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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA
TESIS
PREVIA A LA OBTENCIÓN DEL TITULO DE
LICENCIADO EN LABORATORIO CLÍNICO
TEMA:
DETERMINACIÓN DE ROTAVIRUS POSITIVO EN PACIENTES
PEDIÁTRICOS CON GASTROENTERITIS POR MEDIO DE LA TÉCNICA DE
IMNUNOCROMATOGRAFÍA EN HECES
AUTOR
T.MD. Kevin Moreno Zapata
DIRECTOR:
Msc. Harry Álvarez Castro
TUTOR:
2
Msc. Marcelo Muñoz Villacres
Guayaquil – Ecuador
Año: 2013
CERTIFICACIÓN DE LA ACEPTACIÓN DEL DIRECTOR
CERTIFICO
En mi calidad de director de la tesis sobre el tema: Determinación de rotavirus
positivo en pacientes pediátricos con gastroenteritis por medio de la técnica
de imnunocromatografía en heces, elaborado por T. MD. Kevin Marvin Moreno
Zapata del cuarto año de la carrera de Laboratorio Clínico, Facultad de Ciencias
Médicas, Escuela de Tecnología Médica, me permito declarar que luego de haber
orientado, estudiado , y revisado la apruebo en todas sus partes.
Atentamente
___________________________
Msc. Harry Álvarez Castro
3
CERTIFICACIÓN DE LA ACEPTACIÓN DEL TUTOR
CERTIFICO
En mi calidad de tutor de la tesis sobre el tema: Determinación de rotavirus
positivo en pacientes pediátricos con gastroenteritis por medio de la técnica
de imnunocromatografía en heces, elaborado por T. MD. Kevin Marvin Moreno
Zapata del cuarto año de la carrera de Laboratorio Clínico, Facultad de Ciencias
Médicas, Escuela de Tecnología Médica, me permito declarar que luego de haber
orientado, estudiado , y revisado la apruebo en todas sus partes.
Atentamente
4
___________________________
Msc. Marcelo Muñoz Villacres
Guayaquil – NOVIEMBRE 2013
DEDICATORIA
A mis padres, porque creyeron en mí y porque me sacaron
adelante, dándome ejemplos dignos de superación y entrega,
porque en gran parte gracias a ustedes, hoy puedo ver
alcanzada mi meta, ya que siempre estuvieron impulsándome
en los momentos más difíciles de mi carrera, y porque el
orgullo que sienten por mí, fue lo que me hizo ir hasta el final.
Va por ustedes, por lo que valen, porque admiro su fortaleza y
por lo que han hecho de mí.
A mis hermanos, tíos, primos, abuelos y amigos.
Gracias por haber fomentado en mí el deseo de superación y
el anhelo de triunfo en la vida. Mil palabras no bastarían para
agradecerles su apoyo, su comprensión y sus consejos en los
momentos difíciles.
5
Esto fue posible con la ayuda de Dios, gracias por
otorgarnos la sabiduría y la salud, para lograrlo. Gracias a los
intercambios y exposiciones de ideas con mis compañeros,
colegas y amigos de estudios durante el proceso de la
licenciatura.
T. MED. Kevin Marvin Moreno Zapata
AGRADECIMIENTO
A Dios, Por darme la vida y permitirme estar rodeado de
gente maravillosa, Gracias por todos los mensajes y los
milagros que veo a diario.
A mis Padres, Por traerme al mundo en un ambiente
lleno de amor incondicional. Son las personas que más admiro
y pido a Dios poder llegar a formar una familia como ustedes
lo han hecho.
Y muy en especial para mis directores de tesis, quienes
pusieron su confianza en mí para formar parte de este
proyecto. Por compartir su conocimiento valioso, por sus
consejos, por la paciencia que me tuvieron y por ir caminando
6
siempre a mi lado para realizar este trabajo. Sin ustedes no
hubiera podido lograrlo.
T. MED. Kevin Marvin Moreno Zapata
7
ÍNDICE GENERAL
Portada I
Certificado del Director II
Certificado del Tutor III
Dedicatoria IV
Agradecimiento V
Índice VI
Resumen XIII
Introducción 1
CAPITULO I
EL PROBLEMA
Planeamiento del Problema 4
Formulación del Problema 6
Delimitación del Problema 6
8
Evaluación del Problema 7
Variables 8
Objetivos 8
Justificación e Importancia 9
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO
GASTROENTERITIS
1.1. Antecedentes Científicos 11
1.1.2. Historia 13
1.2. Epidemiología 14
1.3 Etiología 15
1.3.1 Agente Etiológico 16
1.3.2 Viral 16
1.4 Rotavirus 17
1.4.1 Estructura Proteica 18
1.4.2 Clasificación 20
1.5 Patogénesis Y Respuesta Inmune 22
1.6 Transmisión 24
9
1.6.1 Cuadro Clínico 25
1.7 Diagnóstico 27
1.8 Prevención 28
1.8.1 Profilaxis 28
1.8.2 Vacunación 29
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
2.1 Desarrollo 31
2.1.2 Inmunocromatografía 31
2.2 Métodos Directos 33
2.3 Aislamiento Viral - Cultivos Celulares 33
2.4 Detección De Antígenos - Técnicas Inmunológicas 36
2.5 Inmunofluorescencia Directa (Id) 37
2.6 Test De Aglutinación 39
2.7 Radioinmunoensayo (Ria) 39
2.8 Enzimoinmunoanálisis (Eia) 40
2.9 Inmunofluorescencia Indirecta (Ifi) 41
10
2.10 Enzimoinmunoanálisis Indirecto (Eia) 42
2.11 Test De Aglutinación 42
2.12 Producción De Anticuerpos In Vitro 44
2.13 Detección De Rotavirus En Heces 44
2.14 Definición De Términos 51
2.15 Factibilidad 53
2.16 Fundamentación Legal 54
2.17 Hipótesis 56
CAPITULO III
METODOLOGÍA
Diseño de la Investigación 57
Tipo de Investigación 59
Tipo de Estudio 60
Población y Muestra 61
Criterio de Inclusión y Exclusión 63
11
Operalización de las Variables 64
Técnicas e Instrumentos de la Investigación 66
Procedimiento de la Investigación 67
Criterios para la Elaboración de la Propuesta 69
Análisis e Interpretación de Resultados 70
CAPITULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Cronograma 81
Presupuesto 82
Conclusiones 83
Recomendaciones 84
Bibliografía 85
Referencia Bibliográfica 87
Referencias Electrónicas 89
Anexos 91
12
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro N° 1 Distribución de casos positivos para rotavirus según el
grupo de edad.
70
Cuadro N° 2 Pacientes atendidos en el Centro Médico Santa
Isabel.
71
Cuadro N° 3 Pacientes Positivos Divididos por sexo atendidos en
el Centro Médico Santa Isabel
72
Cuadro N° 4 Conocimiento sobre el Rotavirus que tienen los padres
de los niños atendidos en el Centro Médico Santa
Isabel
73
Cuadro N° 5 Se ha realizado exámenes de Laboratorio su
niño(rotavirus heces)
74
13
Cuadro N° 6 Cuál es la alimentación de los niños y la familia.
75
Cuadro N° 7 Conviven en su casa con animales 76
Cuadro N° 8 Cual son las condiciones económicas de la familia 77
Cuadro N° 9 Tiene servicios básicos (agua, luz, alcantarillado,
letrina)
78
Cuadro N° 10 Está informado de los métodos de prevención o
tratamiento de esta enfermedad.
79
Cuadro N° 11 Considera Ud. Que A) Charlas de orientación sobre
enfermedades gástricas, B) Dar capacitaciones de
saneamientos C) Todas las anteriores
80
ÍNDICE DE GRÁFICOS
14
Grafico N° 1 Población 62
Grafico N° 2 Distribución de casos positivos para rotavirus según el
grupo de edad.
70
Grafico N° 3 Pacientes atendidos en el Centro Médico Santa
Isabel.
71
Grafico N° 4 Pacientes divididos según el sexo 72
Grafico N° 5 Conocimiento sobre el Rotavirus 73
Grafico N° 6 Exámenes de laboratorio realizados para detectar el
Rotavirus
74
Grafico N° 7 La alimentación de los niños y la familia 75
Grafico N° 8 Convivencia 76
Grafico N° 9 Factor Económico 77
Grafico N° 10 Servicios Básicos 78
15
Grafico N° 11 Métodos de Prevención y Tratamiento 79
Grafico N° 12 Alternativas 80
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA
TEMA: DETERMINACIÓN DE ROTAVIRUS POSITIVO EN PACIENTES
PEDIÁTRICOS CON GASTROENTERITIS POR MEDIO DE LA TÉCNICA DE IMNUNOCROMATOGRAFÍA EN HECES
AUTOR: T. MED. Kevin M. Moreno Zapata TUTOR: Msc. Marcelo Muñoz Villacres
DIRECTOR: Msc. Harry Álvarez Castro
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FECHA: NOVIEMBRE 2013
RESUMEN El Rotavirus o gastroenteritis como enfermedad infecciosa es la causa principal de hospitalización y muerte de niños y lactantes en todo el mundo, casi todos los niños tienen evidencia serológica de la enfermedad él Rotavirus tiene una estructura icosaedral 5,3,2 formada por tres capas que recubren el genoma viral y es considerada una de las enfermedades más comunes y no difíciles de erradicar siguiendo un patrón de saneamiento y alimentación adecuada, las reinfecciones son comunes durante el resto de vida pero van hacer con menor intensidad por eso es importante determinar las causas que producen enfermedades gastrointestinales ya que facilitan al médico a que su diagnóstico y tratamiento sea oportuno y eficaz, evitando así la deshidratación por la diarrea persistente que a largo plazo puede desencadenar un sin número de problemas muy perjudiciales para la salud de quien padece este virus por ello él motivo que nos condujo a realizar esta investigación y brindar a la comunidad el conocimiento sobre las causales de dicha enfermedad para realizar este trabajo se aplicó una metodología de trabajo de campo científico operativo a partir de la hipótesis y variables planteadas sus ,causas ,tratamiento y alternativas de solución aplicando instrumentos de obtención de información así mismo los recursos utilizados en este tipo de estudios están acorde con el cronograma de actividades planteadas para la detección de la gastroenteritis aguda o Rotavirus en los pacientes que son atendidos en el Centro Médico Santa Isabel de la Ciudad de Guayaquil, Se aplicó el método de investigación de campo, bibliográfica, descriptiva, además de las técnicas de encuesta entrevista y test de diagnóstico para la detección del virus, lo que permitió llegar a la conclusión de que la infección por este virus se presenta con mayor frecuencia, en lactantes y niños hasta los 5 años. Palabras Claves: Rotavirus, niños, Diagnostico, Infección.
INTRODUCCIÓN
La gastroenteritis es una condición médica caracterizada por la inflamación del
tracto gastrointestinal que está compuesto por el estómago y el intestino delgado,
17
los síntomas principales son diarrea, vómito, dolor abdominal y calambres. A nivel
mundial la mayoría de los casos en niños están causados por el rotavirus, en los
adultos, las causas más comunes son el Norovirus y la Campylobacter.
La OMS estima que en el mundo ocurren aproximadamente 1100 millones de
episodios diarreicos al año y cinco millones aproximadamente de fallecimientos
infantiles por esta causa. De estos, el Síndrome diarreico Agudo por Rotavirus
constituye uno de los agentes etiológicos virales más importantes de la diarrea
infantil en todo el mundo siendo responsable por 1 de cada 20 muertes infantiles en
el mundo en vías de desarrollo.
Causa principal son los Rotavirus humanos en todo el mundo, que pueden
provocar desde una infección asintomática en menores de 3 meses, hasta una
diarrea grave con deshidratación que puede ocasionar la muerte. Cada año,
Rotavirus causa alrededor de 114 millones de episodios de gastroenteritis, 610.000
muertes en niños menores de 5 años, es decir, cada minuto muere un niño en el
mundo como consecuencia de EDA.
Las características clínicas de la diarrea por Rotavirus son inespecíficas, por lo
tanto la confirmación de la infección en niños es mediante el diagnóstico etiológico
en el laboratorio a partir de muestras fecales.
En Ecuador, durante el período de 1978 -1980 se realizó un estudio en pacientes
ingresados al hospital de la Junta de Beneficencia de Guayaquil, donde se
determinó que los casos y porcentajes de diarreas con identificación de Rotavirus
18
ocurrían durante la época de verano caracterizada por menor temperatura y
temporada seca o menos lluviosa. En el año 2007, el Ministerio de Salud Pública
(MSP) del Ecuador, en un estudio en los hospitales pediátricos de las ciudades de:
Guayaquil, Quito, Manta y Cuenca, estableció que el 40.8% de EDA era causada
por los Rotavirus, justificando así la necesidad e importancia de implementar un
programa de vacunación contra Rotavirus en nuestro país.
En nuestro país, el síndrome diarreico agudo de carácter infeccioso ocupa el
séptimo lugar de entre las diez principales causas de mortalidad infantil, según datos
ofrecidos por el CIE-10 durante el año 2003. No se conoce ningún estudio aplicado
de investigación Nacional en la determinación del síndrome diarreico agudo por
rotavirus.
Con el presente trabajo se procedió a la realización de un estudio de carácter
descriptivo retrospectivo en base a las historias clínicas de los pacientes pediátricos
atendidos en el Departamento de Pediatría del Centro Médico Santa Isabel.
En el capítulo I.- Se encuentra la introducción del tema detallando lo más
importante de la bacteria rotavirus y los aspectos fundamentales para llevar a cabo
una correcta investigación.
19
En el Capítulo II.- Se desarrolla el marco teórico, apoyado por importantes
bibliografías e informaciones de la Web, las mismas que ayudaron a describir cada
una de las variables que se utilizaron en el proceso investigativo.
En el Capítulo III.- De esta investigación se pudo establecer las estrategias
metodológicas siguientes: método de campo, método bibliográfico, método
descriptivo, método experimental, inducción analítica, descriptiva y dialéctica.
En el Capítulo IV.- Se presenta la exposición y discusión de los resultados en
donde se conformó la teoría que orientó a la investigación.
En el Capítulo V.- Se detallan las conclusiones de cada uno de los objetivos
específicos, con sus respectivas recomendaciones, las mismas que permiten tener
una visión clara de la investigación.
CAPITULO I
EL PROBLEMA
20
DETERMINACIÓN ROTAVIRUS POSITIVO EN PACIENTES
PEDIÁTRICOS CON GASTROENTERITIS POR MEDIO DE LA TÉCNICA DE
IMNUNOCROMATOGRAFÍA EN HECES
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la actualidad de acuerdo a estudios realizados se puede determinar que la
mitad de la población mundial infantil son los más vulnerables a presentar cuadros
de gastroenteritis, por las diversas causas sean estas de factor ambiental y socio
económico,
La etiología de la Gastritis puede ser toxica, farmacológica, alimentaria, así como
manifestaciones de enfermedades del aparato digestivo, de enfermedades
sistémicas o incluso el brote inicial de diarrea crónica, aunque la más frecuente es
de origen infeccioso.
La principal ruta de transmisión de los rotavirus es la vía fecal-oral, aunque
también se ha especulado que el contacto persona a persona, el contacto con
secreciones respiratorias, y/o el contacto con superficies contaminadas pudieran ser
fuentes de transmisión, ya que los altos índices de infección por este virus en los
primeros tres años de vida en todo el mundo son independientes de las condiciones
higiénicas y sanitarias.
21
Las formas asintomáticas son frecuente en el adulto y en los niños mayores a 5
años, debido principalmente a la inmunidad natural adquirida tras 1 o varias
infecciones, así como en neonatos y niños menores de 3 meses, en este caso
principalmente por la impropia madures de las enzimas proteolíticos del intestino
neonatal, la presencia de anti cuerpos anti-rotavirus procedente de la madre
recibidos vía trans-placentaria (IgG), y a través de la leche materna (IgG) y por la
presencia de los inhibidores de la actividad de la tripsina.
A partir de esa edad, el lactante es más vulnerable debido a la inmadurez
funcional de reserva intestinal, una falta de inmunidad específica y una disminución
de los mecanismos inespecíficos de defensa del huésped tales como la acides y el
moco gástrico, con lo que los niños entre 6 y 23 meses son los que tienen mayor
prevalencia e intensidad del (GEA) coincidiendo con la declinación de anticuerpos
de origen materno y con la edad del destete.
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cómo incide el Rotavirus en la gastroenteritis presentada en paciente
pediátricos mediante la técnica de sensibilidad de INMUNOCROMATOGRAFÍA en
heces, que acuden al Centro Médico Santa Isabel en la ciudad de Guayaquil?
22
DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA
Campo: Salud - Inmunología.
Área: Social.
Problema: Los problemas gástricos.
Delimitación: Centro Médico Santa Isabel en la ciudad de Guayaquil.
Población: Pacientes Pediátricos atendidos en el servicio de gastroenterología.
Tema: DETERMINACIÓN DE ROTAVIRUS POSITIVO EN PACIENTES
PEDIÁTRICOS CON GASTROENTERITIS POR MEDIO DE LA
TÉCNICA DE IMNUNOCROMATOGRAFÍA EN HECES
23
EVALUACIÓN DEL PROBLEMA
Delimitación: El trabajo se realiza en el área de Laboratorio Clínico
Claro: Porque es una enfermedad común en el medio, que se puede trasmite con
gran facilidad, principalmente en la población infantil.
Evidente: Porque es una enfermedad de tendencia mundial.
Factible: Porque en el Centro Médico Santa Isabel, presta las facilidades y el
equipamiento necesario para realizar dichos exámenes.
Parcialmente Esperado: Satisfactorio ya que los exámenes realizados ayudan en
la prevención, control y promover a concientizar a las
personas en mejorar la calidad de vida y cuidado
adecuado principalmente del neonato.
24
VARIABLES
VARIABLE INDEPENDIENTE: Determinación Rotavirus positivo en pacientes
Pediátricos con Gastroenteritis.
VARIABLE DEPENDIENTE: Técnica de INMUNOCROMATOGRAFÍA en Heces.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL: Determinar la incidencia de rotavirus en pacientes
pediátricos, que asisten al área del Centro Médico Santa
Isabel de la Ciudad de Guayaquil.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Detección del Rotavirus en pacientes pediátricos con gastroenteritis,
mediante la observación de la técnica de Inmunocromatografia en heces.
Identificar los factores que influyen a que esta enfermedad se haga común
es nuestro medio.
Orientar a las madres en los cuidados de los hábitos alimentación y
salubridad.
25
JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA
La gastroenteritis es una condición médica caracterizada por la inflamación del
tracto gastrointestinal que está compuesto por el estómago y el intestino delgado.
Los síntomas principales son diarrea, vómito, dolor abdominal y calambres. A nivel
mundial, la mayoría de los casos en niños están causados por el rotavirus, en los
adultos, las causas más comunes son el Norovirus y la Campylobacter. Hay causas
menos comunes, como otros tipos de bacterias (o sus toxinas) y parásitos.
Su transmisión puede ocurrir mediante el consumo de alimentos preparados
inadecuadamente o de agua contaminada, o a través del contacto físico con
personas infectadas. La gastroenteritis aguda (GEA) es un síndrome clínico de
comienzo brusco caracterizado por diarrea acompañado de náuseas, vómitos,
fiebre o dolor abdominal como consecuencia de una infección del tracto
gastrointestinal.
Es una enfermedad auto-limitada que, en la mayoría de los casos, no precisa
más que una valoración clínica del paciente a través de una adecuada historia
clínica y una cuidadosa exploración física. Sin embargo hay niños que requieren
ingreso hospitalario cuando hay diarrea mucosa o sanguinolenta sugestiva de
colitis, niños de alto riesgo, como los inmuno-deficientes y en aquellas situaciones
en las que el diagnóstico es incierto.
26
En los países desarrollados, la GEA no conlleva los índices de mortalidad
observados en los países en vías de desarrollo, pero comporta un elevado número
de consultas médicas u hospitalarias con el consecuente impacto sobre la calidad
de vida familiar.
El análisis de los resultados podrá ayudar a orientar y contribuir con medidas de
prevención y control sobre esta enfermedad en los grupos de riesgo, brindando con
esta investigación un aporte al campo de la salud pública.
Los aportes de esta investigación fueron demostrados con datos cuantitativos y
cualitativos que otorgaron las encuestas, entrevistas, y los estudios de casos de
infecciones gastrointestinales por rotavirus, lo que permitió obtener resultados
efectivos y transparentes.
El análisis de los resultados podrá ayudar a orientar y contribuir con medidas de
prevención y control sobre esta enfermedad en los infantes brindando con esta
investigación un aporte al campo de la salud pública.
27
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO
FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
GASTROENTERITIS
1.1. ANTECEDENTES CIENTÍFICOS
La primera información que se tuvo, de que los virus producían gastroenteritis fue
en 1960, cuando Adams y Kraft describieron, la presencia de diarrea en ratones
recién nacidos. Postineramente en 1972 Kapikian, describe al virus Nowalk como
causa de diarrea en humanos, pero no fue en 1973 en Australia, cuando Bishop
reporta al rotavirus como causa de gastroenteritis, este descubrimiento, fue hecho
en biopsias intestinales en niños con diarrea, mediante el microscopio electrónico.
Antes de conocerse la etiología de la enfermedad, se conocía como
gastroenteritis invernal o enfermedad invernal con vómitos, ya que guardaba una
variabilidad estacional. La gastroenteritis por rotavirus, se presenta en todo el
mundo, independientemente del nivel socio-económico. En las zonas templadas es
más notable en invierno, así mismo en América, es donde se observa mejor este
28
fenómeno y en las zonas tropicales, es menos notable, pero se puede encontrar
durante todo el año.
La frecuencia de gastroenteritis por rotavirus es variable, algunos autores la
consideran del 11 al 71%. Su pre-Valencia ocurre en los niños menores de 5 años,
Siendo su pico más alto en menores de 2 años. Además se le encuentra en países
desarrollados: USA, Inglaterra, Canadá, etc. En América Latina, Brasil, etc. En Asía
y en Medio Oriente: Kuwait, Tailandia, Bangladesh. Gentsch J (2009) considera
que: “El Rotavirus es la principal causa de diarrea en el mundo. Este agente
produce 111 millones de casos, 25 millones de consultas médicas, 2 millones
de hospitalizaciones y aproximadamente 611.000 muertes anuales,
principalmente en lactantes y niños pequeños”. (Pág. 69).
El mecanismo exacto de como el rotavirus produce inmunidad es desconocido,
los estudios actuales consideran, que la inmunidad se debe tanto a los anticuerpos
intestinales, en forma de IgA, como a los anticuerpos humorales, siendo el primer
mecanismo el más importante.
De ahí la importancia de la alimentación al seno materno, que proporciona
anticuerpos locales, que protegen en contra de rotavirus. Los anticuerpos séricos
dan protección específica y cruzada. Sin embargo en ocasiones, el infante puede
tener hasta en tres ocasiones gastroenteritis por rotavirus, debido a que son
diferentes serotipos. A medida que se incrementa la edad, la inmunidad es muy
29
importante, ya que en la etapa adulta la enfermedad se presenta en forma
asintomática.
En la actualidad la gastroenteritis aguda (GEA), se la conoce como un cuadro
inflamatorio intestinal de etiología generalmente infecciosa, manifestado por diarrea,
a la que con frecuencia se asocian náuseas, vómitos, dolor abdominal y fiebre. En
los países industrializados, la diarrea aguda constituye una de las causas más
frecuentes de consulta médica. Glass R. (2008) Considera que: “Las infecciones
por este agente en animales se presentan en muchas especies, pero la
transmisión de animales a personas sólo ha sido documentada
excepcionalmente” (Pág. 521)
Aunque generalmente se manifiesta de forma aislada, puede presentarse de
forma epidémica como en los brotes en hospitales y residencias, o en las
toxiinfecciones alimentarías.
1.1.2 HISTORIA
La primera vez que se utilizó el término gastroenteritis fue en el año 1825, antes
de esta fecha, se la conocía más específicamente como fiebre tifoidea o algo menos
especifico como apretón de viseras, queja del intestino o cualquiera de una serie de
otros nombres, de nombres arcaicos para la diarrea agua.
30
La gastroenteritis está asociada con muchos nombres coloquiales incluyendo (la
venganza de Moctezuma), vientre del Delhi (la turista) y la carretera de la puerta
trasera, entre otras, han jugado un papel importante en muchas campañas militares
y se cree que es el origen del término en ingles sin tripas no hay gloria. Gómez, J
(2010) Considera que:
Las infecciones humanas se presentan en todo el mundo y éste agente constituye el agente único más frecuente de diarrea en lactantes menores de 2 años que requieren atención médica en países desarrollados la mortalidad por deshidratación, aunque inusual en éstos, es una causa importante en los países envías de desarrollo. (Pág. 327)
1.2 EPIDEMIOLOGÍA
Se calcula que en mundo se producen entre 3 y 5 mil millones de casos de
gastroenteritis al año que afectan principalmente, a los niños y aquellos en países
de días de desarrollo.
Lo que resulto en aproximadamente en 1, 3 millones de muertes en niños
menores de 5 años en el 2008, de estas la mayoría se produjeron en los países más
pobres del mundo, más del 450.000 de estas muertes se deben al rotavirus en
niños menores a 5 años.
31
El cólera causa entre 3 y 5 millones de casos y mata a unas 100.000 personas al
año, en países en vías de desarrollo los niños menores de 2 años padecen con
frecuencia de 6 a más infecciones al año lo que resulta en gastroenteritis
significativa. Agus S. (2008) considera que: “Hasta principios de los años 70 se
presumía que los virus debían ser una causa importante de GEA ya que las
bacterias o los parásitos se encontraban en una baja proporción” (Pág. 56)
1.3 ETIOLOGÍA
Los virus particularmente el “rotavirus” y las bacterias de las especies
“Escherichia Coli y la Campylobacter” son las causas principales de gastroenteritis,
sin embargo hay muchos otros agentes infecciosos que pueden causar este
síndrome. Parashar U (2008) considera que:
Ocasionalmente se han visto causas no infecciosas, pero son menos probables que la etiología viral o bacteriana: el riesgo de la infección es más alto en los niños debidos por su falta de inmunidad y su relativa poca higiene. La enfermedad diarreica aguda se considera de tipo coleriforme (parecida al cólera) cuando cursa con heces líquidas, en general abundantes, sin sangre, mucus o pus. No se acompaña en general de fiebre, y los agentes causales que se localizan en el intestino delgado no provocan acción patógena ni reacción inflamatoria morfológicamente ostensible. No se observan leucocitos en las materias fecales. Los agentes causales en el niño son habitualmente colientero patógeno o enterotoxigénico, Rotavirus. (Pág. 68)
1.3.1 AGENTE ETIOLÓGICO
32
Los Rotavirus pertenecen a la familia Reoviridae. Los miembros de esta familia
de virus presentan las siguientes características comunes:
a) Las partículas virales tienen una geometría ICOSAHÉDRICA
b) No están envueltos por una membrana LIPÍDICA.
c) Tienen un genoma compuesto por segmentos de ARN de doble cadena.
d) El ARN genómico no es infeccioso pero si en ausencia de las proteínas
virales.
e) La partícula viral contiene todas las enzimas necesarias para la producción
de la replicación viral se lleva a cabo exclusivamente en el citoplasma de sus
ARNs mensajeros.
1.6.2 VIRAL
Entre los virus conocidos como causantes de la gastroenteritis se incluye el
rotavirus, el Norovirus, el Adenovirus y el Astrovirus. El rotavirus es una causa
menos común en los adultos debido a la inmunidad adquirida.
1.7 ROTAVIRUS
33
El género Rotavirus se clasifica dentro de la familia Reoviridae, cuyos miembros
se caracterizan por ser virus icosahédricos sin envoltura, de 60-80 nanómetros (nm)
de diámetro y por contener un genoma compuesto de ARN de doble cadena.
Las partículas maduras, de aproximadamente 70 nm de diámetro, presentan una
cápside proteica de doble capa que consiste en una cubierta externa y otra interna.
Dentro de la cubierta interna hay una tercera capa, el Core, el cual encierra al
genoma. Cuando se observan las partículas completas mediante tinción negativa
presentan apariencia de rueda con espículas, rodeada de un fino borde que le
proporciona apariencia lisa.
Este virus se caracteriza también por presentar 132 canales que atraviesan
ambas cubiertas y que unen la superficie externa con el Core interno. Desde la
superficie de la cápside y hacia afuera se proyectan 60 espículas finas. La estructura
tridimensional del virus, que ha sido determinada por Criomicroscopía electrónica.
La cubierta del virus: está formada por una capa externa la misma que se encuentra
conformada por las proteínas estructurales VP7 y VP4, la interna formada por la
proteína VP6 y la tercera capa o Core, con forma hexagonal, que encierra el genoma
viral.
El genoma viral está compuesto por 11 segmentos de ARN de doble cadena,
numerados del 1 al 11 en función de su movilidad electroforética. La naturaleza
34
segmentada del ARN facilita los reordenamientos del genoma cuando las células
se infectan con diferentes cepas de Rotavirus.
Por ello, cuando se produce una coinfección celular se puede producir un virus
resortante, con segmentos de ARN de cada uno de los virus progenitores, lo que ha
hecho de base en el desarrollo de vacunas.
Cada uno de los segmentos genómicos codifica una proteína vírica. Estas son
las proteínas estructurales que se denominan con las iniciales VP (viral protein)
seguido de un número (VP1, VP2, VP3, VP4, VP6 y VP7) y las proteínas no
estructurales.
1.4.1 ESTRUCTURA PROTEICA
Las proteínas estructurales VP7 y VP4 constituyen la cubierta externa. La VP7
corresponde a la parte lisa de la cubierta y la VP4 a la parte especulada, dando
lugar a 60 espículas cortas. Ambas proteínas son los únicos antígenos virales
conocidos hasta ahora que inducen, independientemente, la formación de
anticuerpos neutralizantes.
La VP4 constituye el 2.5% de la masa vírica, es la hemaglutinina del virus y
probablemente la responsable de la unión a la célula. Debido a la tripsina, la VP4
35
se divide en las subunidades proteicas VP5 y VP8, las cuales se asocian con
funciones de penetración del virus en la célula.
La VP7 es la proteína más importante de la cubierta externa, constituye el 30%
del peso del virión y es una glicoproteína. La VP6 forma mayoritariamente la cubierta
interna constituyendo el 50% del peso de la partícula vírica recientemente se ha
descrito el papel de esta proteína en la infectividad viral y en el desarrollo de la
inmunidad.
La proteína VP2 constituye la envoltura del Core, donde se sitúan también la VP1
y VP3. La VP1 parece constituir la polimerasa viral necesitándose la presencia de
VP2 para su actividad.
Características de las proteínas estructurales y no estructurales de
Rotavirus A
36
1.7.2 CLASIFICACIÓN
Los Rotavirus se clasifican en grupos, sub-grupos y serotipos según las propiedades
antigénicas de las proteínas de su cápside.
La proteína VP6 es la determinante de reactividad de grupo, es en la que se basan
la mayoría de los ensayos diagnósticos y contiene también los antígenos de sub-
grupo. En la actualidad existen 7 grupos denominados con las letras de la A la G y
2 subgrupos, el grupos A, B y C son los que producen infección en el hombre. Los
grupos D, E, F y G únicamente han sido descritos en animales hasta el momento la
37
clasificación en serotipos se basa en las diferencias antigénicas de las proteínas de
la cubierta externa VP7 y VP4. La primera determina los serotipos “G”, denominados
así por la naturaleza glicosilada de esta proteína y la segunda a los serotipos “P”
debido a su sensibilidad a la proteasa.
Actualmente se reconocen 14 serotipos G, del G1 al G14, siendo G1, G2, G3 y
G4 los predominantes en todo el mundo Se han descrito también infecciones por
los serotipos G5, G6, G8, G9, G10 y G12 Los serotipos circulantes pueden variar
incluso dentro de la misma región a lo largo de las distintas temporadas hecho que
se ha descrito también en nuestro país, Los serotipos P, se han clasificado mediante
técnicas de neutralización en varios serotipos y 2 subtipos P: 1A, 1B, 2A, 3, 4, 5 y
8.
Hoy día se utiliza más la clasificación según las técnicas de genotipado y se
recomienda incluir en corchetes el número de genotipo para diferenciarlo del
serotipo determinado por neutralización. Hasta el momento se han descrito 20
genotipos P, siendo los más encontrados los genotipos P [8] (P-serotipo 1A), P [4]
(P-serotipo 1B) y P [6] (P-serotipo 2). Aunque los serotipos G y P son
independientes, existen asociaciones que se repiten con mayor frecuencia como
Son G1, G3 y G4 con el genotipo P [8] (serotipo P 1A) y el G 2 con el P [4] (serotipo
P 1B).
1.8 PATOGÉNESIS Y RESPUESTA INMUNE
38
Los Rotavirus infectan los enterocitos maduros absortivos del epitelio velloso de
los dos tercios superiores del intestino delgado. Esto lleva a la atrofia vellositaria y
muerte celular, dando lugar, de forma compensatoria, a la repoblación del epitelio
por células inmaduras de tipo secretor con hiperplasia secundaria de las criptas
No se conocen bien los mecanismos que llevan a la producción del daño celular,
aunque se propone que la lesión es secundaria a la isquemia vellositaria. En cuanto
al mecanismo que induce la producción de diarrea, parece ser el principal, la menor
absorción de agua y electrolitos en relación con la infección selectiva de las células
absortivas, conservándose funcionalmente intactas las células secretoras de las
criptas.
Esto da como resultado la secreción neta de líquido. Por otra parte se produce
una disminución de las disacaridasas de la pared intestinal, con mala absorción
consiguiente de carbohidratos y un factor osmótico de diarrea. En la actualidad está
cobrando importancia el papel del sistema nervioso entérico en la diarrea por
Rotavirus.
Este agente induciría la secreción hidroelectrolítica intestinal mediante la
estimulación del sistema nervioso de la pared intestinal, hecho demostrado
recientemente en ratones lactantes, eh sabido que los niños que sufren una
infección primaria quedan protegidos frente a episodios graves de diarrea. Sin
embargo todavía no se conocen bien los mecanismos inmunológicos responsables
de esta protección parcial. Se ha demostrado en diversos estudios que la inmunidad
39
local intestinal protege de sucesivos episodios graves de diarrea. Goveia M, (2012)
Considera que:
En la fase aguda de la enfermedad está comprobado el predominio de las inmunoglobulinas de clase IgM, con una respuesta sérica IgG e IgA en la fase convaleciente. En el intestino predominan los anticuerpos secretores IgA, observándose respuesta de copro-anticuerpos en el 70-84% de los niños con infección sintomática. (Pág. 267)
Se ha demostrado que estos anticuerpos son un marcador más sensible de
reinfección que la sero-conversión o la detección de virus en heces. Parece ser que
solo los anticuerpos dirigidos contra las proteínas VP4 o VP7 pueden neutralizar al
virus y proteger al huésped susceptible.
Se ha descrito que la respuesta a la primera infección es homotípica (respuesta
frente al virus infectante y otros virus con glicoproteína VP7 similar), apareciendo
respuestas heterópicas con infecciones sucesivas. La protección serotipo-
específica ha sido difícil de demostrar en humanos, ya que no se ha detectado
asociación entre títulos de anticuerpos neutralizantes serotipo-específicos después
de la infección y la existencia de protección. Aquí entraría el papel de la inmunidad
celular, demostrándose recientemente que la proteína NSP4, produce una
respuesta mediada por la inmunidad celular.
1.6 TRANSMISIÓN
40
La principal ruta de transmisión de los rotavirus es la vía fecal-oral, aunque
también se ha especulado que el contacto persona a persona, el contacto con
secreciones respiratorias, o el contacto con superficies contaminadas pudieran ser
fuentes de transmisión, ya que los altos índices de infección por este virus en los
primeros tres años de vida en todo el mundo son independientes de las condiciones
higiénicas y sanitarias.
También se han descrito brotes en guarderías y residencias de ancianos. La
infección es especie-específica (RV-humano); ya que la transmisión de rotavirus
entre el hombre y animales no ha sido documentada, en investigaciones aleatorias
realizadas en epidemias de diarrea por RV que se presentaron en Australia, EE.UU.
Israel, Japón, Tailandia y Brasil entre 1974 y 1993, caracterizadas por
manifestaciones clínicas severas, en niños menores de 5 años de edad; se encontró
que algunas de las cepas infectantes tuvieron una marcada homología genética
mayor del 90% con cepas provenientes de gatos, perros, cerdos, vacas y caballos.
La presencia de RV de animales en estas epidemias presupone que la
transmisión inter especies de este agente puede estar ocurriendo de manera natural
y pudiera estar participando en forma importante en la evolución de los RV. Sin
embargo, a pesar de la alta homología genética con las cepas aisladas en animales,
la transmisión de una especie a otra no se ha podido comprobar en la naturaleza.
41
1.7.1 CUADRO CLÍNICO
Guevara JN (2011) Considera que:
Esta enfermedad es más común en niños entre los seis meses y los dos años. Los adultos pueden ser infectados, pero raramente son sintomáticos. La enfermedad es rara en neonatos; los anticuerpos maternos transplacentarios, los cambios dependientes de la edad en la mucosa intestinal y la leche materna, probablemente juegan un papel en la protección de este grupo de niños. (Pág. 226)
La gastroenteritis normalmente ocasiona diarrea y vómito, aunque de forma
menos común, presenta solo uno de los dos.
El paciente también puede tener calambres abdominales, los síntomas suelen
empezar a manifestarse de 12 a 72 horas después de contraer el agente viral, está
enfermedad normalmente desaparece en el transcurso de una semana.
Algunas causas virales también pueden estar relacionadas con fiebre, fatiga,
dolor de cabeza y dolor muscular. Si hay presencia de sangre en la deposición, es
menos probable que sea causa viral y más probable que sea bacteriana, algunas
infecciones bacterianas pueden estar asociadas a un dolor abdominal agudo y
pueden persistir durante varias semanas.
42
Los niños infectados por rotavirus usualmente se recuperan por completo en un
período de 3 a 8 días, sin embargo, en los países en vías de desarrollo, el
tratamiento para las infecciones agudas a menudo está fuera del alcance de la
población y la diarrea crónica es común. Velásquez F (2011) Considera que: “Hoy
en día existen sobradas evidencias de que los mecanismos de prevención de
las diarreas son distintos para las diarreas virales y las de origen bacteriano”
(Pág., 423)
La deshidratación es una complicación común de la diarrea y un niño con un nivel
significativo de deshidratación puede tener un llenado capilar prolongado, por una
turgencia cutánea podre y una respiración anormal la presencia representativa
repetitiva de estas infecciones es común en áreas con saneamiento deficiente y
desnutrición, lo que puede provocar retraso en el crecimiento y déficit cognitivo a
largo plazo.
1.8 DIAGNÓSTICO
El diagnóstico virológico comprende la detección e identificación del agente
etiológico de una infección viral, clínica o inaparente, o de la respuesta inmune
específica del huésped. La primera etapa la constituye el diagnóstico viral clínico,
que generalmente tiene un carácter de orientación.
43
Se basa principalmente en el cuadro clínico y considera los antecedentes
personales y familiares, además de la situación epidemiológica; en muchas
circunstancias este diagnóstico clínico puede ser suficiente, sin embargo cada día
se observa con mayor frecuencia la asociación de los virus entéricos con diversos
cuadros clínicos, incluso muy severos, en los que el estudio específico de
laboratorio virológico se hace indispensable como medio diagnóstico, de control
evolutivo, con fines epidemiológicos. Castello A, (2007) Considera que:
“Basándose sólo en el cuadro clínico, es difícil distinguir la gastroenteritis por
rotavirus de otras causas de gastroenteritis aguda” (Pág. 514)
Las aplicaciones del diagnóstico virológico son variadas y dependen de los
medios disponibles y de las circunstancias que ameriten un diagnóstico etiológico
específico. En salud pública se utiliza habitualmente en programas de vigilancia
epidemiológica y en el control de vacunas mediante censos serológicos. En
medicina curativa la necesidad del diagnóstico virológico alcanza a todas las
disciplinas: pediatría, obstetricia, medicina, cirugía, dermatología.
Actualmente el médico clínico puede tratar con nuevos antivirales y controlar el
curso de muchas infecciones virales; en el presente existe comercialmente una gran
variedad de técnicas que pueden implementarse en laboratorios clínicos, por lo que
se requiere conocer sus características para seleccionar las de mayor aplicabilidad.
1.9 PREVENCIÓN
44
Existen dos principales métodos para el control de la gastroenteritis:
Según el estilo de vida (Profilaxis)
vacunación
1.9.1 PROFILAXIS
Para reducir la tasa de infección y la gastroenteritis tiene clínicamente
significativa es importante tener fácil acceso a un suministro de agua no
contaminada en unas prácticas de saneamiento se ha descubierto que las medidas
personales como el lavado de manos reduce hasta en in 30% de la incidencia y tasa
de prevalencia de la gastroenteritis en países desarrollados y en vías de desarrollo,
los genes como el alcohol también pueden ser eficaces.
La lactancia materna es importante en especial en aquellos lugares con una
higiene eficiente, así como la mejora en la higiene en general. La leche materna
reduce tanto la frecuencia de las infecciones como su duración, evitar los alimentos
o bebidas contaminadas también debería ser efectivo. Calva J. (2007) Considera
que:
Es recomendable afianzar el programa de vigilancia epidemiológica de diarreas a través de las unidades centinelas, especialmente en las áreas sujetas a vacunación, a fines de evaluar circulación viral, impacto del programa y avanzar en el conocimiento de esta patología y sobre todo de las estrategias de intervención. (Pág. 892)
45
1.8.2 VACUNACIÓN
Gracias a su efectividad y seguridad la organización mundial de la salud
recomendó en el año 2009 que la vacuna contra el rotavirus se ofrezca a todos los
niños en nivel mundial, en la actualidad existen 2 vacunas comerciales contra el
rotavirus y varias más están en desarrollo. Ruiz P, (2009) Considera que: “Las
vacunas son el principal logro de la investigación biomédica y una de las
principales causas de la mejora de la salud y la calidad de vida del ser
humano” (Pág. 210)
En África y Asia estas vacunas redujeron la enfermedad aguda entre los bebes
alimentados con la leche materna y los países que han implementado los programas
nacionales de vacunación han visto una disminución en las tasas y en el nivel de
gravedad de la enfermedad.
Esta vacuna también puede ayudar a prevenir la enfermedad en los niños no
vacunados al reducir el número de infecciones en circulación, desde el año 2000 la
implementación del programa de vacunación contra el rotavirus en Estados Unidos
se ha reducido considerablemente los casos de diarrea en un 80%.
46
La primera dosis de la vacuna se debe dar a los bebes alimentados con leche
materna entre las 6 y 15 semanas de edad, se ha descubierto que la vacuna contra
el cólera tiene una efectiva de entre el 50 y 60% después de los 2 años de edad.
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
2.1 DESARROLLO.
47
Actualmente existen diversos métodos en el mercado que pueden utilizarse para
el diagnóstico de rotavirus, de tal forma que la técnica de elección dependerá del
equipo y reactivos con que se disponga en cada hospital. Laird A (2009) Considera
que:
Dado el elevado número de partículas virales eliminadas en heces, el diagnóstico se realiza mediante la detección rápida de las mismas, existen diversas pruebas comerciales de ELISA y de aglutinación del látex para detectar virus en las heces. Las pruebas de látex son más sencillas y económicas pero poseen baja especificidad y sensibilidad. Por tal motivo, las técnicas de ELISA son las pruebas de elección. (Pág. 628)
Entre los ensayos más usados tenemos a la Imnunocromatografía.
2.1.2 INMUNOCROMATOGRAFÍA
Son inmunoensayos en fase solida donde se fijan los anticuerpos específicos
para el virus en la superficie de una matriz, tubo o microplaca. Se emplea como
sistema de amplificación del conjugado, el oro coloidal para aumentar la sensibilidad
del método. Posteriormente se pone en presencia del suero o muestra que contiene
el antígeno que se quiere demostrar; una vez que ocurre la reacción antígeno-
anticuerpo la cual es observada por la acumulación de oro coloidal del conjugado
en el papel de nitrocelulosa, se hace un lavado y se agrega un anticuerpo marcado
de captura, que depende de la marcación del anticuerpo.
48
Los más conocidos son: ELISA (Inmunoensayos ligado a la absorción de
enzimas), y la aglutinación en látex dependiendo del trazador que se utilice para
evidenciar la reacción.
Los métodos de diagnóstico viral se basan fundamentalmente en:
Detección del agente viral completo o de sus componentes: por aislamiento
viral con observación del efecto inducido por el virus vivo propagado en un
huésped biológico; por visualización de la partícula viral total o parcial; o por
detección de sus componentes macromoleculares (antígenos virales o ácido
nucleicos).
Detección de la respuesta inmune del huésped mediante el estudio de
anticuerpos antivirales (serología). Varios métodos para la identificación del
rotavirus o antígeno del mismo en heces han sido desarrollados en la
actualidad.
2.2 MÉTODOS DIRECTOS
Son aquellos que detectan:
1. El virus como agente infeccioso (aislamiento viral).
49
2. La presencia de antígenos virales (técnicas inmunológicas):
Inmunofluorescencia (IF), Enzimoinmunoanálisis (EIA), Test de
Aglutinación.
3. La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, etc.).
4. El virus como partícula viral (microscopía electrónica).
2.4 AISLAMIENTO VIRAL - CULTIVOS CELULARES
La base del diagnóstico viral es la detección del virus o de sus componentes. El
aislamiento del virus era la técnica Standard de oro sobre la cual se medían todas
las otras pruebas de diagnóstico viral, pero hoy en día con el desarrollo de las
nuevas técnicas de Biología Molecular ya no es la más sensible.
De igual forma el aislamiento de virus tiene una sensibilidad y una especificidad
muy alta. Debido a que sólo se amplifica el virus, se aumenta la sensibilidad sin
disminuirla especificidad. Sin embargo, existen algunas desventajas en el
aislamiento del virus: el proceso suele ser lento, ya que demanda días a semanas
para la identificación, y en consecuencia puede no estar disponible a tiempo para
influir en la atención del paciente.
Además, es un proceso laborioso y caro. Por otra parte requiere el uso de
sistemas de cultivos adecuados, por ejemplo, se necesitan varias líneas celulares
para la detección óptima de virus. Los cultivos celulares son, pues, los BIOS
substratos más corrientemente empleados para la propagación de los virus.
50
Un cultivo celular es obtenido, de ex plantes de órganos o de embriones de
animales. Estas células obtenidas asépticamente se disocian tratándolas con una
enzima (tripsina) que rompe el cemento intercelular. La suspensión de células libres
así obtenidas se coloca en la superficie plana de un recipiente de vidrio o plástico
en donde las células se adhieren y multiplican formando una fina capa de células
que se llama MONOCAPA CELULAR.
Esta monocapa de células crece en un medio de cultivo complejo que contiene
albúmina, vitaminas, sales, glucosa, etc., en un sistema buffer. Se previene la
contaminación bacteriana adicionándole al medio antibiótico adecuado. Los cultivos
celulares en monocapa son los más usados, aunque hay otros sistemas (cultivos en
suspensión, ex plantos, cultivos de órganos, cultivos en microcarriers).
Los cultivos celulares se dividen en:
Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de células, tejidos u órganos
tomados directamente del organismo y pueden sub cultivarse una o dos
veces.
Líneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en pasajes sucesivos
hasta aproximadamente 50 sub cultivos y que conservan por lo menos en un
75% el cariotipo correspondiente a la especie de que provienen.
Líneas Celulares Continuas: Permite un número finito de sub cultivos y son
heteropolares. Para considerar que se ha logrado establecer una línea
continua, esta debe de haber sido sub cultivada por lo menos 70 veces.
51
Las líneas celulares continuas ofrecen las siguientes ventajas:
Disponibilidad para todos los investigadores de stocks de células idénticas, ya
sea congelada en ampollas o en monocapa de botella de cultivos, con la posibilidad
de reconstituirlas cuando sea necesario. Facilidad relativa del pasaje y
mantenimiento en todos los laboratorios. Libre de contaminación con agentes
extraños. Los distintos cultivos celulares varían en cuanto a su susceptibilidad a los
diferentes virus, ya que existe una relación específica huésped-virus, y es en función
de los datos clínicos y del tipo de muestra que se elige el cultivo para inocular el
material. Luego de inoculado el cultivo celular, se incuba a 35-37º C por un período
de hasta 14 días promedio, esperando la aparición de efecto citopático, toxicidad o
degeneración celular, observando el cultivo al microscopio a las 24, 48, 72 hrs y
luego 2 veces por semana.
Se usan cultivos celulares no inoculados para control y comparación con
cualquier cambio morfológico observado en los cultivos inoculados. El efecto
citopático es la visualización de cambios morfológicos más o menos característicos
en las células inoculadas producidas por la acción del virus sobre el cultivo celular.
Cuando los virus no producen efecto citopático, se puede recurrir a técnicas que
ponen en evidencia la presencia de aquel en el cultivo. Las más usadas son:
52
Hemadsorción: Hay virus que durante su multiplicación intracelular,
expresan en la membrana de la célula huésped elementos estructurales
virales llamados hemaglutinina, glicoproteínas capaces de unirse a
receptores específicos en la membrana de glóbulos rojos de diferentes
especies animales. De modo que si se agregan glóbulos rojos a un cultivo
inoculado, se puede poner en evidencia la infección de esas células a
través de la unión de los glóbulos rojos a la superficie celular.
Hemaglutinación: Las hemaglutinina pueden ponerse en evidencia en el
sobrenadante de los cultivos utilizando el mismo fundamento que para la
hemadsorción.
Tinciones con anticuerpos monoclonales.
2.4 DETECCIÓN DE ANTÍGENOS - TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
Las siguientes técnicas inmunológicas pueden utilizarse tanto para la detección
de antígenos (métodos directos), como de anticuerpos (métodos indirectos). En el
caso de detección de antígenos, se utiliza un anticuerpo específico antiviral (por lo
general IgG) a cuya fracción Fc se ha conjugado una molécula marcada, que puede
ser isotiocianato de fluoresceína (Inmunofluorescencia), un isótopo radioactivo 125I
o 131I (RIA), o una enzima: peroxidasa, fosfatasa alcalina, o biotina-avidina (EIA),
para objetivar la reacción.
53
Para el procedimiento indirecto (detección de anticuerpos), se emplea un anti-
anticuerpo marcado y la reacción se realiza sobre un cultivo celular infectado por el
virus en estudio.
2.5 INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (ID)
Es una de las técnicas más antiguas y de uso más difundido en el laboratorio
clínico. El principio básico de la inmunofluorescencia directa. Muestras clínicas
apropiadas son recolectadas y colocadas sobre porta objetos donde se dejan secar
y fijar. Luego se agregan anticuerpos específicos marcados con isotiocianato de
fluoresceína que difunden a través de la membrana celular y se combinan con los
antígenos víricos en el interior de las células. La reacción antígeno anticuerpo se
visualiza con el microscopio de fluorescencia, por la aparición de fluorescencia de
color verde manzana.
Esta técnica se puede utilizar para una identificación rápida del virus
directamente sobre la muestra (por ejemplo: células eludidas de un lavado nasal, o
de un hisopado nasofaríngeo), o se la puede emplear para la confirmación del efecto
citopático observado en cultivos celulares.
Sin embargo la realización de la reacción es laboriosa, depende mucho de la
calidad de los reactivos, requiere un microscopio de fluorescencia y de una persona
54
con experiencia para llegar a un diagnóstico certero, así como una recolección y
preparación de la muestra adecuada.
Aun así, el método, en manos de una persona con experiencia resulta útil para la
identificación rápida de ciertos virus como los virus respiratorios, ya que nos
proporciona un diagnóstico etiológico en el curso de una jornada de trabajo. Además
puede estudiar varias muestras simultáneamente.
El advenimiento de los anticuerpos monoclonales, ha incrementado la
especificidad y en algunos casos la sensibilidad de estos ensayos. Esta técnica
requiere sólo 2-4hs, y se ha reportado una sensibilidad del 70-80 % comparada con
cultivos celulares para la identificación de virus Herpes Simple, 80-95% para VRS y
71% para Influenza A.
La tinción con inmuno peroxidasa es similar a la de la inmunofluorescencia y es
la técnica de elección en algunos laboratorios. El procedimiento implica unos pocos
pasos adicionales ya que en este caso el anticuerpo monoclonal está marcado con
una enzima que requiere la adición de un substrato para evidenciar la reacción por
un cambio de color que es visible micro y macroscópicamente.
2.6 TEST DE AGLUTINACIÓN
El test de aglutinación es un método simple, de un solo paso, que a veces se usa
para la detección de antígenos virales en muestras clínicas. Los ensayos de
55
aglutinación, dependen de la fijación inicial de anticuerpos antivirales específicos
sobre eritrocitos o partículas de látex. Luego este reactivo se incuba con la muestra
clínica en la cual se investiga el antígeno y las partículas se aglutinan si el antígeno
adecuado se encuentra presente. Estas pruebas en general se complementan o se
confirman por medio de otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones
inespecíficas.
El test de aglutinación ha sido usado para detectar antígeno de Rotavirus en
heces (el más importante) mostrando una buena sensibilidad cuando se lo compara
con el EIA para Rotavirus. Además es una técnica rápida y barata. También se la
ha usado para detectar antígenos de Adenovirus.
2.7 RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
Fue originalmente aplicado para identificar el antígeno de superficie de la
Hepatitis B (HBsAg) y el anticuerpo anti-HBsAg. Estos ensayos tienen una buena
sensibilidad y especificidad, pero la aparición de un método como el ensayo
inmunoenzimático (EIA) con su mayor tiempo de conservación de los reactivos, su
costo relativamente más bajo y la ausencia de residuos radioactivos, hrs 24
reemplazado las técnicas de RIA en la mayor parte de los casos de detección de
antígeno viral.
2.8 ENZIMOINMUNOANÁLISIS (EIA)
56
Los EIA para la detección de antígeno se basan habitualmente en la captura del
antígeno por anticuerpos específicos unidos a una fase sólida, en general el pocillo
de un micro placa o una pequeña esfera de plástico. El antígeno viral presente en
la muestra clínica se combina con el anticuerpo fijado a la fase sólida y el antígeno
viral se detecta mediante la adición de otro anticuerpo específico conjugado a una
enzima. La enzima conjugada suele ser peroxidasa o fosfatasa alcalina.
El substrato para esas enzimas varía. En la reacción con la peroxidasa el
substrato es un peróxido capaz de oxidar un compuesto químico incoloro que en su
forma oxidada tiene un color característico.
En el caso de la fosfatasa la desfosforilización es la responsable directa de la
aparición del color. Por esta técnica se puede procesar gran número de muestras
en forma rápida y automatizada, no requiriendo de un observador experimentado
para leer los resultados, ya que estos se leen por medio de espectrofotómetros
especialmente diseñados, siendo entonces una técnica más objetiva.
2.9 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)
La IFI, es un método rápido y confiable para la determinación de anticuerpos
antivirales en el suero del paciente. Se basa en la unión de anticuerpos antivirales
presentes en el suero del paciente a los antígenos virales expresados en la
superficie y citoplasma de células infectadas, que han sido fijadas a un portaobjeto
de vidrio. Como control de especificidad se usan células no infectadas.
57
El procedimiento es el que sigue: Se incuba el suero del paciente con las células
infectadas y no infectadas. Luego se realiza un lavado con PBS y se agrega
posteriormente anticuerpo anti IgG humana conjugada con isotiocianato de
fluoresceína.
El isotiocianato de fluoresceína es una sustancia que se vuelve fluorescente a la
exposición de la luz ultravioleta y emite una luz verde característica. El conjugado
se unirá a los anticuerpos del paciente si la reacción es positiva, leyéndose la prueba
en un microscopio de fluorescencia.
La presencia de Ac se evidencia por la aparición de fluorescencia en el
citoplasma y superficie de las células infectadas, mientras que las células control no
fluorescente.
2.10 ENZIMOINMUNOANÁLISIS INDIRECTO (EIA)
Los EIA indirectos se han aplicado de forma amplia en los últimos años al
diagnóstico de anticuerpos virales. Tiene las ventajas de ser un método versátil,
relativamente económico, sensible y de lectura objetiva (instrumental).
58
La metodología es la siguiente: los antígenos virales se inmovilizan sobre una
fase sólida (esferita, poli cubetas para micro titulación u otros elementos de plástico)
y se agregan los sueros en estudio; se incuban, se lavan y se revela la reacción Ag-
Ac por el agregado de una inmunoglobulina anti especie conjugada con una enzima,
seguida por el substrato apropiado para esta. Los resultados se pueden leer con un
espectrofotómetro y en algunos casos de forma visual.
2.11 TEST DE AGLUTINACIÓN:
El fundamento y el procedimiento de esta técnica ya fue descrito para el estudio
de Ag viral (método directo).Ahora lo que buscamos es detectar anticuerpos
antivirales, por eso se usan partículas de látex recubiertas con Ag viral.
WESTERN BLOT (WB): Las técnicas inmunológicas de Inmunoblot están
encontrando amplias aplicaciones en el diagnóstico virológico. Son
particularmente útiles para el diagnóstico del HIV. La técnica de WB se
basa en la separación electroforética de proteínas virales que son
posteriormente inmovilizada en papel de nitrocelulosa con el objeto de
determinar la presencia de anticuerpos específicos contra cada una de
esas proteínas.
Esta técnica se realiza esquemáticamente en 3 pasos:
59
1. Se produce en cultivos celulares grandes cantidades de virus que luego son
tratados químicamente para su disgregación e inactivación. Los antígenos
resultantes del lisado viral se separan por electroforesis en gel de
Poliacrilamida.
2. Se realiza una transferencia (blotting o electro transferencia) del Ag
separado a membranas de nitrocelulosa.
3. Se coloca el suero del paciente sobre la membrana de nitrocelulosa.
Posteriormente se añaden anticuerpos anti-inmunoglobulina humana unida
a una enzima (peroxidasa o fosfatasa alcalina) y, por último, se agrega el
substrato enzimático para la visualización de las bandas reactivas con un
producto final coloreado.
La técnica es muy similar a un EIA, menos sensible pero más específica que esta.
En la práctica sólo el 3er. paso es el que se realiza en los laboratorios de
diagnóstico, ya que los equipos comerciales proveen de las tirillas con los antígenos.
(Esto facilita la estandarización de las determinaciones).
2.12 PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS IN VITRO
Se trata de una técnica nueva que ha sido aplicada para el diagnóstico de la
infección peri natal. Este procedimiento revela la presencia de anticuerpos
antivirales producidos en vitro a partir de los linfocitos B extraídos de sangre total,
lo que indicaría que el sistema inmune del paciente ha sido estimulado por el virus.
60
La producción de Ac antivirales in Vitro promete ser de gran valor en el diagnóstico
temprano de niños infectados por VIH.
2.13 DETECCIÓN DE ROTAVIRUS EN HECES
Prueba de laboratorio; Uso previsto H&R Rota Blíster es una prueba
INMUNOCROMATOGRAFÍA de un solo paso para la detección cualitativa de
Rotavirus en heces.
FUNDAMENTO DEL TEST
H&R Rota blíster test es una prueba cualitativa INMUNOCROMATOGRAFÍA para
la determinación de rotavirus en muestras de heces. Duran te la prueba, la reacción
con los conjugados coloreados (anticuerpos monoclonales de ratón anti-Rotavirus-
micro esferas rojas) previamente secados en el test. Este complejo avanza por
capilaridad a través de la membrana del test. Para dar el resultado para dar el
resultado positivo, una línea de color ROJO aparecerá en la zona de resultado de
la membrana.
La ausencia de esta línea sugiere un resultado negativo. Independientemente de
que haya presencia o no del Rotavirus, la mezcla de conjugado va avanzando por
la membrana hasta la región de control donde se han inmovilizado anticuerpos y
siempre aparecerá una línea de color VERDE (línea de control).La aparición de esta
línea se utiliza:
1. Para verificar que se ha añadido el volumen de muestra suficiente.
61
2. Que el flujo ha sido apropiado
3. Como con control interno de los reactivos
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO
El producto debe ser almacenado entre 2 y 30 °C en su envase original sellado
(blíster), para conseguir un óptimo funcionamiento hasta la fecha de caducidad
impresa en cada blíster. No debe abrirse hasta el momento de su uso. No congelar.
PRECAUCIONES
- Solo para uso profesional in Vitro.
- No utilizar después de la fecha de caducidad.
- Las muestras se deben considerar potencialmente peligrosas y deben ser
manipuladas de la misma forma que a un agente infeccioso.
- Los test usados deben ser gestionados como residuos sanitarios (contenedor
de residuos sanitarios).
RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN
Las muestras deben ser recogidas en un recipiente limpio y la prueba debe
realizarse lo más pronto posible después de la recogida. Las muestras se deben
conservar en frio (solo o 2 días a 2-4 °C) hasta el momento de utilizarlas. Para
62
conservar las muestras durante un tiempo prolongado, como máximo 1 año, deben
mantenerse congeladas -20 °C.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
a. Abrir el tubo para la dilución de muestra
b. Con ayuda del palito se toma una muestra de las heces recogidas.
Para ello se pasa el palito por la muestra recogiendo una pequeña
cantidad de heces. Se introduce el palito en el tampón cerrando el
tubo.
c. Agitar para facilitar la dispersión de la muestra.
MATERIALES SUMINISTRADOS
Blíster test
Instrucciones de uso
Tubos de dilución de muestras con tampón de extracción (DIL).
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Recipiente para la recogida de la muestra de heces
Tubos de ensayo o viales
Guantes desechables
Cronometro
63
PROCEDIMIENTO
Previamente los test, las muestras de heces y los controles se deben
acondicionar a la temperatura ambiente (15-30 °C).No abrir el envase hasta el
momento de la prueba. Antes de abrir el blíster, conviene acondicionar solo el
número de test que se vayan a utilizar
UTILIZANDO EL ENVASE COMO TEST DE TARJETA O CASSETTE TEST
1. Cada pocillo del blíster contiene un test. Se corta el blíster para obtener cada test
en un envase individual (cada test esta envasado de manera independiente a los
demás). Para abrir este envase se toma el extremo no sellado de la lámina
superior y se tira de el hasta que se vea el test completamente, este debe usarse
en el tiempo más corto posible. No sacarlo de su pocillo (identificar uno a uno los
pocillos del blíster según la muestra de heces utilizada).
2. Agitar el tubo de dilución de la muestra para asegurar una buena dispersión.
Corta la punta del tapón.
3. Colocar cada envase individual con el test sobre una superficie horizontal. Añadir
5 gotas o 150 ul de la muestra diluida en la zona blanca del extremo del test. Leer
el resultado a los 10 minutos.
4. Dependiendo de la concentración de Rotavirus, un resultado positivo se puede
observar a partir de los 3 minutos. Sin embargo, para confirmar un resultado final,
se debe esperar 10 minutos.
64
NEGATIVO: Una sola línea de color VERDE (línea de control) aparece en la parte
central del test.
POSITIVO: Además de la línea de control VERDE, también aparece una línea
ROJA en la zona de resultado (línea de resultado).
INVALIDO: Cuando la línea de control (VERDE) no aparece independientemente
de que aparezca o no la línea de resultado (ROJO).Las causas más comunes por
las que puede aparecer un resultado invalido son: una cantidad insuficiente de
muestra, una forma de proceder incorrecta o un deterioro de los reactivos. Si
ocurriera esto, debe revisarse el procedimiento y repetir la prueba con un nuevo
test. Si persistiese el problema, debe contactar con su proveedor y dejar de utilizar
la prueba.
OBSERVACIONES: La intensidad de la línea de color rojo en la zona de resultado
del test variara dependiendo de la concentración de Rotavirus presente en la
muestra. Sin embargo, esta prueba es cualitativa, por lo que, ni la cantidad ni la tasa
de aumento de Rotavirus pueden ser determinados por la misma.
CONTROL DE CALIDAD: El control interno de funcionamiento viene en la prueba.
La línea verde que aparece en la zona de control es el control interno del proceso,
comprobando que el volumen de muestra es suficiente y que el procedimiento
seguido ha sido el adecuado.
65
LIMITACIONES
1. Una vez abierto el envase individual el test no debe usarse después de las 2
horas transcurridas sin uso.
2. Un exceso de muestra puede dar resultado negativos, dando líneas no muy
definidas de color pardo que no tienen ningún valor diagnóstico, diluir la
muestra en más tiempo y repetir ensayo.
3. Después de una semana de infección la presencia de virus eliminados en
heces disminuye considerablemente por lo que es probable una menor
concentración en la muestra. Se debe tomar la muestra de heces dentro de
la primera semana de aparición de los síntomas.
4. Esta prueba diagnóstica una posible infección por rotavirus, situación que
debe confirmarse por un especialista o médico cualificado en cuenta las
pruebas clínicas y de laboratorio evaluadas.
VALORES PREVISTOS: Se esperan resultados negativos en niños y jóvenes
sanos, así como en adultos libres de infección.
CARACTERÍSTICAS DEL TEST: Se han realizado estudios y evaluaciones para
comparar la eficacia del test. H&R Rota blíster test se evaluó en paralelo con un test
rápido del mercado para detección de Rotavirus.
66
SENSIBILIDAD: La detección de Rotavirus presenta un >99% de concordancia en
sensibilidad.
ESPECIFICIDAD: La detección de Rotavirus presenta un 98% de concordancia en
especificidad .El uso de anticuerpos monoclonales de ratón en el diseño de H&R
ROTABLISTER TEST asegura un alto grado de especificidad para la detección de
Rotavirus.
2.14 DEFINICIÓN DE TÉRMINOS
67
Gastroenteritis.- Inflamación del estómago y del intestino delgado caracterizada
por náuseas, vómitos, diarrea y molestias abdominales. Es
producida por la ingestión de virus, bacterias o sus toxinas.
Tóxica.- Se utiliza como adjetivo para designar y calificar a todos aquellos
elementos o sustancias que resulten nocivos y dañinos.
Epidemiología.- Es el estudio de la epidemias, es decir las enfermedades que
afectan transitoriamente a muchas personas en un sitio
determinado.
Inmunocromatografía.- Es una de las técnicas de inmuno-diagnóstico más
modernas cuyas principales ventajas son la simplicidad
y rapidez de la prueba.
Virus.- Microorganismo infeccioso que sólo contiene un tipo de ácido nucleico (ADN
o ARN) y que es incapaz de vivir fuera de la célula que ha infectado.
Rotavirus.- El rotavirus es un virus muy contagioso que infecta a casi todos los
niños antes de los cinco años. Generalmente se presenta acompañado
de fiebre, vómitos y diarrea.
68
Inmunidad.- Inmunidad es un término médico que describe el estado de tener
suficientes defensas biológicas para evitar la infección, enfermedad.
2.15 FACTIBILIDAD
69
Factibilidad Legal.- El Centro Médico Santa Isabel de la ciudad de Guayaquil,
se fundó el 8 de enero de 1997, ubicada en el sector Norte, Sauces 6 etapa, Av.
Antonio Parra Velazco mz. 259. F. 49. SL 8A, ha crecido con el pasar de los años,
brindando 16 años de servicio a la comunidad.
Factibilidad Económica.- El Centro Médico cuenta con los recursos
necesarios para la toma de muestras, los pacientes que asisten al Centro Médico
Santa Isabel son de factor económico intermedio.
Factibilidad Técnica.- El laboratorio clínico cuenta con equipos humano
capacitado dando el mejor servicio y con el respectivo equipo tecnológico para
brindar datos confiables.
2.16 FUNDAMENTACIÓN LEGAL
70
DISPOSICIONES GENERALES.
De los Objetivos y Sujetos.
Ámbito:
Art. 3.- Son deberes primordiales del Estado:
1. Garantizar sin discriminación alguna el efectivo goce de los derechos
establecidos en la Constitución y en los instrumentos internacionales,
en particular la educación, la salud, la alimentación, la seguridad social
y el agua para sus habitantes.
Salud:
Art. 32.- La salud es un derecho que garantiza el Estado, cuya realización se
vincula al ejercicio de otros derechos, entre ellos el derecho al agua, la
alimentación, la educación, la cultura física, el trabajo, la seguridad
social, los ambientes sanos y otros que sustentan el buen vivir.
Art. 35.- Las personas adultas mayores, niñas, niños y adolescentes, mujeres
embarazadas, personas con discapacidad, personas privadas de
libertad y quienes adolezcan de enfermedades catastróficas o de alta
complejidad, recibirán atención prioritaria y especializada en los
ámbitos público y privado.
71
a) La misma atención prioritaria recibirán las personas en situación de
riesgo, las víctimas de violencia doméstica y sexual, maltrato infantil,
desastres naturales o antropogénicos.
b) El Estado prestará especial protección a las personas en condición de
doble vulnerabilidad.
Social:
Art. 46.- El Estado adoptará, entre otras, las siguientes medidas que aseguren a
las niñas, niños y adolescentes:
1. Atención a menores de seis años, que garantice su nutrición, salud,
educación y cuidado diario en un marco de protección integral de sus
derechos.
2. Protección especial contra cualquier tipo de explotación laboral o económica.
Se prohíbe el trabajo de menores de quince años, y se implementarán
políticas de erradicación progresiva del trabajo infantil.
3. Atención preferente para la plena integración social de quienes tengan
discapacidad. El Estado garantizará su incorporación en el sistema de
educación regular y en la sociedad.
2.17 HIPÓTESIS
PREGUNTAS DIRECTRICES
72
1. Conoce la enfermedad del Rotavirus
2. Acude a la Unidad de Salud con su niño frecuentemente
3. Se ha realizado exámenes de Laboratorio su niño(rotavirus heces)
4. Cuál es la alimentación de los niños y la familia
5. Conviven en su casa con animales
6. Cual son las condiciones económicas de la familia? Orientación
7. Como es la vivienda de la familia?
8. Tiene servicios básicos (agua, luz, letrina)
9. Está informado de los métodos de prevención o tratamiento de esta
enfermedad.
10. Considera Ud. Que A) Charlas de orientación sobre enfermedades gástricas,
B) Dar capacitaciones de saneamientos C) Todas las anteriores
73
CAPITULO III
METODOLOGÍA
DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
El presente trabajo de investigación es cuasi experimental, transversal el cual se
realizó en el Área de Pediatría del Centro Médico Santa Isabel Ubicado en la ciudad
de Guayaquil, con la finalidad de aplicar un estudio investigativo sobre el porcentaje
de pacientes infectados con el Rotavirus.Fernández, R. (2010), Comprende:
La elaboración y desarrollo de una propuesta de un modelo operativo variable, para solucionar problema, requerimientos o necesidades de organizaciones o de grupos sociales; pueda referirse a la formulación de políticas, programas, metodologías, métodos y procesos. Para su ejecución debe de apoyarse en investigaciones de tipo documental; de campo que incluya ambas modalidades. En la estructura de la presente tesis consta de diagnóstico, planteamiento, fundamento teórico de la propuesta, procedimiento metodológicos, actividades y recursos necesarios para su ejecución, análisis y conclusión del proceso como de su desarrollo y como de su resultado. (Pág. 124)
74
Por su formación y ejecución deben apoyarse en la investigación de tipo
documental y de campo.
El proyecto como requisito puede expresarse en:
Llegar hasta las conclusiones sobre la facilidad que existe de la investigación.
Consiste en la presentación del problema que debe ser aprobado por un
experto.
La investigación es el proyecto claro porque sé basa en el diagnóstico, está
apoyada en consulta bibliográficas, internet y plantean una alternativa de solución
al problema.
75
TIPO DE INVESTIGACIÓN
La investigación de campo se presenta mediante la manipulación de una variable
externa no comprobada, en condiciones rigurosamente controlada, con el fin de
describir de qué modo o porqué causas se produce una situación o acontecimiento
particular. Fernández, R. (2010) describe:
La investigación de campo constituye un proceso sistemático, riguroso y racional de recolección, tratamiento, análisis y presentación de datos, basado en una estrategia de recolección directa de la realidad de las informaciones necesarias para la investigación. (Pág. 133)
Observación.- Se basa en la observación directa de los hechos en la
investigación.
Descripción.- Se aplica cuando el conocimiento existente acerca del problema
es escaso o no existe. La definición de las variables es más descriptiva que
operacional, pero indicadores que facilitan su medio.
76
TIPO DE ESTUDIO
El tipo de estudio que se utilizó es científico, investigativo, deductivo:
Método Científico.- Recolecta y analiza datos teniendo siempre como requisito
la objetividad, veracidad, veracidad y la comprobación de los fenómenos o hechos
presentes en el problema. Se caracteriza por ser táctico, empírico objetivo,
trascendental y auto-correctivo.
Método Inductivo.- Parte de la observación de hecho individuales para constatar
hechos generales, a este método se lo aprecia como revista.
Método Deductivo.- Busca la verdad partiendo del conocimiento de hechos
generales para llegar a los particulares.
77
POBLACIÓN Y MUESTRA
Población
La población es un término definido desde la demografía y señala la cantidad de
personas que viven en un determinado lugar en un momento en particular.
Fernández, R. (2010) relata:
La población es el grupo de personas a la que va proyectado dicho estudio, la clasificación característica de los mismos, lo cual lo hace modelo de estudio para el proyecto establecido. La población en diversos países del mundo se está dando cuenta de la estructura y la dinámica de la misma y estableciendo leyes o principios que regirían esos fenómenos. (Pág. 67)
La población la constituyen 100 pacientes en el área Laboratorio Clínico del
Centro Médico Santa Isabel, ubicado en sauces 6 etapa, Av. Antonio Parra Velazco
mz. 259. F. 49.SL 8A, de la Ciudad de Guayaquil.
78
Muestra
En este trabajo de investigación dio como resultado 35 pacientes de los
que presentaron signos y síntomas y cumplieron con los parámetros para
realizarles el estudio y fueron derivados a examen.
Muestra
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 1
Población
Población Nº Niñas Nº Niños Nº de Pacientes
Agosto
Septiembre
Octubre
Noviembre
Diciembre
Enero
2
4
6
3
3
2
5
1
3
2
4
5
7
5
3
5
8
7
TOTAL 35
79
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis: Se puede observar que en el mes de agosto se atendieron 5
pacientes, en el mes de septiembre 6, en el mes de octubre 8, en el mes de
noviembre 2, en el mes de diciembre 7, en el mes de enero 7, siendo atendidos
una totalidad en los seis meses a 35 adultos.
La muestra se basa en criterios de inclusión y exclusión
Criterios de inclusión
Criterios de exclusión
20%
14%9%
14%
23%
20% Agosto
Septiembre
Octubre
Noviembre
Diciembre
Enero
80
Pacientes con Gastritis Pacientes Pediátricos de 1 a 5 años Pacientes con antecedentes clínicos
Pacientes sanos Pacientes pediátricos mayores a 5 años Pacientes que no presentan problemas gástricos
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
OPERALIZACIÓN DE LAS VARIABLES.
VARIABLE
INDEPENDIENTE
DEFINICIÓN
DIMENSIONES
INDICADORES
Infección menor
del tracto
Agente etiológico
Viral
Rotavirus
Patogénesis y respuesta inmune
81
Gastroenteritis
digestivo,
cuando algunos
microorganismo
s se multiplican
con rapidez en
el estómago y
en el intestino
Clasificación
Trasmisión
Prevención
Cuadro clínico
Diagnostico
Profilaxis
Vacunación
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
VARIABLE
DEPENDIENTE
DEFINICIÓN
DIMENSIONES
INDICADORES
82
.
Diagnóstico de
Laboratorio
Métodos que se
utilizan para
determinar en
forma correcta
la identificación
del Rotavirus
Técnica de
Laboratorio
Experiencia del
Laboratorio
Imnunocromática
Positiva
Negativa
Años
0-5
Pericia
Muy buena
Buena
Mala
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
83
TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE LA INVESTIGACIÓN
Las técnicas son un medio que instrumenta al método y sirven para alcanzar
el resultado propuesto a nivel de etapas prácticas o modos de estrategias.
Entre estas tenemos:
1. Planteamiento de problemas.
2. Estudio de campo.
3. Las fichas de observación realizadas a los pacientes.
4. Encuesta dirigida a los pacientes.
5. Entrevistas al personal profesional y médico.
6. Conclusión y recomendaciones.
7. Formulación de la propuesta.
8. Preparación y redacción del informe final de la investigación
PROCEDIMIENTO DE LA INVESTIGACIÓN
84
Una vez aplicadas las encuestas, la entrevista y la observación, pasamos a
procesarlo en datos estadísticos y de tabulación, en este aspecto utilizamos lo
siguiente:
1. Seguimiento a pacientes sospechosos con algún riesgo de
enfermedades Gástricas.
2. Toma de muestra.
3. Procesamiento de las muestras de los pacientes.
4. Entrega de los resultados.
5. Diagnóstico del paciente (por el médico tratante).
6. Con la asesor de investigación se revisó las características y
connotaciones del proyecto investigativo.
7. Se realizaron las correcciones afines del proyecto investigativo.
8. Se escogieron a las personas que fueron muestra de estudio e
investigación.
9. Se pusieron en ejecútese los instrumento para la recolección de la
información.
10. Con la información recolectada, se realizó el proceso estadístico
según los parámetros establecidos.
11. Con los resultados y conclusiones se formuló recomendaciones de
solución a problemática social objeto de estudio.
UNIVERSIDAD ESTATAL DE GUAYAQUIL
85
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA
Validación de los instrumentos para elaborar la propuesta en el Centro Médico Santa Isabel de la Ciudad de Guayaquil en el Área de Laboratorio Clínico, “DETERMINACIÓN ROTAVIRUS POSITIVO EN PACIENTES PEDIÁTRICOS CON GASTROENTERITIS POR MEDIO DE LA TÉCNICA DE IMNUNOCROMATOGRAFÍA EN HECES”
Observaciones:…………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………
El instrumento que se utilizó fue la ficha de observación, mediante la cual se
obtuvo los datos necesarios para realizar el trabajo de campo
CRITERIOS PARA LA ELABORACIÓN DE LA PROPUESTA
INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS
Nombre y Apellido:
Edad: Sexo: Historia clínica:
F M N° de Orden
Ultima Vacunación:
Nombre/Madre: Nombre/Padre:
Dirección Domiciliaria:
Test de preguntas Dirigido a pacientes y/o familiares
Responda con una X en los casilleros SI o NO, si tiene alguna duda deje en blanco
SI NO
Conoce la enfermedad del Rotavirus
Acude a la Unidad de Salud con su niño frecuentemente
Se ha realizado exámenes de Laboratorio su niño(rotavirus heces)
Cuál es la alimentación de los niños y la familia
Conviven en su casa con animales
Cual son las condiciones económicas de la familia? Orientación
Como es la vivienda de la familia?
Tiene servicios básicos (agua, luz, letrina)
Está informado de los métodos de prevención o tratamiento de esta enfermedad
Considera Ud. Que A) Charlas de orientación sobre enfermedades gástricas, B) Dar capacitaciones de saneamientos C) Todas las anteriores
86
El diseño para la determinación de rotavirus positivo en heces en pacientes
pediátricos con síntomas gastrointestinales, se estructuró bajo los siguientes
criterios:
1. Estudio diagnóstico
2. Estudio de factibilidad
3. Diseño de proyecto
4. Ejecución de proyecto
5. Evaluación de proyecto
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
87
1. Distribución de casos positivos para rotavirus según el grupo de edad.
Cuadro N° 1
EDAD N° POSITIVOS NEGATIVOS %
<1 años 35 12 18 34%
1 – 2 años 28 10 21 29%
3 – 5 años 37 13 26 37%
Total 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 2
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- El grafico representa por edades los casos positivos menos de 1 año
tenemos 34%, de 1 a 2 años con el 29% y de 3 a 5 años de edad el 37%.
2. Pacientes atendidos en el Centro Médico Santa Isabel
34%
29%
37%
Casos por Edad
< 1 año
1 -- 2 años
3 -- 5 años
88
Cuadro N° 2
N° DE CASOS POSITIVOS NEGATIVOS
0-5 35 65
100% 32% 68%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 3
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- En este cuadro se muestra que el valor de los casos negativos con un
68% es mayor al de los casos positivos con un 32%, en los 100 casos que se
realizaron las pruebas de Rotavirus.
POSITIVOS32%
NEGATIVOS68%
Casos de 0-5
89
3. Pacientes Positivos Divididos por sexo atendidos en el Centro Médico
Santa Isabel?
Cuadro N° 3
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 4
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
46%54%
SEXOS
NIÑAS
NIÑOS
Población Nº POSITIVOS Nº de Pacientes
NIÑAS 16 46%
NIÑOS 19 54%
TOTAL 35 100%
90
Análisis.- En este cuadro se muestra los casos divididos por el sexo de los infantes
que dieron positivos en la prueba del Rotavirus del cual las Niñas tiene un 46% y
los Niños un 54% en su Mayoría son los niños más afectados.
4. Conocimiento sobre el Rotavirus que tienen los padres de los niños
atendidos en el Centro Médico Santa Isabel
Cuadro N° 4
ALTERNATIVAS FAMILIARES %
SI 15 15%
NO 85 85%
TOTAL 100
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 5
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
15%
85%
Conocen el Rotavirus
SI
NO
91
Análisis.- El gráfico nos demuestra que existe en su gran Mayoría el
desconocimiento del Rotavirus con un 85% de No saber de él, y con un porcentaje
menor a 15% de Si saber de su existencia
5. Se ha realizado exámenes de Laboratorio su niño(rotavirus heces)
Cuadro N° 5
ALTERNATIVAS F %
SI 35 35%
NO 65 65%
TOTAL 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 6
35%
65%
Rotavirus en HecesSI NO
92
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- En este cuadro y grafico se puede apreciar que el 35% de los niños
menores a 5 años se realizaron exámenes. Los padres obedecieron las
recomendaciones del Médico y les realizaron los análisis correspondientes, el 65%
restante hicieron caso omiso a las recomendaciones dadas por el doctor.
6. Cuál es la alimentación de los niños y la familia.
Cuadro N° 6
ALTERNATIVAS F %
Frutas 11 11%
Legumbres 9 9%
Carnes 12 12%
Pescado 15 15%
Yogurt 8 8%
Leche (materna) 22 22%
Leche (fórmula) 23 23%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Cuadro N° 7
93
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Podemos observar que la alimentación de los niños es la siguiente Frutas
11%, Legumbres 9%, Carne 12%, Pescado 15%, Yogurt 8%, Leche Materna 22% y
la Leche de Fórmula 23%, se concluye que la alimentación de los niños es variada,
Incidiendo en el desarrollo equitativo y funcional de su salud general.
7. Conviven en su casa con animales?
Cuadro N° 7
ALTERNATIVAS F %
SI 27 80%
NO 8 20%
TOTAL 35 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 8
11%9%
12%
15%8%
22%
23%
Alimentación
Frutas
Legumbres
Carnes
Pescado
Yogurt
Leche (materna)
Leche (fórmula)
94
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Como podemos observar en este cuadro el 77% de los hogares de los
menores si tienen animales en las viviendas, mientras que un 23% no tienen, lo
que significa los infantes con los animales es estrecho y cotidiano, pudiendo jugar
la infección asintomática en estos animales un papel importante en la aparición de
los brotes de las enfermedades gastrointestinales.
8. Cual son las condiciones económicas de la familia?
Cuadro N° 8
ALTERNATIVAS F %
Media Alta 0 0%
Media 3 31%
Media Baja 11 60%
Baja 21 9%
77%
23%
Convivencia
SI
NO
95
TOTAL 35 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 9
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Se puede notar que el nivel socioeconómico de las familias de los
menores está distribuida de la siguientes manera; el 0% es de la clase alta, el 9%
Media, el 31% Media Baja y el 60% Baja, la mayoría cantidad de población de
menores afectados se encuentra en las familia de bajos recursos o con dificultad
de acceso a los sistemas de salud.
9. Tiene servicios básicos (agua, luz, alcantarillado, letrina)
Cuadro N° 9
ALTERNATIVAS F %
Agua Potable 15 43%
Luz 14 40%
0% 9%
31%
60%
Factor Economico
Media Alta Media Media Baja Baja
96
Alcantarillado 5 14%
Letrina 1 3%
TOTAL 35 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 10
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Podemos apreciar que los servicios con los que cuentan las familias de
los menores presentan el 43% tiene Agua Potable, el 40% Luz, el 14%
Alcantarillado y con un 3% el uso de letrina, es importante saber las condiciones en
que viven las familias, para determinar las barreras que existen con el propósito de
mantener sanos a los menores y a la familia en general.
10. Está informado de los métodos de prevención o tratamiento de esta
enfermedad.
43%
40%
14% 3%
Servicios Básicos
Agua Potable
Luz
Alcantarrillado
Letrina
97
Cuadro N° 10
ALTERNATIVAS F %
SI 10 29%
NO 25 71%
TOTAL 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 11
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Podemos observar que el 29% SI, de los padres si conocen los tipos de
prevención y tratamiento, el 71% en su mayoría NO, Lo que nos ayuda a ver la
necesidad que tiene los padres tomen esta enfermedad con seriedad y conozcan
acerca del rotavirus y sus complicaciones.
29%
71%
SI
NO
98
11. Considera Ud. Que A) Charlas de orientación sobre enfermedades
gástricas, B) Dar capacitaciones de saneamientos C) Todas las anteriores.
Cuadro N° 11
ALTERNATIVAS F %
A.- Charlas de Orientación 11 31%
B.- Capacitaciones 15 43%
C.- Todas las Anteriores 9 26%
TOTAL 100%
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Grafico N° 12
Elaborado por: Kevin Marvin Moreno Zapata Detalle del Cuadro Estadístico.
Análisis.- Podemos observar un 31% está de acuerdo con las Charlas, el 43% con
las Capacitaciones y con un 26% con Todas las anteriores. Es necesario que los
padres y familiares estén informados de este tipo de enfermedades para poder
31%
43%
26% A Charlas
B Capacitaciones
C Todas lasAnteriores
99
detectar los síntomas a tiempo y dar una atención emergente hasta acudir al Centro
Médico más cercano.
100
CAPÍTULO IV
MARCO ADMINISTRATIVO
CRONOGRAMA
ACTIVIDADES AGOSTO SEPTIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO FEBRERO
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2
Árbol del Problema
Selección del Problema
Aprobación del Tema
Desarrollo de la Investigación
Revisión de la Tesis
Aprobación
101
Sustentación
I
I
PRESUPUESTO
CONCEPTO DE RUBRO DE GASTOS
VALOR
1 ELABORACIÓN DE PROYECTO $60.00
2 MATERIAL DE ESCRITORIO Y FUNGIBLE $ 80.00
3 MATERIAL BIBLIOGRÁFICO $ 30.00
4 COPIAS $ 10.00
5 REFRIGERIOS $ 30.00
6 GASTOS ADMINISTRATIVOS $ 20.00
7 PAGOS A ASESORES Y ESPECIALISTAS $ 90.00
8 TRANSPORTE $ 15.00
9 IMPREVISTOS $ 15.00
10 ALQUILER DE EQUIPO E IMPLEMENTOS $ 200.00
TOTAL $ 550.00
II
II
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
CONCLUSIONES
1. La infección por Rotavirus tiene un fuerte impacto a nivel mundial tanto
países desarrollados como en vía de desarrollo ya que esta es una
enfermedad de gasto socio-sanitaria que produce un alto número de muertes
en la población infantil.
2. El Rotavirus afecta en general a niños menores de 5 años, los síntomas más
frecuentes que causan esta infección Gastrointestinal por Rotavirus son,
fiebre, vomito, dolor abdominal, diarrea los cuales tienen un rango de
duración de 3 a 9 días, cuando suele ocurrir muerte, esta se debe a una gran
deshidratación y por consiguiente desequilibrio electrolítico.
3. Se diagnostica por medio de una prueba en la cual se busca los antígenos
virales en heces.
4. La infección por este virus no deja una inmunidad permanente sino hasta
después de varios ataques la ventaja es que si vuelve a parecer siempre son
con menor intensidad que el primero.
5. Las medidas preventivas más importantes son evidente mente los hábitos
higiénicos y dietéticos, como se mencionó anteriormente la vía de trasmisión
es oro-fecal.
III
III
RECOMENDACIONES
1. Como el Rotavirus es una infección a nivel mundial los padres deben
incluirse en programas de vacunación infantil con el objetivo de hacer
frente a esta enfermedad socio-económico.
2. Los padres de familia al notar que sus infantes presentan síntomas como
vómito, fiebre, diarrea, deben llevarlos a un centro médico cercano y no
auto-medicar.
3. Debe mantenerse informado adecuadamente a los profesionales que
llevan a cabo los programas de vacunación, como los responsables de la
elaboración y financiación de programas de vacunación, a los padres y a
medios de comunicación u otras instituciones relacionadas con la salud.
4. Debe establecerse un sistema de vigilancia epidemiológica para
investigar cuadros y diagnósticos con el fin de conocer agentes etiológicos
de la gastroenteritis.
5. Debe recordarse que por ser el Rotavirus una enfermedad de tipo viral-
infeccioso, adoptar normas y medidas higiénicas que permitan llevar un
mejor y adecuado estilo de vida y alimentación.
BIBLIOGRAFÍA
IV
IV
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IX
IX
X
X
ANEXOS
XI
XI
Anexo 1: Estructura del Rotavirus.
Foto Tomada: Descargada de internet.
XII
XII
Anexo 2: Obtención de la muestra.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XIII
XIII
Anexo 3: Prueba rápida para Rotavirus.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil
XIV
XIV
Anexo 4: Fundamentación de la prueba.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XV
XV
Anexo 5: Técnica.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XVI
XVI
Anexo 6: Rotulación de la muestra.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XVII
XVII
Anexo 7: Procedimiento de la prueba.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XVIII
XVIII
Anexo 8: Inmersión de la muestra con el reactivo.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XIX
XIX
Anexo 9: Agitando muestra y reactivo.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XX
XX
Anexo 10: Procedimiento de la Muestra.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
XXI
XXI
Anexo 11: Lectura positiva de Rotavirus.
Foto Tomada: En Laboratorio Clínico del Centro Médico Santa Isabel de la
ciudad de Guayaquil.
