-5
20 DITIOMETILBENZAMIDA 2527-58-4 0,10
21 DIAZOLIDINIL UREIA 78491-02-8 0,50
22 IMIDAZOLIDINIL UREIA 39236-46-9 0,60
23 HIDROXIMETILGLICINATO DE
SÓDIO
70161-44-3 0,50
24 MDM HIDANTOÍNA 116-25-6 0,50
25 DMDM HIDANTOÍNA 6440-58-0 0,60
26 QUARTENIUM -15 / CLORETO DE
1- (3-CLOROALIL) -3,5,7-TRIAZO-
1-AZONIADAMANTANO
4080-31-3 0,20
27 2-FENOXIETANOL 122-99-6 1,00
28 3,4,4’ TRICLOROCARBANILIDA 101-20-2 0,20
29 POLIHEXAMETILENO BIGUANIDA 32289-58-0 0,30
30 PIRITIONATO DE SÓDIO 3811-73-2 0,064
31 ÁCIDO SÓRBICO / SORBATO DE
POTÁSSIO
110-44-1 0,60
32 ÁLCOOL BENZÍLICO 100-51-6 1,00
